米諾環(huán)素通過影響下丘腦室旁核小膠質(zhì)細(xì)胞活化水平降低兩腎一夾所致高血壓的作用機(jī)制

摘要" 目的：觀察米諾環(huán)素對兩腎一夾（2k1c）型高血壓大鼠血漿炎性因子、神經(jīng)遞質(zhì)濃度及血壓的影響，并探討其是否通過影響下丘腦室旁核（PVN）發(fā)揮調(diào)控作用。方法：將雄性無特定病原體（SPF）級SD大鼠28只隨機(jī)分為假手術(shù)（SHAM）＋人工腦脊液（aCSF）組、SHAM＋minocycline組、2k1c＋aCSF組、2k1c＋minocycline組。通過腎動脈縮窄術(shù)制作模型并進(jìn)行室旁核置管，利用無創(chuàng)血壓測量儀監(jiān)測大鼠血壓；10周后進(jìn)行腎臟交感神經(jīng)放電（RSNA）檢測；通過小膠質(zhì)細(xì)胞染色統(tǒng)計(jì)激活小膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量及細(xì)胞突起的長度；采用高效液相色譜法（HPLC）檢測下丘腦室旁核（PVN）中白細(xì)胞介素1β（IL-1β）、白細(xì)胞介素6（IL-6）、去甲腎上腺素（NE）、谷氨酸（GLU）、γ-氨基丁酸（GABA）含量。實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）檢測gp91phoxmRNA在PVN中的表達(dá)。采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測大鼠血漿IL-1β、IL-6和NE濃度。結(jié)果：中樞緩慢輸注米諾環(huán)素可減少激活小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量，增加細(xì)胞突起長度（P＜0.05）。2k1c＋aCSF組和2k1c＋minocycline組大鼠PVN和血漿IL-1β、IL-6、NE水平及PVN中GLU含量高于SHAM＋aCSF組和SHAM＋minocycline組（P＜0.05），米諾環(huán)素可逆轉(zhuǎn)上述表達(dá)（P＜0.05）。2k1c＋aCSF組和2k1c＋minocycline組大鼠PVN中GABA含量低于SHAM＋aCSF組和SHAM＋minocycline組（P＜0.05），經(jīng)米諾環(huán)素治療可有效提高2k1c＋minocycline組大鼠GABA表達(dá)量（P＜0.05）。與SHAM＋aCSF組和SHAM＋minocycline組大鼠比較，2k1c＋aCSF組和2k1c＋minocycline組大鼠PVN中g(shù)p91phoxmRNA表達(dá)升高（P＜0.05），米諾環(huán)素可降低PVN中g(shù)p91phoxmRNA表達(dá)（P＜0.05）。2k1c＋aCSF組和2k1c＋minocycline組大鼠腎交感放電高于SHAM＋aCSF組和SHAM＋minocycline組（P＜0.05），經(jīng)米諾環(huán)素治療后腎交感放電有效減弱（P＜0.05）。結(jié)論：緩慢輸注米諾環(huán)素通過影響下丘腦室旁核小膠質(zhì)細(xì)胞活化水平從而降低2k1c所致的高血壓。

關(guān)鍵詞" 高血壓；米諾環(huán)素；兩腎一夾；下丘腦室旁核；神經(jīng)遞質(zhì)；大鼠；實(shí)驗(yàn)研究

doi：10.12102/j.issn.1672-1349.2024.22.009

Mechanism of Minocycline in Reducing Hypertension Induced by Two Kidneys and One Clip by Affecting the Activation Level of Microglia in the Paraventricular Nucleus of Hypothalamus

YIN Lixi1， SU Yukun2， YU Xiaojing3， LIU Xiaojing1， KANG Yuming3， SUN Yaojun1， YANG Huiyu1

1.Shanxi Medical University， Taiyuan 030001， Shanxi， China; 2.The Second People′s Hospital of Shanxi; 3.Xi′an Jiaotong University

