從肝治心組方對心肌缺血再灌注損傷大鼠心肌Nrf2、HO-1和鐵轉運相關蛋白的影響

〔摘要〕 目的 研究從肝治心組方對心肌缺血再灌注損傷（MIRI）大鼠心肌保護作用及核轉錄因子紅系2相關因子2（Nrf2）、血紅素加氧酶-1（HO-1）、二價金屬轉運蛋白1（DMT1）和膜鐵轉運輔助蛋白（Heph）表達的影響。方法 將60只SPF級雄性SD大鼠隨機分為正常組、假手術組、模型組、從肝治心組方組[5.32 g/（kg·d）]、麝香保心丸組[10.27 mg/（kg·d）]、地爾硫[艸][卓]組[6.86 mg/（kg·d）]，每組10只。通過結扎左前降支冠狀動脈30 min后再灌注120 min，構建MIRI大鼠模型，術后連續(xù)灌胃給藥14 d后取材。采用HE染色觀察心肌組織形態(tài)學變化，普魯士藍染色觀察心肌組織鐵沉積情況，透射電子顯微鏡檢測心肌組織超微結構，RT-PCR、Western blot檢測Nrf2、HO-1、DMT1、Heph mRNA和蛋白表達情況。結果 與正常組和假手術組比較，模型組大鼠心肌纖維排列紊亂，纖維瘢痕組織增生，鐵沉積水平高，線粒體結構異常，線粒體內(nèi)脊模糊，Nrf2、HO-1、Heph mRNA和蛋白表達下調（Plt;0.05），DMT1 mRNA和蛋白表達上調（Plt;0.05）。與模型組比較，各給藥組大鼠心肌組織病理損傷改善，鐵沉積水平降低，線粒體和內(nèi)脊結構較完整，Nrf2、HO-1、Heph mRNA和蛋白表達上調（Plt;0.05），DMT1 mRNA和蛋白表達下調（Plt;0.05）。結論 從肝治心組方可能是通過激活Nrf2/HO-1信號通路，上調Heph的表達，下調DMT1的表達，減輕心肌組織鐵沉積，發(fā)揮改善MIRI的作用。

〔關鍵詞〕 心肌缺血再灌注損傷;從肝治心組方;核因子E2相關因子2;血紅素加氧酶-1;膜鐵轉運輔助蛋白;二價金屬轉運蛋白1;鐵代謝失衡

〔中圖分類號〕R256.2" " " " "〔文獻標志碼〕A" " " " " 〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2025.01.004

Effects of Conggan Zhixin Formula on Nrf2， HO-1， and iron transport-related proteins in myocardial ischemia-reperfusion injury in rats

WANG Xinqiang1， HE Piao1， PIAO Meihong2， XIE Lihua1，2， ZENG Yang1，2， WANG Jinxi1，

ZHANG Chengcheng2， HU Guoheng1， CHEN Ya1*

1. The First Hospital of Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410007， China; 2. Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410208， China

