國(guó)標(biāo)濾膜法檢驗(yàn)桶裝飲用水中銅綠假單胞菌的關(guān)鍵控制點(diǎn)及預(yù)防措施研究

摘 要：國(guó)標(biāo)濾膜法是指《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 飲用天然礦泉水檢驗(yàn)方法》（GB 8538—2022）中提出的飲用天然礦泉水中銅綠假單胞菌的檢驗(yàn)方法。該方法具有操作簡(jiǎn)便、結(jié)果可靠等特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于各類(lèi)水的銅綠假單胞菌檢驗(yàn)。本文分析國(guó)標(biāo)濾膜法檢驗(yàn)桶裝飲用水中銅綠假單胞菌的關(guān)鍵控制點(diǎn)，并提出有效的預(yù)防措施，以顯著降低桶裝飲用水中銅綠假單胞菌的污染風(fēng)險(xiǎn)，保障人們的飲水安全。

關(guān)鍵詞：國(guó)際濾膜法；桶裝飲用水；銅綠假單胞菌；關(guān)鍵控制點(diǎn)；預(yù)防措施

Study on the Critical Control Points and Preventive Measures of Pseudomonas aeruginosa in Barreled Drinking Water by National Standard Filter Membrane Method

MAI Miao

（Hezhou Inspection and Testing Center， Hezhou 542899， China）

Abstract： The national standard filtration method refers to the test method for Pseudomonas aeruginosa in drinking natural mineral water proposed in GB 8538—2022. The method has the characteristics of simple operation and reliable results， and has been widely used in the detection of Pseudomonas aeruginosa in all kinds of water. This paper analyzes the key control points of the national standard filtration method for detecting Pseudomonas aeruginosa in barreled drinking water， and puts forward effective preventive measures to significantly reduce the risk of Pseudomonas aeruginosa contamination in barreled drinking water and ensure people’s drinking water safety.

Keywords： national standard filtration membrane method; barreled drinking water; Pseudomonas aeruginosa; critical control point; preventive measure

銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是一種常見(jiàn)的革蘭氏陰性桿菌，廣泛存在于自然環(huán)境中，如土壤、水、空氣以及醫(yī)院等場(chǎng)所。這種細(xì)菌具有較強(qiáng)的環(huán)境適應(yīng)能力和生存能力，能夠在多種條件下生長(zhǎng)繁殖，對(duì)消毒劑、干燥和紫外線(xiàn)等理化因素具有很強(qiáng)的抵抗力。該菌存在于食品或水體中會(huì)威脅人體健康，尤其是免疫力低下人群，可引起急性腸道炎、腦膜炎、敗血癥和皮膚炎癥等疾病[1-5]。銅綠假單胞菌是桶裝飲用水中最主要的微生物污染源之一[6]。隨著桶裝飲用水市場(chǎng)需求的不斷擴(kuò)大，近年來(lái)國(guó)內(nèi)外關(guān)于銅綠假單胞菌污染桶裝水的報(bào)道屢見(jiàn)不鮮，引起了諸多學(xué)者、消費(fèi)者及生產(chǎn)企業(yè)的普遍關(guān)注[7-9]。由銅綠假單胞菌污染造成的飲用水中毒案件也有報(bào)道[10-12]。這不僅影響了消費(fèi)者的飲水安全，也對(duì)生產(chǎn)企業(yè)的聲譽(yù)和經(jīng)濟(jì)利益造成了嚴(yán)重?fù)p害?！妒称钒踩珖?guó)家標(biāo)準(zhǔn) 飲用天然礦泉水檢驗(yàn)方法》

（GB 8538—2022）對(duì)飲用天然礦泉水中銅綠假單胞菌的檢驗(yàn)方法（簡(jiǎn)稱(chēng)國(guó)標(biāo)濾膜法）進(jìn)行了詳細(xì)規(guī)定。國(guó)標(biāo)濾膜法具有操作簡(jiǎn)便、結(jié)果可靠等特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于各類(lèi)水的銅綠假單胞菌檢驗(yàn)，故分析其檢驗(yàn)的關(guān)鍵控制點(diǎn)和有效防控手段至關(guān)重要。