Corresponding Author "YANG Huiyu， E-mail： yanghuiyu2010@126.com

Abstract" Objective：To observe the effects of minocycline on plasma inflammatory factor，neurotransmitter concentration and blood pressure in 2 kidney and 1 clip（2k1c） hypertensive rats，and to explore a regulatory role by" hypothalamic paraventricular nucleus（PVN）.Methods：Twenty-eight male specific pathogen free（SPF） grade SD rats were randomly divided into SHAM＋artificial cerebrospinal fluid（aCSF） group，SHAM＋minocycline group，2k1c＋aCSF group，and 2k1c＋minocycline group.The model was established by renal artery narrowing and paraventricular nuclear cannulation was performed，and the blood pressure of rats was monitored using a non-invasive blood pressure meter.Renal sympathetic nerve discharge（RSNA） detection was performed after 10 weeks.The number of activated microglia and the length of the cell process were measured by microglia staining.The contents of interleukin-1β（IL-1β），interleukin-6（IL-6），noradrenaline（NE），glutamic acid（GLU） and gamma-aminobutyric acid（GABA） in PVN were detected by high performance liquid chromatography（HPLC）.Real-time quantitative polymerase chain reaction（PCR） was used to detect gp91phoxmRNA expression in PVN.Plasma levels of IL-1β，IL-6，and NE were detected by enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）.Results：Central chronic infusion of minocycline could reduce the number of activated microglia and increase the length of cell processes（P＜0.05）.The levels of IL-1β，IL-6 and NE in plasma and the GLU in PVN of the 2k1c＋aCSF group and 2k1c＋minocycline group were higher than those of the SHAM＋aCSF group and SHAM＋minocycline group（P＜0.05），and minocycline could reverse the above expression（P＜0.05）.The GABA content of PVN in the 2k1c＋aCSF group and 2k1c＋minocycline group was lower than that in the SHAM＋aCSF group and SHAM＋minocycline group（P＜0.05）.GABA expression in the 2k1c＋minocycline group effectively increased by minocycline treatment（P＜0.05）.Compared with SHAM＋aCSF group and SHAM＋minocycline group，gp91phoxmRNA expression in PVN of 2k1c＋aCSF group and 2k1c＋minocycline group was increased（P＜0.05）.Minocycline decreased gp91phoxmRNA expression in PVN（P＜0.05）.The renal sympathetic discharge in the 2k1c＋aCSF group and 2k1c＋minocycline group was higher than that in the SHAM＋aCSF group and SHAM＋minocycline group（P＜0.05），and the renal sympathetic discharge was effectively weakened after minocycline treatment（P＜0.05）.Conclusion：Chronic infusion of minocycline could reduce hypertension by affecting the activation level of microglia in the paraventricular nucleus of hypothalamus.

Keywords" hypertension; minocycline; two kidneys and one clip; paraventricular nucleus of hypothalamus; neurotransmitter; rats; experimental study

基金項(xiàng)目" 國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（No.81770426）

作者單位" 1.山西醫(yī)科大學(xué)（太原" 030001）；2.山西省第二人民醫(yī)院；3.西安交通大學(xué)

通訊作者" 楊慧宇，E-mail：yanghuiyu2010@126.com

引用信息" 殷利茜，宿宇坤，于曉靜，等.米諾環(huán)素通過影響下丘腦室旁核小膠質(zhì)細(xì)胞活化水平降低兩腎一夾所致高血壓的作用機(jī)制［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2024，22（22）：4114-4120.