〔Abstract〕 Objective To study the myocardial protective effects of Conggan Zhixin Formula on myocardial ischemia-reperfusion injury （MIRI） in rats and its influence on the expressions of nuclear factor-erythroid 2-related factor 2 （Nrf2）， heme oxygenase-1 （HO-1）， divalent metal transporter 1 （DMT1）， and hephaestin （Heph）. Methods Sixty male SPF-grade SD rats were randomly divided into normal group， sham-operated group， model group， Conggan Zhixin Formula group [5.32 g/（kg·d）]， Shexiang Baoxin Pill group [10.27 mg/（kg·d）]， and diltiazem group [6.86 mg/（kg·d）]， with ten rats in each group. A MIRI rat model was established by ligating the left anterior descending coronary artery for 30 minutes followed by 120 minutes of reperfusion. Samples were collected after 14 consecutive days of gavage administration post-surgery. HE staining was used to observe the morphological changes in myocardial tissue， Prussian blue staining was employed to assess iron deposition in the myocardial tissue， and transmission electron microscopy was utilized to examine the ultrastructure of myocardial tissue. RT-PCR and Western blot were performed to examine the mRNA and protein expressions of Nrf2， HO-1， DMT1， and Heph. Results Compared with the normal group and sham-operated group， the model group exhibited disordered arrangement of myocardial fibers， fibrous scar tissue hyperplasia， high levels of iron deposition， abnormal mitochondrial structure with blurred cristae， and downregulated mRNA and protein expressions of Nrf2， HO-1， and Heph （Plt;0.05）， as well as upregulated mRNA and protein expression of DMT1 （Plt;0.05）. Compared with the model group， the rats in each drug-administered group showed reduced morphological damage in the myocardial tissue， reduced levels of iron deposition， more intact mitochondrial and cristae structures， more intact mitochondrial and cristae structures， upregulated mRNA and protein expressions of Nrf2， HO-1， and Heph （Plt;0.05）， and downregulated mRNA and protein expression of DMT1 （Plt;0.05）. Conclusion Conggan Zhixin Formula may exert its effects on reducing MIRI by activating the Nrf2/HO-1 signaling pathway， upregulating Heph expression， downregulating DMT1 expression， and reducing iron deposition in myoc?ardial tissue.

〔Keywords〕 myocardial ischemia-reperfusion injury; Conggan Zhixin Formula; nuclear factor-erythroid 2-related factor 2; heme oxygenase-1; membrane iron transporter accessory protein; divalent metal transporter 1; iron metabolism imbalance

隨著人口老齡化發(fā)展和現(xiàn)代生活壓力的增大，我國心肌梗死發(fā)病率不斷上升，加重了社會經(jīng)濟負擔。心肌缺血再灌注損傷（myocardial ischemic reperfusion injury， MIRI）是指心肌梗死后缺血區(qū)域心肌組織恢復血流后可能出現(xiàn)比之前更嚴重的損傷，其發(fā)病機制尚不明確，可能與細胞凋亡、壞死、鐵死亡、氧化應激損傷、線粒體功能障礙、細胞內(nèi)鈣超載等有關，目前缺乏有效的治療手段[1]。

近年來，鐵死亡作為MIRI機制受到廣泛關注。鐵死亡是二價鐵超載導致的超氧化應激反應，特點是鐵代謝失衡和脂質過氧化產(chǎn)物增多，活性氧（reactive oxygen species，ROS）大量堆積在細胞內(nèi)，導致細胞膜崩潰、細胞死亡[2]。鐵死亡的發(fā)生與氧化系統(tǒng)和抗氧化系統(tǒng)之間的平衡失調密切相關，細胞內(nèi)的鐵沉積可以導致氧化應激損傷，核轉錄因子紅系2相關因子2（nuclear factor-erythroid 2-related factor 2， Nrf2）是抗氧化系統(tǒng)中重要的轉錄因子，血紅素加氧酶-1（heme oxygenase-1， HO-1）是其下游因子，具有抗炎、抗凋亡作用[3]。研究發(fā)現(xiàn)，Nrf2/HO-1信號通路不僅能抗氧化應激損傷，還對鐵代謝失衡有調節(jié)作用，成為研究抗鐵代謝失衡藥物的熱點[4]。

課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，在缺氧/復氧損傷的H9c2心肌細胞中，Nrf2/HO-1信號通路被抑制，線粒體膜電位水平下降，ROS水平升高，與鐵死亡有著密切關系，從肝治心組方可以抑制缺氧/復氧損傷H9c2心肌細胞鐵死亡[5]。本研究以鐵代謝失衡可能是MIRI發(fā)生機制為切入點，探討MIRI模型大鼠心肌組織Nrf2、HO-1、膜鐵轉運輔助蛋白（hephaestin， Heph）和二價金屬轉運蛋白1（divalent metal-ion transporter 1，DMT1）的表達變化，以及從肝治心組方發(fā)揮MIRI保護作用的具體機制。