1 國(guó)標(biāo)濾膜法的操作步驟

采用國(guó)標(biāo)濾膜法時(shí)，用無(wú)菌鑷子夾取無(wú)菌濾膜邊緣部分，帖放在已滅菌的濾頭上，通過(guò)微孔濾膜過(guò)濾水樣，將水中的細(xì)菌截留在濾膜上，然后將濾膜貼在假單胞菌瓊脂培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，計(jì)數(shù)濾膜上的典型微生物菌落數(shù)。該方法操作簡(jiǎn)便、靈敏度高，適用于檢測(cè)飲用水中的銅綠假單胞菌。

2 關(guān)鍵控制點(diǎn)

2.1 樣品的采集與處理

樣品采集是檢測(cè)的第一步，也是影響檢測(cè)結(jié)果的首要因素。桶裝水體積大、取樣口小，導(dǎo)致桶裝水檢驗(yàn)時(shí)采樣難度非常大。采樣時(shí)應(yīng)先用消毒水消毒桶壁四周，特別是用于取樣的部位，并確保采樣容器和器具清潔無(wú)菌，避免交叉污染。采樣人員應(yīng)注意手部消毒，確保無(wú)菌。同時(shí)，采樣時(shí)應(yīng)充分振蕩水樣，使細(xì)菌均勻分布，確保采樣的均勻度，以提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性。

2.2 培養(yǎng)基及試劑的選擇、制備與接種

培養(yǎng)基自身質(zhì)量的好壞、保存是否妥當(dāng)、制備與使用是否正確都會(huì)直接影響檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此，加強(qiáng)培養(yǎng)基的質(zhì)量控制與使用管理是保證桶裝水銅綠假單胞菌檢測(cè)準(zhǔn)確性的關(guān)鍵。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)結(jié)合工作實(shí)際選擇合適的培養(yǎng)基質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)、制定相應(yīng)的質(zhì)量控制作業(yè)指導(dǎo)書(shū)。培養(yǎng)基的選擇與制備應(yīng)嚴(yán)格按照《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn)培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求》（GB 4789.28—2013）進(jìn)行，確保培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)成分的比例和pH值符合要求。同時(shí)，應(yīng)注意對(duì)培養(yǎng)基配制用水、驗(yàn)證試劑加強(qiáng)質(zhì)量控制。實(shí)驗(yàn)室在使用檢測(cè)銅綠假單胞菌的相關(guān)培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)選擇適宜的制備方法、滅菌方式、儲(chǔ)存方式等，并按照標(biāo)準(zhǔn)要求進(jìn)行質(zhì)量控制，以確保最終檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性[13]。接種過(guò)程中，應(yīng)確保無(wú)菌操作并將濾膜緊密貼合在培養(yǎng)基上，避免氣泡產(chǎn)生，以確保銅綠假單胞菌能夠充分接觸培養(yǎng)基并生長(zhǎng)。此外，應(yīng)注意合理控制培養(yǎng)箱的溫度和濕度，以保證銅綠假單胞菌正常生長(zhǎng)。

2.3 濾膜的選擇與使用

濾膜是濾膜法檢測(cè)桶裝水中銅綠假單胞菌的關(guān)鍵耗材，濾膜的質(zhì)量會(huì)直接影響細(xì)菌的截留效率和檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。應(yīng)選擇孔徑適中、質(zhì)地均勻、質(zhì)量好的濾膜，并確保其在有效期內(nèi)使用。濾膜采購(gòu)回來(lái)后，先對(duì)濾膜進(jìn)行陰性和陽(yáng)性質(zhì)量控制，確保濾膜的截留效率和銅綠假單胞菌在濾膜上的顯色情況。使用前對(duì)濾膜進(jìn)行滅菌處理或直接使用一次性濾膜，以避免引入外源性污染。同時(shí)，操作過(guò)程中應(yīng)注意保持濾膜的完整性，避免濾膜破損導(dǎo)致細(xì)菌無(wú)法完全截留。

2.4 確證試驗(yàn)的準(zhǔn)確性

確證試驗(yàn)是判斷疑似菌落是否為銅綠假單胞菌的重要依據(jù)，常用的確證方法有綠膿菌素試驗(yàn)、產(chǎn)氨試驗(yàn)、42 ℃生長(zhǎng)試驗(yàn)、氧化酶試驗(yàn)及熒光試驗(yàn)等。在進(jìn)行這些試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格按照檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)和試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，并確保試劑的有效性和操作的準(zhǔn)確性。同時(shí)，應(yīng)注意觀(guān)察試驗(yàn)結(jié)果的時(shí)間點(diǎn)和顏色變化，正確判斷菌落是否為銅綠假單胞菌。

