酶輔助超聲優(yōu)化提取紫蘇籽多酚及其抗氧化和酶抑制活性

摘要：紫蘇籽多酚是紫蘇的成分之一，具有多種生物活性。文章以紫蘇籽為原料，通過單因素實(shí)驗(yàn)考察了酶的種類、提取方法、超聲條件對(duì)紫蘇籽多酚提取量的影響，并將乙醇濃度、料液比、提取溫度、超聲時(shí)間、超聲功率等因素下的各個(gè)水平與抗氧化指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析。同時(shí)，對(duì)紫蘇籽提取液酚類成分進(jìn)行鑒定，并對(duì)α-淀粉酶、胰脂肪酶、α-葡萄糖酶的抑制活性進(jìn)行研究。結(jié)果表明，紫蘇籽多酚的最優(yōu)提取條件：酶的種類為胃蛋白酶，提取方法為先酶解再超聲，胃蛋白酶添加量5 mg/mL、乙醇濃度40%、料液比1∶40、提取溫度40 ℃、超聲時(shí)間45 min、超聲功率432 W，在此條件下，紫蘇籽多酚提取量為38.69 mg/g。紫蘇籽多酚提取液的抗氧化能力與多酚提取量具有良好的相關(guān)性。此外，紫蘇籽多酚對(duì)α-淀粉酶、胰脂肪酶、α-葡萄糖酶具有顯著的抑制作用。

關(guān)鍵詞：紫蘇籽；多酚；提?。豢寡趸?；酶活抑制

中圖分類號(hào)：TS201.2""""""文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A"""""文章編號(hào)：1000-9973（2025）02-0112-09

Optimization of Extraction of Polyphenols from Perilla Seeds by

Enzyme-Assisted Ultrasound and Their Antioxidant and

Enzyme Inhibitory Activities

HAO Xi， LI Wei， ZHANG Hai-peng， LI Xin-tong， ZHANG Ming， WU Song-yao， CHEN Lin-lin^*

（College of Food Engineering， Harbin University of Commerce， Harbin 150028， China）

Abstract： Perilla seed polyphenols are one of the components of perilla and have a variety of biological activities. In this paper， with perilla seeds as the raw materials， the effects of enzyme types， extraction methods and ultrasonic conditions on the extraction amount of perilla seed polyphenols are investigated by single factor experiment， and correlation between various levels under ethanol concentration， solid-liquid ratio， extraction temperature， ultrasonic time， ultrasonic power and antioxidant indexes is analyzed. At the same time， the phenolic components of perilla seed extracting solution are identified， and their inhibitory activities on α-amylase， pancreatic lipase and α-glucolase are studied. The results show that the optimal extraction conditions of perilla seed polyphenols are as follows： the type of enzyme is pepsin， the extraction method is enzymatic hydrolysis followed by ultrasound， the addition amount of pepsin is 5 mg/mL， the ethanol concentration is 40%， the solid-liquid ratio is 1∶40， the extraction temperature is 40 ℃， the ultrasonic time is 45 min， and the ultrasonic power is 432 W. Under these conditions， the extraction amount of perilla seed polyphenols is 38.69 mg/g. The antioxidant capacity of perilla seed polyphenol extracting solution has a good correlation with the extraction amount of polyphenols. In addition， perilla seed polyphenols have significant inhibitory effects on α-amylase， pancreatic lipase and α-glucolase.

Key words： perilla seeds; polyphenols; extraction; antioxidation; enzyme activity inhibition

紫蘇是薄荷科一年生草本植物，是藥食兩用藥材，主要成分為油脂、蛋白質(zhì)、黃酮、多酚、甾醇等，具有近千年的栽培歷史^[1]。紫蘇籽富含油脂，含有α-亞麻酸、亞油酸、油酸、棕櫚酸、硬脂酸等脂肪酸，其中不飽和脂肪酸含量高于90%，是目前已知α-亞麻酸含量最高的植物油資源之一。然而，壓榨提取食用油后，剩余的殘?jiān)杂欣脙r(jià)值，含有豐富的酚酸類生物活性成分，如原兒茶醛、秦皮乙素、咖啡酸、木犀草素、芹菜素、迷迭香酸、野黃芩素、槲皮素等^[2]。因此，紫蘇籽多酚具有極高的開發(fā)價(jià)值。紫蘇籽多酚具有抗氧化、抗炎、抗菌、抗癌、改善睡眠、抗衰老、改善腸胃功能、提高免疫力、降血壓、降血脂等多種功效^[3]，目前，紫蘇籽多酚資源已得到了較廣泛的開發(fā)利用。在食品方面，以紫蘇籽為原料制成的具有保健功能的食品包括紫蘇油、紫蘇茶、紫蘇面包、紫蘇蛋白粉等。此外，還可制成紫蘇果醬、紫蘇醬油等調(diào)味料^[4]。