高血壓的發(fā)病原因較多，防治不及時(shí)可出現(xiàn)高血壓心臟病甚至腦出血等嚴(yán)重情況。因此，如何有效防治高血壓成為國內(nèi)外的研究熱點(diǎn)。目前對高血壓的機(jī)制研究多集中于外周，如腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（RAAS）、巨噬細(xì)胞極化、非編碼RNA等［1］。關(guān)于高血壓發(fā)病的中樞機(jī)制，尤其是下丘腦室旁核（paraventricular nucleus of hypothalamus，PVN）在高血壓中的作用報(bào)道較少。PVN是大腦中控制自主神經(jīng)功能的一個(gè)異質(zhì)核，其在高血壓的交感神經(jīng)驅(qū)動方面發(fā)揮著重要作用［2］。血管緊張素Ⅱ（angiotensin Ⅱ，AngⅡ）是RAAS中的一種重要激素，當(dāng)RAAS功能亢進(jìn)時(shí)，較多的AngⅡ進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)，引起高血壓的發(fā)生［3］。小膠質(zhì)細(xì)胞是腦內(nèi)的先天免疫細(xì)胞［4］，在AngⅡ誘導(dǎo)的高血壓模型中，小膠質(zhì)細(xì)胞被激活［5］，被激活的小膠質(zhì)細(xì)胞胞體變大，突起縮短，并產(chǎn)生炎性細(xì)胞因子［6］，這些炎性細(xì)胞因子具有調(diào)控神經(jīng)元活動的功能［7］。高血壓是一種與炎癥狀態(tài)相關(guān)的疾病，在這種狀態(tài)下炎性細(xì)胞因子作為神經(jīng)調(diào)節(jié)劑參與高血壓的發(fā)生和發(fā)展，如白細(xì)胞介素1β（IL-1β）、白細(xì)胞介素6（IL-6）。PVN內(nèi)交感前神經(jīng)元的興奮性受到興奮性氨基酸［谷氨酸（GLU）］和抑制性氨基酸［γ-氨基丁酸（GABA）］兩種突觸的微調(diào)。高血壓發(fā)生時(shí)，GABA能突觸的輸入受損或GLU能突觸的輸入增強(qiáng)引起交感前神經(jīng)細(xì)胞活動亢進(jìn)，交感傳出活動增加。AngⅡ可增加神經(jīng)元煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶（gp91phox是其亞基）的活性，而NADPH氧化酶又是超氧陰離子（O2－）的主要來源，O2－增多導(dǎo)致氧化應(yīng)激增強(qiáng)，交感神經(jīng)興奮性增加，血壓升高［8］。米諾環(huán)素（minocycline）進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)［9］，抑制腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞的激活［10］。本研究將米諾環(huán)素作為治療高血壓的藥物，觀察其對兩腎一夾（two kidneys and one clip，2k1c）型高血壓大鼠血漿炎性因子、神經(jīng)遞質(zhì)濃度及血壓的影響，并探討其是否通過影響PVN發(fā)揮調(diào)控作用，以期為高血壓的中樞性治療提供新策略。

1" 材料與方法

1.1" 2k1c模型的制備

實(shí)驗(yàn)大鼠由西安交通大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，已通過動物倫理委員會批準(zhǔn)（編號：2017-560）。選取體質(zhì)量250～270 g，無特定病原體（SPF）級SD雄性大鼠28只。將大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)（SHAM）＋人工腦脊液（aCSF）組、SHAM＋minocycline組、2k1c＋aCSF組、2k1c＋minocycline組。實(shí)驗(yàn)前大鼠適應(yīng)環(huán)境1周，測量初始血壓，重復(fù)測量4次，取平均值。所有大鼠術(shù)前禁飲禁食24 h，腹腔注射10%水合氯醛將大鼠麻醉（3 mL/kg），麻醉后大鼠取右側(cè)臥位于手術(shù)臺，從脊柱開始從第3腰椎水平線向左1.0～1.5 cm處縱向切開3～4 cm切口，長度以暴露左腎為準(zhǔn)。使用棉簽分離左腎周圍的脂肪組織，暴露左腎動脈，將準(zhǔn)備好的針灸針與左腎動脈平行放置，使用手術(shù)線結(jié)扎。數(shù)分鐘后，左腎顏色由紅色變蒼白說明結(jié)扎位置正確。之后小心抽取針灸針，此時(shí)造成了左腎動脈狹窄。SHAM＋aCSF組和SHAM＋minocycline組只穿線，不結(jié)扎，其余操作同上。

1.2" 動物分組與處理

所有大鼠造模1個(gè)月血壓穩(wěn)定后開始行PVN置管術(shù)。腹腔注射10%水合氯醛將大鼠麻醉，頭部固定在腦立體定位儀上。暴露顱骨，在前囟后1.5 mm，中線外側(cè)0.5 mm處分別鉆孔，置入2個(gè)6號針頭（進(jìn)入深度為7 mm），再將3號針頭針尖處打彎置于6號針頭開口處（防止灰塵落入堵塞針頭），最后用牙科樹脂固定插管。術(shù)后肌肉注射青霉素0.15 mL（青霉素0.48 g＋5 mL生理鹽水）。

