缺血性腦卒中的中西醫(yī)動(dòng)物模型研究進(jìn)展

摘要" 缺血性腦卒中是臨床常見的腦血管疾病，具有發(fā)病率高、致殘率高、死亡率高、復(fù)發(fā)率高的特點(diǎn)，嚴(yán)重威脅人類健康。為研究缺血性腦卒中發(fā)生發(fā)展的病理機(jī)制，尋找更加有效的治療手段，建立合適的動(dòng)物模型必不可少?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)多從病因角度進(jìn)行造模，以各種方式阻斷大腦中動(dòng)脈血流來造成腦缺血。中醫(yī)學(xué)注重辨證論治，建立病證結(jié)合動(dòng)物模型以模擬不同證型腦卒中病人的臨床表現(xiàn)?，F(xiàn)對(duì)缺血性腦卒中動(dòng)物模型研究進(jìn)展進(jìn)行綜述，以期為缺血性腦卒中模型的制備與治療研究提供參考。

關(guān)鍵詞" 缺血性腦卒中；動(dòng)物模型；病證結(jié)合；綜述

doi：10.12102/j.issn.1672-1349.2024.16.015

缺血性腦卒中是指血栓等造成腦血管狹窄或堵塞，腦血流灌注下降，引起腦組織缺血、缺氧，神經(jīng)功能缺損，臨床表現(xiàn)為猝然昏倒、不省人事、肢體障礙、言語障礙等癥狀［1］?！吨袊?guó)卒中報(bào)告2020（中文版）》顯示，卒中居2019年我國(guó)城鄉(xiāng)居民死亡原因的第3位，給我國(guó)醫(yī)療衛(wèi)生和社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展帶來了沉重的負(fù)擔(dān)，成為危害國(guó)民健康的重要因素。2019年我國(guó)有394萬例卒中新發(fā)病例，219萬例死于卒中，其中缺血性腦卒中占比高達(dá)82.6%［2］。缺血性腦卒中按病因分型主要有大動(dòng)脈粥樣硬化型、心源性栓塞型、小動(dòng)脈閉塞型等，西醫(yī)學(xué)造模時(shí)多采用線栓法、開顱法、光化學(xué)栓塞法、內(nèi)皮素-1法、栓子栓塞法等。缺血性腦卒中在中醫(yī)學(xué)屬于中風(fēng)病范疇，根據(jù)病人神志情況分為中臟腑與中經(jīng)絡(luò)，證型可分為肝陽上亢證、風(fēng)痰阻絡(luò)證、痰熱腑實(shí)證、血瘀毒損證、氣滯血瘀證、氣虛血瘀證、腎陽虛損證、陰虛風(fēng)動(dòng)證等。為研究針對(duì)缺血性腦卒中行之有效的治療方法，需要建立合適的動(dòng)物模型，本研究將從西醫(yī)學(xué)目前常用的動(dòng)物模型制備法及中醫(yī)病證結(jié)合動(dòng)物模型的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。

1" 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)

缺血性腦卒中根據(jù)缺血區(qū)域，可分為全腦缺血與局灶性腦缺血［3］，常用的制備方法有四血管閉塞法［4］、雙血管閉塞法［5］、三血管閉塞法［6］等。全腦缺血模型操作復(fù)雜，對(duì)全身血流影響較大，主要應(yīng)用于全腦缺血的發(fā)病機(jī)制研究及相關(guān)藥物評(píng)價(jià)［7］。因其應(yīng)用較少，本研究主要針對(duì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中更常應(yīng)用的局灶性腦缺血

基金項(xiàng)目" 國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（No.2022YFC3501103）；河南省中醫(yī)藥拔尖人才培養(yǎng)項(xiàng)目，編號(hào)：豫中醫(yī)科教〔2018〕35號(hào)

作者單位" 1.河南中醫(yī)藥大學(xué)（鄭州 450046）；2.河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院（鄭州450000）

通訊作者" 趙敏，E-mail：byts1969@126.com

引用信息" 董紫琲，趙敏，劉飛祥，等.缺血性腦卒中的中西醫(yī)動(dòng)物模型研究進(jìn)展［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2024，22（16）：2968-2972.

