桉蝙蛾嗅覺相關(guān)蛋白的鑒定及部分新鑒定蛋白的表達分析

摘 要：桉蝙蛾（Endoclita vietnamensis Buchsbaum amp; Grehan）是近年來新發(fā)現(xiàn)的桉樹蛀干害蟲，是一種典型的本地昆蟲適應外來寄主的實例。成蟲將卵散產(chǎn)于林下地面，其幼蟲孵化后在落葉層地棲至3 齡，后轉(zhuǎn)移樹上危害，即使在混交林中幼蟲也能準確定位寄主，可推測出幼蟲的嗅覺系統(tǒng)有助于其選擇宿主。此外，嗅覺系統(tǒng)在成蟲求偶交配過程中也發(fā)揮著重要作用。在此，本研究對桉蝙蛾5 齡幼蟲頭部、12 齡幼蟲頭部及胸腹和成蟲觸角轉(zhuǎn)錄組進行研究，并探討嗅覺蛋白的表達譜。結(jié)果共鑒定出66 種嗅覺蛋白，其中14 種為新鑒定的嗅覺蛋白，包括3 種氣味結(jié)合蛋白（OBPs）、4 種氣味受體（ORs）、1 種味覺受體（GRs）和6 種離子型受體（IRs）。表達譜顯示除OR22 和OR25 在5 齡幼蟲頭部中不表達外，所有的OBPs、ORs 和GRs 在測定的3 個時期內(nèi)均有不同程度的表達。其中EsigOR23 在所有嗅覺蛋白中表達量最高，且在5 齡幼蟲頭部顯著高表達；EsigGOBP9 在成蟲觸角中的表達量顯著高于5 齡和12 齡。本研究結(jié)果為進一步研究桉蝙蛾的化學感覺提供分子基礎。EsigOR23 和EsigGOBP9 具有獨特的表達模式，可能分別是影響幼蟲寄主選擇的因素和成蟲求偶行為中的重要蛋白，值得進一步探索。

關(guān)鍵詞：桉蝙蛾；表達譜；嗅覺相關(guān)蛋白；轉(zhuǎn)錄組

中圖分類號：Q963 文獻標志碼：A

桉蝙蛾（Endoclita vietnamensis Buchsbaum amp;Grehan， 2022），屬鱗翅目（Lepidoptera）蝙蝠蛾科（Hepialidae）是桉樹上的一種重要蛀干性害蟲[1]，在廣西分布極為廣泛[2]，且隨著廣西桉樹人工林的大面積種植，其危害范圍逐漸擴大，已在廣西造成較大的經(jīng)濟損失和生態(tài)影響[3]。桉蝙蛾是本地害蟲適應外來寄主的典型案例，其幼蟲有地棲和樹棲2 個階段，整個幼蟲期共有12 齡[4]，主要危害1～3 a 桉樹幼林[5]。雌成蟲將卵散產(chǎn)于地面孵化后，幼蟲在腐木或落葉層地棲至3 齡，后轉(zhuǎn)移選擇寄主上樹危害[4]。即使在桉樹混交林中，桉蝙蛾幼蟲也能準確選擇并為害桉樹[6]，推測其幼蟲在轉(zhuǎn)移過程中能通過嗅覺系統(tǒng)主動識別桉樹。在求偶行為中，桉蝙蛾成蟲對同性個體有排斥反應，而異性個體間卻有明顯的吸引[7]，推測成蟲通過嗅覺系統(tǒng)識別其他個體釋放的信息素，以此分辨同性或異性，完成求偶過程。

嗅覺是昆蟲感知外界環(huán)境，進行信息交流的關(guān)鍵，嗅覺系統(tǒng)能夠引導昆蟲進行寄主定位、覓食、求偶、選擇棲息地等行為[8]。昆蟲的嗅覺識別過程復雜，需要一系列嗅覺相關(guān)蛋白參與，如氣味結(jié)合蛋白（odorant binding proteins， OBPs）、化學感受蛋白（chemosensory proteins， CSPs）、氣味受體（odorant receptors， ORs）、離子型受體（ionotropic receptors， IRs）及感覺神經(jīng)元膜蛋白（sensory neuron membrane proteins， SNMPs）[9]。其中，ORs、SNMPs、IRs、GRs 是昆蟲嗅覺蛋白中的膜蛋白，OBPs 和CSPs 是昆蟲嗅覺蛋白中的結(jié)合蛋白[10]。結(jié)合蛋白在感器淋巴液中結(jié)合通過感器表皮孔進入的氣味分子[11]，并將其轉(zhuǎn)運到昆蟲的氣味受體，觸發(fā)嗅覺相關(guān)信號轉(zhuǎn)導[12]。昆蟲的各種嗅覺蛋白協(xié)同合作，使得昆蟲能在復雜的自然環(huán)境中準確地進行化學識別，從而精準進行寄主選擇和求偶交尾等行為活動[13]。