目前，對(duì)紫蘇籽多酚的提取方法主要有超聲輔助提取法^[5]、微波輔助提取法^[6]、復(fù)合酶法^[7]等。Li等^[5]采用響應(yīng)面法優(yōu)化紫蘇葉中酚類化合物、抗氧化劑和迷迭香酸的超聲輔助提取工藝，在最優(yōu)條件下得到迷迭香酸含量為31.02 mg/g DW。同時(shí)Li等^[6]使用綠色質(zhì)子離子液體從紫蘇種子中提取迷迭香酸，結(jié)合微波輔助提取多酚，在最佳條件下多酚含量為15.744 mg/g。此外，馬嘉潔等^[7]以紫蘇葉為原料，采用纖維素酶法輔助提取多酚，在最佳酶解條件下，多酚提取量最高，為16.82 mg/g。

這些方法存在能耗高、提取率低、提取時(shí)間長等問題。由于紫蘇籽具有果皮薄、硬而脆、易壓碎等特點(diǎn)，先利用酶系破壞細(xì)胞壁，使其釋放多酚^[8]，再利用超聲輔助提取使大分子物質(zhì)溶于溶劑中，溫度的升高和功率的增加可加快多酚溶出速率，因此，采用酶輔助超聲提取法能高效提取多酚。目前酶輔助超聲提取法已經(jīng)應(yīng)用于辣木^[9]、鱗花草^[10]等植物多酚的提取中，并取得了良好的提取效果，但鮮見在紫蘇籽多酚提取中應(yīng)用的報(bào)道。

本文采用酶輔助超聲提取紫蘇籽多酚，通過單因素實(shí)驗(yàn)，以紫蘇籽多酚提取量為指標(biāo)，篩選最佳酶的種類和提取方法，并對(duì)酶添加量、料液比、乙醇濃度、超聲功率、超聲時(shí)間與抗氧化指標(biāo)（（2，2′-聯(lián)氮雙（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二銨鹽[2，2'-azino-bis（3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid） ammonium salt radical cation，ABTS⁺·]和1，1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基（1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical，DPPH·）清除活性及鐵離子還原/抗氧化能力（ferric ion reducing antioxidant power，F(xiàn)RAP））之間的相關(guān)性進(jìn)行分析，并進(jìn)行酶抑制實(shí)驗(yàn)和紫蘇籽提取液的成分分析，為降血糖、降血脂等紫蘇健康食品的研發(fā)及紫蘇籽多酚資源的綜合開發(fā)利用提供了理論技術(shù)參考。

1"材料與方法

1.1"材料與儀器

紫蘇籽：黑龍江省佳木斯市樺南縣；纖維素酶（100 U/g）、α-淀粉酶（14 000 U/g）、胰脂肪酶（250 U/g）、胃蛋白酶（3 000 U/g）：上海阿拉丁生化科技股份有限公司；所用其他試劑均為分析純。

UV-2550紫外可見分光光度計(jì)"日本島津公司；DHG-9053A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱、HH.S11-4電熱恒溫水浴鍋"上海一恒科學(xué)儀器有限公司；PHS-2F型精密酸度計(jì)"上海圣科儀器設(shè)備有限公司；BSA124S電子分析天平"北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司；FW100粉碎機(jī)"溫嶺市林大機(jī)械有限公司；H1650-W高速臺(tái)式離心機(jī)"鹽城市凱特實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；KQ-200KDE高功率數(shù)控超聲波清洗機(jī)"昆山市超聲儀器有限公司。

1.2"實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1"紫蘇籽預(yù)處理

將紫蘇籽研磨粉碎后過60目篩，加入石油醚進(jìn)行除脂，石油醚與紫蘇籽粉末的比例為2∶1，密封^[11]。充分浸泡24 h后進(jìn)行抽濾，將濾渣放入烘箱中完全烘干至恒重備用。

