鱉甲煎丸對胰腺癌細胞PANC-1增殖、凋亡和EMT的干預作用

DOI：10.3969/j.issn.10001565.2025.01.008

摘" 要：為探討鱉甲煎丸（biejiajian pill，BJJP）對胰腺癌細胞增殖、凋亡和上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）的干預作用.采用CCK-8、集落形成、Western blot、TUNEL劃痕、Transwell和免疫熒光等實驗方法檢測BJJP含藥血清對人正常胰腺導管上皮細胞HPNE活力的影響，對胰腺癌細胞PANC-1增殖、凋亡、遷移、侵襲、EMT以及PI3K/AKT通路蛋白表達的影響.結(jié)果顯示：BJJP含藥血清對HPNE細胞的活力無明顯影響，具有抑制PANC-1細胞的增殖、遷移、侵襲、EMT進程的能力，促進了PANC-1細胞凋亡，抑制了PI3K/AKT通路，綜上，鱉甲煎丸能抑制胰腺癌PANC-1細胞的惡性生物學行為，其機制可能與調(diào)節(jié)PI3K/AKT通路有關(guān).

關(guān)鍵詞：鱉甲煎丸；胰腺癌；增殖；凋亡；上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化

中圖分類號：R735.9""" 文獻標志碼：A""" 文章編號：10001565（2025）01007012

Intervention effects of BJJP on the proliferation， apoptosis， and EMT of PANC-1 pancreatic cancer cells

XIONG Yanan1，LI Yiheng1，ZHANG Ronghua1，ZHANG Guangling2，LIU Zhiyong2

（1. Hebei Key Laboratory for Chronic Diseases， School of Basic Medicine， North China University of Science and Technology， Tangshan 063210， China; 2. Hebei Provincial Key Laboratory of Medical-Industrial Integration Precision Medicine， North China University of Science and Technology Affiliated Hospital， Tangshan 063000， China）

Abstract： To investigate the effects of BJJP on the proliferation， apoptosis， and EMT of PANC-1 pancreatic cancer cells.CCK-8， Colony formation， Western blot， TUNEL scratch， Transwell and immunofluorescence assays were used to detect the effect of BJJP-containing serum on the activity of human normal pancreatic ductal epithelial cells HPNE， and detect the effects of BJJP-containing serum on the proliferation， apoptosis， migration， invasion， EMT， and the protein expression of PI3K/AKT pathway of pancreatic cancer cells PANC-1. The results showed that BJJP-containing serum has no significant effect on the activity of HPNE cells but inhibits the proliferation， migration， invasion， EMT

收稿日期：20240612;修回日期：20240914

基金項目：

河北省自然科學基金資助項目（H2023209047;H202409077）；河北省教育廳在讀研究生創(chuàng)新能力培養(yǎng)項目（CXZZSS2024056）

第一作者：熊亞南（1978—），女，華北理工大學副教授，主要從事胰腺癌分子機制研究.E-mail：xiongyanan@ncst.edu.cn

通信作者：劉志勇（1971—），男，華北理工大學教授，博士，主要從事胰腺癌分子機制研究.E-mail：macromicro@126.com

process and PI3K/AKT pathway， enhances the apoptosis of pancreatic cancer PANC-1 cells.Studies have shown that BJJP inhibits the malignant biological behavior of pancreatic cancer PANC-1 cells， and the mechanism may be related to the regulation of PI3K/AKT pathway.

Key words： BJJP; pancreatic cancer; proliferation; apoptosis; EMT

胰腺癌是消化系統(tǒng)腫瘤的一種，其特點為轉(zhuǎn)移快，死亡率高，早期篩查困難，近年來發(fā)病率呈上升趨勢，5年生存率接近10%［1］.手術(shù)仍然是胰腺癌的主要治療方法.對于不適合手術(shù)切除的胰腺癌患者，可以選擇化療、放療和免疫治療等.雖然常規(guī)化療可以改善胰腺癌患者的預后，但化療耐藥性是治療胰腺癌不可避免的挑戰(zhàn)［2］.傳統(tǒng)中醫(yī)藥可以提高化療、放療、靶向治療和免疫治療的療效，并能減輕這些療法造成的損害［3］.發(fā)現(xiàn)和開發(fā)具有治療選擇性的新型天然化合物、活性成分、單一草藥、復方或處方，可以優(yōu)先殺死癌細胞并抑制癌細胞的擴散，且無顯著毒性，這是癌癥治療的一個重要研究領(lǐng)域［4］.鱉甲煎丸（Biejiajian pill，BJJP）大復方，具有行氣化瘀、軟堅散結(jié)、攻補兼施之效，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于肝硬化、肝炎、高脂血癥和心絞痛等疾病的治療，并且取得較好的療效.此外，BJJP在防治腫瘤上也取得了一定的成果［5］.然而，BJJP對胰腺癌的作用效果以及藥理機制仍未可知.本研究以胰腺癌PANC-1細胞為研究對象，使用鱉甲煎丸含藥血清作為干預措施，探討B(tài)JJP對胰腺癌PANC-1細胞惡性生物學行為的影響，為胰腺癌的中藥治療提供重要的實驗依據(jù).