基于桉蝙蛾3 齡幼蟲地棲轉(zhuǎn)樹棲的過程中結(jié)合蛋白高表達并在寄主的嗅覺識別中發(fā)揮作用[6]，探究5 齡、12 齡幼蟲期內(nèi)高表達并對幼蟲寄主選擇可能產(chǎn)生影響的重要嗅覺相關(guān)蛋白?；阼耱瓿上x通過嗅覺系統(tǒng)相互識別進行求偶行為[7]，探究成蟲期內(nèi)高表達并對求偶行為具有影響的嗅覺相關(guān)蛋白。本研究基于桉蝙蛾轉(zhuǎn)錄組鑒定的嗅覺相關(guān)蛋白，通過實時熒光定量PCR 技術(shù)，測定嗅覺相關(guān)蛋白在桉蝙蛾5 齡幼蟲頭部、12 齡幼蟲頭部和成蟲觸角中的表達情況，揭示嗅覺相關(guān)蛋白的變化規(guī)律，同時基于其表達模式，探究可能對幼蟲寄主選擇和對成蟲求偶行為有重要影響的嗅覺相關(guān)蛋白，對開發(fā)其高效綠色的防治手段有十分重要的意義[14]。

1 材料與方法

1.1 材料

2023 年12 月—2024 年1 月于廣西壯族自治區(qū)國有高峰林場（22°907?N，108°266?E）的桉樹人工林中采集生長健壯、形態(tài)發(fā)育正常的桉蝙蛾幼蟲，帶回實驗室，參照楊秀好[4]判斷桉蝙蛾齡期的方法和標準，選取活體5 齡和12 齡的桉蝙蛾幼蟲各3 頭。將所有5 齡和12 齡桉蝙蛾幼蟲的頭部剪下作為桉蝙蛾幼蟲頭部樣品。使用桉樹皮為主要原料制成的飼料（桉樹皮、瓊脂粉、酵母粉、蔗糖、尼泊爾金甲酯、抗壞血酸和純水）在培養(yǎng)皿中繼續(xù)飼養(yǎng)野外采集的幼蟲至其化蛹羽化，后使用手術(shù)剪剪取羽化后的成蟲觸角，將觸角放入裝有RNAlater 的離心管中保存，作為桉蝙蛾成蟲觸角樣品。所有樣品均保存于?80 ℃冰箱中。

1.2 方法

1.2.1 cDNA 文庫構(gòu)建及Illumina 測序

分別對桉蝙蛾5 齡幼蟲頭部、12 齡幼蟲頭部、12 齡幼蟲胸腹和成蟲觸角組織按照TRIzol?Reagent 試劑盒的要求提取總RNA[15]，每組3 個重復。測序工作經(jīng)由上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司完成。提取樣品總RNA 后，分別采用Qubit 4.0、Agilent 2100和NanoDrop 分光光度計對樣本進行濃度、完整性和純度質(zhì)控。選用Hieff NGS? mRNA lsolationMaster Kit Yeasen Cat#12603 試劑盒，用帶有Oligo（dT）的磁珠通過A-T 互補配對與mRNA 的ployA 結(jié)合的方式從Total RNA 中富集mRNA。隨后加入fragmentation buffer 將mRNA 打斷成短片段，以mRNA 為模板，用六堿基隨機引物（random hexamers）合成第1 條cDNA 鏈，然后加入緩中液、dNTPs RNase H 和DNA polymerase l合成第2 條DNA 鏈，接下來對雙鏈DNA 進行末端修復和3?末端加poy（A），連接測序接頭，使用Hieff NGS? DNA Selection Beads 磁珠進行純化及片段選擇，最后進行PCR 擴增，獲得文庫。使用Qubit 進行定量質(zhì)控， 文庫質(zhì)量合格后采用DNBSEQ-T7 進行上機測序。