1.2.2"沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線建立

稱取10 mg沒食子酸，用無水乙醇定容于10 mL容量瓶中。取30，60，90，120，150 μL沒食子酸溶液于試管中，加入6 mL 5% Na₂CO₃溶液混勻后加入200 μL 1 mol/L福林酚溶液，用Na₂CO₃溶液定容至8 mL，空白組為Na₂CO₃和福林酚溶液，水?。?0 ℃，30 min），在764 nm處測吸光度值。

1.2.3"酶種類對(duì)多酚提取效果的影響

分別取2.50 g紫蘇籽粉末，加入2.4 U/mL纖維素酶（pH 4.8）、果膠酶（pH 4.8）、胃蛋白酶（pH 2.0）、胰蛋白酶（pH 8.0），水?。?0 ℃，2 h），酶解后進(jìn)行滅酶，抽濾，然后向?yàn)V渣中以料液比1∶40加入濃度為40%的乙醇，進(jìn)行超聲處理（50 ℃，45 min，432 W），合并濾液，減壓蒸餾，離心（8 000 r/min，10 min），以總酚含量為指標(biāo)，篩選較優(yōu)的酶種類。

1.2.4"提取方法對(duì)多酚提取效果的影響

分別取2.50 g紫蘇籽粉末，采用不同方法（磁力攪拌、超聲、纖維素酶酶解、纖維素酶酶解輔助超聲、果膠酶酶解、果膠酶酶解輔助超聲、胃蛋白酶酶解、胃蛋白酶酶解輔助超聲、胰蛋白酶酶解、胰蛋白酶酶解輔助超聲），以總酚含量為指標(biāo)，篩選較優(yōu)的紫蘇籽多酚提取方法。

1.2.5"酶輔助超聲提取條件的優(yōu)化

分別取2.50 g紫蘇籽粉末，改變條件參數(shù)：乙醇濃度（20%、40%、60%、80%、100%）、料液比（1∶20、1∶40、1∶60、1∶80、1∶100）、胃蛋白酶添加量（2.4，3.6，4.8，6.0，7.2，8.4，9.6，10.8 U/mL）、超聲功率（288，360，432，504，576，649 W）、超聲時(shí)間（15，30，45，60，75 min）。離心（8 000 r/min，10 min），取上清液，測定多酚提取量及各條件參數(shù)提取液對(duì)ABTS⁺·、DPPH·的清除能力和FRAP。

1.2.6"多酚含量測定

采用福林酚比色法測定提取物的總酚含量^[12]。標(biāo)準(zhǔn)曲線為以沒食子酸（0～300 μg/mL）為標(biāo)準(zhǔn)品，結(jié)果以每克樣品干重（dry weight，DW）的沒食子酸毫克數(shù)當(dāng)量表示，即mg GAE/g DW^"[13]?？偡雍繙y定：取2.50 g紫蘇籽粉末，以料液比1∶40加入40%乙醇，加入400 μL 5 mg/mL胃蛋白酶，調(diào)節(jié)pH至2.0，在40 ℃、超聲功率60 W下超聲45 min，然后在40 ℃水浴鍋中水浴45 min。取樣液，以8 000 r/min離心15 min后取400 μL上，加入到7.4 mL 5% Na₂CO₃溶液中，加入200 μL福林酚溶液，40 ℃水浴30 min，冷卻后測定吸光度值。多酚提取量計(jì)算公式如下：

W=C×D×Vm。（1）

式中：W表示多酚提取量，mg GAE/g DW；C表示根據(jù)吸光度值計(jì)算出的溶液質(zhì)量濃度，mg/mL；D表示溶液稀釋倍數(shù)；V表示多酚提取液的用量，mL；m表示紫蘇籽取樣量，mg。

1.2.7"高效液相色譜鑒定紫蘇籽提取液的成分

配制1 mg/mL的咖啡酸、阿魏酸、迷迭香酸、木犀草素、槲皮素、山奈酚混合對(duì)照品溶液。紫蘇籽提取液用80%的甲醇溶液提取，離心（8 000 r/min，10 min），過濾膜（0.22 μm），置于液相瓶中備用。

色譜柱： Agilent Eclipse XDB-C₁₈（2.1 mm×150 mm，5 μm）；流動(dòng)相：0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B），梯度洗脫程序（0～5 min，5%～10% B；5～42 min，10%～35% B；42～47 min，35%～35% B；47～50 min，35%～60% B;50～52 min，60%～60% B；52～60 min，60%～95% B；60～65 min，95%～5% B；65～75 min，5%～5% B）；流速：0.8 mL/min；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。