1 材料

1.1" 動物

雄性SPF級SD大鼠60只，體質量250～280 g，購自湖南斯萊克景達實驗動物有限公司[許可證號：SCXK（湘）2019-0004]。飼養(yǎng)于湖南中醫(yī)藥大學SPF級實驗動物中心[實驗單位使用許可證編號：SYXK（湘）2019-0009]，環(huán)境溫度保持在（24±2） ℃，濕度保持在60%±10%，明/暗光線12 h交替，自由攝食和飲水，適應性喂養(yǎng)7 d。本實驗經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學實驗動物倫理委員會批準，倫理審查批號：LL2021101201。

1.2" 藥物

從肝治心組方組成：紅參10 g，當歸10 g，丹參10 g，柴胡10 g，姜黃10 g，郁金10 g，白芥子5 g，九香蟲5 g。水煎劑，濾液蒸發(fā)濃縮至含生藥1.5 g/mL，由湖南中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院提供。麝香保心丸（國藥準字：Z31020068，批號：210109，規(guī)格：22.5 mg/丸，上海和黃藥業(yè)有限公司）;鹽酸地爾硫[艸][卓]緩釋膠囊（Ⅱ）（國藥準字：H12020126，批號：2101155，規(guī)格：90 mg/粒，天津田邊制藥有限公司）。

1.3" 主要試劑

HE染色試劑盒、普魯士藍染色試劑盒（北京索萊寶科技有限公司，批號：G1120、G1428）;超純總RNA提取試劑盒（杭州Simgen生物技術有限公司，批號：5003050）;RT-PCR反應專用反轉錄試劑、擴增試劑（日本TaKaRa公司，批號：RR047A、RR820A）;Nrf2抗體、HO-1抗體、DMT1抗體（武漢Proteintech生物技術有限公司，批號：16396-1-AP、27282-1-AP、20507-1-AP）;Heph抗體、β-Tubulin（美國Affinity Bio?sciences生物科技有限公司，批號：DF13057、AF7011）;彩色預染蛋白Marker、ECL化學發(fā)光底物試劑盒（合肥Biosharp生物科技有限公司，批號：BL712A、BL523B）;Western快速轉膜液、Western快速封閉液（上海Beyotime生物技術股份有限公司，批號：P0575-1 L、P0252-100 mL）。

1.4" 主要儀器

旋轉蒸發(fā)儀（型號：RE-2000B，鞏義中天科技儀器有限公司）;數(shù)字心電圖機（型號：ECG-2303B，廣州三銳電子科技有限公司）;小型動物呼吸機（型號：RWD407，深圳瑞沃德生命科技有限公司）;病理切片機（型號：RM2016，德國Leica儀器有限公司）;光學顯微鏡（型號：TS100，日本Nikon公司）;透射電子顯微鏡（型號：FEI TECNAI G2 20 TWIN，美國FEI公司）;核酸蛋白濃度測定儀（型號：BioDrop Ulite，英國Biochrom公司）;多功能酶標儀（型號：Enspire，美國Perkinelmer公司）;熒光定量PCR儀（型號：Roche LightCycler480 Ⅱ，瑞士Roche公司）;蛋白印跡系統(tǒng)、化學發(fā)光系統(tǒng)（型號：Bio-Rad、CheemiDoc XRS+Imager，美國Bio-Rad公司）。

