白菜類蔬菜遺傳轉(zhuǎn)化研究進(jìn)展

摘 " "要：遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)是研究白菜類蔬菜基因功能和開展遺傳育種的重要手段。通過適宜的遺傳轉(zhuǎn)化方法，可以將目標(biāo)基因?qū)肷锘蚪M，實(shí)現(xiàn)對(duì)其生物學(xué)特性和經(jīng)濟(jì)性狀的改良。然而，白菜類蔬菜的遺傳轉(zhuǎn)化面臨著再生能力差、轉(zhuǎn)化效率低等問題。通過查閱國內(nèi)外白菜類蔬菜遺傳轉(zhuǎn)化相關(guān)文獻(xiàn)，對(duì)影響白菜類蔬菜遺傳轉(zhuǎn)化效率的因素（基因型、再生體系、轉(zhuǎn)化方法等）進(jìn)行了分析和總結(jié)，探討了CRISPR/Cas9在遺傳轉(zhuǎn)化中的應(yīng)用，并對(duì)其再生與遺傳轉(zhuǎn)化的前景進(jìn)行了展望。

關(guān)鍵詞：白菜類蔬菜；遺傳轉(zhuǎn)化；再生體系；轉(zhuǎn)化方法；CRISPR/Cas9

中圖分類號(hào)：S634 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1673-2871（2025）02-001-06

Research progress on genetic transformation of Brassica rapa vegetables

ZHANG Jiaxin1， 2， ZHANG Wenjing2， LU Cuiling3， SU Henan2， ZHAO Yanyan2， WEI Xiaochun2， YANG Shuangjuan2， WANG Zhiyong2， FENG Jianqi4， ZHANG Xiaowei2， YUAN Yuxiang2， YUAN Jingping1

（1. College of Horticulture and Landscape Architecture， Henan University of Science and Technology， Xinxiang 453003， Henan， China; 2. Vegetable Research Institute， Henan Academy of Agricultural Sciences， Zhengzhou 450002， Henan， China; 3. Zhengzhou Institute of Agriculture Science and Technology， Zhengzhou 450006， Henan， China; 4. Kaifeng Academy of Agriculture and Forestry Sciences， Kaifeng 475004， Henan， China）

Abstract： Genetic transformation technology is an important toll for exploring the gene functions of Brassica rapa vegetables and conducting genetic breeding. Through appropriate genetic transformation methods， target genes can be introduced into the genome to improve their biological characteristics and economic traits. However， the genetic transformation of Brassica rapa vegetables faces challenges such as poor regeneration ability and low transformation efficiency. This paper reviews the relevant literature on genetic transformation of Brassica rapa vegetables both domestically and internationally， analyzes and summarizes the factors affecting transformation efficiency （such as genotype， regeneration system and transformation method， etc.）， discusses the application of CRISPR/Cas9 in genetic transformation， and provides prospects for "regeneration and genetic transformation in the future.

Key words： Brassica rapa vegetables; Genetic transformation; Regeneration system; Transformation methods; CRISPR/Cas9

白菜類蔬菜包括大白菜（Brassica rapa L. ssp. pekinensis）、小白菜（Brassica rapa L. chinensis）和菜心（Brassica rapa L. chinensis var. utilis Tsen et Lee）等，屬于十字花科（Cruciferae）蕓薹屬（Brassica）作物。白菜類蔬菜在我國蔬菜產(chǎn)業(yè)中占據(jù)重要地位，白菜類蔬菜育種對(duì)提高農(nóng)業(yè)生產(chǎn)力至關(guān)重要。隨著組織培養(yǎng)技術(shù)、分子標(biāo)記輔助育種技術(shù)和基因工程育種技術(shù)的進(jìn)步，生物技術(shù)在農(nóng)業(yè)中的應(yīng)用越來越廣泛。將抗蟲、抗病等優(yōu)異基因?qū)胫参锘蚪M中，對(duì)改良農(nóng)作物、解決農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的難題具有重要意義。目前，遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)已成為白菜類蔬菜育種工作的重要手段之一，但白菜類蔬菜的遺傳轉(zhuǎn)化仍面臨著許多問題。白菜種是蕓薹屬3個(gè)基本種和3個(gè)復(fù)合種中最難進(jìn)行組織培養(yǎng)的一類[1]，其轉(zhuǎn)化效率遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于同為蕓薹屬的油菜和甘藍(lán)。目前，研究者不斷探索和改良遺傳轉(zhuǎn)化方法，提高其再生率和轉(zhuǎn)化效率。筆者將歸納匯總目前已報(bào)道的白菜類蔬菜遺傳轉(zhuǎn)化方法和影響因素，以期為白菜類蔬菜遺傳轉(zhuǎn)化效率的提升和技術(shù)的優(yōu)化提供參考[2]。