按0.125%的濃度（1 mg米諾環(huán)素＋800 μL生理鹽水）配制米諾環(huán)素，SHAM＋minocycline組和2k1c＋minocycline組每只大鼠雙側(cè)PVN緩慢輸注米諾環(huán)素各5 μL。SHAM＋aCSF組和2k1c＋aCSF組大鼠雙側(cè)PVN輸注5 μL aCSF。置管術(shù)后1周，每組大鼠每日輸注定量的米諾環(huán)素或人工腦脊液，持續(xù)6周，每周測量1次血壓。

1.3" 無創(chuàng)血壓的測量

采用尾袖法測量大鼠收縮壓。將處于清醒、安靜狀態(tài)的大鼠置于恒溫箱中，溫度36 ℃。待溫度升至預(yù)設(shè)溫度后，將阻斷器和傳感器套在鼠尾根部，當(dāng)顯示屏上的曲線呈正常鋸齒狀時(shí)開始測量血壓。阻斷器充氣時(shí)鋸齒線變平直，阻斷器放氣時(shí)再次恢復(fù)到鋸齒線，恢復(fù)鋸齒線時(shí)間即測得所需血壓。每次測量4次，取平均值。每周測量1次，共4次，記錄血壓變化。

1.4" 腎交感神經(jīng)放電（RSNA）測定

腹腔注射10%水合氯醛，采用銀絲電極連接大鼠腎交感神經(jīng)和生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，檢測并記錄腎交感放電值（用百分比代表最大交感神經(jīng)放電活動）。為排除手術(shù)干擾，記錄大鼠生命體征平穩(wěn)數(shù)值，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.5" 標(biāo)本采集

大鼠經(jīng)水合氯醛腹腔注射麻醉后，從頸部正中切口暴露頸總動脈，用動脈夾將動脈近心端夾閉，手術(shù)剪剪開一個(gè)小口，收集新鮮血液至采血管，血液離心后取上清液保存于凍存管，用于酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測。之后大鼠斷頭，留取完整腦組織，直接凍存于－80 ℃冰箱，用于實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）和高效液相色譜法檢測。

1.6" 小膠質(zhì)細(xì)胞染色

參照相關(guān)文獻(xiàn)［11］進(jìn)行小膠質(zhì)細(xì)胞染色，統(tǒng)計(jì)各組激活小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量及突起長度。

1.7" 高效液相色譜法（HPLC）檢測

采用HPLC-EC系統(tǒng)測量PVN中IL-1β、IL-6、去甲腎上腺素（NE）、GLU、GABA含量［12-13］。

1.8" RT-PCR檢測gp91phoxmRNA在PVN中的表達(dá)

采用RT-PCR檢測PVN中g(shù)p91phoxmRNA表達(dá)。應(yīng)用TRIzol試劑先提取PVN總RNA，再根據(jù)操作說明反轉(zhuǎn)錄成cDNA。利用分光光度法測定待測樣品mRNA濃度，檢測mRNA純度。

1.9" ELISA檢測血漿IL-1β、IL-6、NE濃度

根據(jù)ELISA試劑盒說明，檢測每組大鼠血漿IL-1β、IL-6、NE濃度。將待測樣品添加進(jìn)微量滴定板中，讓其與孔內(nèi)預(yù)孵好的特異性抗體共同在37 ℃烤箱中孵育1 h，之后洗滌。每孔加入等量酶標(biāo)抗體，37 ℃孵育1 h，洗板。最后加入終止液停止反應(yīng)，利用酶標(biāo)儀讀取OD值（在450 nm處讀數(shù)），計(jì)算每組大鼠IL-1β、IL-6、NE濃度。

1.10" 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用GraphPad Prism 8.0.2版本進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。符合正態(tài)分布和方差齊性的定量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用單因素方差分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2" 結(jié)" 果

2.1" 各組不同時(shí)間收縮壓比較

與SHAM＋aCSF組和SHAM＋minocycline組同時(shí)間比較，2k1c＋aCSF組和2k1c＋minocycline組收縮壓升高（P＜0.05）。與2k1c＋aCSF組同時(shí)間比較，2k1c＋minocycline組收縮壓下降（P＜0.05）。詳見圖1。