1.2.2 轉(zhuǎn)錄組生物信息學分析

（ 1 ） 利用Trimmmomatic 篩選和處理所有轉(zhuǎn)錄組測序得到的原始測序數(shù)據(jù)（raw data），以去除低質(zhì)量和有接頭序列，最后篩選得到質(zhì)控后的測序數(shù)據(jù)（cleandata）。（2）將所有的clean reads 進行合并后，使用Trinity 在默認參數(shù)下從頭組裝拼接所有的clean data，選取TransRate、CD-HIT 軟件對組裝結(jié)果進行優(yōu)化過濾，利用BUSCO 軟件對組裝結(jié)果進行組裝評估，確保得到高質(zhì)量且完整性好的轉(zhuǎn)錄組本。（3）選擇最長的轉(zhuǎn)錄本作為基因的umigene。（4）使用BlastX 軟件將拼接所得的unigene 序列在E-value利用Blast2GO 軟件參照在NR 數(shù)據(jù)庫中BlastX比對結(jié)果對unigene 進行基因本體注釋和分類。

1.2.3 嗅覺蛋白基因的鑒定

選取tBlastN 程序，以NCBI 數(shù)據(jù)庫中昆蟲所有的OBPs、CSPs、ORs、IRs 和GRs 序列為Query 來比對桉蝙蛾轉(zhuǎn)錄組，篩選出與之序列相似性最高的unigene 作為候選嗅覺蛋白基因，再使用BlastX 進行驗證。

1.2.4 系統(tǒng)發(fā)育進化樹分析

選用MEGA 7 軟件中的ClustalW程序按照默認參數(shù)比對序列間的同源性。系統(tǒng)發(fā)育樹由MEGA 7 軟件進行構(gòu)建，選用Neighbor-Joining 法并經(jīng)過Bootstrap 進行1000次的反復計算來評估樹結(jié)構(gòu)和節(jié)點的支持度。最后，利用Figtree 美化系統(tǒng)發(fā)育樹。

1.2.5 實時熒光定量PCR

表達分析 選取桉蝙蛾轉(zhuǎn)錄組新鑒定的嗅覺蛋白中高表達量的8 個蛋白，使用Primer 5.0 軟件設計熒光定量引物（表1）；參照陳曉等[16]的方法，根據(jù)所使用桉蝙蛾樣品的齡期和體段選擇內(nèi)參基因。取1.2.1 提取的桉蝙蛾幼蟲和成蟲RNA 進行反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，反轉(zhuǎn)錄過程按照HiScript? QRT SuperMix for qPCR（+gDNA wiper）反轉(zhuǎn)錄試劑盒使用說明書進行。qRT-PCR 在熒光定量PCR 儀LIGHT CYCLE 480Ⅱ上進行。20 μL 反應體系：2×SYBR Green FastqPCR Mix 10 μL，cDNA 模板1 μL，10 μmol/L 正反引物各0.4 μL，ddH2O 8.2 μL。反應程序：94 ℃預變性30 s；94 ℃變性5 s，60 ℃退火和延伸共30 s，45 個循環(huán)；65～94 ℃每增加0.5 ℃保持5 s以記錄溶解曲線。每個樣品采用3 個生物學重復和3 個技術(shù)重復。Ct 值通過LightCycler 480Software release（version1.5.1.62SP3）軟件獲得。表達量采用2?ΔΔCt方法計算[17]。參照ZHANG等[12]以EsigGOBP9 在5 齡幼蟲頭部的表達量作為數(shù)據(jù)分析中的對照樣品。

1.3 數(shù)據(jù)處理

每個基因在各齡期的表達量的顯著性分析采用單因素方差分析（one-way nested analysis ofvariance， ANOVA）中多重比較的Tukey?s honestlysignificance difference（HSD）檢驗，分析軟件為SPSS 18.0（International Business Machines Corporation）。

