熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)聯(lián)合顯色培養(yǎng)法在孕晚期孕婦B群鏈球菌篩查中的價(jià)值

【摘要】目的 分析熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qRT-PCR）聯(lián)合顯色培養(yǎng)法在孕晚期孕婦B群鏈球菌篩查中的價(jià)值，為臨床提供參考。方法 選取2022年10月至2024年3月陽(yáng)光融和醫(yī)院孕35～37周行B群鏈球菌篩查的1 000例孕婦進(jìn)行回顧性分析，分別采用B群鏈球菌顯色培養(yǎng)法、qRT-PCR法對(duì)孕婦肛拭子或陰拭子B群鏈球菌進(jìn)行檢測(cè)。以肉湯增菌培養(yǎng)法為金標(biāo)準(zhǔn)，比較B群鏈球菌顯色培養(yǎng)法、qRT-PCR法檢測(cè)B群鏈球菌的一致性；評(píng)估B群鏈球菌顯色培養(yǎng)法、qRT-PCR法對(duì)B群鏈球菌的檢測(cè)效能；以B群鏈球菌顯色培養(yǎng)法、qRT-PCR法任一檢測(cè)方法陽(yáng)性作為聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性，評(píng)估聯(lián)合檢測(cè)與肉湯增菌培養(yǎng)法對(duì)B群鏈球菌的檢測(cè)一致性及檢測(cè)效能。結(jié)果 1 000例標(biāo)本經(jīng)金標(biāo)準(zhǔn)檢出陽(yáng)性94例，陰性906例，陽(yáng)性檢出率為9.40%。B群鏈球菌顯色培養(yǎng)法檢出陽(yáng)性89例，陰性911例，陽(yáng)性檢出率為8.90%，與金標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)一致性中等（Kappa值=0.681，Plt;0.05）；qRT-PCR法檢出陽(yáng)性98例，陰性902例，陽(yáng)性檢出率為9.80%，與金標(biāo)準(zhǔn)一致性較好（Kappa值=0.839，Plt;0.05）；聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性148例，陰性為852例，陽(yáng)性檢出率為14.80%，與金標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)一致性較好（Kappa值=0.881，Plt;0.05）。與B群鏈球菌顯色培養(yǎng)法相比，qRT-PCR法檢測(cè)靈敏度、準(zhǔn)確率均較高，漏診率較低，聯(lián)合檢測(cè)靈敏度較高，特異度、漏診率均較低（均Plt;0.05）；與qRT-PCR法相比，聯(lián)合檢測(cè)靈敏度較高，特異度、漏診率均較低（均Plt;0.05），準(zhǔn)確率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pgt;0.05）。結(jié)論 B群鏈球菌顯色培養(yǎng)法、qRT-PCR法聯(lián)合檢測(cè)可提高檢測(cè)敏感度，提升B群鏈球菌陽(yáng)性檢出能力，可為臨床診斷提供參考。

【關(guān)鍵詞】熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)；顯色培養(yǎng)法；肉湯增菌培養(yǎng)法；B群鏈球菌

【中圖分類號(hào)】R446 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】2096-2665.2025.01.0004.03

DOI：10.3969/j.issn.2096-2665.2025.01.002

B群鏈球菌是一種革蘭氏陽(yáng)性菌，約25%的成年健康女性為B群鏈球菌攜帶者，可通過垂直傳播感染新生兒，是新生兒發(fā)生敗血癥的重要原因之一，死亡率較高，且治療后也有較大概率發(fā)生神經(jīng)后遺癥[1-2]。因此，圍產(chǎn)期B群鏈球菌篩查并預(yù)防性給藥至關(guān)重要。肉湯增菌培養(yǎng)法作為圍產(chǎn)期B群鏈球菌檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)，其敏感度和特異度均較高。但肉湯增菌培養(yǎng)法的結(jié)果容易受送檢時(shí)間、保存條件、環(huán)境因素等的影響，且培養(yǎng)需要較長(zhǎng)時(shí)間，從而限制了該法在快速診斷中的應(yīng)用。B群鏈球菌顯色培養(yǎng)法是通過B群鏈球菌代謝產(chǎn)物特征性顯色進(jìn)行篩查的方法，但其對(duì)不產(chǎn)溶血素的菌落無顯色反應(yīng)，有漏診風(fēng)險(xiǎn)，檢測(cè)效能有待進(jìn)一步提高[3-4]。實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qRT-PCR）測(cè)定B群鏈球菌具有較高的敏感度與特異度，且所需時(shí)間短[5]。本研究對(duì)1 000例孕晚期孕婦使用兩種方法聯(lián)合測(cè)定，評(píng)估其對(duì)B群鏈球菌的檢出情況，進(jìn)而判斷聯(lián)合檢測(cè)的臨床價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2022年10月至2024年3月陽(yáng)光融和醫(yī)院孕35～37周行B群鏈球菌篩查的1 000例孕婦進(jìn)行回顧性分析。孕婦年齡21～45歲，平均年齡（32.36±3.27）歲；孕周35～37周，平均孕周（35.92±0.18）周。排除同一患者的重復(fù)樣本、多胎病例。本研究經(jīng)陽(yáng)光融和醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 患者標(biāo)本采集及檢測(cè)方式