2.5 實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制

實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制是保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性和可靠性的重要手段。應(yīng)通過(guò)參加能力驗(yàn)證、定期校準(zhǔn)儀器、檢查試劑有效期等方式，確保實(shí)驗(yàn)室的設(shè)備、人員、環(huán)境、檢測(cè)能力和水平符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)要求。還應(yīng)建立完善的記錄制度和審核機(jī)制，對(duì)檢測(cè)過(guò)程進(jìn)行全面監(jiān)管。此外，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立完善的質(zhì)量管理體系，對(duì)檢測(cè)過(guò)程中的每個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行嚴(yán)格監(jiān)管，包括但不限于樣品的接收、處理、分析和結(jié)果的報(bào)告。質(zhì)量控制人員應(yīng)定期統(tǒng)計(jì)分析實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)數(shù)據(jù)，及時(shí)發(fā)現(xiàn)并糾正偏差，確保檢測(cè)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。同時(shí)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)定期對(duì)檢測(cè)人員進(jìn)行培訓(xùn)和考核，提高其專(zhuān)業(yè)技能和操作水平，以減少人為誤差。

3 預(yù)防措施

3.1 加強(qiáng)水源管理

桶裝水的水體來(lái)源通常有公共供水系統(tǒng)的自來(lái)水、地下水或地表水。由于自然環(huán)境復(fù)雜多變，地下水或地表水的微生物負(fù)載較高，水體普遍存在銅綠假單胞菌。所以，為保障桶裝飲用水安全，需要采取如下水源管理措施：①選擇水質(zhì)優(yōu)良、無(wú)污染的水源作為原料水體，并對(duì)水源地進(jìn)行嚴(yán)格的保護(hù)，防止工業(yè)排放、農(nóng)業(yè)污染等外部因素對(duì)水源造成污染；②定期對(duì)原水池進(jìn)行清洗消毒，以去除池壁和池底的污垢、微生物等，并減少原水在池中滯留的時(shí)間，避免長(zhǎng)時(shí)間滯留導(dǎo)致水質(zhì)惡化；③定期檢查原水池的密封性和完整性，防止外部污染物進(jìn)入；④對(duì)水源進(jìn)行精濾或超濾，去除水中的懸浮物、膠體、細(xì)菌、病毒等污染物。

3.2 完善桶裝水的生產(chǎn)工藝

桶裝水生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)加強(qiáng)優(yōu)化生產(chǎn)工藝流程，減少灌裝次數(shù)，確保一次灌裝完成，避免混合半產(chǎn)品水的再次灌裝。還應(yīng)加強(qiáng)設(shè)備管道、灌裝系統(tǒng)、成品水罐的清洗消毒和維護(hù)，并要求員工在生產(chǎn)前進(jìn)行手部清潔消毒，穿戴符合要求的防護(hù)用品，在生產(chǎn)過(guò)程中嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，避免人為帶入污染源[14]。

在桶裝水的生產(chǎn)過(guò)程中，臭氧混合滅菌是去除水中銅綠假單胞菌等有害微生物的主要手段。為了提升滅菌效果，可以適當(dāng)提高水體中臭氧的濃度，并增加臭氧與水的接觸面積。然而，需要注意的是，過(guò)高的臭氧濃度可能會(huì)產(chǎn)生溴酸鹽等有害物質(zhì)，因此需要在保證溴酸鹽不超標(biāo)的前提下調(diào)整臭氧的濃度。除了臭氧濃度和接觸面積外，殺菌時(shí)間也是確保水質(zhì)安全的關(guān)鍵因素。在生產(chǎn)過(guò)程中，需要根據(jù)臭氧的濃度、水的流量及目標(biāo)殺菌效果嚴(yán)格控制臭氧滅菌的時(shí)間。同時(shí)，桶裝水生產(chǎn)企業(yè)需要建立完善的監(jiān)測(cè)系統(tǒng)，以實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)水體中的微生物含量和臭氧濃度，及時(shí)發(fā)現(xiàn)并處理異常情況。