（與SHAM＋aCSF組同時(shí)間比較，＊P＜0.05；與SHAM＋minocycline組同時(shí)間比較，△P＜0.05；與2k1c＋aCSF組同時(shí)間比較，#P＜0.05）

2.2" 各組PVN中激活的小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量及小膠質(zhì)細(xì)胞突起長度比較

與SHAM＋aCSF組比較，2k1c＋aCSF組激活的小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量增多（P＜0.05）；2k1c＋minocycline組激活的小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量多于SHAM＋minocycline組（P＜0.05）；與2k1c＋aCSF組比較，2k1c＋minocycline組激活的小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量減少（P＜0.05）。與SHAM＋aCSF組比較，2k1c＋aCSF組小膠質(zhì)細(xì)胞突起長度變短（P＜0.05）；2k1c＋minocycline組小膠質(zhì)細(xì)胞突起長度小于SHAM＋minocycline組（P＜0.05）；與2k1c＋aCSF組比較，2k1c＋minocycline組小膠質(zhì)細(xì)胞突起長度增加（P＜0.05）。詳見圖2、圖3。

（A為不同組別激活的小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量比較的柱狀圖；B為不同組別小膠質(zhì)細(xì)胞突起長度比較的柱狀圖。與SHAM＋aCSF組比較，＊P＜0.05；與SHAM＋minocycline組比較，△ P＜0.05；與2k1c＋aCSF組比較，# P＜0.05）

2.3" 各組PVN中IL-1β表達(dá)比較

與SHAM＋aCSF組比較，2k1c＋aCSF組PVN中IL-1β濃度升高（P＜0.05）；2k1c＋minocycline組PVN中IL-1β濃度高于SHAM＋minocycline組（P＜0.05）；與2k1c＋aCSF組比較，2k1c＋minocycline組PVN中IL-1β濃度降低（P＜0.05）。詳見圖4。

（與SHAM＋aCSF組比較，＊P＜0.05；與SHAM＋minocycline組比較，△ P＜0.05；與2k1c＋aCSF組比較，# P＜0.05）

2.4" 各組PVN中IL-6表達(dá)比較

與SHAM＋aCSF組比較，2k1c＋aCSF組PVN中IL-6濃度升高（P＜0.05）；2k1c＋minocycline組PVN中IL-6濃度高于SHAM＋minocycline組（P＜0.05）；與2k1c＋aCSF組比較，2k1c＋minocycline組PVN中IL-6濃度降低（P＜0.05）。詳見圖5。

（與SHAM＋aCSF組比較，＊P＜0.05；與SHAM＋minocycline組比較，△ P＜0.05；與2k1c＋aCSF組比較，# P＜0.05）

2.5" 各組PVN中NE表達(dá)比較

與SHAM＋aCSF組比較，2k1c＋aCSF組PVN中NE表達(dá)升高（P＜0.05）；2k1c＋minocycline組PVN中NE表達(dá)高于SHAM＋minocycline組（P＜0.05）；與2k1c＋aCSF組比較，2k1c＋minocycline組PVN中NE表達(dá)降低（P＜0.05）。詳見圖6。

（與SHAM＋aCSF組比較，＊P＜0.05；與SHAM＋minocycline組比較，△ P＜0.05；與2k1c＋aCSF組比較，# P＜0.05）

2.6" 各組PVN中興奮性神經(jīng)遞質(zhì)GLU水平比較

與SHAM＋aCSF組比較，2k1c＋aCSF組PVN中興奮性神經(jīng)遞質(zhì)GLU升高（P＜0.05）；2k1c＋minocycline組中興奮性神經(jīng)遞質(zhì)GLU表達(dá)高于SHAM＋minocycline組（P＜0.05）；與2k1c＋aCSF組比較，2k1c＋minocycline組PVN中興奮性神經(jīng)遞質(zhì)GLU表達(dá)降低（P＜0.05）。詳見圖7。

