非洲豬瘟的流行病學(xué)調(diào)查及實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)

摘 要：非洲豬瘟是由非洲豬瘟病毒引起的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，發(fā)病率和死亡率可高達(dá)100%。自首次報(bào)道非洲豬瘟以來(lái)，該疾病已在全球多個(gè)國(guó)家和地區(qū)蔓延，給全球養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)了較大的經(jīng)濟(jì)損失?；诖?，養(yǎng)殖戶(hù)在生豬養(yǎng)殖期間，應(yīng)對(duì)非洲豬瘟的流行病學(xué)調(diào)查進(jìn)行了解與分析，并采取科學(xué)的防控措施，以避免豬群發(fā)病。

關(guān)鍵詞：非洲豬瘟；流行病學(xué)；實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)

本研究對(duì)非洲豬瘟在邊境地區(qū)的流行病學(xué)調(diào)查及實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)進(jìn)行深入探討，具有重要意義。通過(guò)對(duì)該地區(qū)非洲豬瘟的流行特點(diǎn)、傳播途徑等流行病學(xué)特征進(jìn)行研究與分析，并制定出科學(xué)有效的防控策略，為其提供參考依據(jù)。能夠降低非洲豬瘟傳入和擴(kuò)散的風(fēng)險(xiǎn)。此外，準(zhǔn)確、快速的實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)，是及時(shí)發(fā)現(xiàn)疫情、采取有效防控措施的關(guān)鍵。

1 傳播途徑

非洲豬瘟病毒的傳播途徑主要包括直接接觸傳播、間接接觸傳播和媒介傳播等，這些傳播途徑在邊境地區(qū)的生豬養(yǎng)殖和流通環(huán)節(jié)中相互交織，增加了病毒傳播的風(fēng)險(xiǎn)。直接接觸傳播是非洲豬瘟最主要的傳播方式之一。在生豬養(yǎng)殖過(guò)程中，豬之間的相互接觸、爭(zhēng)斗、交配等行為，都能夠?qū)е虏《驹谪i群中傳播。當(dāng)健康豬與感染豬直接接觸時(shí)，病毒可通過(guò)皮膚傷口、口腔黏膜、鼻腔黏膜等途徑進(jìn)入健康豬體內(nèi)，引發(fā)感染。在一些小規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)，由于養(yǎng)殖密度較大，豬活動(dòng)空間有限，直接接觸傳播的風(fēng)險(xiǎn)更高。間接接觸傳播也是非洲豬瘟病毒傳播的重要途徑，被病毒污染的飼料、飲水、器具、車(chē)輛、衣物等都會(huì)成為病毒傳播的載體。在崇左市，部分養(yǎng)殖場(chǎng)從外地采購(gòu)飼料時(shí)，若飼料在運(yùn)輸過(guò)程中受到污染，而養(yǎng)殖場(chǎng)又未對(duì)飼料進(jìn)行嚴(yán)格的檢驗(yàn)和消毒，很大概率會(huì)將病毒帶入豬場(chǎng)。使用被污染的飼料槽、飲水器，或運(yùn)輸過(guò)感染豬的車(chē)輛未經(jīng)徹底清洗和消毒，就用于運(yùn)輸健康豬，也會(huì)導(dǎo)致病毒的傳播[1]。

2 流行特點(diǎn)

2.1 季節(jié)性特點(diǎn)