1.2.8"抗氧化性的測定

參考Gulcin等^[14]的方法并稍作修改，分別取ABTS儲(chǔ)備液（7.4 mmol/L）和過硫酸鉀儲(chǔ)備液（2.6 mmol/L）等量混合并于黑暗處放置12～16 h。用無水乙醇將上述混合溶液稀釋至734 nm 處的吸光度值為0.70±0.02，分別取2.9 mL ABTS溶液與0.1 mL不同條件下的多酚提取液、2.9 mL無水乙醇與0.1 mL不同條件下的多酚提取液、2.9 mL ABTS溶液與0.1 mL無水乙醇，混勻后于暗處反應(yīng)10 min，隨后測定764 nm處的吸光度值，分別記為A₁、A₂、A₀，按照公式（2）計(jì)算ABTS⁺·清除率。

清除率（%）=1－A₁－A₂A₀×100%。（2）

參考Rumpf等^[15]的方法并稍作修改，將多酚提取液與12 mg/mL DPPH乙醇溶液按1∶9.5混合均勻，此時(shí)在764 nm 處的吸光度值為0.70±0.02，分別取2.9 mL DPPH溶液與0.1 mL不同條件下的多酚提取液、2.9 mL無水乙醇與0.1 mL不同條件下的多酚提取液、2.9 mL DPPH溶液與0.1 mL無水乙醇混勻后暗處反應(yīng)30 min，在517 nm 記錄吸光度值，分別記為A₁、A₂、A₀，按照公式（2）計(jì)算DPPH·清除率。

參考Skroza等^[16]的方法并稍作修改，取0.3 mmoL/L醋酸緩沖溶液、10 mmol/L TPTZ溶液、40 mmol/L FeCl₃按10∶1∶1配制成FRAP工作液，取0.1 mL樣液與2.9 mL FRAP混合，在暗處反應(yīng)10 min，于593 nm處測定吸光度值。

1.2.9"紫蘇籽多酚對(duì)酶活的抑制作用

1.2.9.1"對(duì)α-淀粉酶的抑制活性

參考胡芳等^[17]的方法并稍作修改，用0.05 mol/L的PBS緩沖溶液（pH 6.8）配制濃度為 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mg/mL的紫蘇籽多酚提取液，分別取0.20 mL不同質(zhì)量濃度的多酚提取液，加入0.20 mL α-淀粉酶 （1 U/mL） 混合，于37 ℃保持15 min后，加入0.50 mL 1%的可溶性淀粉溶液反應(yīng)10 min。隨后加入1 mL DNS 試劑終止反應(yīng)，沸水浴5 min，冷卻至室溫，用蒸餾水定容至8 mL，在540 nm處測定吸光度值。實(shí)驗(yàn)空白組和對(duì)照空白組均用磷酸緩沖液代替酶液，對(duì)照組用磷酸緩沖液代替提取液，按照公式（3）計(jì)算紫蘇籽多酚提取液對(duì)α-淀粉酶活性的抑制率。

酶活性抑制率（%）=A－BC－D×100%。（3）

式中：A表示實(shí)驗(yàn)組的吸光度值；B表示實(shí)驗(yàn)空白組的吸光度值；C表示對(duì)照組的吸光度值；D表示對(duì)照空白組的吸光度值。

1.2.9.2"對(duì)胰脂肪酶的抑制活性

參考余雨婷等^[18]的方法并稍作修改，配制1 mmol/L PNPP（取0.037 8 g PNPP，加入1 mL曲拉通X-100與5 mL異丙醇，用Tris-HCl（pH 8.0）定容至100 mL），并配制濃度為1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mg/mL 的紫蘇籽多酚提取液，測定酶活性時(shí)，取0.5 mL 10 U/mL的胰脂肪酶，將1.5 mL 1 mmol/L的PNPP與1.5 mL Tris-HCl（pH 8.0）充分混勻，加入0.5 mL各濃度梯度的紫蘇籽多酚提取液，水?。?7 ℃，20 min），再加入4.5 mL蒸餾水，對(duì)照組為0.5 mL蒸餾水，其他條件相同。實(shí)驗(yàn)空白組和對(duì)照空白組均用磷酸緩沖液代替酶液，測定405 nm處的吸光度值，以奧利司他為陽性對(duì)照，抑制率按照公式（3）計(jì)算。