1 遺傳轉(zhuǎn)化的再生體系

高頻再生體系是遺傳轉(zhuǎn)化的基礎(chǔ)，近年來，國內(nèi)外學(xué)者在白菜類蔬菜再生體系的建立方面做了大量工作，并取得了較大進(jìn)展。用于白菜類蔬菜遺傳轉(zhuǎn)化的再生體系包括誘導(dǎo)愈傷組織的再生體系、直接分化的再生體系以及以生殖細(xì)胞為受體的再生體系[2]。其中，誘導(dǎo)愈傷組織的再生體系是最常用的方法。在誘導(dǎo)愈傷組織的再生體系中，影響再生的因素包括基因型、外植體類型、培養(yǎng)基成分等諸多因素。

1.1 基因型

白菜類蔬菜的基因型對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)和植株再生頻率影響極大，即使采用相同的培養(yǎng)條件，不同基因型也具有不同的再生頻率[2]。選擇合適的基因型對(duì)建立高頻再生體系至關(guān)重要。研究表明，白菜的再生率由核基因控制[3]。白菜類蔬菜屬于AA基因組，而控制芽再生的相關(guān)基因位于C基因組上[4-5]。Murata等[6]指出缺乏C基因的白菜類蔬菜，相比于CC型的甘藍(lán)類蔬菜，其不定芽再生困難、植株再生能力較低，這一現(xiàn)狀已成為制約白菜類蔬菜功能研究以及白菜轉(zhuǎn)基因品種培育的一大因素。張鳳蘭等[7]比較了123個(gè)大白菜基因型的再生頻率，結(jié)果表明，不同大白菜品種再生頻率差異極大，再生頻率與品種起源、結(jié)球類型及熟性無相關(guān)性。曹家樹等[8]研究了7個(gè)白菜類蔬菜栽培品種和1個(gè)雜交親本離體培養(yǎng)再生情況，發(fā)現(xiàn)青梗類品種的離體再生頻率明顯高于白梗類品種，認(rèn)為青梗類品種更適宜離體培養(yǎng)的植株再生。任家利[9]對(duì)22個(gè)不同基因型的大白菜和小白菜進(jìn)行再生分析，其中有17個(gè)可被誘導(dǎo)出不定芽，并指出純合基因型利于誘導(dǎo)出不定芽。

1.2 外植體類型

目前，白菜類蔬菜再生中應(yīng)用最多的外植體有子葉、子葉柄、帶柄子葉、下胚軸、小孢子、花粉等。外植體只有同時(shí)具備再生能力強(qiáng)、易于農(nóng)桿菌侵染、適應(yīng)性強(qiáng)等特點(diǎn)，才能成為良好的轉(zhuǎn)化受體。Li等[10]對(duì)大白菜的下胚軸、帶柄子葉和根的不定芽分化進(jìn)行評(píng)估，發(fā)現(xiàn)帶柄子葉的平均分化率高達(dá)81.15%。劉雨佳[11]用大白菜花粉和小孢子誘導(dǎo)胚狀體的形成。張曉東等[12]以大白菜品種Seoul下胚軸為外植體，建立了大白菜高效穩(wěn)定再生體系，誘導(dǎo)出不定芽的頻率最高為39.15%。范愛麗等[13]提出白菜外植體保留單片子葉的切割方式明顯優(yōu)于保留2片子葉的切割方式。陳敏敏等[14]比較了不結(jié)球白菜的帶柄子葉、子葉、沿葉脈切開的半子葉-子葉柄和下胚軸4種不同外植體的再生率，發(fā)現(xiàn)帶柄子葉的再生能力最強(qiáng)，子葉次之，下胚軸最差。劉學(xué)成等[15]利用06J28基因型大白菜真葉建立了高效再生體系，再生率最高達(dá)87.63%。