1" 材料和方法

1.1" 主要材料

雄性SPF級健康Sprague-Dawley（SD）大鼠，購自北京華阜康生物科技股份有限公司，經(jīng)華北理工大學實驗動物倫理委員會批準（批準號：2022-SY-022），飼養(yǎng)于華北理工大學實驗動物中心屏障實驗室；人正常胰腺導管上皮細胞HPNE購自上海富衡生物科技有限公司；人胰腺癌細胞PANC-1購自武漢普諾賽公司；鱉甲煎丸購自國藥集團中聯(lián)藥業(yè)有限公司；DMEM高糖培養(yǎng)基、胰蛋白酶及青霉素-鏈霉素混合液均購自北京中生奧邦生物科技有限公司；胎牛血清購自武漢普諾賽生命科技有限公司；CCK-8試劑盒購自北京聚合美生物科技有限公司；PBS、質(zhì)量分數(shù)4%多聚甲醛、Triton-X-100及抗熒光衰減封片劑均購自北京Solarbio科技有限公司；Matrigel基質(zhì)膠購自美國Corning公司；Caspase-3、Caspase-9、Bax及Bcl-xl抗體購自美國Cell Signaling Technology公司；Bcl-2及GAPDH抗體購自美國Proteintech公司；E-鈣黏蛋白（E-cadherin）、N-鈣黏蛋白（N-cadherin）及波形蛋白（Vimentin）抗體購自江蘇Affinity公司；HRP標記羊抗兔二抗及羊抗鼠二抗均購自北京普利萊有限公司；Ki-67及增殖細胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）抗體購自沈陽萬類生物科技有限公司；Transwell小室購自廣州BIOFIL公司；熒光二抗、DAPI及TUNEL試劑盒均購自上海碧云天有限公司.

1.2" BJJP含藥血清制備

生長于SPF環(huán)境的雄性SD大鼠72只，隨機分為4組，每組18只，按照標準對照組和BJJP含藥血清低劑量（0.55 g/kg）、中劑量（1.1 g/kg）和高劑量（2.2 g/kg）處理組對大鼠進行處理，每12 h灌胃1次，連續(xù)3 d，對照組給予相同劑量的無菌純水灌胃.末次給藥2 h后，腹腔麻醉，無菌條件下經(jīng)腹主動脈采集大鼠血液，于4 ℃冰箱靜置4 h，1 200 r/min離心15 min，分離血清，并按照分組混合均勻.采用0.22 μm針式過濾器過濾，56 ℃水浴30 min，分裝標記置-80 ℃保存.

1.3" 細胞培養(yǎng)及BJJP含藥血清處理

HPNE細胞、PANC-1細胞使用含體積分數(shù)10%胎牛血清（FBS）的DMEM高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)條件37 ℃、體積分數(shù)5% CO2.取對數(shù)生長期的細胞進行BJJP含藥血清處理48 h，分為5個處理組：BC組（10% FBS培養(yǎng)基處理），NC組（10%純水灌胃大鼠血清培養(yǎng)基處理），L組（10%低劑量BJJP灌胃大鼠血清培養(yǎng)基處理），M組（10%中劑量BJJP灌胃大鼠血清培養(yǎng)基處理），H組（10%高劑量BJJP灌胃大鼠血清培養(yǎng)基處理）.

