海南熱帶雨林國家公園鸚哥嶺片區(qū)牛肝菌目真菌物種多樣性及資源評價

關(guān)鍵詞：牛肝菌目；大型真菌；物種多樣性

中圖分類號：Q949.32 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

海南熱帶雨林國家公園鸚哥嶺片區(qū)位于海南島中南部，跨白沙、瓊中、五指山和樂東4 縣市，總面積882 km²，主要保護(hù)對象為海南熱帶雨林生態(tài)系統(tǒng)。鸚哥嶺片區(qū)屬中山山地地貌，所處黎母嶺山脈南段，呈東北—西南走向，最高峰為鸚哥嶺山峰，海拔1812 m，最低海拔為170 m，相對高差1642 m。該片區(qū)屬熱帶海洋性季風(fēng)氣候，年均氣溫20～24 ℃，年平均降水量為1800～2700 mm，雨量充沛，是海南的主要水源地。區(qū)域內(nèi)植被類型豐富，包括了低地?zé)釒в炅?、熱帶季雨林、熱帶山地雨林、熱帶山地常綠闊葉林、熱帶針葉林和熱帶山頂矮林的完整植被譜帶[1]，為大型真菌的生存繁衍提供了充分條件。

海南熱帶雨林國家公園管理局鸚哥嶺分局是在原海南鸚哥嶺省級自然保護(hù)區(qū)管理站、原海南佳西省級自然保護(hù)區(qū)管理站和原海南省南高嶺林場的基礎(chǔ)上組建的。原海南鸚哥嶺省級自然保護(hù)區(qū)在其成立初期的生物資源本底調(diào)查中，僅記錄了大型真菌76 種[1]，包括牛肝菌目真菌2 科5 屬5 種。原佳西省級自然保護(hù)區(qū)記錄到大型真菌51屬117 個分類單元[2]（包括變種），包括牛肝菌目真菌1科1屬2種。之后，隨著對鸚哥嶺片區(qū)牛肝菌目真菌資源野外調(diào)查的加強(qiáng)，同時利用大型真菌監(jiān)測平臺進(jìn)行常態(tài)化監(jiān)測，截至到2020年底，在鸚哥嶺片區(qū)共發(fā)現(xiàn)牛肝菌目真菌5 科31 屬62 種[3]。海南熱帶雨林國家公園正式成立后，通過對鸚哥嶺片區(qū)牛肝菌目真菌資源進(jìn)行專項深入研究，以鸚哥嶺為模式產(chǎn)地的16 個牛肝菌新種和1 個海南新記錄種又陸續(xù)被發(fā)現(xiàn)[4-14]。

牛肝菌目真菌中的大部分種類能與殼斗科、龍腦香科、松科等植物形成共生關(guān)系[15-16]，對于森林生態(tài)系統(tǒng)平衡的維護(hù)、退化生態(tài)系統(tǒng)中的植被恢復(fù)以及植樹造林具有重要作用[17]。同時，牛肝菌目的多種真菌具有食用及藥用價值，少部分種類還具有毒性[18-20]，因此，該目真菌是大型真菌中的熱點研究類群。本研究通過對鸚哥嶺片區(qū)牛肝菌目真菌資源進(jìn)行較為全面的調(diào)查，以期進(jìn)一步了解該區(qū)域大型真菌資源的物種多樣性，發(fā)現(xiàn)該區(qū)域具有重要經(jīng)濟(jì)價值的真菌資源，為海南熱帶雨林國家公園大型真菌資源的保護(hù)、管理和利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料研究材料為2009—2023 年在鸚哥嶺片區(qū)內(nèi)通過野外采集得到的標(biāo)本。憑證標(biāo)本保存于海南醫(yī)科大學(xué)真菌標(biāo)本館（Fungal Herbarium of HainanMedical University， FHMU）。

1.2 方法

1.2.1 調(diào)查方法 野外調(diào)查采用踏查法。調(diào)查區(qū)域為海南熱帶雨林國家公園鸚哥嶺片區(qū)全域。在野外調(diào)查過程中，對大型真菌的生境、子實體等進(jìn)行拍照，記錄標(biāo)本采集地點的經(jīng)緯度及海拔，采集標(biāo)本并現(xiàn)場編號；填寫野外蘑菇采集記錄表格，詳細(xì)記錄每號標(biāo)本新鮮子實體各部位特征信息。制作用于提取總DNA 的硅膠干燥材料；后將子實體在烘干機(jī)內(nèi)于50 ℃烘干過夜，待標(biāo)本完全干透后用自封袋裝好標(biāo)本。

1.2.2 形態(tài)學(xué)研究 包括宏觀形態(tài)特征和顯微結(jié)構(gòu)特征的觀察和測量。標(biāo)本的宏觀形態(tài)觀察包括子實體大小、顏色、菌蓋及菌柄特征、菌肉厚度、菌管顏色及長度（或菌褶顏色及寬度）、菌孔直徑（或每厘米所含菌褶數(shù)量）、菌管（或菌褶）著生方式、菌柄基部菌絲顏色、子實層體和菌肉受傷后顏色變化等。對干燥標(biāo)本的顯微特征進(jìn)行觀察包括在光學(xué)顯微鏡下觀察擔(dān)孢子大小、形狀、表面特征，擔(dān)子形狀、大小、擔(dān)子小梗數(shù)量和長度，囊狀體大小、形狀，菌蓋表皮及菌柄表皮等特征。顯微結(jié)構(gòu)觀察以5%的KOH 作為浮載劑，用1%的剛果紅進(jìn)行染色，測量數(shù)據(jù)并繪圖。擔(dān)孢子大小在100倍物鏡下，測量其側(cè)面觀（臍突位于孢子一側(cè)時）的長度和寬度，每個標(biāo)本測量20個以上的成熟擔(dān)孢子。根據(jù)實際需要，利用掃描電鏡觀察擔(dān)孢子紋飾，并與國內(nèi)外相關(guān)的標(biāo)本進(jìn)行對比研究。