模型展開論述。

1.1" 線栓法

線栓法制備大腦中動(dòng)脈閉塞（middle cerebral artery occlusion，MCAO）模型是目前廣泛應(yīng)用的局灶性腦缺血標(biāo)準(zhǔn)模型。Koizumi等［8］于1986年首次提出利用線栓法制備腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ停瑢⑦B接手術(shù)線的栓子放置在大鼠右頸內(nèi)動(dòng)脈（internal carotid artery，ICA）分支，線栓逐漸閉塞血流，引起右大腦中動(dòng)脈（middle cerebral artery，MCA）區(qū)域的大面積腦梗死。線栓移除后，缺血區(qū)域的血流可進(jìn)行再循環(huán)，形成可以恢復(fù)血流的大鼠腦梗死模型。之后Longa等于1989年進(jìn)行改良，將頂端燙成光滑圓球的4-0尼龍線插入頸內(nèi)動(dòng)脈，以阻斷大腦中動(dòng)脈的血流供應(yīng)，通過中斷頸外動(dòng)脈（external carotid artery，ECA）的所有分支和頸內(nèi)動(dòng)脈的所有顱外分支來減少側(cè)支血流量，并創(chuàng)建神經(jīng)功能缺損評(píng)分進(jìn)行模型驗(yàn)證［9］。李勇等［10］對(duì)比通過頸總動(dòng)脈（common carotid artery，CCA）和頸外動(dòng)脈線栓法制備的MCAO模型，發(fā)現(xiàn)在神經(jīng)功能缺損、腦梗死率以及血腦屏障的通透性方面，兩種術(shù)式并無明顯差異，而頸總動(dòng)脈線栓法相比之下操作方便、模型成功率更高，但再灌注后存在更明顯的微循環(huán)障礙。

線栓法具有不需開顱、對(duì)指標(biāo)影響較小、缺血部位穩(wěn)定、缺血及再灌注時(shí)間可控等優(yōu)點(diǎn)，缺點(diǎn)為動(dòng)物個(gè)體差異、線栓的類型及插線的深度不同都可能影響建模的成功率。

1.2" 開顱法

開顱法是指通過外科手術(shù)的方式，打開顱骨后切開硬腦膜，暴露大腦中動(dòng)脈及附近相應(yīng)區(qū)域，通過直接閉塞腦血管來建立局灶性缺血性腦卒中動(dòng)物模型。通過閉塞血管的手法不同，常分為電凝法、夾閉法、結(jié)扎法等。Robinson等［11］首次提出利用開顱電凝法制備缺血性腦卒中模型；Tamura等［12］在顯微鏡下通過顳下頜關(guān)節(jié)進(jìn)行開顱，閉塞大腦中動(dòng)脈造成缺血性腦梗死，發(fā)現(xiàn)以大腦皮質(zhì)、尾狀核缺血最明顯。電凝法不能實(shí)現(xiàn)缺血后再灌注，且對(duì)操作者技術(shù)要求較高，現(xiàn)已較少應(yīng)用。

夾閉法主要為開顱后暴露出大腦中動(dòng)脈，用動(dòng)脈夾夾閉一定時(shí)長(zhǎng)，建立MCAO模型［13］。有研究改良為將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物麻醉后，切開頸前皮膚，分離出兩側(cè)頸總動(dòng)脈，用無創(chuàng)動(dòng)脈夾夾閉頸總動(dòng)脈，制作出局灶性腦缺血模型［14］。夾閉法優(yōu)點(diǎn)為操作簡(jiǎn)單，可實(shí)現(xiàn)缺血后再灌注。結(jié)扎法為開顱后對(duì)大腦中動(dòng)脈進(jìn)行結(jié)扎處理，孫偉等［15］從胸骨上窩上緣做切口，分離出頸總動(dòng)脈后進(jìn)行結(jié)扎，發(fā)現(xiàn)相較Wistar大鼠，Sprague-Dawley大鼠存活率更高，可能與其有更豐富的側(cè)支循環(huán)網(wǎng)絡(luò)有關(guān)。結(jié)扎法對(duì)血管損傷較小，但對(duì)操作者技術(shù)要求較高。