1.4" CCK-8實驗檢測BJJP含藥血清對細胞增殖的影響

將各處理組細胞消化后接種于96孔板中進行培養(yǎng)，接種量每孔2×103個，每組設(shè)3個復孔，共檢測4 d，即每組接種12個孔.培養(yǎng)24、48、72、96 h后，在每孔中加入含10 μL CCK-8試劑及100 μL無雙抗培養(yǎng)基的CCK-8工作液，37 ℃培養(yǎng)2 h.用酶標儀在450 nm處檢測光密度（OD）值，其中HPNE細胞在第48 h時加入CCK-8工作液檢測細胞活力.各組數(shù)據(jù)減去空白對照的平均值，計算各組OD值的均值和標準差.

1.5" 集落形成實驗檢測BJJP含藥血清對細胞集落形成能力的影響

將各處理組PANC-1細胞消化后接種于6孔板中進行培養(yǎng)，接種量每孔1×103個，每組設(shè)3個復孔，置于37 ℃體積分數(shù)5% CO2的恒溫箱中培養(yǎng).每2～3 d更換1次體積分數(shù)10% FBS DMEM高糖培養(yǎng)基，當鏡下觀察到細胞團生長為大于50個細胞的數(shù)量時（約10 d）進行固定，結(jié)晶紫溶液染色，拍照，計數(shù).

1.6" 細胞劃痕愈合實驗檢測BJJP含藥血清對細胞遷移的影響

將各處理組PANC-1細胞消化后，取適量接種至6孔板中，每組設(shè)3個復孔.溫箱培養(yǎng)至細胞密度達到80%時，用200 μL槍頭沿孔內(nèi)鋼尺進行劃痕，生理鹽水清洗細胞碎片，加入無血清培養(yǎng)基.分別于0、24、48 h光學倒置顯微鏡下拍照，觀察劃痕愈合程度，用Image J軟件計算劃痕面積，按照遷移率進行統(tǒng)計.

遷移率=（0h劃痕面積-24 h或48 h劃痕面積）/0 h劃痕面積×100%.

1.7" Transwell小室實驗檢測BJJP含藥血清對細胞遷移及侵襲的影響

將各處理組PANC-1細胞消化后，加入無血清培養(yǎng)基重懸計數(shù)，以267個/μL濃度接種150 μL至Transwell小室的上室中，下室加入650 μL含有體積分數(shù)20%FBS培養(yǎng)液.侵襲實驗的上室預鋪Matrigel基質(zhì)膠，其余步驟同遷移實驗.在37 ℃下培養(yǎng)24 h，將遷移和侵襲至膜外的細胞固定并用結(jié)晶紫染色，對遷移和侵襲的細胞進行拍照、Image J軟件計數(shù).

1.8" 細胞免疫熒光實驗檢測細胞EMT標志物的表達情況

將各處理組PANC-1細胞消化后，接種至共聚焦小皿繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞生長至50%左右棄去小皿中原培養(yǎng)液，PBS溶液潤洗3次，質(zhì)量分數(shù)4%多聚甲醛溶液室溫固定30 min，PBS溶液再潤洗3次.小皿中加入500 μL 體積分數(shù)0.2%的Triton-X-100溶液，室溫10 min，對細胞打孔，PBS溶液潤洗3次.使用免疫染色封閉液（體積分數(shù)5% BSA）進行細胞封閉1 h.一抗（E-cadherin、N-cadherin、Vimentin）室溫結(jié)合30 min，4 ℃孵育過夜.二抗加入小皿中室溫避光孵育45 min.DAPI染液細胞核染色5 min.熒光顯微鏡下觀察并拍照，Image J軟件分析熒光強度的比值.

1.9" Western blot法檢測蛋白表達

收集各處理組PANC-1細胞，經(jīng)細胞裂解液處理后提取細胞總蛋白，BCA法測定細胞蛋白濃度，變性、電泳、轉(zhuǎn)膜，脫脂奶粉室溫封閉，一抗稀釋液（Ki-67、AKT、p-AKT、Bcl-xl、Bcl-2、Bax、PI3K、p-PI3K及Vimentin稀釋倍數(shù)均為1∶1 000，caspase-3、caspase-9稀釋倍數(shù)均為1∶2 000，E-cadherin、N-cadherin稀釋倍數(shù)均為1∶3 000，GAPDH稀釋倍數(shù)1∶10 000）4 ℃處理過夜.之后在相應(yīng)HRP標記的二抗（稀釋倍數(shù)1∶5 000）中室溫孵育2 h，于暗室內(nèi)采用ECL試劑顯示目標條帶.以GAPDH為內(nèi)參蛋白，通過凝膠成像和Image J軟件分析目的蛋白的相對表達量.