1.3 培養(yǎng)基成分

白菜類蔬菜再生體系的研究中大多使用MS培養(yǎng)基和B5培養(yǎng)基，并在這些培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上再添加有利于愈傷組織誘導(dǎo)分化及再生的物質(zhì)。在植物組織培養(yǎng)中，激素的種類和濃度對(duì)植株的再生效率具有決定性影響，特別是在白菜類蔬菜的遺傳轉(zhuǎn)化和再生過程中，確定合適的激素配比對(duì)提高再生頻率尤為重要。

在白菜類蔬菜離體芽誘導(dǎo)階段培養(yǎng)中，常用的生長素及類似物有NAA、IAA、IBA、2，4-D等，細(xì)胞分裂素有KT、6-BA、TDZ、CPPU等，其他種類激素有ABA、GA3等[9，16-18]。在誘導(dǎo)白菜類蔬菜不定芽分化時(shí)使用的激素組合多為6-BA+NAA或TDZ+NAA[19-20]。在生根方面，有研究發(fā)現(xiàn)用單一的生長素（IAA、IBA、NAA）刺激能表現(xiàn)出較高的生根率，而有研究則認(rèn)為細(xì)胞分裂素和生長素組合的共同作用的生根效果更佳，只是與誘導(dǎo)培養(yǎng)基的激素比例不同[21]。

在植株生長的過程中會(huì)產(chǎn)生乙烯等氣體，所以多數(shù)培養(yǎng)基中都會(huì)添加AgNO3來中和這些氣體，同時(shí)它還具有促進(jìn)植物器官和體細(xì)胞胚胎發(fā)生[22]、緩解褐化與玻璃化現(xiàn)象的作用。杜紅等[23]研究表明，培養(yǎng)基添加AgNO3能明顯促進(jìn)大白菜子葉的芽再生。不同基因型的植株、不同的外植體類型和不同的轉(zhuǎn)化方法在離體培養(yǎng)各階段所需要的成分都不盡相同。

2 遺傳轉(zhuǎn)化的方法

目前，常用于白菜類蔬菜遺傳轉(zhuǎn)化的方法有基因槍法、磁轉(zhuǎn)染法和農(nóng)桿菌介導(dǎo)法等。

2.1 基因槍法

基因槍法也稱粒子轟擊法，其基本原理是將外源DNA包被在金粉或鎢粉微粒中，通過基因槍轟擊將包被的顆粒直接轉(zhuǎn)移到細(xì)胞或組織中，進(jìn)而在受體植株基因組中穩(wěn)定遺傳表達(dá)，其本質(zhì)是一種物理過程，故基本不受受體基因型的限制，使用范圍也更廣泛[24]。李菲[25]第一次報(bào)道以基因槍法進(jìn)行大白菜遺傳轉(zhuǎn)化體系的構(gòu)建。劉雨佳[11]利用基因槍法轟擊大白菜小孢子得出轉(zhuǎn)化效率為10.83%。但基因槍法作為轉(zhuǎn)基因技術(shù)工具，存在轉(zhuǎn)化率低、成本高、外源DNA易損和僅能轉(zhuǎn)移小于10 kb DNA片段等局限性[24]。

2.2 磁轉(zhuǎn)染法

利用磁性納米粒子（magnetic nanoparticles， MNPs）載體運(yùn)轉(zhuǎn)外源基因，通過磁場(chǎng)進(jìn)入和轉(zhuǎn)化細(xì)胞的過程稱作磁轉(zhuǎn)染法。磁性納米顆粒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化技術(shù)通過將質(zhì)粒DNA包裹在磁性納米顆粒中，形成MNP-DNA復(fù)合物，利用磁場(chǎng)將這些復(fù)合物引入花粉中，然后用這些花粉給植物授粉，DNA會(huì)整合到植物的基因組中，產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因種子，這些種子可以再生為轉(zhuǎn)基因植物[24]。該方法通過將DNA直接送入花粉中，通過授粉實(shí)現(xiàn)遺傳轉(zhuǎn)化，無需組織培養(yǎng)。劉雨佳[11]利用大白菜小孢子及花粉粒分別作為轉(zhuǎn)化受體，初步探討了以磁轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)化大白菜的方式。許可翠[26]等用磁轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)化不結(jié)球白菜，轉(zhuǎn)化效率為8.89%。侯忠樂[27]利用花粉磁轉(zhuǎn)化方法成功將外源基因編輯載體導(dǎo)入不結(jié)球白菜植株，獲得了轉(zhuǎn)基因植株。磁轉(zhuǎn)染法作為一個(gè)新興的遺傳轉(zhuǎn)化手段，仍存在許多問題，如基因轉(zhuǎn)化機(jī)制尚未明確、納米載體設(shè)計(jì)復(fù)雜以及需要針對(duì)不同植物系統(tǒng)定制建立有效的轉(zhuǎn)化體系等。