1.3" 光化學(xué)栓塞法

Watson等［16］于1985年通過光化學(xué)栓塞法誘導(dǎo)可重復(fù)的血栓形成，導(dǎo)致大鼠腦梗死。具體操作方法：向?qū)嶒?yàn)大鼠尾靜脈注射光敏染料孟加拉玫瑰后，通過用波長(zhǎng)560 nm的綠光照射暴露顱骨的左頂骨20 min，誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞啟動(dòng)凝血功能，導(dǎo)致被照射區(qū)血栓形成，建立大鼠腦梗死模型。李舒?zhèn)惖龋?7］對(duì)光化學(xué)栓塞法進(jìn)行改良，應(yīng)用532 nm固定波長(zhǎng)激光器定點(diǎn)照射骨窗10 min，利用胰島素針將玫瑰紅沿大鼠股靜脈注射，造模成功率達(dá)95%，并通過對(duì)比發(fā)現(xiàn)，玫瑰紅濃度為80 mg/kg時(shí)組織壞死持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)，便于觀察腦缺血后病理變化。

光化學(xué)栓塞法具有操作相對(duì)簡(jiǎn)單、梗死部位可控、可重復(fù)性高、死亡率較低等優(yōu)勢(shì)，缺點(diǎn)在于不能實(shí)現(xiàn)缺血后再灌注。李鉆芳等［18］對(duì)比線栓法與光化學(xué)栓塞法兩種方法誘導(dǎo)大鼠腦缺血模型，并通過磁共振成像（MRI）檢測(cè)大鼠腦影像結(jié)構(gòu)，發(fā)現(xiàn)線栓法模型適用于與功能恢復(fù)有關(guān)的預(yù)防、血管損傷保護(hù)或治療相關(guān)的長(zhǎng)期觀察研究，而光化學(xué)栓塞法適用于疾病急性期或針對(duì)特定腦區(qū)的干預(yù)機(jī)制研究。

1.4" 內(nèi)皮素-1（endothelin-1，ET-1）法

ET-1是一種由血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的內(nèi)源性血管收縮活性物質(zhì)，其通過強(qiáng)烈的血管收縮作用減少局部腦血流量，導(dǎo)致缺血性腦卒中。ET-1濃度與缺血區(qū)域的大小、嚴(yán)重程度、持續(xù)時(shí)間有直接關(guān)系，當(dāng)ET-1濃度逐漸降低時(shí)，缺血區(qū)域可重新恢復(fù)血流灌注，形成腦缺血后再灌注動(dòng)物模型［19］，適用于治療藥物的評(píng)估。張秀春等［20］向大鼠紋狀體、皮層注射ET-1制作腦缺血模型，判定標(biāo)準(zhǔn)為大鼠倒懸時(shí)右上肢向胸前屈曲，或行走時(shí)向右側(cè)傾倒、轉(zhuǎn)圈，且癥狀持續(xù)超過24 h。ET-1法優(yōu)勢(shì)為操作簡(jiǎn)便、損傷輕、死亡率較低，缺點(diǎn)為缺血后再灌注的時(shí)長(zhǎng)難以人為控制，主要用于腦卒中后恢復(fù)機(jī)制及藥物治療作用的研究。