1.10" TUNEL實驗檢測細胞凋亡

在新6孔板中預置細胞爬片，將各處理組PANC-1細胞消化后，接種至新6孔板中繼續(xù)培養(yǎng).觀察細胞形態(tài)以及密度，達到50%左右時棄去培養(yǎng)液，質(zhì)量分數(shù)4%多聚甲醛室溫固定30 min，體積分數(shù)0.3% Triton-X-100溶液室溫處理5 min，PBS溶液搖洗.TUNEL工作液（5 μL TdT酶+45 μL熒光標記液）37 ℃避光孵育1 h，DAPI染液細胞核染色5 min.避光用抗熒光淬滅劑將細胞爬片黏附至載玻片上封片，熒光顯微鏡下觀察并拍照，采用Image J軟件進行量化.

1.11" 統(tǒng)計分析

通過SPSS軟件對重復3次實驗（n=3）所得的數(shù)據(jù)進行分析，運用Graphpad Prism軟件作圖.結(jié)果用平均值±標準差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，當Plt;0.05為差異具有統(tǒng)計學意義.

2" 結(jié)果

2.1" BJJP含藥血清抑制胰腺癌細胞的增殖

采用CCK-8實驗檢測不同劑量BJJP含藥血清處理人正常胰腺導管上皮細胞HPNE后的細胞活力.結(jié)果表明，各組之間的細胞活力無明顯差異，提示BJJP含藥血清對HPNE細胞無毒副作用（圖1）.

圖2為BJJP含藥血清對PANC-1細胞增殖的影響.由圖2可知，BC組與NC組之間的細胞增殖能力無明顯差異.與NC組相比，不同劑量BJJP含藥血清處理后，PANC-1細胞的增殖能力均明顯降低（Plt;0.05），經(jīng)高劑量BJJP含藥血清處理后，胰腺癌細胞PANC-1的增殖能力降低最為顯著.

集落形成實驗結(jié)果顯示，在胰腺癌細胞PANC-1中，BC組與NC組之間的細胞集落形成數(shù)量無明顯差異.與NC組相比，不同劑量BJJP含藥血清組處理PANC-1細胞后，集落形成數(shù)量均明顯減少（Plt;0.05）（圖3）.

Western blot實驗結(jié)果顯示，在胰腺癌細胞PANC-1中，BC組與NC組之間的細胞增殖相關(guān)標志物Ki-67和PCNA的蛋白表達水平無明顯差異.與NC組相比，不同劑量BJJP含藥血清處理組PANC-1細胞的Ki-67和PCNA蛋白表達水平均明顯降低（Plt;0.05）（圖4），以上結(jié)果均提示BJJP含藥血清具有抑制胰腺癌細胞的增殖能力.

2.2" BJJP含藥血清促進胰腺癌細胞的凋亡

TUNEL實驗結(jié)果顯示，在胰腺癌細胞PANC-1中，BC組與NC組之間的細胞凋亡數(shù)量及熒光強度無明顯差異.與NC組相比，不同劑量BJJP含藥血清處理組凋亡細胞數(shù)量及熒光強度均顯著增加（Plt;0.05）（圖5）.

Western blot實驗結(jié)果顯示，在胰腺癌細胞PANC-1中，BC組與NC組之間的細胞凋亡相關(guān)標志物Cl-caspase 3、Cl-caspase 9、BCL-XL、BCL-2和BAX的蛋白表達水平無明顯差異.與NC組相比，不同劑量BJJP含藥血清處理組中Cl-caspase 3、Cl-caspase 9和BAX的蛋白表達水平均呈現(xiàn)不同程度的升高；而BCL-XL、BCL-2的蛋白表達水平則呈現(xiàn)不同程度降低（Plt;0.05）（圖6）.TUNEL實驗和Western blot實驗結(jié)果均提示BJJP含藥血清可促進胰腺癌細胞的凋亡.

2.3" BJJP含藥血清抑制胰腺癌細胞的遷移

Transwell實驗將計數(shù)結(jié)果以NC組為對照組歸一化為100進行統(tǒng)計，計算處理組相對細胞數(shù)量.結(jié)果顯示，在胰腺癌細胞PANC-1中，BC組與NC組之間細胞穿過小室底部聚碳酸酯膜（無基質(zhì)膠）相對數(shù)量無明顯差異.與NC組相比，不同劑量BJJP含藥血清處理組中PANC-1細胞穿過小室底部聚碳酸酯膜（無基質(zhì)膠）的相對細胞數(shù)量均明顯減少，且呈現(xiàn)出一定的劑量依賴性（Plt;0.05）（圖7）.