2.3 農(nóng)桿菌介導(dǎo)法

農(nóng)桿菌介導(dǎo)法是實(shí)現(xiàn)遺傳轉(zhuǎn)化成功例子最多的植物轉(zhuǎn)基因方法，因其具有轉(zhuǎn)化大片段DNA、轉(zhuǎn)化效率高、操作簡便且能穩(wěn)定遺傳等優(yōu)勢(shì)，已成為植物遺傳轉(zhuǎn)化的首選。在植物基因工程中大約有80%的遺傳轉(zhuǎn)化是通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)完成的[28]。農(nóng)桿菌分為根癌農(nóng)桿菌和發(fā)根農(nóng)桿菌，其含有Ti（tumor-inducing）質(zhì)粒，可通過對(duì)植物受傷部位的侵染將外源DNA整合入宿主細(xì)胞基因組。通過人為改造Ti質(zhì)粒上的DNA片段，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)植物的轉(zhuǎn)基因改造[11]。此方法選擇靈活，可基于離體再生體系完成轉(zhuǎn)化，又可獨(dú)立完成轉(zhuǎn)化[29]。李海艷[30]對(duì)4種農(nóng)桿菌菌株（GV3101、LBA4404、EHA105、AGL-1）的大白菜遺傳轉(zhuǎn)化效率進(jìn)行了比較，結(jié)果顯示GV3101菌株得到了最高的抗性愈傷組織誘導(dǎo)率、抗性芽分化率和轉(zhuǎn)化率，表明其轉(zhuǎn)化能力最強(qiáng)。EHA105、LBA4404和AGL-1的抗性愈傷組織誘導(dǎo)率、抗性芽分化率、轉(zhuǎn)化率都依次降低。賈艷麗[31]利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將抗蟲基因轉(zhuǎn)入漢陽青小白菜中，轉(zhuǎn)化率為3.65%。梁雯雯[32]利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法建立了菜心的遺傳轉(zhuǎn)化59

體系，轉(zhuǎn)化率為2.22%。但農(nóng)桿菌介導(dǎo)法也存在對(duì)物種基因型和外植體依賴性強(qiáng)、對(duì)組織培養(yǎng)技術(shù)要求高、轉(zhuǎn)化周期長等缺點(diǎn)。

2.4 其他方法

基因槍法、磁轉(zhuǎn)染法和農(nóng)桿菌介導(dǎo)法各有利弊，研究者們也嘗試了其他方式。如孟茜[33]首次構(gòu)建了細(xì)胞穿透肽介導(dǎo)的大白菜小孢子遺傳轉(zhuǎn)化體系，其主要是利用CPPs作為承載外源DNA等生物大分子物質(zhì)的載體進(jìn)入細(xì)胞。Liu等[34]用浸花法轉(zhuǎn)化普通白菜，結(jié)果表明用于擬南芥轉(zhuǎn)化的浸花法也可以適用于其他十字花科植物。Khan等[35]用浸花法轉(zhuǎn)化高產(chǎn)多室類型白菜，發(fā)現(xiàn)半開放花轉(zhuǎn)化率為7.2%，完全開放花轉(zhuǎn)化率為5.2%。胡毅等[36]利用蘸花法對(duì)普通白菜進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化并得到轉(zhuǎn)基因植株。趙靜[37]采用真空滲入法將目的載體轉(zhuǎn)入大白菜中，轉(zhuǎn)化率為0.37%。楊慧瑩[38]用超聲波-真空滲入法轉(zhuǎn)化結(jié)球白菜，但未獲得轉(zhuǎn)基因植株。