1.5" 栓子栓塞法

栓子栓塞法是指將血栓凝塊栓子或非血栓凝塊栓子注入血管模擬血管栓塞狀態(tài)，血栓凝塊栓子主要為自體或凝血酶誘導(dǎo)的體外血栓凝塊，非血栓凝塊栓子主要為硅膠、膠原蛋白、二氧化鈦等形成的微球或大球栓子，此外也有應(yīng)用中藥提取物作為栓子。Zhang等［21］于1997年將自體血栓排在大腦中動(dòng)脈起始部，栓子阻塞大腦中動(dòng)脈而建立大鼠腦缺血模型。李楠等［22］將大鼠自體血凝結(jié)后研磨成60～100 μm血栓栓子，溶于制成混合液，沿頸外動(dòng)脈注射進(jìn)頸內(nèi)動(dòng)脈并計(jì)數(shù)，對(duì)比50個(gè)栓子組和100個(gè)栓子組發(fā)現(xiàn)，100個(gè)栓子組的大鼠梗死面積更大，程度更重。

Dong等［23］將膠原蛋白（7.5 mg/kg）和腎上腺素（300 μg/kg）的混合物注入小鼠的尾靜脈中，以制備腦缺血模型。Gao等［24］采用熒光微球注射到右側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈，同時(shí)移除阻塞頸總動(dòng)脈的血管鉗，使273個(gè)微球移動(dòng)到大腦動(dòng)脈導(dǎo)致栓塞，評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)為神經(jīng)評(píng)分、前爪外伸和攀繩測(cè)試評(píng)分。郭云良等［25］以標(biāo)準(zhǔn)微球囊與自制微球囊盲插作為對(duì)照，并對(duì)比經(jīng)頸總動(dòng)脈或股動(dòng)脈介入手術(shù)，利用標(biāo)準(zhǔn)微球囊導(dǎo)管阻斷大腦中動(dòng)脈血流，建立獼猴大腦中動(dòng)脈缺血模型，退出微球囊后大腦中動(dòng)脈可再灌注；通過血管造影及MRI對(duì)比，發(fā)現(xiàn)經(jīng)股動(dòng)脈微球囊導(dǎo)管介入法成功率高，易標(biāo)準(zhǔn)化，且無需退出球囊即可通過微球囊導(dǎo)管向大腦中動(dòng)脈注射微量藥物，便于開展藥物研究。

栓子栓塞法的優(yōu)勢(shì)為栓子的類型及大小可選擇，血栓凝塊栓子引起腦缺血的機(jī)制與人類血栓栓塞相近，缺點(diǎn)為不同類型的栓子造模效果有差異，缺血程度難以控制。故此法更適用于評(píng)估溶栓、取栓相關(guān)治療。

2" 中醫(yī)病證結(jié)合模型

病證結(jié)合是陳可冀院士提出的辨病與辨證相結(jié)合的臨床研究模式，以實(shí)現(xiàn)中醫(yī)學(xué)與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的優(yōu)勢(shì)結(jié)合［26］，臨床最常用的模式為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)診斷疾病結(jié)合中醫(yī)辨證論治的現(xiàn)代病證結(jié)合模式。病證結(jié)合動(dòng)物模型主要指西醫(yī)疾病與中醫(yī)證候結(jié)合的動(dòng)物模型，這樣的模型既有西醫(yī)疾病的病理改變，又有中醫(yī)證候的特點(diǎn)［27］，更符合中醫(yī)學(xué)的整體觀念。

2.1" 肝陽上亢型

肝陽上亢證是常見的中風(fēng)證型，葉天士提出“精血衰耗，水不涵木……肝陽偏亢，內(nèi)風(fēng)時(shí)起”，肝氣郁結(jié)，或肝腎虧虛，以致陰虧于下，肝陽亢盛，臨床常伴頭痛、面紅目赤、口苦咽干、心煩易怒等癥狀［28］。黃文權(quán)等［29］提出肝陽上亢型動(dòng)物模型，應(yīng)用多巴胺對(duì)大白兔進(jìn)行靜脈注射，觀察性情變化及周圍血管充盈情況，造模后兔出現(xiàn)心率加快、皮膚潮紅等癥狀，可模擬肝陽上亢證的客觀表現(xiàn)。謝映［30］對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠應(yīng)用附子湯灌胃及高濃度鹽水飲水4周，在此基礎(chǔ)上應(yīng)用線栓法阻塞大腦中動(dòng)脈，形成缺血性中風(fēng)肝陽上亢證大鼠模型。若出現(xiàn)捉持頸部時(shí)咬人、結(jié)膜充血、收縮壓≥200 mmHg、旋轉(zhuǎn)時(shí)間≤60 s可認(rèn)為肝陽上亢證造模成功。