2 結(jié)果與分析

2.1 轉(zhuǎn)錄組測序和序列組裝

桉蝙蛾在不同齡期不同部位的轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)結(jié)果良好，經(jīng)過去除低質(zhì)量的序列和接頭序列后均可獲得大量優(yōu)質(zhì)數(shù)據(jù)（表2）。其中，Q20 均在97%以上，Q30 均在93%以上，表明測序質(zhì)量良好。將所有轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)合并并使用Trinity 對這些高質(zhì)量測序數(shù)據(jù)進行組裝拼接， 總共得到54 894 條unigenes 和75 562 條transcript。unigenes的總長度為54 668 278 bp，其中最長為29 838 bp，最短為201 bp，平均長度為995.89 bp，N50 的長度為1692 bp，unigenes 的長度分布如圖1 所示。桉蝙蛾轉(zhuǎn)錄組的原始數(shù)據(jù)已提交至NCBI SRA 數(shù)據(jù)庫（NCBI Sequence Read Archive database），登錄號為PRINA713545。

2.2 同源分析和基因本體注釋

如圖2 所示，共有19 490 條unigene 可以被注釋到六大蛋白數(shù)據(jù)庫中，占所有unigenes 的35.50%。其中，18 813 條（34.27%）unigenes 注釋到NR 數(shù)據(jù)庫，數(shù)目最多；15 939 條（29.04%）unigenes 注釋到eggNOG 數(shù)據(jù)庫，僅次于NR 數(shù)據(jù)庫；注釋到GO、Pfam 和Swiss-Prot 數(shù)據(jù)庫的unigenes 數(shù)目分別為13 343 條（24.31%）、13 146條（23.95%）和11 608 條（21.15%）；注釋到KEGG 數(shù)據(jù)庫的unigenes 有9874 條（17.99%），數(shù)目最少。

如圖3 所示，通過對桉蝙蛾轉(zhuǎn)錄組中unigenes在NR 非冗余蛋白庫中進行BlastX 同源比對，結(jié)果顯示，最多的物種是鱗翅目昆蟲，其中，有8.18% unigenes 為日本袋蛾（ Eumeta japonicaHeylaerts），其次是二化螟（Chilo suppressalis Walker，4.79%）、斜紋夜蛾（Spodoptera litura Fabricius，4.53%）、亞洲玉米螟（Ostrinia furnacalis Guenee，4.25% ） 和海波斯莫科馬屬蛾（ Hyposmocomakahamanoa Schmitz amp; Rubinoff， 3.96%）等。

如圖4 所示，歸類于分子功能（molecularfunction）的unigenes 數(shù)目最多有15 611 條，其次是細胞組分（cellular component）有13 685 條，生物過程（biological process）最少有11 378 條。細分之后，歸類于分子功能的unigenes 中結(jié)合（binding）項所占比例最高，其次是催化活性（catalytic activity），歸類于細胞組分的unigenes中膜部分（membrane part）是最豐富的一項，其次是細胞部分（cell part）；歸類于生物過程的unigenes 中細胞過程（cellular process）是占比最高的一項，其次是代謝過程（metabolic process）。

如圖5 所示，被注釋到KEGG 數(shù)據(jù)庫六大通路的unigenes 中數(shù)目最多的一項是代謝（metabolism）有2107 條，其次是人類疾?。╤uman diseases）有2009 條，接下來依次是生物體系統(tǒng)（organismalsystems）2000 條、遺傳信息處理（genetic informationprocessing）1672 條、環(huán)境信息處理（environmental information processing）1363 條，細胞過程（cellular processes）最少僅有1351 條。其中有15 條二級通路中unigenes 的數(shù)目大于400條，其余28 條通路中的unigenes 均不足400 條。

2.3 嗅覺蛋白基因的鑒定

為了對比桉蝙蛾羽化前后嗅覺相關(guān)蛋白的表達變化，對成蟲觸角樣品和12 齡幼蟲頭部樣品中嗅覺相關(guān)蛋白的表達進行了比較。由表3 可知，在桉蝙蛾轉(zhuǎn)錄組中新鑒定了3 個OBPs 基因EsigOBP17、EsigOBP18 和EsigGOBP9，均在成蟲觸角中的表達量更高，其中EsigGOBP9 表達量最高；新鑒定的4 個Ors 基因OR22、OR23、OR24、OR25，其中OR22、OR23 在成蟲觸角中表達量更高，OR24 僅在12 齡幼蟲頭部表達，OR25 僅在成蟲觸角中表達； 新鑒定的1 個GRs 基因EsigGR8，其在成蟲觸角中表達量更高；新鑒定的6 個Irs 基因，其中EsigIR20 在成蟲觸角中表達量更高，EsigIR21、EsigIR22、EsigIR23、EsigIR24、EsigIR25 均只在成蟲觸角中表達。