3 轉(zhuǎn)化載體的選擇

遺傳轉(zhuǎn)化載體構(gòu)建是其中最為關(guān)鍵的一步。選擇具有合適的選擇標(biāo)記基因和報(bào)告基因的遺傳轉(zhuǎn)化載體能極大地提高試驗(yàn)效率。

3.1 選擇標(biāo)記基因

在遺傳轉(zhuǎn)化過程中，標(biāo)記基因的選擇起著關(guān)鍵作用。選擇標(biāo)記基因通常用于識(shí)別成功整合到細(xì)胞或組織的目標(biāo)基因。白菜類蔬菜遺傳轉(zhuǎn)化中常見的選擇標(biāo)記基因分別為抗生素抗性基因（nptⅡ、hpt）和除草劑抗性基因（bar）。通過將相應(yīng)篩選劑加入培養(yǎng)基中來篩選帶有轉(zhuǎn)基因載體的植株，篩選劑提供選擇性壓力，僅使包含目標(biāo)基因的細(xì)胞能夠存活和生長。篩選劑的選擇必須與選擇標(biāo)記基因匹配，篩選劑的濃度需要足夠高以抑制未轉(zhuǎn)化細(xì)胞的生長，但又不能對(duì)轉(zhuǎn)化細(xì)胞產(chǎn)生毒性[37]。

含有新霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶基因（nptⅡ）標(biāo)記的載體可以選擇卡那霉素（Kan）、遺傳霉素（G418）、新霉素等作為篩選劑。含有潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶基因（hpt）標(biāo)記的載體可以選擇潮霉素（Hyg）作為篩選劑。賈艷麗[31]在建立白菜高效遺傳轉(zhuǎn)化體系當(dāng)中使用20和25 mg·L-1的Kan進(jìn)行篩選。潮霉素作為篩選劑時(shí)質(zhì)量濃度范圍多在8～20 mg·L-1[1]。Sivanandhan等[39]通過逐漸增加潮霉素質(zhì)量濃度（10～12 mg·L-1），對(duì)大白菜子葉外植體進(jìn)行3次篩選，成功實(shí)現(xiàn)了14%的轉(zhuǎn)化率。

抗除草劑基因（bar）編碼膦化麥黃酮（phosphinothricin，PPT）和乙酰轉(zhuǎn)移酶（phosphinothricin acetyltransferase，PAT），可以使轉(zhuǎn)基因植株對(duì)篩選劑草丁膦、草銨膦及其類似物Basta具有耐性[2]。劉任源[29]發(fā)現(xiàn)，8 mg·L-1膦化麥黃酮（PPT）可作為菜心轉(zhuǎn)化過程中的最適篩選劑和質(zhì)量濃度。Park等[40]用5 mg·L-1草胺膦篩選出了過表達(dá)的大白菜轉(zhuǎn)基因植株。

選擇合適的標(biāo)記基因，探索最適宜的篩選劑濃度對(duì)抑制和篩選未轉(zhuǎn)化的植株、提高篩選效率、提高轉(zhuǎn)化率有重要作用。

3.2 報(bào)告基因

為方便快捷地鑒定轉(zhuǎn)化植株，需要用到報(bào)告基因。在白菜類蔬菜轉(zhuǎn)基因研究中常用的報(bào)告基因包括uidA（GUS）和GFP。uidA（GUS）基因編碼能夠水解X-葡萄糖苷基底物（如5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-D-葡萄糖苷）的β-葡萄糖醛酸酶（β-glucuronidase），進(jìn)而產(chǎn)生藍(lán)色反應(yīng)物。因此，通過GUS基因的表達(dá)能夠觀察到組織或細(xì)胞中的活性位置，從而檢測(cè)轉(zhuǎn)基因的表達(dá)情況[41]。張國裕等[42]利用GUS染色組織分析法研究最適轉(zhuǎn)化條件，建立了農(nóng)桿菌介導(dǎo)的菜心遺傳轉(zhuǎn)化體系。綠色熒光蛋白（GFP）是一個(gè)廣泛應(yīng)用的熒光報(bào)告基因。GFP基因可以通過其獨(dú)特的綠色熒光標(biāo)記在細(xì)胞或組織中表達(dá)，GFP自身可發(fā)光，不需要外加底物，可以直接通過熒光顯微鏡觀察，因此應(yīng)用于基因表達(dá)、蛋白質(zhì)定位等研究中[43]。報(bào)告基因的表達(dá)實(shí)現(xiàn)了轉(zhuǎn)基因表達(dá)的實(shí)時(shí)檢測(cè)和可視化，是研究基因功能及生物過程的強(qiáng)大工具。Xin等[44]利用抗GFP抗體對(duì)大白菜轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行驗(yàn)證。侯忠樂[27]在轉(zhuǎn)化后的第3天檢測(cè)到GFP熒光蛋白標(biāo)簽的表達(dá)，得到CRISPR/Cas9系統(tǒng)編輯的不結(jié)球白菜，編輯效率為12.5%。選擇合適的標(biāo)記基因不僅可以提高轉(zhuǎn)化效率，鑒定轉(zhuǎn)基因植物的準(zhǔn)確性和簡便性，還能幫助人們快速識(shí)別成功轉(zhuǎn)化的個(gè)體，從而加速育種進(jìn)程，減少篩選時(shí)的工作量和降低成本。

