血清miRNA-21、術(shù)前清蛋白-球蛋白比值對大腦膠質(zhì)瘤預后的預測價值

摘要" 目的：探討血清miRNA-21、術(shù)前清蛋白-球蛋白比值與膠質(zhì)瘤預后的關(guān)系。方法：選取2019年1月—2023年1月243例術(shù)后病理檢查確診為膠質(zhì)瘤的病人，收集病人年齡、性別、吸煙和飲酒情況、體質(zhì)指數(shù)、Karnofsky表現(xiàn)狀態(tài)（KPS）、腫瘤大小、腫瘤位置（腦區(qū)）、切除范圍、術(shù)前淋巴細胞計數(shù)、術(shù)前清蛋白水平、輔助放療、化療等資料，并根據(jù)磁共振成像數(shù)據(jù)計算腫瘤大小，采集病人術(shù)前1周血液學指標數(shù)據(jù)，評估術(shù)前清蛋白與球蛋白比值（AGR）及總生存期（OS）。檢測血清miRNA-21，OS由Kaplan-Meier分析估計，采用受試者工作特征（ROC）曲線分析AGR和miRNA21的預測能力。Cox比例風險模型用于單變量和多變量分析。結(jié)果：排除65例不符合納入標準的病人和12例失訪病人，共納入166例病人。 Kaplan-Meier分析曲線顯示，AGR≤1.75或miRNA-21≤48的病人OS明顯低于AGR＞1.75或miRNA-21＞48的病人（P均＜0.001）。1年生存期：AGR和miRNA-21的ROC曲線下面積（AUC）分別為0.680，0.631；2年生存期：AGR和miRNA-21的AUC分別為0.651，0.656。在多變量分析中，AGR［HR＝0.785，95%CI（0.357，0.979），P＝0.040］和miRNA-21［HR＝0.757，95%CI（0.378，0.985），P＝0.039］均是OS的獨立預測因子。結(jié)論：術(shù)前AGR和miRNA-21與膠質(zhì)瘤病人的OS顯著相關(guān)?；谛g(shù)前炎癥、免疫和營養(yǎng)狀況等指標，AGR和miRNA-21可為膠質(zhì)瘤病人制定更有效的術(shù)前調(diào)節(jié)策略和更好的輔助治療方案。

關(guān)鍵詞" 膠質(zhì)瘤；miRNA21；術(shù)前清蛋白-球蛋白比值；預后

doi：10.12102/j.issn.1672-1349.2024.16.036

膠質(zhì)瘤（GB）是最常見的原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤之一，新診斷的膠質(zhì)瘤被廣泛接受的治療方案為最大限度地安全切除和同時化療與替莫唑胺放療［1］。盡管膠質(zhì)瘤的治療已經(jīng)取得了一定進展（包括根治性手術(shù)、放療和化療），但一些病人仍然面臨預后不良，由于分子和細胞的異質(zhì)性，加上個體差異，具有相似診斷和治療的病人的臨床結(jié)果仍然多種多樣［2］。此外，局部復發(fā)率高（90%）是生存率低的重要原因［3］。因此，早期發(fā)現(xiàn)預后可能不良的病人，為其制定個性化的治療方案，以進一步改善總生存期（OS）非常重要，其中探索有效的預后生物標志物是首要需求。術(shù)前清蛋白與球蛋白比值（AGR）可反映癌癥病人營養(yǎng)不良和全身炎癥，血清清蛋白是血清蛋白的主要成分，可用于衡量長期營養(yǎng)不良，也與全身炎癥有關(guān)，賁門腺癌和卵巢癌術(shù)前血清清蛋白水平高的病人生存期長于血清清蛋白水平低的病人［4］。球蛋白作為激素的載體，在免疫和炎癥反應中起著重要作用。最近，AGR被用于預測膀胱尿路上皮癌、小細胞肺癌和自然殺傷/T細胞淋巴瘤病人預后［5］。miRNA是小的非編碼RNA，可促進腫瘤的

基金項目nbsp; 河北省衛(wèi)生健康委員會科研項目（No.20210298）

作者單位" 1.唐山弘慈醫(yī)院（河北唐山 063000）；2.石家莊長城中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院；3.華北理工大學附屬醫(yī)院

引用信息" 張應杰，吳再輝，李曉龍，等.血清miRNA-21、術(shù)前清蛋白-球蛋白比值對大腦膠質(zhì)瘤預后的預測價值［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2024，22（16）：3064-3068.