2.2" 風(fēng)痰入絡(luò)型

若過食肥甘厚味，損傷脾胃，內(nèi)生痰濕，加之臟腑陰陽失調(diào)，肝風(fēng)夾痰，上擾腦絡(luò)而發(fā)為中風(fēng)［31］。姚偉平［32］通過向模型組大鼠喂食高脂飼料復(fù)制痰證模型，灌服制附子湯劑以復(fù)制肝陽上亢證模型，腦梗死模型采用線栓法進(jìn)行制備。大鼠模型疾病的評(píng)價(jià)為神經(jīng)功能缺損評(píng)分，證候的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)為出現(xiàn)痰證、肝陽化風(fēng)證相關(guān)的癥狀體征。真方白丸子改善模型大鼠的癥狀、體征及微觀指標(biāo)，可反證該模型確為腦梗死風(fēng)痰入絡(luò)證大鼠模型。

2.3" 痰熱腑實(shí)型

痰熱腑實(shí)是中風(fēng)病急性期的關(guān)鍵病機(jī)，有眩暈、舌紅苔黃、脈滑等痰熱癥狀，及大便不通等腑實(shí)癥狀，其嚴(yán)重程度與中風(fēng)的預(yù)后相關(guān)［33］。高強(qiáng)［34］參考Longa改良的線栓法構(gòu)建小鼠局灶性腦缺血再灌注損傷模型，給予小鼠高脂低纖維飲食4周，構(gòu)建痰熱腑實(shí)證候模型，小鼠出現(xiàn)局灶性神經(jīng)功能缺損的體征，并伴隨糞便干燥、眼口鼻分泌物增多、喉中痰鳴等癥狀時(shí)可認(rèn)為造模成功。甘佳樂等［35］給予實(shí)驗(yàn)大鼠高脂飲食1周，及自體糞便混懸液灌胃3 d，復(fù)制痰熱腑實(shí)證模型，腦缺血模型亦采用改良線栓法制備，成功標(biāo)準(zhǔn)為大鼠出現(xiàn)糞便干結(jié)、煩躁、毛色暗淡無光澤、鼻分泌物多、喉中痰鳴、肢體癱瘓等癥狀。

2.4" 血瘀毒損型

王永炎院士在中風(fēng)發(fā)病理論基礎(chǔ)上提出“毒損腦絡(luò)”的病機(jī)假說，認(rèn)為中風(fēng)后毒邪與火熱、痰濕、血瘀等病理產(chǎn)物交雜，損傷腦絡(luò)，導(dǎo)致絡(luò)脈破損或瘀閉，腦神失養(yǎng)，形成竅閉神昏、半身不遂的病理狀態(tài)［36］。馬瑞雪等［37］采用Longa改良法構(gòu)建急性缺血性腦卒中后腦缺血再灌注損傷模型，血瘀毒損證模型通過腹腔注射角叉菜膠制備，構(gòu)建成功的標(biāo)志為出現(xiàn)爪甲腫脹紅紫、黑尾現(xiàn)象、體溫呈增高趨勢(shì)。通過苦碟子注射液預(yù)處理后，急性缺血性腦卒中后腦缺血再灌注損傷血瘀毒損證模型大鼠的神經(jīng)功能缺損情況較模型組減輕，驗(yàn)證了病證結(jié)合動(dòng)物模型的成功構(gòu)建。王鳳麗等［38］通過線栓法復(fù)合腹腔注射角叉菜膠建立缺血性腦卒中火毒證大鼠模型，證型建立的標(biāo)準(zhǔn)為出現(xiàn)黑尾、舌色紫暗、舌下絡(luò)脈增粗、耳郭發(fā)紅、爪甲腫脹等瘀熱表現(xiàn)，接近臨床癥狀，提示制備了缺血性卒中火毒證大鼠模型。