非洲豬瘟在邊境地區(qū)呈現(xiàn)出一定的季節(jié)性流行特點(diǎn)。通過(guò)對(duì)該地區(qū)多年的疫情監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)夏季和秋季是非洲豬瘟相對(duì)高發(fā)的季節(jié)。夏季高溫多雨，這種氣候條件為病毒的生存和傳播創(chuàng)造了有利環(huán)境。高溫高濕的環(huán)境有利于病毒在外界環(huán)境中的存活，如在被污染的土壤、水源中，病毒可存活較長(zhǎng)時(shí)間。雨水的沖刷導(dǎo)致病毒在不同區(qū)域之間擴(kuò)散，增加了健康豬感染的風(fēng)險(xiǎn)。夏季蚊蟲(chóng)滋生，蜱蟲(chóng)、蒼蠅等昆蟲(chóng)活動(dòng)頻繁，它們作為非洲豬瘟病毒的傳播媒介，能夠?qū)⒉《緩母腥矩i傳播給健康豬。秋季是生豬出欄和調(diào)運(yùn)的高峰期，大量生豬在市場(chǎng)上流通，人員、車(chē)輛的流動(dòng)也更為頻繁。在這個(gè)過(guò)程中如果生物安全措施不到位，如運(yùn)輸車(chē)輛未進(jìn)行徹底清洗和消毒、交易市場(chǎng)衛(wèi)生條件差等，很容易導(dǎo)致病毒的傳播和擴(kuò)散。部分養(yǎng)殖戶(hù)為了追求經(jīng)濟(jì)效益，在秋季集中補(bǔ)欄，從外地引入仔豬或種豬，若引入的豬攜帶病毒，且在引入后未進(jìn)行嚴(yán)格的隔離觀察和檢測(cè)，就會(huì)引發(fā)疫情[2]。

2.2 區(qū)域分布特點(diǎn)

非洲豬瘟在崇左市邊境地區(qū)的疫情分布呈現(xiàn)出明顯的不均衡性，與地理環(huán)境、養(yǎng)殖密度等因素密切相關(guān)。與越南接壤的寧明縣、龍州縣等邊境縣是疫情的高發(fā)區(qū)域。這些地區(qū)邊境線(xiàn)長(zhǎng)，邊民互市貿(mào)易頻繁，生豬及其產(chǎn)品的非法跨境流動(dòng)難以完全杜絕。一些不法分子為了謀取私利，通過(guò)邊境小道非法將越南生豬或豬肉制品走私入境，這些未經(jīng)檢疫的生豬或豬肉制品可能攜帶非洲豬瘟病毒，從而引發(fā)疫情。據(jù)崇左海關(guān)統(tǒng)計(jì)，2023年在邊境口岸查獲的走私生豬及其產(chǎn)品案件達(dá)30余起，這些活動(dòng)極大增加了非洲豬瘟傳播的風(fēng)險(xiǎn)。

3 診斷技術(shù)

3.1 血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）是一種常用的血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)，廣泛應(yīng)用于非洲豬瘟抗體的檢測(cè)。其基本原理是利用抗原與抗體的特異性結(jié)合，將已知的非洲豬瘟病毒抗原包被在固相載體（如微孔板）上，加入待檢豬血清，若血清中含有非洲豬瘟病毒抗體，則抗體與包被抗原結(jié)合，形成抗原-抗體復(fù)合物。再加入酶標(biāo)記的二抗（如辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗豬IgG抗體），二抗與抗原—抗體復(fù)合物結(jié)合，形成抗原—抗體—酶標(biāo)二抗復(fù)合物。最后加入底物，在酶的催化作用下，底物發(fā)生顏色反應(yīng)，通過(guò)酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度值，根據(jù)吸光度值與已知標(biāo)準(zhǔn)品的比較，判斷待檢血清中是否含有非洲豬瘟病毒抗體以及抗體的含量[3]。

3.2 熒光PCR檢測(cè)技術(shù)

熒光定量PCR常用的熒光標(biāo)記方法有SYBR Green I染料法和TaqMan探針?lè)?。SYBR Green I染料能夠與雙鏈DNA特異性結(jié)合，在PCR擴(kuò)增過(guò)程中，隨著雙鏈DNA的合成，染料與雙鏈DNA結(jié)合，熒光信號(hào)增強(qiáng)，通過(guò)檢測(cè)熒光信號(hào)的強(qiáng)度來(lái)定量分析病毒核酸的含量。但該方法容易受到引物二聚體、非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物的影響，導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)假陽(yáng)性。TaqMan探針?lè)▌t是在PCR反應(yīng)體系中加入一條特異性的熒光探針，該探針兩端分別標(biāo)記有熒光報(bào)告基團(tuán)和熒光淬滅基團(tuán)。當(dāng)探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收，檢測(cè)不到熒光信號(hào)；在PCR擴(kuò)增過(guò)程中，Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，且熒光信號(hào)的強(qiáng)度與擴(kuò)增的DNA量成正比。TaqMan探針?lè)ň哂休^高的特異性和靈敏度，能夠有效避免非特異性擴(kuò)增的干擾，準(zhǔn)確地定量檢測(cè)樣本中的病毒核酸含量。在崇左市的非洲豬瘟疫情監(jiān)測(cè)中，熒光定量PCR技術(shù)被廣泛應(yīng)用于對(duì)生豬養(yǎng)殖場(chǎng)、屠宰場(chǎng)等場(chǎng)所的樣本檢測(cè)，能夠快速、準(zhǔn)確地判斷樣本中是否存在非洲豬瘟病毒以及病毒的含量，為疫情的及時(shí)發(fā)現(xiàn)和處置提供了重要依據(jù)。