劃痕實驗結(jié)果顯示，在胰腺癌細胞PANC-1中，同時間點處理的BC組與NC組遷移面積無顯著差異.相比于同時間點處理的NC組，不同劑量BJJP含藥血清處理組在24 h和48 h時遷移能力均降低，48 h降低更加明顯（Plt;0.05）（圖8）.Transwell實驗和劃痕實驗結(jié)果均提示BJJP含藥血清可抑制胰腺癌細胞的遷移.

2.4" BJJP含藥血清抑制胰腺癌細胞的侵襲

Transwell實驗結(jié)果顯示，BC組與NC組PANC-1細胞穿過小室底部Matrigel聚碳酸酯膜（有基質(zhì)膠）的相對細胞數(shù)量無明顯差異.與NC組相比，不同劑量BJJP含藥血清處理組中PANC-1細胞穿過小室底部Matrigel聚碳酸酯膜（有基質(zhì)膠）的相對細胞數(shù)量均明顯減少（Plt;0.05）（圖9）.結(jié)果顯示BJJP含藥血清對胰腺癌細胞的侵襲能力有明顯的抑制作用.

2.5" BJJP含藥血清抑制胰腺癌細胞的EMT進程

Western blot實驗對不同劑量BJJP含藥血清處理胰腺癌細胞后的EMT標志物E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的蛋白表達水平進行檢測.結(jié)果顯示：在胰腺癌細胞PANC-1中，BC組與NC組E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的蛋白表達水平無明顯差異；與NC組相比，不同濃度組的上皮樣標志物E-cadherin表達水平升高，而間質(zhì)樣標志物N-cadherin和Vimentin表達水平均降低（Plt;0.05）（圖10）.

細胞免疫熒光實驗結(jié)果與上述Western blot實驗結(jié)果的趨勢相似（圖11～13）.以上結(jié)果顯示BJJP含藥血清可抑制胰腺癌細胞的EMT進程.

2.6" BJJP含藥血清抑制PI3K/AKT信號通路

利用Western blot實驗對不同劑量BJJP含藥血清處理后的胰腺癌細胞PANC-1中PI3K/AKT標志物的蛋白表達水平進行檢測.結(jié)果顯示：在胰腺癌細胞PANC-1中，BC組與NC組的p-AKT和p-PI3K蛋白表達水平無明顯差異；與NC組相比，不同劑量BJJP含藥血清處理組的p-AKT和p-PI3K的蛋白表達水平均顯著降低（Plt;0.05）（圖14）.結(jié)果顯示BJJP含藥血清可抑制胰腺癌細胞PI3K/AKT信號通路.

3" 討論與結(jié)論

胰腺癌當前已成為全球癌癥死亡率高的主要原因之一［6］.轉(zhuǎn)移性胰腺癌患者中位生存期為6～10個月，局部晚期腫瘤如未經(jīng)適當治療，中位生存期將縮短至3～5個月.因局限性胰腺癌接受前期手術(shù)的患者標準治療是輔助化療.目前晚期和轉(zhuǎn)移性胰腺癌化療的有效藥物是吉西他濱，其效果明顯優(yōu)于經(jīng)典化療藥物5-氟尿嘧啶.然而，患者對吉西他濱治療的總體反應(yīng)率較低，此外患者還可能產(chǎn)生化療耐藥性，并伴有嚴重的全身中毒和疾病進展［7］.因此，對于胰腺癌有效且毒性較低藥物的探索仍是目前臨床的主要迫切需求.

BJJP是由23味中藥組成的中成藥，具有活血化瘀、軟堅散結(jié)的功效［8］.本研究首先通過CCK-8實驗檢測BJJP含藥血清對HPNE細胞活力的影響，結(jié)果提示BJJP含藥血清對HPNE細胞的活力無抑制作用.隨后通過CCK-8實驗、集落形成實驗和Western blot實驗檢測BJJP含藥血清對胰腺癌細胞的增殖能力的影響，結(jié)果提示BJJP含藥血清可抑制胰腺癌細胞的增殖能力.該結(jié)果表明BJJP含藥血清可特異性抑制胰腺癌細胞的增殖能力且對正常胰腺上皮細胞的活力無影響，這也表明BJJP可作為治療胰腺癌的候選藥物，并且無毒副作用.