發(fā)病機制和進展，在許多人類實體瘤中發(fā)現(xiàn)了大部分過表達的miRNA，如乳腺癌、前列腺癌、肺癌、胃癌和胰腺癌，但也在許多循環(huán)體液中存在［6］。研究顯示，miRNA-21在膠質(zhì)瘤中表達上調(diào)［7］。在血液中，循環(huán)miRNA豐富，非常穩(wěn)定，并且一小部分循環(huán)miRNA由于封裝在蛋白質(zhì)和/或脂質(zhì)制成的包絡(luò)中，對血漿RNA酶具有抗性。此外，在循環(huán)體液中檢測到的miRNA相對穩(wěn)定、易于獲得、無創(chuàng)，這些是可靠臨床生物標志物的重要先決條件［8］。本研究主要探索血清miRNA-21、術(shù)前AGR與膠質(zhì)瘤預后的關(guān)系。現(xiàn)報道如下。

1" 資料與方法

1.1" 臨床資料

本研究收集了2019年1月—2023年1月243例術(shù)后病理檢查確診為膠質(zhì)瘤的病人。術(shù)后定期隨訪，中位隨訪時間為14個月（1～52個月）。排除標準：代謝綜合征、糖尿病、心臟病、高血壓、自身免疫性疾病和3個月內(nèi)感染的病人。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準，所有病人均書面同意參加本研究。

1.2 "數(shù)據(jù)收集

收集病人年齡、性別、吸煙和飲酒情況、體質(zhì)指數(shù)、Karnofsky評分（KPS）、腫瘤大小、腫瘤定位（腦區(qū)）、切除范圍、術(shù)前淋巴細胞計數(shù)、術(shù)前清蛋白水平、輔助放療、化療等資料。根據(jù)磁共振成像數(shù)據(jù)計算腫瘤大?。鹤铋L×最寬直徑×厚度（切片厚度×層數(shù)）× 0.5。收集所有入組病人術(shù)前1周內(nèi)血液學指標數(shù)據(jù)。從手術(shù)到死亡的時間定義為OS。AGR ＝清蛋白/（總血清蛋白－清蛋白）。

1.3" RNA提取、逆轉(zhuǎn)錄和實時熒光定量PCR（qRT-PCR）

按照制造商說明書，使用TRIZOLTM試劑（Invitrogen）提取總RNA，使用PureLinkTMmiRNA分離試劑盒（Invitrogen）分離microRNA，RNA濃度由NanoDrop ND-3300分光光度計測定，TaqMan miRNA測定（應用生物系統(tǒng)公司）定量miRNA水平，用10 μL含總RNA用于逆轉(zhuǎn)錄反應（16 ℃ 30 min，42 ℃ 30 min，85 ℃ 5 min，4 ℃）。qRT-PCR采用7500 Real-time PCR系統(tǒng)進行，循環(huán)條件為：95 ℃ 10 min，95 ℃ 15 s，60 ℃ 60 s，循環(huán)40次。7500 SDS系統(tǒng)軟件（應用生物系統(tǒng)公司）將每個樣品的熒光數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為循環(huán)閾值（Ct）測量值，重復運行，計算總miRNA的平均Ct值和標準偏差，△Ct＝△CtmiR－△CtmiR-21，相對表達水平報告為2－△Ct。