2 方法

2.1" MIRI模型的制備

大鼠術前禁食12 h、禁飲1 h，2%戊巴比妥鈉0.3 mL/100 g體質量腹腔注射麻醉。氣管插管，呼吸機輔助呼吸，連接數(shù)字心電圖機，記錄Ⅱ導聯(lián)心電圖，開胸暴露心臟，找到左心耳與肺動脈圓錐之間的左前降支冠狀動脈（left anterior descending coronary artery， LAD），在左心耳下離根部2～3 mm，以6-0號帶線縫合針結扎。術中監(jiān)測心肌缺血成功標志：局部心肌顏色變紫色或灰色，Ⅱ導聯(lián)心電圖持續(xù)ST段抬高或倒置呈弓背向上抬高。持續(xù)30 min后打開結扎線再灌注120 min，再灌注成功標志：左前降支結扎以下缺血心肌顏色由紫色、灰色變鮮紅色，抬高的ST段下降gt;50%，或高尖的T波下降。迅速復位心臟，關閉胸腔，腹腔注射青霉素10萬U預防感染。脫離呼吸機后，待大鼠恢復自主呼吸后拔管，放回鼠籠，整個實驗過程嚴格遵循無菌操作的要求。正常組不作處理，假手術組僅開胸而不結扎，其余手術過程與造模相同。

2.2" 分組及給藥方法

60只大鼠隨機分為正常組、假手術組、模型組、從肝治心組方組、麝香保心丸組、地爾硫[艸][卓]組，每組10只。正常組不作處理，假手術組只開胸不結扎LAD，其余各組制備MIRI模型大鼠。術后第1天各組開始干預，正常組、假手術組、模型組給予等體積蒸餾水灌胃;正常人一天服用從肝治心組方劑量為70 g，依據(jù)體型系數(shù)法[6]進行人與大鼠藥物劑量換算，大鼠用藥劑量為5.32 g/（kg·d）;麝香保心丸正常人一天服用劑量為135 mg，換算得大鼠給藥劑量為10.27 mg/（kg·d）;鹽酸地爾硫[艸][卓]緩釋膠囊（Ⅱ）正常人一天服用劑量為90 mg，換算得大鼠給藥劑量為6.86 mg/（kg·d）。灌胃14 d后處死各組大鼠，留取心肌組織行指標檢測。

2.3" HE染色觀察心肌組織形態(tài)學變化

將大鼠心肌組織用4%多聚甲醛固定24 h以上，梯度脫水，石蠟包埋后固定位置切片（厚度約為3～5 μm），脫蠟水化后HE染色，梯度脫水透明，封片后在光鏡下觀察心肌組織形態(tài)學變化。

2.4" 普魯士藍染色觀察心肌組織鐵沉積情況

將大鼠心肌組織制備成石蠟切片，脫蠟水化后普魯士藍染色工作液染色，孵育、復染、梯度乙醇脫水、二甲苯透明，封片后行顯微鏡觀察心肌組織鐵沉積情況。

2.5" 透射電子顯微鏡檢測心肌組織超微結構

將新鮮的大鼠心肌組織用電鏡固定液4 ℃固定2～4 h，沖洗后用1%四氧化鋨固定2 h，再沖洗后用丙酮梯度脫水，100%環(huán)氧樹脂中60 ℃包埋過夜。用Leica UC7切片（厚度為70 nm）后3%乙酸鈾和檸檬酸鉛37 ℃下各染色15 min。沖洗晾干后，用透射電子顯微鏡觀察心肌組織超微結構。

2.6" RT-PCR檢測Nrf2、HO-1、DMT1、Heph mRNA表達

取適量大鼠缺血再灌注區(qū)域心肌組織研磨勻漿，超純總RNA提取試劑盒提取總RNA，測定RNA濃度，合成cDNA后使用RT-PCR擴增檢測。參照www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank設計引物，北京擎科生物科技有限公司合成引物，引物序列信息詳見表1，使用2-ΔΔct的算法定量分析。

2.7" Western blot檢測Nrf2、HO-1、DMT1、Heph蛋白表達

取適量大鼠缺血再灌注區(qū)域心肌組織研磨勻漿，RIPA裂解液4 ℃裂解30 min，4 ℃低溫離心（12 000 r/min，10 min，離心半徑6 cm）后收集上清液。檢測各樣本蛋白濃度，SDS變性后-20 ℃保存。制膠上樣，電泳，轉膜，封閉，一抗Nrf2（1∶2 000）、HO-1（1∶3 000）、DMT1（1∶1 000）、Heph（1：2 000）、β-Tubulin（1∶5 000）4 ℃孵育過夜。次日PBST洗膜4次，二抗IgG HRP（1∶5 000）常溫孵育1 h，PBST清洗4次，避光配制ECL顯色液，孵育盒用錫紙包裹好，將PVDF膜正面朝下置于ECL顯色液中避光孵育3 min后，正面朝上置于儀器中顯色，導出圖片并用Image J軟件分析灰度值。