4 應(yīng) 用

近年來CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)得到廣泛應(yīng)用并與遺傳轉(zhuǎn)化相結(jié)合。CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)利用Cas9核酸酶和向?qū)NA，精確識(shí)別和切割基因組中的特定位點(diǎn)[45]。切割后通過DNA修復(fù)機(jī)制（如NHEJ或HDR）引入插入、缺失等修飾，實(shí)現(xiàn)基因的精準(zhǔn)編輯和改造。與傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)基因技術(shù)相比，CRISPR/Cas9具有靶向性高、操作簡便、成本低廉、精確定位和編輯特定基因序列等特點(diǎn)，適用于各種生物體的基因編輯[46]。此外，CRISPR/Cas9能夠?qū)崿F(xiàn)穩(wěn)定遺傳的突變，確保編輯后的基因能夠在后代中傳遞。在農(nóng)業(yè)中，它常被用于培育具有抗病性、耐逆性和高產(chǎn)特性的作物品種[47]。CRISPR/Cas9在大白菜中的應(yīng)用并不影響大白菜轉(zhuǎn)化效率[30]。吳棟雄[48]對(duì)菜心CRISPR/Cas9系統(tǒng)進(jìn)行了初步的探索。李海燕[30]建立了穩(wěn)定高效的大白菜遺傳轉(zhuǎn)化體系，并將CRISPR/Cas9系統(tǒng)成功地應(yīng)用于大白菜基因編輯，最終該體系經(jīng)重復(fù)試驗(yàn)證明，平均轉(zhuǎn)化率為10.83%。王薇[49]在研究中對(duì)白菜材料中的基因進(jìn)行特異敲除，在得到的基因編輯植株中，檢測(cè)到在靶點(diǎn)處發(fā)生不同程度的堿基替換，進(jìn)而驗(yàn)證了白菜目的基因的功能。Park等[50]研究表明，CRISPR/Cas9介導(dǎo)的基因敲除能夠成功生成具有獨(dú)特代謝特性的白菜育種資源，且CRISPR/Cas9技術(shù)能夠高效應(yīng)用于功能性大白菜育種中。

5 展 望

目前，白菜類蔬菜遺傳轉(zhuǎn)化仍面臨遺傳轉(zhuǎn)化效率較低、篩選困難、后代難以收種、基因型依賴性強(qiáng)、受生長激素和培養(yǎng)條件影響較大、轉(zhuǎn)化不穩(wěn)定、轉(zhuǎn)基因植株嵌合體多、假陽性高等問題。解決這些問題需要綜合利用新的技術(shù)和方法。在再生體系方面需要對(duì)外植體類型、培養(yǎng)基成分等進(jìn)行綜合優(yōu)化，以提高再生效率。面對(duì)再生困難的品種應(yīng)重點(diǎn)研究不依賴于組織培養(yǎng)的轉(zhuǎn)化方法，選擇合適的載體與工具。隨著CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)的發(fā)展，其越來越多地應(yīng)用于相關(guān)作物的分子育種及基因功能鑒定上，遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)與CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)相結(jié)合必將推動(dòng)白菜類蔬菜育種技術(shù)的發(fā)展。

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