（與SHAM＋aCSF組比較，＊P＜0.05；與SHAM＋minocycline組比較，△ P＜0.05；與2k1c＋aCSF組比較，# P＜0.05）

2.7" 各組PVN中抑制性神經(jīng)遞質(zhì)GABA水平比較

與SHAM＋aCSF組比較，2k1c＋aCSF組PVN中抑制性神經(jīng)遞質(zhì)GABA水平降低（P＜0.05）；2k1c＋minocycline組PVN中抑制性神經(jīng)遞質(zhì)GABA水平低于SHAM＋minocycline組（P＜0.05）；與2k1c＋aCSF組比較，2k1c＋minocycline組PVN中抑制性神經(jīng)遞質(zhì)GABA水平升高（P＜0.05）。詳見圖8。

（與SHAM＋aCSF組比較，＊P＜0.05；與SHAM＋minocycline組比較，△ P＜0.05；與2k1c＋aCSF組比較，# P＜0.05）

2.8" 各組PVN中g(shù)p91phoxmRNA基因表達(dá)比較

2k1c＋aCSF組PVN中g(shù)p91phoxmRNA表達(dá)水平高于SHAM＋aCSF組（P＜0.05）；2k1c＋minocycline組PVN中g(shù)p91phoxmRNA表達(dá)水平高于SHAM＋minocycline組（P＜0.05）；與2k1c＋aCSF組比較，2k1c＋minocycline組PVN中g(shù)p91phoxmRNA表達(dá)水平下降（P＜0.05）。詳見圖9。

（與SHAM＋aCSF組比較，＊P＜0.05；與SHAM＋minocycline組比較，△ P＜0.05；與2k1c＋aCSF組比較，# P＜0.05）

2.9" 各組血漿IL-1β濃度比較

與SHAM＋aCSF組比較，2k1c＋aCSF組血漿IL-1β濃度升高（P＜0.05）；2k1c＋minocycline組血漿IL-1β濃度高于SHAM＋minocycline組（P＜0.05）；與2k1c＋aCSF組比較，2k1c＋minocycline組血漿IL-1β濃度降低（P＜0.05）。詳見圖10。

（與SHAM＋aCSF組比較，＊P＜0.05；與SHAM＋minocycline組比較，△ P＜0.05；與2k1c＋aCSF組比較，# P＜0.05）

2.10" 各組血漿IL-6濃度比較

與SHAM＋aCSF組比較，2k1c＋aCSF組血漿IL-6濃度升高（P＜0.05）；2k1c＋minocycline組血漿IL-6濃度高于SHAM＋minocycline組（P＜0.05）；與2k1c＋aCSF組比較，2k1c＋minocycline組血漿IL-6濃度降低（P＜0.05）。詳見圖11。

（與SHAM＋aCSF組比較，＊P＜0.05；與SHAM＋minocycline組比較，△ P＜0.05；與2k1c＋aCSF組比較，# P＜0.05）

2.11" 各組血漿NE水平比較

與SHAM＋aCSF組比較，2k1c＋aCSF組血漿NE水平升高（P＜0.05）；與2k1c＋aCSF組比較，2k1c＋minocycline組NE水平降低（P＜0.05）。詳見圖12。

（與SHAM＋aCSF組比較，＊P＜0.05；與2k1c＋aCSF組比較，# P＜0.05）

2.12" 各組腎交感神經(jīng)活動比較

與SHAM＋aCSF組比較，2k1c＋aCSF組RSNA電增強(qiáng)（P＜0.05）；2k1c＋minocycline組RSNA高于SHAM＋minocycline組（P＜0.05）；與2k1c＋aCSF組比較，2k1c＋minocycline組RSNA減弱（P＜0.05）。詳見圖13。

（與SHAM＋aCSF組比較，＊P＜0.05；與SHAM＋minocycline組比較，△ P＜0.05；與2k1c＋aCSF組比較，# P＜0.05）

3" 討" 論

PVN位于第三腦室下丘腦部的上側(cè)兩端，在維持心血管系統(tǒng)的正常功能活動中發(fā)揮著重要的作用［14］。小膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的免疫效應(yīng)細(xì)胞，通過周圍環(huán)境及時(shí)感知危險(xiǎn)信號［15］。高血壓發(fā)生時(shí)，PVN內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞被激活，產(chǎn)生炎性細(xì)胞因子，進(jìn)而調(diào)控神經(jīng)元活動。米諾環(huán)素是一種可抑制小膠質(zhì)細(xì)胞激活的抗生素［9］，可通過血腦屏障［16］。相關(guān)研究顯示，米諾環(huán)素通過口服或腹腔注射發(fā)揮作用［5，9］，將米諾環(huán)素直接輸注PVN，提示米諾環(huán)通過PVN發(fā)揮降壓作用。