2.8" 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 22.0軟件進行統(tǒng)計學分析。多樣本計量資料以“x±s”表示，符合正態(tài)分布和方差齊性者，進行單因素方差分析，兩組之間比較用獨立樣本t檢驗;方差不齊者，兩組之間比較用Dunnett's T3法。均以Plt;0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

3 結果

3.1" 各組大鼠心肌組織形態(tài)學變化

正常組大鼠心肌纖維規(guī)律排列，結構完整，細胞核清晰，細胞間質正常;假手術組心肌細胞之間少量炎性細胞浸潤，細胞核大致正常;模型組可見心肌纖維排列紊亂稀疏，肌纖維斷裂，偶可見心肌細胞發(fā)生斑片狀壞死，細胞核皺縮甚或消失，細胞間質可見大量炎性細胞浸潤，纖維瘢痕組織增生;與模型組比較，各給藥組心肌組織形態(tài)學明顯改善，肌纖維排列相對有序，炎癥細胞浸潤減少。詳見圖1。

3.2" 各組大鼠心肌組織鐵沉積情況

正常組和假手術組心肌組織鐵沉積不顯著;模型組鐵沉積增多;各給藥組相較于模型組，鐵沉積減少。詳見圖2。

3.3" 各組大鼠心肌細胞超微結構觀察結果

正常組和假手術組大鼠心肌細胞形態(tài)正常，心肌纖維排列規(guī)則，線粒體豐富，內(nèi)脊結構完整;模型組心肌細胞形態(tài)上有差異，可見壞死心肌細胞，心肌纖維斷裂，排列紊亂，線粒體分布不均，線粒體內(nèi)脊模糊，自噬體形成;相比模型組，各給藥組病理形態(tài)改善，心肌細胞形態(tài)差異小，心肌纖維排列相對規(guī)則，線粒體內(nèi)脊排列規(guī)則、結構較清晰。詳見圖3。

3.4" 各組大鼠心肌組織Nrf2、HO-1、DMT1、Heph mRNA的表達情況

與正常組比較，假手術組Nrf2、HO-1、DMT1、Heph mRNA表達差異無統(tǒng)計學意義（Pgt;0.05）;與正常組和假手術組比較，模型組Nrf2、HO-1、Heph mRNA表達減少（Plt;0.05），DMT1 mRNA表達增加（Plt;0.05）;與模型組比較，各給藥組Nrf2、HO-1、HephmRNA表達增加（Plt;0.05），DMT1 mRNA表達減少（Plt;0.05）。詳見表2。

3.5" 各組大鼠心肌組織Nrf2、HO-1、DMT1、Heph蛋白的表達情況

與正常組比較，假手術組Nrf2、HO-1、DMT1、Heph蛋白表達差異無統(tǒng)計學意義（Pgt;0.05）;與正常組和假手術組比較，模型組Nrf2、HO-1、Heph蛋白表達減少（Plt;0.05），DMT1蛋白表達增加（Plt;0.05）;與模型組比較，各給藥組Nrf2、HO-1、Heph蛋白表達增加（Plt;0.05），DMT1蛋白表達減少（Plt;0.05）。詳見圖4、表3。