1.2.1 標(biāo)本采集 孕35～37周的圍產(chǎn)期孕婦經(jīng)產(chǎn)科醫(yī)師采集陰拭子（872例）或肛拭子（128例）標(biāo)本，每例標(biāo)本平均分為3份，一份用于顯色肉湯增菌培養(yǎng)法，一份用于B群鏈球菌顯色培養(yǎng)檢測(cè)，另一份用于B群鏈球菌qRT-PCR檢測(cè)，保存后送檢。

1.2.2 肉湯增菌培養(yǎng)法 取一份陰拭子或肛拭子標(biāo)本，接種于B群鏈球菌增菌肉湯培養(yǎng)液中，于5% CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)（24 h），再轉(zhuǎn)種于哥倫比亞培養(yǎng)基，待細(xì)菌生長(zhǎng)后，使用全自動(dòng)微生物質(zhì)譜檢測(cè)系統(tǒng)[安圖實(shí)驗(yàn)儀器（鄭州）有限公司，豫械注準(zhǔn)20182400196，型號(hào)：Autof ms1000]，對(duì)生長(zhǎng)的細(xì)菌進(jìn)行鑒定。如待鑒定菌群中有B群溶血鏈球菌則報(bào)告陽(yáng)性。

1.2.3 B群鏈球菌顯色培養(yǎng)法 取一份陰拭子或肛拭子標(biāo)本，經(jīng)氯化鈉注射液懸?。?0 μL），接種于B群鏈球菌顯色培養(yǎng)板中，避光孵育24 h。如果培養(yǎng)基顏色變?yōu)闇\粉色至紅色，則判定為B群溶血鏈球菌陽(yáng)性。

1.2.4 qRT-PCR法 使用qRT-PCR對(duì)標(biāo)本中B群鏈球菌進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)試劑盒采購(gòu)西安天隆科技有限公司，檢測(cè)步驟及結(jié)果判讀嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

1.3 觀察指標(biāo) ⑴比較兩種篩查方法檢測(cè)結(jié)果及一致性。經(jīng)B群鏈球菌顯色培養(yǎng)法、qRT-PCR檢測(cè)陽(yáng)性菌株分別作為各自檢測(cè)方法陽(yáng)性，通過與金標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比，分析評(píng)估兩種方式檢測(cè)敏感度與特異度。⑵分析兩者聯(lián)合檢測(cè)結(jié)果及與金標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)一致性。通過與金標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比分析聯(lián)合檢測(cè)敏感度與特異度。⑶分析B群鏈球菌顯色培養(yǎng)法、qRT-PCR法及聯(lián)合檢測(cè)效能。靈敏度=[真陽(yáng)性例數(shù)/（真陽(yáng)性例數(shù)+假陰性例數(shù)）]×100%；特異度=[真陰性例數(shù)/（真陰性例數(shù)+假陽(yáng)性例數(shù)）]×100%；準(zhǔn)確率=[（真陽(yáng)性例數(shù)+真陰性例數(shù)）/總例數(shù)]×100%；漏診率=[假陰性例數(shù)/（真陽(yáng)性例數(shù)+假陰性例數(shù)）]×100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計(jì)數(shù)資料以例或百分率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)；一致性分析采用Kappa檢驗(yàn)，Kappa值為0.76～1.00說明一致性較好；Kappa值≥0.41但lt;0.76說明一致性中等；Kappa值lt;0.41說明一致性較差。以Plt;0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種篩查方法檢測(cè)結(jié)果及一致性分析 1 000例標(biāo)本經(jīng)金標(biāo)準(zhǔn)檢出陽(yáng)性94例，陰性906例，陽(yáng)性檢出率為9.40%。B群鏈球菌顯色培養(yǎng)法檢出陽(yáng)性89例，陰性911例，陽(yáng)性檢出率為8.90%，與金標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)一致性中等（Kappa值=0.681，Plt;0.05）；qRT-PCR法檢出陽(yáng)性98例，陰性902例，陽(yáng)性檢出率為9.80%，與金標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)一致性較好（Kappa值=0.839，Plt;0.05），見表1。