由表4 可知，在桉蝙蛾轉(zhuǎn)錄組中，已鑒定的基因包括16 個OBPs、6 個CSPs、19 個Ors、6個GRs、5 個Irs。

2.4 系統(tǒng)發(fā)育進化樹分析

如圖6 所示，利用桉蝙蛾與其他鱗翅目昆蟲共8 個物種的OBPs 構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進化樹，顯示新鑒定的桉蝙蛾的OBPs 并未全部聚集到同一支，而EsigOBP17、EsigOBP18 與其他物種的OBPs聚集在一起，形成獨立的分支。其中EsigOBP17與棉鈴蟲HarmOBP19 聚在同一支，EsigOBP18與桑螟GpylOBP19、甜菜夜蛾SexiOBP23 聚在一起；EsigGOBP9 與桑螟GpylOBP3 在自展支持率大于90%的情況下聚集在同一支，進化關(guān)系較近。

2.5 嗅覺蛋白表達譜

8 個新鑒定的嗅覺蛋白在桉蝙蛾不同時期的表達水平的檢測結(jié)果如圖7 所示，并對其表達譜進行分析。在5 齡幼蟲頭部中OR22 和OR25 不表達，OBPs、ORs 和GRs 在測定的3 個時期內(nèi)均表達。在所有嗅覺蛋白中，OR23 表達量最高；在5 齡幼蟲頭部中，OBP18 和OR23 表達量最高，且與在成蟲觸角和12 齡幼蟲頭部中的表達量相比差異顯著（Plt;0.05）；在12 齡幼蟲頭部中，OBP17、OR24 和OR25 表達量最高，其中OBP17和OR24 與在成蟲觸角和5 齡幼蟲頭部中的表達量相比差異顯著（Plt;0.05）； 在成蟲觸角中，GOBP9、OR22 和GR8 表達量最高，其中GOBP9和GR8 與在5 齡幼蟲頭部和12 齡幼蟲頭部中的表達量相比差異顯著（Plt;0.05）。GOBP9 和OR22的表達量隨齡期的增加而增加，而OR23 的表達量則降低。

3 討論

本研究對轉(zhuǎn)錄組測序所得的clean reads 進行組裝和拼接，獲得的unigenes 平均長度為995.89 bp，與大蠟螟（Galleria mellonella Linnaeus， 781 bp）[18]和仁扇舟蛾（Clostera restitura Walker， 896 bp）[10]的結(jié)果相近。其中，34.27%的unigenes 可以同源比對到NR 數(shù)據(jù)庫，且比對上最多的物種為鱗翅目昆蟲，進一步說明了該桉蝙蛾轉(zhuǎn)錄組的可靠性。

本研究在桉蝙蛾轉(zhuǎn)錄組共初步鑒定出66 個嗅覺相關(guān)蛋白，包括19 個OBPs、6 個CSPs、23個ORs、11 個IRs 和7 個GRs，嗅覺相關(guān)蛋白數(shù)量低于其他鱗翅目昆蟲，如在斜紋夜蛾（S. litura）轉(zhuǎn)錄組中鑒定出158 個嗅覺相關(guān)基因[19]；在仁扇舟蛾（C. restitura）雌、雄蟲觸角轉(zhuǎn)錄組中共鑒定出165 個嗅覺相關(guān)基因[10] ； 在稻縱卷葉螟（Cnaphalocrocis medinalis Guenee）成蟲轉(zhuǎn)錄組中鑒定出97 個嗅覺相關(guān)基因[20]； 在茶谷蛾（Agriophara rhombata Meyrich）成蟲觸角轉(zhuǎn)錄組中挖掘到238 個候選嗅覺相關(guān)基因[21]；推測出現(xiàn)這種現(xiàn)象可能是因為相較于其他鱗翅目昆蟲，不論是幼蟲還是成蟲，桉蝙蛾的活動能力更弱，活動范圍更小，生存環(huán)境更單一，因此表達的嗅覺蛋白基因更少。其次，不同的測序方法獲得的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)也存在著一定的差異，如ZHANG 等[22]通過Illumina Hiseq 2000 對棉鈴蟲（H. armigera）觸角轉(zhuǎn)錄組測序，鑒定出133 個嗅覺相關(guān)基因，而LIU 等[23]通過Roche 454 測序技術(shù)在棉鈴蟲中僅鑒定出97 個嗅覺蛋白基因，推測桉蝙蛾的嗅覺蛋白基因仍有待發(fā)掘。