4 討論

隨著人口老齡化發(fā)展，我國心血管疾病的發(fā)病率和死亡率逐年上升，并且呈年輕化的趨勢。其中，急性心肌梗死（acute myocardial infarction， AMI）是心血管死亡事件發(fā)生的主要原因，AMI是指因冠狀動脈粥樣硬化斑塊急性破裂，繼發(fā)冠狀動脈血流中斷或閉塞導致心肌急性壞死，同時具備心肌損傷和至少一項心肌缺血的臨床證據(jù)[7]。快速恢復梗死部位血液灌注是治療AMI的關鍵，急診溶栓和經(jīng)皮冠狀動脈介入治療是目前常用的再灌注治療方法，但是心肌組織恢復灌注后可能出現(xiàn)比之前更為嚴重的損傷，即MIRI，主要表現(xiàn)為致死性心肌再灌注損傷、心肌頓抑、微血管阻塞以及心律失常，目前缺乏有效的治療手段[8]。故MIRI的預防和改善逐漸成為心血管疾病研究領域的熱點。

MIRI根據(jù)其癥狀表現(xiàn)，歸屬于中醫(yī)學“胸痹心痛”范疇。追溯中醫(yī)經(jīng)典，《黃帝內(nèi)經(jīng)》中記載“氣郁”為心病的重要病因病機?！妒颐劁洝るp治法》提出“心病調肝”之說：“如人病心痛，不可只治心痛，必須兼治肝……蓋心氣之傷，由于肝木之不足，補其肝而心君安其位矣?！薄妒颐劁洝て畏ā吩疲骸叭瞬⌒耐?，不治心而偏治肝?！弊匪莘剿幱涊d，最早體現(xiàn)“心病調肝”之說的是《金匱要略》中的橘枳姜湯[9]。全國名中醫(yī)王行寬認為，“肝心同治法”的理論基石主要有兩方面：一是心、肝共主血脈，兩者協(xié)調則肝有所藏，心血充盈;二是神、魂共主七情，心、肝各司神魂，共主七情，以行情志。從肝治心組方為心痛靈基礎上增加疏肝解郁之品而成，是王行寬“心病治肝，肝心同治”學術思想的體現(xiàn)。該方中當歸補血活血，紅參大補元氣、通血脈，二者共奏補養(yǎng)氣血、活血化瘀之功，共為君藥;丹參行氣活血、益氣養(yǎng)血，又入心、肝二經(jīng)，攻補兼?zhèn)洌窈柰ǜ文?、宣暢氣血，姜黃、郁金行氣破瘀、宣降氣機，四者共為臣藥;白芥子豁痰開胸利氣，為佐藥;九香蟲理胸膈之凝滯，為諸藥先鋒使者。此外，柴胡、郁金疏肝氣，當歸、紅參養(yǎng)肝血，能解郁和肝。諸藥合用，共奏補氣活血、疏肝解郁之功。

鐵從食物中攝取，由腸道吸收，通過血液遍布全身，主要儲存在紅細胞內(nèi)[10]。鐵對人體至關重要，作為血紅蛋白和肌紅蛋白的組成元素，參與氧氣運輸，也是機體中很多酶類的組成部分，參與機體能量代謝和過氧化氫生產(chǎn)過程，而心臟作為泵血器官，易發(fā)生鐵超載類疾病[11]。生理情況下，鐵的攝取和流失是平衡的，當MIRI時血流瘀滯，血紅蛋白結構損傷，釋放大量游離鐵，心肌細胞內(nèi)鐵超載，鐵離子進入線粒體，導致線粒體內(nèi)鐵沉積，鐵離子蓄積后在H2O2的催化下發(fā)生芬頓反應和Haber-Weiss反應，形成過量ROS和脂質過氧化物，引起細胞膜和線粒體膜崩潰，導致心肌細胞鐵死亡[12]。