3.3 膠體金免疫層析技術(shù)

膠體金免疫層析技術(shù)是一種基于抗原抗體特異性結(jié)合原理的快速檢測(cè)方法，在非洲豬瘟的現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)中具有重要應(yīng)用價(jià)值。其原理是將膠體金標(biāo)記的抗體或抗原固定在試紙條的特定區(qū)域，當(dāng)樣品中的待測(cè)物（如非洲豬瘟病毒抗原或抗體）與試紙條上的膠體金標(biāo)記物相遇時(shí)，會(huì)發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)，這種結(jié)合會(huì)導(dǎo)致膠體金顆粒聚集，從而在試紙條上形成肉眼可見(jiàn)的條帶，通過(guò)觀察條帶的有無(wú)和位置，即可判斷樣品中是否存在目標(biāo)物。在實(shí)際操作中使用非洲豬瘟膠體金免疫層析試紙條進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，首先需采集豬的血液、組織液或其他相關(guān)樣本。以血液樣本為例，用無(wú)菌采血針采集豬的耳靜脈血或其他合適部位的血液，將采集的血液樣本滴加到試紙條的加樣孔中。樣本會(huì)在試紙條的毛細(xì)作用下，沿著試紙條向前移動(dòng)。當(dāng)樣本中的非洲豬瘟病毒抗原（或抗體）與試紙條上預(yù)先包被的膠體金標(biāo)記的抗體（或抗原）相遇時(shí)，會(huì)迅速結(jié)合形成復(fù)合物。該復(fù)合物繼續(xù)移動(dòng)至檢測(cè)線(xiàn)區(qū)域，若樣本中含有目標(biāo)物，則會(huì)與檢測(cè)線(xiàn)上固定的抗原（或抗體）再次結(jié)合，使檢測(cè)線(xiàn)處的膠體金顆粒聚集，呈現(xiàn)出紅色條帶；若樣本中沒(méi)有目標(biāo)物，則檢測(cè)線(xiàn)不會(huì)顯色。在質(zhì)控線(xiàn)區(qū)域，無(wú)論樣本中是否含有目標(biāo)物，都會(huì)與試紙條上相應(yīng)的物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)，形成一條紅色條帶，用于驗(yàn)證試紙條的有效性[4]。

4 防控方法

4.1 加大監(jiān)測(cè)力度，建立健全非洲豬瘟監(jiān)測(cè)體系

增加監(jiān)測(cè)點(diǎn)的數(shù)量和覆蓋范圍，除了對(duì)規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)、屠宰場(chǎng)等重點(diǎn)場(chǎng)所進(jìn)行監(jiān)測(cè)外，還應(yīng)加強(qiáng)對(duì)散養(yǎng)戶(hù)、邊境貿(mào)易點(diǎn)、野生動(dòng)物棲息地等區(qū)域的監(jiān)測(cè)。提高監(jiān)測(cè)頻次，特別是在非洲豬瘟高發(fā)季節(jié)和重點(diǎn)防控區(qū)域，應(yīng)加密監(jiān)測(cè)，及時(shí)掌握疫情動(dòng)態(tài)。采用多種監(jiān)測(cè)方法相結(jié)合，如病原學(xué)檢測(cè)、血清學(xué)檢測(cè)與臨床觀察相結(jié)合的方法，來(lái)提高監(jiān)測(cè)的準(zhǔn)確性和及時(shí)性。例如，在邊境貿(mào)易點(diǎn)可增加對(duì)入境生豬及產(chǎn)品的抽檢頻次，不僅要檢測(cè)核酸病毒，還要檢測(cè)抗體水平，并全面了解豬群的感染情況。