3.3 強(qiáng)化周轉(zhuǎn)桶消毒

周轉(zhuǎn)桶內(nèi)壁容易沾染綠藻孢子，一旦遇到合適的環(huán)境就會(huì)大量繁殖、污染水體。因此，周轉(zhuǎn)桶為引入銅綠假單胞菌的最大風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)[15]。桶裝水生產(chǎn)企業(yè)回收的周轉(zhuǎn)桶應(yīng)先去除桶蓋，人工檢查確認(rèn)其能否繼續(xù)使用。不能繼續(xù)使用的進(jìn)行報(bào)廢處理；能夠正常使用的周轉(zhuǎn)桶進(jìn)入外洗、內(nèi)洗、燈檢流程，在燈檢過(guò)程中發(fā)現(xiàn)不合格的就剔除。能使用的周轉(zhuǎn)桶要特別注重桶內(nèi)壁清洗消毒，選擇合適的高效消毒劑殺滅殘留的細(xì)菌和孢子。桶裝水生產(chǎn)企業(yè)可使用自動(dòng)化設(shè)備清洗消毒周轉(zhuǎn)桶內(nèi)部，清洗消毒工位（含瀝干工藝）不少于10個(gè)，包括預(yù)清洗、洗滌劑清洗、消毒劑清洗、水清洗、成品水清洗等。同時(shí)，桶裝水生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)注意桶蓋的清潔消毒。周轉(zhuǎn)桶滅菌時(shí)應(yīng)注意合理使用消毒劑，不同種類(lèi)、不同品牌消毒劑的使用方法和劑量不同，需要按照說(shuō)明書(shū)的要求使用，確保周轉(zhuǎn)桶的滅菌效果。

3.4 控制生產(chǎn)環(huán)境條件

企業(yè)生產(chǎn)過(guò)程中生產(chǎn)環(huán)境控制不嚴(yán)格會(huì)導(dǎo)致銅綠假單胞菌超標(biāo)。因?yàn)殂~綠假單胞菌在潮濕、室溫條件下極易生長(zhǎng)繁殖，所以生產(chǎn)車(chē)間環(huán)境應(yīng)保持清潔和干燥，使用紫外燈殺菌或其他有效方式殺菌，并定期進(jìn)行監(jiān)測(cè)，確保生產(chǎn)環(huán)境條件符合相關(guān)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的要求。

3.5 提升檢測(cè)水平

目前除了傳統(tǒng)的國(guó)標(biāo)濾膜法外，檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)還可以引入聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction，PCR）和環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（Loop-mediated Isothermal Amplification，LAMP）等分子生物技術(shù)，用于大批量水樣的快速檢測(cè)和結(jié)果初篩。這些技術(shù)具有快速靈敏的優(yōu)點(diǎn)，配合國(guó)際濾膜法能夠顯著提高檢測(cè)效率和準(zhǔn)確性。同時(shí)，檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)針對(duì)檢測(cè)人員開(kāi)展有關(guān)銅綠假單胞菌檢驗(yàn)技術(shù)的相關(guān)培訓(xùn)，確保檢驗(yàn)員的檢測(cè)水平與檢驗(yàn)國(guó)標(biāo)要求相匹配。

4 結(jié)語(yǔ)

國(guó)標(biāo)濾膜法是一種準(zhǔn)確可靠的檢測(cè)方法，可用于飲用水中銅綠假單胞菌的檢測(cè)。檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)嚴(yán)格把控樣品的采集與處理、培養(yǎng)基和試劑的選擇和制備、濾膜的選擇與使用、確證試驗(yàn)的準(zhǔn)確性以及實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制等關(guān)鍵控制點(diǎn)，以確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。同時(shí)，采取加強(qiáng)水源管理、完善桶裝水的生產(chǎn)工藝、強(qiáng)化周轉(zhuǎn)桶消毒、控制生產(chǎn)環(huán)境條件以及提升檢測(cè)水平等預(yù)防措施，以有效降低桶裝水中銅綠假單胞菌的污染風(fēng)險(xiǎn)。未來(lái)，隨著科技的進(jìn)步和行業(yè)的發(fā)展，相信會(huì)有更多更高效的方法和技術(shù)應(yīng)用于桶裝飲用水中銅綠假單胞菌的檢測(cè)和預(yù)防工作中，為保障人類(lèi)健康做出更大的貢獻(xiàn)。

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