系統(tǒng)發(fā)育分析結(jié)果顯示，EsigGOBP9 與桑螟GpylOBP3 在自展支持率大于90%的情況下聚集在同一支；EsigOBP18 與桑螟GpylOBP19 聚在一起；EsigOBP17 與棉鈴蟲HarmOBP19 聚在同一支，推測EsigGOBP9 與桑螟GpylOBP3、EsigOBP18與桑螟GpylOBP19、EsigOBP17 與棉鈴蟲HarmOBP19 功能相近。根據(jù)宋文淼[24]的研究結(jié)果， 在桑螟雌雄觸角表達量比較中， 桑螟GpylOBP3 在雌蟲觸角中表達量更高， 桑螟GpylOBP19 在雄蟲觸角中表達量更高，推測EsigGOBP9 與EsigOBP18 也具有相應的雌雄觸角表達分布。

絕大部分OBP 基因在昆蟲觸角中高表達[25]，這與OBPs 作為載體參與觸角淋巴液氣味分子運輸?shù)墓δ芟嚓P(guān)[26]；同時OBP 在昆蟲的不同時期表達量也不同，可能與OBP 在昆蟲特定時期承擔的功能不同有關(guān)，如桃小食心蟲CsasOBP7 在成蟲交配高峰期觸角中的表達量遠高于其他時期[27]。在本研究中，新鑒定了3 個OBPs，在各齡期均有不同程度的表達，其中EsigGOBP9 在成蟲觸角中顯著高表達且遠高于其他2 個基因，這意味著EsigGOBP9 可能結(jié)合桉蝙蛾成蟲釋放的性信息素，在雌雄蟲的求偶過程中起著重要作用，值得進一步研究。

幼蟲頭部是觸角著生部位，觸角是昆蟲進行嗅覺識別的主要器官，而ORs 是主要分布在觸角的嗅覺相關(guān)蛋白[28]，推測這些基因可能也主要行使桉蝙蛾幼蟲嗅覺識別功能；WEN 等[29]在對草地螟（Loxostege sticticalis Linnaeus）幼蟲的研究中發(fā)現(xiàn)LstiOR5 是其識別大豆葉揮發(fā)物水楊酸甲酯的重要嗅覺蛋白，且LstiOR5 在草地螟幼蟲頭部特異性高表達； 宋玄[30]在對中紅側(cè)溝繭蜂（Microplitis mediator Halidag）幼蟲的氣味受體MmedOR48 的研究中證明MmedOR48 主要功能是識別植物揮發(fā)物，且MmedOR48 在中紅側(cè)溝繭蜂幼蟲頭部高表達。在本研究中，新鑒定了4 個ORs，其中EsigOR23 在5 齡幼蟲頭部的表達量顯著高于其他齡期，且遠高于其他3 個ORs 的表達量。所以推測在桉蝙蛾5 齡幼蟲頭部顯著表達的EsigOR23 可能是識別寄主植物揮發(fā)物的重要氣味受體蛋白，值得進一步研究。

ORs 的功能與其表達模式有關(guān)，不同組織中ORs 的表達存在很大差異[31]；研究發(fā)現(xiàn)ORs 除了在嗅覺感受器豐富的觸角上高表達之外，在其他器官也有表達，如申建梅等[32]研究表明瓜實蠅（Bactrocera cucurbita Coquillett）的ORs 除了在頭部表達外，在翅和足部也有少量表達；還有研究發(fā)現(xiàn)ORs 在味覺器官如東亞飛蝗（Locustamigratoria manilensis）的喙中表達[33]。本研究qPCR 結(jié)果表明，EsigOR22 和EsigOR25 在桉蝙蛾5 齡幼蟲頭部中不表達， 推測EsigOR22 和EsigOR25 可能在桉蝙蛾5 齡幼蟲時期的其他部位表達，這2 個基因在桉蝙蛾5 齡幼蟲時期可能是參與除氣味感受之外的其他生理生化反應，具有氣味感受外的其他功能。

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基金項目 廣西壯族自治區(qū)科技基地和人才專項（No. 2020AC19057）；國家自然科學基金青年科學基金項目（No. 32001321）；廣西壯族自治區(qū)自然科學基金面上項目（No. 2020JJA130068）。