細胞凋亡是對許多刺激、感染或損傷的正常生理細胞死亡反應(yīng)，包括細胞毒性藥物治療或放療方案后產(chǎn)生的細胞死亡反應(yīng)，這些刺激、感染或損傷會產(chǎn)生無法修復的DNA損傷［9］.細胞凋亡的內(nèi)在途徑或線粒體途徑受BCL-2蛋白家族調(diào)節(jié)，當前治療的主要挑戰(zhàn)是BCL-2家族相互作用的失調(diào)導致癌癥對細胞凋亡產(chǎn)生的抵抗力［10］.本研究結(jié)果顯示，BJJP含藥血清處理胰腺癌細胞后還可降低BCL-XL和BCL-2的蛋白表達水平，并增加Cl-caspase-3、Cl-caspase-9和BAX的蛋白表達水平來誘導細胞凋亡，隨后，TUNEL實驗結(jié)果顯示BJJP含藥血清處理胰腺癌細胞后可明顯增加其早期凋亡水平.因此，BJJP可誘導胰腺癌細胞凋亡.

EMT是上皮表型轉(zhuǎn)化為間充質(zhì)表型，這在腫瘤的進展、轉(zhuǎn)移和耐藥中起著至關(guān)重要的生物學作用［11］.EMT在腫瘤中的主要標志之一是E-cadherin表達下調(diào).E-cadherin通過在細胞表面的黏附連接處形成多蛋白復合物，在調(diào)節(jié)上皮細胞之間的細胞黏附中起關(guān)鍵作用，該蛋白的下調(diào)導致細胞間黏附喪失，使癌細胞從原發(fā)腫瘤中分離出來，從而發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移［12］.劃痕實驗和Transwell實驗結(jié)果顯示BJJP含藥血清處理胰腺癌細胞后，細胞的遷移和侵襲能力均顯著降低.為了進一步探討胰腺癌細胞遷移和侵襲能力降低的內(nèi)在機制，通過Western blot實驗和細胞免疫熒光實驗檢測胰腺癌細胞中EMT標志物的表達水平，結(jié)果顯示，BJJP含藥血清處理胰腺癌細胞后可顯著增加上皮樣標志物E-cadherin的表達水平，降低間充質(zhì)樣標志物N-cadherin和Vimentin的表達水平.即BJJP可能通過逆轉(zhuǎn)EMT來抑制胰腺癌細胞的遷移和侵襲.以上結(jié)果揭示BJJP含藥血清可抑制胰腺癌細胞的增殖、遷移、侵襲以及EMT進程，并且可促進胰腺癌細胞凋亡.

相關(guān)研究表明BJJP可通過抑制AT1R/VEGF信號通路，抑制肝癌小鼠的腫瘤生長和腫瘤血管生成，具有一定的抗腫瘤活性［5］.Chen等［13］研究表明BJJP通過抑制癌癥相關(guān)成纖維細胞中PDGFRβ的表達，抑制PI3K、AKT和GSK-3β的磷酸化，同時也下調(diào)下游蛋白肝細胞生長因子和血管內(nèi)皮生長因子A的表達，從而抑制肝細胞癌的進展.超過90%的胰腺癌在K-Ras中攜帶突變，這些突變通過激活多種下游效應(yīng)通路發(fā)揮強烈的促腫瘤作用.而頻繁激活的PI3K/AKT通路在促進胰腺癌侵襲中的作用已得到充分證實［14］.PI3K被認為是癌癥治療的關(guān)鍵治療靶基因之一［15-16］，PI3K信號的過度活躍與人類腫瘤進展、腫瘤微血管密度增加以及癌細胞趨化性和侵襲潛力增強顯著相關(guān)［17］.目前在開發(fā)靶向PI3K信號轉(zhuǎn)導的藥物方面投入巨大［18］.本研究通過Western blot實驗顯示BJJP含藥血清可以顯著降低胰腺癌細胞p-AKT和p-PI3K的蛋白表達水平.BJJP作為一種由23味藥組成的中成藥，可能通過抑制PI3K/AKT信號通路的表達，影響胰腺癌細胞惡性進程，具體成分分析及其分子作用機制將在后續(xù)研究中進一步探索.

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（責任編輯：梁俊紅）