1.2.9.3"對(duì)α-葡萄糖酶的抑制活性

參考滿子意等^[19]的方法并稍作修改，以0.05 mol/L PBS（pH 6.8）作為溶劑，配制濃度為1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mg/mL的紫蘇籽多酚提取液，分別取0.5 mL各濃度梯度的紫蘇籽多酚提取液，加入0.5 mL 1 U/mL的α-葡萄糖酶溶液，充分混勻，37 ℃水浴20 min，加入0.5 mL 0.02 mol/L的對(duì)硝基苯基-D-吡喃葡萄糖苷，充分混勻，37 ℃水浴20 min，隨后加入2 mL 1 mol/L的Na₂CO₃終止反應(yīng)，并在波長700 nm 處測定吸光度值。實(shí)驗(yàn)空白組和對(duì)照空白組均用磷酸緩沖液代替酶液，對(duì)照組用磷酸緩沖液代替提取液，抑制率按照公式（3）計(jì)算。

1.3"數(shù)據(jù)處理

所有實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3次，采用Origin 2021軟件作圖和SPSS 28.0軟件進(jìn)行相關(guān)性分析。

2"結(jié)果與分析

2.1"沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線

由圖1可知，在0.003～0.017 mg/mL濃度范圍內(nèi)，沒食子酸溶液濃度與吸光度值呈線性關(guān)系，回歸方程為y=0.260 5x+0.004，r²=0.995 9，線性關(guān)系可靠，結(jié)果以mg/g提取物的沒食子酸當(dāng)量（GAE）表示。

2.2"酶種類及方法的優(yōu)化

2.2.1"酶種類的選擇

由圖2可知，當(dāng)酶解時(shí)間為60 min時(shí)，紫蘇籽多酚的提取量較高，且胃蛋白酶的多酚提取量優(yōu)于其他3種酶。當(dāng)酶解時(shí)間為30～60 min時(shí)，隨著酶解時(shí)間的增加，多酚提取量呈上升趨勢，當(dāng)酶解時(shí)間為60 min，酶種類為胃蛋白酶時(shí)，紫蘇籽多酚提取量為21.96 mg GAE/g DW，隨著酶解時(shí)間的繼續(xù)增加，多酚提取量呈下降趨勢，這是由于酶解時(shí)間太長會(huì)導(dǎo)致多酚發(fā)生氧化降解^[20]。在紫蘇籽中，蛋白質(zhì)含量高，胃蛋白酶與胰蛋白酶都能通過降解紫蘇籽細(xì)胞壁和細(xì)胞內(nèi)部網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)增加多酚提取量，但胃蛋白酶的降解作用較強(qiáng)；然而纖維素酶只能通過分解細(xì)胞壁使多酚提取量增加^[21]。因此，選取胃蛋白酶輔助提取多酚。

2.2.2"提取方法的選擇

由圖3可知，采用先酶解再超聲的提取方法優(yōu)于只酶解，更優(yōu)于磁力攪拌提取。其中先胃蛋白酶酶解再超聲提取的紫蘇籽多酚提取量較高，此時(shí)多酚提取量為28.64 mg GAE/g DW。酶輔助超聲提取法操作簡單、條件溫和、提取過程無污染，適用于活性要求高、產(chǎn)物濃度高的天然產(chǎn)物的提取。因此，選擇胃蛋白酶作為酶輔助超聲提取的較優(yōu)酶。

2.3"酶輔助超聲提取優(yōu)化條件及對(duì)抗氧化性的影響

2.3.1"乙醇濃度的影響

由圖4中A可知，多酚提取量在乙醇濃度為20%～40%時(shí)呈上升趨勢，乙醇濃度對(duì)多酚提取量的影響顯著（Plt;0.05），乙醇能夠破壞植物細(xì)胞壁，使結(jié)合態(tài)多酚釋放出來，故多酚提取量增加，但當(dāng)乙醇濃度＞40%時(shí)，多酚提取量開始下降，基于相似相溶原理，乙醇濃度增大，多酚與溶劑的極性差增大，多酚提取量減少^[22]。因此，乙醇濃度為40%較優(yōu)。