2.5" 氣滯血瘀型

若病人平素肝氣不舒，氣機(jī)郁滯，則易血瘀，復(fù)因情志變化或其他外因刺激時(shí)易發(fā)為中風(fēng)，瘀血阻滯脈絡(luò)更不利血行，發(fā)為氣滯血瘀證。

吳萬豐等［39］采用腎上腺素皮下注射聯(lián)合多種刺激的方法制作氣滯血瘀證動(dòng)物模型，向大鼠連續(xù)14 d皮下注射腎上腺素，4 h后接受隨機(jī)刺激，刺激方式包括晝夜顛倒、0～4 ℃冰水游泳4 min、夾尾、束縛、懸尾，每天隨機(jī)給予1種刺激，15 d內(nèi)每種刺激各進(jìn)行3次，刺激結(jié)束后亦采用改良Longa線栓法制備MCAO模型。發(fā)現(xiàn)在腸道菌群物種組成方面，Bacilli菌可能是本證型的生物標(biāo)志物。

2.6" 氣虛血瘀型

氣為血之帥，氣虛日久易致血脈瘀滯，中風(fēng)病常見氣虛血瘀證。一項(xiàng)針對(duì)2 558例缺血性腦卒中病人的中醫(yī)證候研究顯示，氣虛血瘀證病人占比高達(dá)58.87%［40］，故建立與人類疾病特點(diǎn)相似的動(dòng)物模型至關(guān)重要。吳萬豐等［39］對(duì)大鼠進(jìn)行力竭游泳法進(jìn)行訓(xùn)練，出現(xiàn)游泳動(dòng)作失調(diào)、水淹沒鼻尖、身體下沉超過10 s不能浮出水面時(shí)視作大鼠力竭，連續(xù)游泳21 d后采用改良Longa線栓法阻塞大鼠右側(cè)大腦中動(dòng)脈來制備MCAO模型，并通過對(duì)比發(fā)現(xiàn)，Sutterella菌是氣虛血瘀證缺血性腦卒中模型大鼠腸道菌群特異性的主要菌屬。薛貝珊［41］在“饑則氣損”“勞則氣耗”的理論基礎(chǔ)上，對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠進(jìn)行食量控制及強(qiáng)迫游泳以模擬疲勞因素，持續(xù)14 d后進(jìn)行線栓法制備MCAO模型，并根據(jù)線粒體功能變化探討氣虛血瘀證缺血性腦卒中的生物學(xué)內(nèi)涵，補(bǔ)陽還五湯可能通過改善磷酸腺苷活化蛋白激酶（AMPK）/過氧化物酶體增殖物激活受體γ共激活因子1α（PGC-1α）/核呼吸因子-1（NRF-1）通路蛋白的表達(dá)保護(hù)線粒體功能，也可證實(shí)氣虛血瘀證動(dòng)物模型的建立。