心肌細胞線粒體鐵含量比其他細胞高50%，心肌梗死區(qū)域紅細胞大量溶解，細胞膜損傷，血紅蛋白中鐵釋放并沉積，導致心肌細胞鐵死亡，引發(fā)MIRI的病理事件[13]。本研究構建MIRI大鼠模型，結果顯示，MIRI大鼠心肌纖維排列紊亂，纖維瘢痕組織增生，鐵沉積水平高，線粒體結構異常，線粒體內(nèi)脊模糊。從肝治心組方能夠改善大鼠心肌組織病理形態(tài)學改變，減少心肌細胞核皺縮、壞死，減少細胞間質炎癥細胞浸潤，改善纖維瘢痕組織增生，減少心肌組織中鐵沉積，降低線粒體損傷程度。多項研究表明，鐵死亡與MIRI的發(fā)生密切相關，抑制鐵死亡的發(fā)生可以減輕MIRI[10，14-16]。Nrf2是參與脂質過氧化過程中控制細胞內(nèi)氧化穩(wěn)態(tài)的關鍵調節(jié)因子[17]。在正常條件下，Nrf2和Kelch樣Ech相關蛋白1（Kelch like Ech associated protein 1， Keap1）結合存在于細胞質中，在氧化應激下，分布在細胞質中的Nrf2從Keap1解聚，然后轉移到細胞核中，與抗氧化反應原件結合，上調幾種抗氧化的下游靶基因表達，包括HO-1、谷胱甘肽S-轉移酶等，從而發(fā)揮細胞保護作用。其中，HO-1啟動子包含核心抗氧化反應原件堿基序列，而Nrf2可以優(yōu)先結合這些序列來誘導HO-1表達。Nrf2/HO-1信號通路參與鐵死亡、細胞自噬、程序性細胞壞死和細胞凋亡的預防，可作為動脈硬化、心律失常和心肌梗死的潛在治療靶點[18]。Nrf2已被證明可以通過對抗鐵代謝失衡誘導的氧化應激來抑制鐵死亡，也可以預防鐵死亡激活劑引起的鐵死亡[19]。Nrf2也能調控鐵調素表達，以控制細胞內(nèi)鐵穩(wěn)態(tài)和抗氧化系統(tǒng)[20]。HO-1參與鐵代謝，可以將血紅素降解為Fe2+、CO及膽綠素，當MIRI時，HO-1過表達促進鐵沉積[21]。DMT1廣泛表達，負責機體的鐵吸收，鐵超載時介導Fe2+進入細胞[22]。Heph是含銅的亞鐵氧化酶，通過將Fe2+氧化成Fe3+來減輕鐵過載誘發(fā)的氧化應激損傷[23]。本研究發(fā)現(xiàn)，MIRI大鼠心肌組織Nrf2、HO-1、Heph mRNA和蛋白表達減少，DMT1 mRNA和蛋白表達增加，而從肝治心組方使MIRI大鼠心肌組織Nrf2、HO-1、Heph mRNA和蛋白表達增加，DMT1 mRNA和蛋白表達減少，改善了MIRI大鼠心肌細胞鐵死亡。

綜上所述，從肝治心組方可能通過促進Nrf2/HO-1通路表達、上調Heph的表達以減輕鐵過載誘發(fā)的氧化損傷，抑制DMT1的表達以減少具有氧化還原活性的Fe2+的吸收，維持鐵代謝穩(wěn)定，進而抑制了因鐵離子價態(tài)不穩(wěn)定導致芬頓反應和Haber-Weiss反應產(chǎn)生的ROS及脂質過氧化產(chǎn)物引起的心肌細胞鐵死亡，從而對MIRI的心肌組織發(fā)揮保護作用。

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〔收稿日期〕2023-05-01

〔基金項目〕全國名老中醫(yī)藥專家傳承工作室建設項目（國中醫(yī)藥函人教函〔2022〕75號）;湖南省自然科學基金項目（2021JJ40418）;湖南省衛(wèi)生健康委員會科研計劃項目（202203074417）;湖南中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院中醫(yī)藥傳承創(chuàng)新專項（2024XYLH363）;湖南中醫(yī)藥大學校級科研項目（Z2023XJYB25）;湖南中醫(yī)藥大學中醫(yī)學世界一流培育學科（2023）。

〔通信作者〕*陳" 亞，女，碩士，副主任醫(yī)師，E-mail：310532@hnucm.edu.cn。