1.4" 統(tǒng)計學處理

為確定組間差異，連續(xù)變量采用非配對t檢驗，定性資料采用χ2檢驗。使用Kaplan-Meier方法估計OS。采用受試者工作特征（receiver-operating characteristic，ROC）曲線確定AGR和miRNA-21的最佳截斷值，并采用ROC曲線下面積（AUC）估計方法評估AGR和miRNA-21的預測能力。采用單變量Cox回歸分析法分析各變量的預后意義，采用Cox比例風險模型進行多變量分析，以確定預后因素的獨立性。所有統(tǒng)計分析均使用社會科學統(tǒng)計軟件包SPSS 23.0版。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2" 結(jié)" 果

2.1" 一般資料

本研究排除65例不符合納入標準的病人和12例失訪病人后，最終納入166例病人，診斷時病人年齡為（50.41±14.5）歲，其中，男84例（50.6%）；體質(zhì)指數(shù)（BMI）為（22.4±3.52）kg/m2；91例（54.8%）KPS為80～100分，75例（45.2%）KPS≤70分，腫瘤大小為（52.61±28.12）cm3；腫瘤多位于額葉（38.6%），顳葉（33.7%）和頂枕區(qū)（20.5%），腦室、小腦、島葉、丘腦和胼胝體等其他部位占7.2%；全切除109例（65.7%）。術(shù)前清蛋白水平、淋巴細胞計數(shù)、AGR和miRNA-21分別為（42.21±4.07）g/L，（1.97±0.64）×109/L，1.65±0.41和51.82±4.57；105例（63.3%）病人接受輔助放療，42例（25.3%）病人接受輔助化療。詳見表1。

2.2" 臨床特征與術(shù)前AGR和miRNA-21的相關(guān)性

本研究結(jié)果顯示，在ROC分析中，AGR和miRNA-21的最佳截斷值分別為1.75（敏感度為0.554，特異度為0.806）和48（敏感度為0.782，特異度為0.575）。高AGR組和高miRNA-21組術(shù)前清蛋白水平高于低AGR組和低miRNA-21組（P均＜0.001），高AGR組和高miRNA-21組術(shù)前淋巴細胞計數(shù)高于低AGR組和低miRNA-21組（P＝0.013；P＜0.001）。詳見表2。

2.3" AGR和miRNA21對預后的預測價值

Kaplan-Meier曲線顯示，AGR≤1.75或miRNA-21≤48的病人OS明顯低于AGR＞1.75或miRNA-21＞48的病人（P均＜0.001），詳見圖1。1年生存：AGR和miRNA-21的AUC分別為0.680（敏感度為0.670，特異度為0.774，95%CI 0.577～0.783，P＝0.038）和0.631（敏感度為0.834，特異度為0.429，95%CI 0.523～0.739，P＝0.045）；2年生存：AGR和miRNA-21的AUC分別為0.651（敏感度為0.524，特異度為0.786，95%CI 0.550～0.752，P＝0.024）和0.656（敏感度為0.766，特異度為0.550，95%CI 0.548～0.765，P＝0.041）。詳見圖2。

2.4" OS因素的單變量和多變量分析

在單變量Cox分析中，OS與年齡、KPS、腫瘤大小、切除范圍、術(shù)前白蛋白水平、淋巴細胞計數(shù)、AGR、miRNA-21以及輔助放療和化療相關(guān)。在多變量Cox分析中，OS的預測因子為KPS ［HR＝0.528，95%CI（0.341，0.851），P＝0.032］、腫瘤大?。跦R＝1.343，95%CI（1.014，1.726），P＝0.037］、切除程度［HR＝0.416，95%CI（0.334，0.885），P＝0.026］、術(shù)前AGR［HR＝0.785，95%CI（0.357，0.979），P＝0.04］、miRNA-21［HR＝0.757，95%CI（0.378，0.985），P＝0.039］、輔助放療［HR＝0.599，95%CI（0.320，0.983），P＝0.031］。詳見表3。