譚輝等［42］采用線栓法結(jié)合老齡、饑餓、疲勞、高脂飲食、低氧等多因素復(fù)合模擬制備大腦中動(dòng)脈閉塞缺血再灌注氣虛血瘀證模型，大鼠模型評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)包括神經(jīng)功能缺損評(píng)分、氣虛證及血瘀證評(píng)分：與正常組大鼠相比，模型大鼠在激光多普勒儀檢測(cè)下局部腦血流量降低，神經(jīng)功能缺損、腦梗死體積增大、空間認(rèn)知功能降低，且凝血功能亢進(jìn)，纖溶功能降低，與缺血性梗死的病理表現(xiàn)相符，說明缺血性腦卒中的疾病模型復(fù)制成功；模型大鼠的氣虛證評(píng)分和血瘀證評(píng)分升高，有明顯氣虛、血瘀的癥狀表現(xiàn)，可證明在同時(shí)結(jié)合中醫(yī)多因素復(fù)合模擬干預(yù)下，模型大鼠出現(xiàn)了氣虛血瘀的“證模型”；同時(shí)，通過益氣活血方藥的干預(yù)，出現(xiàn)了相應(yīng)指標(biāo)的反應(yīng)性改變，表明益氣活血方藥反證模型大鼠符合病證結(jié)合的表現(xiàn)。王磊沙等［43］根據(jù)“勞則氣耗”的理論基礎(chǔ)，注射海藻酸鈉微球建立多發(fā)性腦梗死大鼠模型，在此基礎(chǔ)上通過多因素復(fù)合建立氣虛血瘀證大鼠模型，3個(gè)病證結(jié)合組分別采用力竭游泳、睡眠剝奪、力竭游泳聯(lián)合睡眠剝奪，評(píng)價(jià)指標(biāo)包括中醫(yī)證候指標(biāo)（體質(zhì)量、抓力、脈搏、舌象等）和西醫(yī)生化指標(biāo)（血液流變學(xué)、凝血4項(xiàng)等），發(fā)現(xiàn)睡眠剝奪法更適合建立腦梗死氣虛血瘀證病證結(jié)合大鼠模型。

針對(duì)動(dòng)物模型的評(píng)價(jià)，陳進(jìn)成等［44］提出在中醫(yī)“四診合參”的指導(dǎo)下，綜合證候標(biāo)準(zhǔn)及實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，建立病證結(jié)合動(dòng)物模型的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。羅慧等［45］采用改良后的大腦中動(dòng)脈線栓法對(duì)雄性大鼠進(jìn)行造模，神經(jīng)缺損嚴(yán)重程度根據(jù)評(píng)分進(jìn)行，評(píng)分＞0分即為出現(xiàn)神經(jīng)缺損，評(píng)分越高表明缺損程度越嚴(yán)重，即為完成缺血性腦卒中疾病模型的建立。氣虛證動(dòng)物模型診斷標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)《中醫(yī)內(nèi)科學(xué)》中缺血性腦卒中氣虛證的診斷指標(biāo)、文獻(xiàn)查閱、團(tuán)隊(duì)前期研究基礎(chǔ)，形成針對(duì)缺血性腦卒中氣虛證動(dòng)物模型的評(píng)價(jià)指標(biāo)。具體診斷指標(biāo)包括量化指標(biāo)及宏觀指標(biāo)，量化指標(biāo)指體質(zhì)量、抓力、曠場(chǎng)最大移動(dòng)距離，宏觀指標(biāo)包括精神狀態(tài)、膚色、飲食量等，手術(shù)組大鼠若能滿足2項(xiàng)或3項(xiàng)量化指標(biāo)較假手術(shù)組顯著降低，同時(shí)宏觀指標(biāo)有至少1項(xiàng)氣虛證表現(xiàn)，即可認(rèn)為建立了氣虛證動(dòng)物模型。

2.7" 腎陽虛損型

老年人肝腎不足，中風(fēng)后易出現(xiàn)腎陽虛證，表現(xiàn)為神疲乏力、形寒肢冷、小便清長(zhǎng)等臨床癥狀。孫詩杰［46］通過連續(xù)21 d向大鼠腿部肌肉注射氫化可的松琥珀酸鈉注射液建立腎陽虛證大鼠模型。評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)為出現(xiàn)體質(zhì)量下降、皮毛色澤暗淡、精神萎靡、行動(dòng)緩慢等陽虛癥狀，客觀評(píng)價(jià)指標(biāo)包括環(huán)磷酸腺苷（cAMP）含量降低、鳥嘌呤核糖苷（cGMP）含量升高，或cAMP/cGMP的比值降低，認(rèn)為腎陽虛證大鼠模型造模成功。在腎陽虛證動(dòng)物模型的基礎(chǔ)上，參照改良的Longa線栓法，建立大鼠永久性右側(cè)大腦中動(dòng)脈栓塞模型，形成基于病證結(jié)合的缺血性腦卒中腎陽虛證大鼠模型。通過溫陽逐瘀湯干預(yù)后，大鼠腎陽虛癥狀較前減輕，可證實(shí)腎陽虛證模型的成功建立。