由圖4中B可知，當(dāng)乙醇濃度增加時(shí)，多酚提取量增加，使得抗氧化性增強(qiáng)，在乙醇濃度為40%時(shí)達(dá)到最大值，此時(shí)ABTS⁺·、DPPH·清除能力和FRAP增加，乙醇濃度對(duì)抗氧化性的影響顯著（Plt;0.05）。但乙醇濃度過高會(huì)影響多酚的提取，使整體抗氧化活性降低，隨著乙醇濃度的繼續(xù)增加，對(duì)ABTS⁺·、DPPH·的清除能力緩慢下降，F(xiàn)RAP急劇下降；ABTS⁺·、DPPH·清除能力、FRAP均在乙醇濃度為40%時(shí)達(dá)到最大，分別為79.65%、72.84%、4.66。其中，乙醇濃度對(duì)FRAP的影響最大。

由圖4中C可知，在不同乙醇濃度下，紫蘇籽多酚提取量與ABTS⁺·清除率呈極顯著正相關(guān)（Plt;0.01）；多酚提取量與DPPH·清除率、多酚提取量與FRAP、ABTS⁺·清除率與DPPH·清除率、ABTS⁺·清除率與FRAP、DPPH·清除率與FRAP的線性相關(guān)程度不顯著（Pgt;0.05）。由紫蘇籽多酚提取量與抗氧化性指標(biāo)的相關(guān)性分析可知，隨著多酚提取量的增加，對(duì)ABTS⁺·的清除率隨之增大，根據(jù)多酚提取量隨乙醇濃度增加的變化趨勢，當(dāng)乙醇濃度為40%時(shí)，多酚提取量最大，對(duì)ABTS⁺·的清除率最佳。

2.3.2"料液比的影響

由圖5中A可知，隨著料液比的增加，多酚提取量先上升后緩慢下降，料液比對(duì)多酚提取量的影響顯著（Plt;0.05）。當(dāng)料液比為1∶40時(shí)，多酚提取量達(dá)到最大值。當(dāng)提取溶劑體積達(dá)到一定量時(shí)才能充分與紫蘇籽中多酚反應(yīng)，而提取溶劑體積過大會(huì)降低溶劑中多酚濃度，使多酚提取量減少^[23]，因此料液比以1∶40為宜。

由圖5中B可知，DPPH·清除率、ABTS⁺·清除率和FRAP隨著料液比的增加先上升后下降，影響顯著（Plt;0.05）。在料液比為1∶40時(shí)，ABTS⁺·、DPPH·清除能力和FRAP均達(dá)到最大，分別為86.70%、73.03%、2.89。

由圖5中C可知，在不同料液比下，紫蘇籽多酚提取量與FRAP呈極顯著正相關(guān)（Plt;0.01）；紫蘇籽多酚提取量與ABTS⁺·清除率、ABTS⁺·清除率與FRAP都呈顯著正相關(guān)（Plt;0.05）；多酚提取量與DPPH·清除率、ABTS⁺·清除率與DPPH·清除率、DPPH·清除率與FRAP線性相關(guān)程度不顯著（Pgt;0.05）。由相關(guān)性分析可知，多酚提取量越高，ABTS⁺·清除率、DPPH·清除率、FRAP越大，抗氧化性越強(qiáng)。當(dāng)料液比為1∶40時(shí)，多酚提取量最大，對(duì)ABTS⁺·的清除率和FRAP均最佳，抗氧化能力較強(qiáng)。

2.3.3"酶添加量的影響

由圖6中A可知，當(dāng)酶添加量為2.4～7.2 U/mL時(shí)，紫蘇籽多酚提取量先上升后下降，影響顯著（Plt;0.05），當(dāng)酶添加量為6.0 mg/mL時(shí)多酚提取量最高，而當(dāng)酶添加量超過7.2 U/mL時(shí)，對(duì)多酚提取量的影響不顯著（Pgt;0.05）。胃蛋白酶能分解蛋白質(zhì)，破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，從而有助于多酚釋放，使多酚提取量隨著酶添加量的增加而增加。但多酚會(huì)阻礙底物與胃蛋白酶催化中心接觸，使酶活降低，隨著多酚提取量的增加，多酚對(duì)胃蛋白酶的抑制作用增強(qiáng)，當(dāng)酶添加量繼續(xù)增加時(shí)，多酚提取量降低^[24]，因此，選擇酶添加量6.0 U/mL為宜。

由圖6中B可知，DPPH·清除率、ABTS⁺·清除率和FRAP與酶添加量呈正相關(guān)。當(dāng)酶添加量為2.4～7.2 U/mL時(shí)呈上升趨勢，當(dāng)酶添加量超過7.2 U/mL后趨于平緩，由于多酚的抗氧化性與酚羥基有關(guān)，酚羥基與氨基酸殘基形成氫鍵后多酚的抗氧化性降低，而胃蛋白酶會(huì)增加樣品中氨基酸殘基含量，從而抑制多酚的抗氧化性^[25]，使得酶添加量繼續(xù)增加時(shí)DPPH·清除率、ABTS⁺·清除率和FRAP趨于平緩。