本研究結(jié)果顯示，2k1c＋aCSF組和2k1c＋minocycline組收縮壓高于SHAM＋aCSF組和SHAM＋minocycline組。提示米諾環(huán)素對2k1c所致的高血壓有一定的治療作用。高血壓模型中PVN內(nèi)激活的小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量增多且突起變短；經(jīng)米諾環(huán)素治療后，激活小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量減少，且突起變長，高血壓模型中PVN內(nèi)激活的小膠質(zhì)細(xì)胞可產(chǎn)生較多炎性因子如IL-1β、IL-6（PVN中重要的炎性因子）；2k1c＋aCSF組和2k1c＋minocycline組大鼠PVN中IL-1β、IL-6濃度高于SHAM＋aCSF組和SHAM＋minocycline組，經(jīng)過米諾環(huán)素治療后，該趨勢得到了有效逆轉(zhuǎn)。

NE、GLU是PVN中重要的神經(jīng)遞質(zhì)，具有興奮交感神經(jīng)的作用，在2k1c型高血壓大鼠腦內(nèi)注射微量GLU可升高血壓［17］。GABA是PVN中的神經(jīng)遞質(zhì)，對交感神經(jīng)具有抑制作用，使用GABA受體激動劑可降低血壓［18］。本研究結(jié)果顯示，高血壓大鼠NE、GLU含量升高，GABA降低；經(jīng)過米諾環(huán)素治療后，此趨勢得到扭轉(zhuǎn)。高血壓模型中神經(jīng)元NADPH氧化酶的活性提高，產(chǎn)生大量O2－，氧化應(yīng)激增強(qiáng)，致使細(xì)胞產(chǎn)生大量活性氧，外周交感神經(jīng)興奮性增強(qiáng)，血壓升高?；钚匝鮼碓从贜ADPH氧化酶，gp91phox是NADPH氧化酶的一個(gè)亞基，其表達(dá)水平可間接反映NADPH氧化酶活性。2k1c型高血壓大鼠模型中PVN內(nèi)gp91phoxmRNA表達(dá)高于對照組，本研究結(jié)果顯示，米諾環(huán)素可減弱這種基因的表達(dá)，發(fā)揮降壓作用；經(jīng)米諾環(huán)素治療后，外周血漿受到一定影響，2k1c＋aCSF組大鼠血漿IL-1β、IL-6、NE濃度高于SHAM＋aCSF組；與2k1c＋aCSF組相比，2k1c＋minocycline組血漿IL-1β、IL-6、NE濃度下降。表明高血壓大鼠腎交感神經(jīng)活動明顯增強(qiáng)，經(jīng)雙側(cè)PVN連續(xù)6周慢性給予米諾環(huán)素可部分逆轉(zhuǎn)上述變化。因此認(rèn)為，米諾環(huán)素的降壓作用是通過影響PVN小膠質(zhì)細(xì)胞活化水平進(jìn)而影響炎性因子和神經(jīng)遞質(zhì)實(shí)現(xiàn)的。

綜上所述，米諾環(huán)素可能通過抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的激活（減少激活小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量，增加突起長度），進(jìn)而抑制炎性因子IL-1β、IL-6的產(chǎn)生，并進(jìn)一步調(diào)節(jié)神經(jīng)元的活動；PVN緩慢輸注米諾環(huán)素可抑制高血壓PVN中NADPH氧化酶亞基gp91phoxmRNA，降低血漿IL-1β、IL-6、NE濃度，顯著減弱高血壓模型腎交感放電。PVN緩慢輸注米諾環(huán)素可對2k1c型高血壓發(fā)揮降壓作用。

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（收稿日期：2022-05-04）

（本文編輯薛妮）