2.8" 陰虛風(fēng)動(dòng)型

肝腎虧虛于下，陰不制陽，引起陽氣偏亢，發(fā)為中風(fēng)，其本質(zhì)在于陰氣虧虛，制作動(dòng)物模型時(shí)一般采用傷陰的方式。

為模擬急躁易怒、多汗、烘熱等陰虛證候的臨床表現(xiàn)，有實(shí)驗(yàn)應(yīng)用甲狀腺素聯(lián)合利血平，以及用四氯化碳（CCl4）花生油液、甲狀腺素結(jié)合夾尾情志刺激法等方法進(jìn)行造模［47］。孫曉霞等［48］根據(jù)“熱盛傷陰”理論，對(duì)小鼠連續(xù)4周灌服傷陰藥物來制作陰虛證模型。證型評(píng)價(jià)指標(biāo)包括曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、提問、飲水量、唾液流率、皮膚含水量、糞便含水量、24 h尿量、體重、食量、拉力。

3" 小" 結(jié)

隨著科技的不斷發(fā)展，缺血性腦卒中動(dòng)物模型的實(shí)驗(yàn)制備已逐漸完善。在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇方面，大鼠因其飼養(yǎng)成本低、血管生理解剖結(jié)構(gòu)與人類相似等特點(diǎn)，得到廣泛應(yīng)用，但大鼠腦梗死后只會(huì)出現(xiàn)暫時(shí)性偏癱，康復(fù)過程與人類差異較大［49］，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果難以向臨床轉(zhuǎn)化。臨床缺血性腦卒中病人多為中老年，且常存在高血壓、高血脂、動(dòng)脈粥樣硬化等高危因素，但實(shí)驗(yàn)動(dòng)物多為健康成年大鼠，飼養(yǎng)條件穩(wěn)定，不能準(zhǔn)確模擬人體狀態(tài)。

中醫(yī)方面，多數(shù)實(shí)驗(yàn)采用注射藥物或多因素模擬進(jìn)行證候模型的制備，在此基礎(chǔ)上采用線栓法造成大腦中動(dòng)脈閉塞，以此制備缺血性腦卒中疾病模型，評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)除神經(jīng)功能缺損評(píng)分外，多以出現(xiàn)對(duì)應(yīng)證候的癥狀作為證型判斷標(biāo)準(zhǔn)，少數(shù)實(shí)驗(yàn)采用客觀指標(biāo)。若經(jīng)對(duì)應(yīng)方藥的治療后，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物較前明顯好轉(zhuǎn)，也可證實(shí)證型的成功建立，這也是中醫(yī)學(xué)“以方測(cè)證”思想的體現(xiàn)。在病證結(jié)合模型評(píng)價(jià)方面，尚無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，需建立缺血性腦卒中病證結(jié)合動(dòng)物模型的評(píng)價(jià)體系，以滿足研究需要。

因此，缺血性腦卒中動(dòng)物模型的制備除了不斷改良操作手段外，還要考慮實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇、評(píng)價(jià)指標(biāo)的規(guī)范，以及臨床病人多有共病的現(xiàn)實(shí)問題。同時(shí)應(yīng)積極構(gòu)建規(guī)范化的缺血性腦卒中病證結(jié)合動(dòng)物模型，并與代謝組學(xué)、蛋白組學(xué)等生物學(xué)技術(shù)結(jié)合［50］，為病證結(jié)合動(dòng)物模型的建立及中醫(yī)藥的合理運(yùn)用提供依據(jù)。

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（收稿日期：2023-03-22）

（本文編輯王麗）