由圖6中C可知，在不同酶添加量下，紫蘇籽多酚提取量與ABTS⁺·清除率、多酚提取量與DPPH·清除率、多酚提取量與FRAP、ABTS⁺·清除率與FRAP的線性相關(guān)程度不顯著（Pgt;0.05）；ABTS⁺·清除率與DPPH·清除率呈顯著正相關(guān)（Plt;0.05）；DPPH·清除率與FRAP呈高度顯著正相關(guān)（Plt;0.001）。當(dāng)酶添加量為6.0 mg/mL時(shí)，多酚提取量達(dá)到最大，但此時(shí)抗氧化性并未達(dá)到最佳，而隨著酶添加量的增大，抗氧化性的各項(xiàng)指標(biāo)均增大。

2.3.4"超聲時(shí)間的影響

由圖7中A可知，紫蘇籽多酚提取量隨著超聲時(shí)間的增加先緩慢上升后趨于穩(wěn)定，當(dāng)超聲時(shí)間為45 min時(shí)多酚提取率達(dá)到峰值，這是由于提取紫蘇籽多酚時(shí)需要一定的時(shí)間使多酚擴(kuò)散，但時(shí)間過長會(huì)使部分多酚發(fā)生氧化^[26]，因此，選擇超聲時(shí)間45 min為宜。

由圖7中B可知，隨著超聲時(shí)間的增加，DPPH·清除率先上升后下降，在45 min時(shí)達(dá)到最大值79.80%，而后下降。ABTS⁺·清除率隨著超聲時(shí)間的增加先上升后下降，在45 min時(shí)達(dá)到最大值82.09%，F(xiàn)RAP隨著超聲時(shí)間的增加呈先上升后下降的趨勢，在45 min時(shí)達(dá)到最大值8.51。超聲時(shí)間對(duì)ABTS⁺·、DPPH·清除能力和FRAP的影響顯著（Plt;0.05）。

由圖7中C可知，在不同超聲時(shí)間下，紫蘇籽多酚提取量與ABTS⁺·清除率、多酚提取量與DPPH·清除率、多酚提取量與FRAP、ABTS⁺·清除率與DPPH·清除率、ABTS⁺·清除率與FRAP、DPPH·清除率與FRAP的線性相關(guān)程度不顯著（Pgt;0.05）。結(jié)合圖7中B可知，隨著超聲時(shí)間的增加，紫蘇籽中多酚提取量與抗氧化性各項(xiàng)指標(biāo)的變化趨勢一致，超聲時(shí)間達(dá)到45 min時(shí)多酚提取量最大，ABTS⁺·清除率、DPPH·清除率、FRAP均最佳。

2.3.5"超聲功率的影響

由圖8中A可知，紫蘇籽多酚提取量隨著超聲功率的增加先上升后下降，影響顯著（Plt;0.05），在432 W時(shí)多酚提取量達(dá)到最高。適當(dāng)?shù)某暪β蕰?huì)增加多酚提取量，而超聲功率過大會(huì)使提取液流速過大，紫蘇籽樣品停留時(shí)間縮短，破壁功能減弱，使多酚提取量降低^[27]，因此，選擇超聲功率432 W為宜。

由圖8中B可知，隨著超聲功率的增加，ABTS⁺·、DPPH·清除能力和FRAP變化趨勢一致，總體先上升，在432 W時(shí)達(dá)到最大，分別為82.47%、85.71%、5.05，之后開始下降，超聲功率對(duì)ABTS⁺·、DPPH·清除能力和FRAP的影響顯著（Plt;0.05）。

由圖8中C可知，在不同超聲功率下，紫蘇籽多酚提取量與ABTS⁺·清除率、多酚提取量與FRAP、ABTS⁺·清除率與DPPH·清除率都呈顯著正相關(guān)（Plt;0.05）；多酚提取量與DPPH·清除率的線性相關(guān)程度不顯著（Pgt;0.05）；ABTS⁺·清除率與FRAP、DPPH·清除率與FRAP都呈極顯著正相關(guān)（Plt;0.01）。由紫蘇籽多酚提取量與抗氧化指標(biāo)的相關(guān)性可知，多酚提取量越高，ABTS⁺·清除率、FRAP越大，抗氧化性越強(qiáng)。當(dāng)超聲功率達(dá)到432 W時(shí)，紫蘇籽多酚的DPPH·清除率為86%，清除效果良好，此時(shí)多酚提取量為26.41 mg GAE/g DW。