4.2 加強(qiáng)宣傳教育

通過(guò)舉辦培訓(xùn)班、發(fā)放宣傳資料、開(kāi)展現(xiàn)場(chǎng)指導(dǎo)等方式，向養(yǎng)殖戶(hù)宣傳非洲豬瘟的危害、傳播途徑、防控措施等知識(shí)，增強(qiáng)他們的防控意識(shí)和責(zé)任感。加強(qiáng)對(duì)從業(yè)人員的培訓(xùn)，提高他們的業(yè)務(wù)能力和操作技能，確保各項(xiàng)防控措施能夠被有效落實(shí)。如，對(duì)運(yùn)輸生豬的司機(jī)進(jìn)行培訓(xùn)，使其了解非洲豬瘟的防控要求，掌握運(yùn)輸車(chē)輛的消毒方法和注意事項(xiàng)。通過(guò)多種渠道，如電視、廣播、網(wǎng)絡(luò)等，廣泛宣傳非洲豬瘟的防控知識(shí)，提高公眾的認(rèn)知度和參與度，營(yíng)造全社會(huì)共同防控非洲豬瘟的良好氛圍。

4.3 推廣診斷技術(shù)

定期組織實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)培訓(xùn)班，邀請(qǐng)專(zhuān)家進(jìn)行授課和現(xiàn)場(chǎng)指導(dǎo)，讓基層人員熟練掌握各種診斷技術(shù)的操作方法和要點(diǎn)。鼓勵(lì)養(yǎng)殖場(chǎng)（戶(hù)）配備必要的診斷設(shè)備，如便攜式熒光定量PCR儀、膠體金免疫層析試紙條等，以便及時(shí)進(jìn)行自我檢測(cè)。加強(qiáng)對(duì)診斷技術(shù)的研究和創(chuàng)新，不斷提高診斷的準(zhǔn)確性、快速性和便捷性。例如，加大對(duì)新興快速檢測(cè)技術(shù)的研發(fā)投入，推動(dòng)環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（LAMP）、納米金探針技術(shù)等在崇左市邊境地區(qū)的應(yīng)用和推廣。

結(jié)語(yǔ)

綜上所述，非洲豬瘟一旦發(fā)病，對(duì)我國(guó)生豬養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)巨大影響，其死亡率高且無(wú)法治療，嚴(yán)重影響了生豬養(yǎng)殖業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益。養(yǎng)殖戶(hù)在管理期間應(yīng)全面了解非洲豬瘟的發(fā)生和流行趨勢(shì)，做到早發(fā)現(xiàn)、早處理。同時(shí)，養(yǎng)殖過(guò)程中要做好養(yǎng)殖場(chǎng)的消毒、滅蟲(chóng)等工作，減少病毒的傳播，為生豬打造優(yōu)質(zhì)、健康的生長(zhǎng)環(huán)境。

參考文獻(xiàn)：

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[2]張爽.遼寧北票地區(qū)非洲豬瘟的流行病學(xué)調(diào)查[J].中國(guó)畜牧業(yè)，2024（10）：119-120.

[3]張馨.非洲豬瘟的流行病學(xué)、診斷與綜合防控措施[J].畜牧獸醫(yī)科技信息，2024（03）：159-161.

[4]方韜.非洲豬瘟疫情下豬瘟的防控措施[J].吉林畜牧獸醫(yī)， 2024，45（03）：10-12.

收稿日期：2025-01-20

作者簡(jiǎn)介：張色萍（1982—），女，本科，獸醫(yī)師。研究方向：動(dòng)物疫病實(shí)驗(yàn)室診斷和治療。

*通訊作者：秦桂清（1990—），女，本科，獸醫(yī)師。研究方向：動(dòng)物疫病防控與診斷。