2.2 B群鏈球菌顯色培養(yǎng)法及qRT-PCR法聯(lián)合檢測(cè)與金標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)一致性 聯(lián)合檢測(cè)檢出陽(yáng)性148例，陰性852例，陽(yáng)性檢出率為14.80%，與金標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)一致性較好（Kappa值=0.881，Plt;0.05），見表2。

2.3 B群鏈球菌顯色培養(yǎng)法、qRT-PCR法及聯(lián)合檢測(cè)效能分析 與B群鏈球菌顯色培養(yǎng)法相比，qRT-PCR法檢測(cè)靈敏度、準(zhǔn)確率均較高，漏診率較低，聯(lián)合檢測(cè)靈敏度較高，特異度、漏診率均較低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均Plt;0.05）；與qRT-PCR法相比，聯(lián)合檢測(cè)靈敏度較高，特異度、漏診率均較低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均Plt;0.05）；準(zhǔn)確率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2值=0.486，Pgt;0.05）。見表3。

3 討論

B群鏈球菌屬于條件致病菌，可引發(fā)新生兒肺炎、敗血癥等，治療后也可能發(fā)生神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥，嚴(yán)重影響患兒生長(zhǎng)發(fā)育[6-7]。因此，對(duì)孕婦進(jìn)行B群鏈球菌篩查并進(jìn)行預(yù)防性用藥，對(duì)降低分娩過程中B群鏈球菌感染風(fēng)險(xiǎn)，預(yù)防母嬰產(chǎn)后感染有重要臨床意義。

B群鏈球菌檢測(cè)金標(biāo)準(zhǔn)為肉湯培養(yǎng)基培養(yǎng)。B群鏈球菌顯色培養(yǎng)法是以黃色素產(chǎn)生法為基礎(chǔ)的酶反應(yīng)顯色，為B群鏈球菌提供營(yíng)養(yǎng)成分與生長(zhǎng)因子，并抗雜菌生長(zhǎng)。B群鏈球菌可在此培養(yǎng)基中生成紅色菌落，而其他細(xì)菌與酵母菌在該培養(yǎng)基中不生長(zhǎng)，或不產(chǎn)生菌落[8]。本研究結(jié)果顯示，金標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)1 000例陰拭子或肛拭子標(biāo)本中陽(yáng)性94例，陰性906例，陽(yáng)性率為9.40%。而B群鏈球菌顯色培養(yǎng)法檢測(cè)出陽(yáng)性89例，陰性911例，陽(yáng)性檢出率為8.90%，與金標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)一致性為中等，靈敏度為69.14%，特異度為97.35%，檢測(cè)靈敏度相對(duì)較低。分析原因?yàn)?，B群鏈球菌顯色培養(yǎng)法對(duì)不產(chǎn)溶血素的菌落無顯色反應(yīng)，對(duì)于不產(chǎn)溶血素的菌落無法檢出[9]。宋建梅等[10]研究顯示，B群鏈球菌顯色培養(yǎng)基檢測(cè)孕產(chǎn)婦B群鏈球菌感染陽(yáng)性率為23.80%，高于本研究結(jié)果，可能與納入的患者差異有關(guān)。

qRT-PCR利用基因探針技術(shù)，能夠特異性地檢測(cè)B群鏈球菌的DNA序列，該方法檢測(cè)所需時(shí)間較短、敏感度較高[11]。本研究qRT-PCR法檢出陽(yáng)性98例，陰性902例，陽(yáng)性檢出率為9.80%。陶婭琳等[12]研究顯示，qRT-PCR法對(duì)圍產(chǎn)期孕婦B群鏈球菌檢出陽(yáng)性率為7.17%，與本研究結(jié)果相近。qRT-PCR法檢測(cè)真陽(yáng)性為82例，有16例誤診，存在12例漏診，漏診的原因可能為病毒菌落數(shù)過低，不易被檢出。在B群鏈球菌的檢測(cè)中，漏診的危險(xiǎn)性要高于誤診，因此，提升B群鏈球菌的檢測(cè)敏感度是研究重點(diǎn)[13]。本研究結(jié)果顯示，聯(lián)合檢測(cè)的陽(yáng)性檢出率較高，與金標(biāo)準(zhǔn)的一致性較高，檢測(cè)靈敏度升高，但檢測(cè)特異度低于B群鏈球菌顯色培養(yǎng)法、qRT-PCR法。因此，臨床應(yīng)根據(jù)實(shí)際需要選擇合適的檢測(cè)方式，滿足檢測(cè)需要。

綜上所述，B群鏈球菌顯色培養(yǎng)法、qRT-PCR法聯(lián)合檢測(cè)可提高檢測(cè)靈敏度，可為臨床提供參考。

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