3" 討" 論

miRNA和AGR對癌癥病人的預后有不良影響，AGR和miRNA已被用作多種癌癥的預后預測因素［6，9］。本研究評估了166例膠質(zhì)瘤病人AGR和miRNA-21的臨床意義，高AGR（＞1.75）和miRNA-21（＞48）增強了OS，兩者都是OS的獨立預測因子，術(shù)前AGR和miRNA-21可能是預測膠質(zhì)瘤病人OS的簡便指標。

癌癥病人經(jīng)常表現(xiàn)出營養(yǎng)不良，導致治療耐受能力下降、死亡率增加和術(shù)后生活質(zhì)量下降，此外，營養(yǎng)不良已被發(fā)現(xiàn)與免疫抑制有關(guān)，表明抗腫瘤免疫能力不足［10］。慢性炎癥已被確定為癌癥的一個標志，大多數(shù)腫瘤組織都含有炎癥成分，即使是那些與炎癥反應沒有因果關(guān)系的組織細胞炎癥介質(zhì)也通過增加腫瘤的增殖和轉(zhuǎn)移來促進腫瘤的發(fā)生，并可發(fā)揮免疫抑制作用，導致淋巴細胞功能受損，淋巴細胞數(shù)量減少，使癌細胞逃避免疫監(jiān)測［11］。同時，炎癥與膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，鑒于營養(yǎng)與免疫能力的關(guān)系，以及炎癥對膠質(zhì)瘤的影響，在膠質(zhì)瘤的管理中應評估病人的營養(yǎng)狀況和免疫能力［12］。本研究評估了AGR對膠質(zhì)瘤病人的預后價值，發(fā)現(xiàn)臨界值為1.75。術(shù)前AGR與膠質(zhì)瘤病人的OS相關(guān)。盡管AGR與術(shù)前清蛋白水平和淋巴細胞計數(shù)相關(guān)，但在多變量分析中調(diào)整其他臨床特征后，其預測價值仍然顯著。

研究表明，細胞外miRNA可能是早期診斷癌癥的新潛在生物標志物［13］。miRNA-21是研究較多的miRNA之一，因其在各種癌癥類型的過度表達而被廣泛報道，并且在細胞外環(huán)境中也被發(fā)現(xiàn)［14］。miRNA-21已被確定在大多數(shù)研究的人膠質(zhì)母細胞瘤（GBM）標本中上調(diào)，其表達水平與膠質(zhì)瘤分級相關(guān)，此外，膠質(zhì)瘤細胞中miRNA-21的下調(diào)導致其遷移和侵襲能力降低。相關(guān)研究顯示，miRNA-21具有很高的診斷性能，并可作為膠質(zhì)瘤的無創(chuàng)診斷標志物，但需要進一步的前瞻性研究來驗證其預后意義和治療效果［15］。本研究結(jié)果顯示，miRNA-21與膠質(zhì)瘤病人的OS明顯相關(guān)，miRNA-21與術(shù)前清蛋白水平和淋巴細胞計數(shù)相關(guān)，但在多變量分析中調(diào)整其他臨床特征后，預測價值仍然顯著。但根據(jù)ROC分析，AGR比miRNA-21具有更好的特異性，miRNA-21比AGR具有更好的敏感性。AGR和miRNA-21可為膠質(zhì)瘤病人提供重要的預后信息。

綜上所述，術(shù)前AGR和miRNA-21與膠質(zhì)瘤病人的OS有關(guān)，且AGR比miRNA-21具有更好的特異性，miRNA-21比AGR具有更好的敏感性。AGR和miRNA-21可為膠質(zhì)瘤病人制定更有效的術(shù)前調(diào)節(jié)策略和更好的輔助治療方案提供參考。但本研究為單中心、小樣本研究，其結(jié)論需要在多中心、大樣本研究中得到證實。

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（收稿日期：2023-04-20）

（本文編輯王麗）