2.4"紫蘇籽多酚提取物的成分分析

由圖9可知，通過高效液相色譜標(biāo)準(zhǔn)譜圖和Lee等^[28]對(duì)韓國紫蘇籽酚類化合物的液質(zhì)鑒定結(jié)果對(duì)比，推測成分1（23.265 min）、成分2（25.952 min）、成分3（26.518 min）、成分4（26.717 min）、成分5（27.557 min）分別可能為芹菜素-7-葡萄糖苷、黃芩素-7-O-葡萄糖苷、阿魏酸、迷迭香酸-3-O-葡萄糖苷、橙皮素-7-O-葡萄糖苷。

2.5"紫蘇籽多酚提取物的酶抑制活性研究

由圖10中A可知，與阿卡波糖相比，紫蘇籽多酚提取物對(duì)α-淀粉酶活性有明顯的抑制作用（Plt;0.05）。當(dāng)多酚濃度在1.0～5.0 mg/mL范圍內(nèi)時(shí)，其對(duì)α-淀粉酶活性的抑制作用隨多酚濃度的增加而增強(qiáng)。當(dāng)多酚濃度為5.0 mg/mL時(shí)，對(duì)α-淀粉酶活性的抑制率達(dá)到（38.56±4.53）%，表明紫蘇籽多酚提取物對(duì)α-淀粉酶活性具有良好的抑制作用，即多酚能夠干擾或阻礙淀粉酶的活性和功能，在一定程度上可控制血糖濃度^[29]。

由圖10中B可知，與陽性藥奧利司他相比，紫蘇籽多酚提取物對(duì)胰脂肪酶活性有較好的抑制作用，并且抑制效果隨著紫蘇籽多酚提取物濃度的增加呈持續(xù)上升趨勢。紫蘇籽多酚主要通過改變胰脂肪酶的化學(xué)結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)象來抑制胰脂肪酶活性，從而達(dá)到降血脂功效^[30]。當(dāng)多酚濃度為5.0 mg/mL時(shí)，對(duì)胰脂肪酶活性的抑制率達(dá)到（37.34±1.30）%，表明紫蘇籽多酚對(duì)胰脂肪酶活性具有抑制作用。

由圖10中C可知，與阿卡波糖標(biāo)準(zhǔn)品相比，紫蘇籽多酚提取物對(duì)α-葡萄糖酶活性有明顯的抑制作用（Plt;0.05）。多酚提取物可以抑制α-葡萄糖酶活性，從而延緩或抑制腸道對(duì)葡萄糖的吸收，同時(shí)減少小腸對(duì)葡萄糖的釋放和吸收，有效降低體內(nèi)血糖水平，調(diào)控糖脂代謝^[31]。當(dāng)多酚濃度為5.0 mg/mL時(shí)，對(duì)α-葡萄糖酶活性抑制率達(dá)到（34.04±2.10）%，表明紫蘇籽多酚對(duì)α-葡萄糖酶活性有一定的抑制作用。

3"結(jié)論

本文發(fā)現(xiàn)紫蘇籽多酚提取物具有抗氧化和酶活性抑制作用，是潛在的天然抗氧化劑和酶抑制劑。酶輔助超聲法可作為提取紫蘇籽多酚的有效方法，為植物廢棄物的高值化利用及其在功能性特膳食品中的應(yīng)用提供了新思路。酶輔助超聲法提取的紫蘇籽多酚量高于單一酶解提取和單一超聲提取，這種差異可能是紫蘇籽自身的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)或提取工藝不同導(dǎo)致的。此方法得到的最佳紫蘇籽多酚提取參數(shù)具有可行性，且提取效率較高，為紫蘇籽多酚提取物的鑒定及體內(nèi)活性的研究提供了理論參考。此外，紫蘇籽多酚提取物具有一定的抑制α-淀粉酶、胰脂肪酶和α-葡萄糖酶活性的作用，為進(jìn)一步揭示紫蘇籽酚類化合物的體內(nèi)抗氧化和酶抑制活性奠定了理論基礎(chǔ)，也為紫蘇籽等油料種子的回收利用、功能開發(fā)提供了新思路。

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