1.2.3 分子系統(tǒng)發(fā)育研究 采用改良的CTAB 法提取標(biāo)本的總DNA，針對不同目的片段選擇對應(yīng)的擴(kuò)增引物和反應(yīng)體系進(jìn)行PCR 擴(kuò)增及純化，之后選擇核糖體大亞基（nrLSU）、編碼核糖體RNA的內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（ ITS ）、翻譯延長因子1-α（tef1-α）、編碼RNA 聚合酶第一大亞基（rpb1）、編碼RNA 聚合酶II 第二大亞基（rpb2）等基因片段進(jìn)行多基因測序，PCR 產(chǎn)物直接測序失敗的樣品，采用克隆測序法獲得序列。得到的序列用軟件SeqMan 進(jìn)行拼接，后用軟件MUSCLE v3.6進(jìn)行序列對齊，在Bioedit 上進(jìn)行調(diào)整，確定序列邊界，比對后采用MrBayes 和RAxML 等軟件進(jìn)行單獨分析和聯(lián)合分析，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。物種名稱參照真菌索引網(wǎng)站（http：//www.indexfungorum.org）中最新的研究成果和李玉等[21]所著的《中國大型菌物資源圖鑒》一書。

1.2.4 資源評價 根據(jù)物種分類鑒定結(jié)果，對鸚哥嶺片區(qū)牛肝菌目真菌科、屬、種的數(shù)量進(jìn)行統(tǒng)計，并參考相關(guān)文獻(xiàn)[22]，將物種數(shù)≥10 種的科定為優(yōu)勢科，物種數(shù)≥5 種的屬定為優(yōu)勢屬。牛肝菌目真菌的食、藥用價值及有毒物種的分析參考相關(guān)文獻(xiàn)[23-27]中所報道的食用菌、藥用菌以及毒菌的物種名錄。

2 結(jié)果與分析

根據(jù)對鸚哥嶺片區(qū)野外采集的大型真菌標(biāo)本進(jìn)行整理和鑒定，區(qū)內(nèi)生長分布的牛肝菌目真菌共82 種（表1），隸屬于5科37屬。其中包括了以鸚哥嶺片區(qū)為模式產(chǎn)地的2個屬和26個物種（圖1、圖2），2個中國新記錄種和20個海南新記錄種。此外，該牛肝菌目真菌名錄中還包括海南熱帶雨林國家公園優(yōu)先保護(hù)物種21個（表1），較為全面地反映了鸚哥嶺片區(qū)牛肝菌目真菌的物種多樣性。

2.1 牛肝菌目真菌優(yōu)勢科屬組成

2.1.1 優(yōu)勢科組成 根據(jù)表2 的統(tǒng)計結(jié)果，種類最多的優(yōu)勢科為牛肝菌科，共包含32屬75 種，占總種數(shù)的91.46%。

2.1.2 優(yōu)勢屬組成 鸚哥嶺片區(qū)牛肝菌目真菌優(yōu)勢屬分析結(jié)果顯示（表3），含5 種以上的優(yōu)勢屬有6個，合計40種，占總種數(shù)的48.78%。種類最多的優(yōu)勢屬為褶孔牛肝菌屬，包含9 種，占總種數(shù)的10.98%；第二大屬是金牛肝菌屬，包含7種，占總種數(shù)的8.54%；其次是條孢牛肝菌屬、新牛肝菌屬、松塔牛肝菌屬和粉孢牛肝菌屬，均包含6 種，均占總種數(shù)的7.32%。

2.2 鸚哥嶺片區(qū)牛肝菌目真菌資源評價

根據(jù)統(tǒng)計，鸚哥嶺片區(qū)牛肝菌目真菌中，具有食用價值的有20 種，具有藥用價值的有4 種（其中食藥兼用菌2 種），有毒的種類8 種。

2.2.1 食用菌資源 鸚哥嶺片區(qū)牛肝菌目中的可食用種類占總數(shù)的24.39%，其中較常食用的種類包括華麗新牛肝菌（Neoboletus magnificus）、暗褐新牛肝菌（N. obscureumbrinus）、皺蓋牛肝菌（Rugiboletus extremiorientalis）、暗褐脈柄牛肝菌（ Phlebopus portentosus ） 和中華腐生牛肝菌（Buchwaldoboletus xylophilus）等。華麗新牛肝菌最早描述于云南，是當(dāng)?shù)刂匾囊吧秤镁?，因其子實體各部位受傷后變?yōu)樗{(lán)色，故稱其為“見手青”，需要注意的是，該種牛肝菌生食會出現(xiàn)幻覺，要完全煮熟后方可食用。暗褐新牛肝菌不僅子實體很大，而且非常美味。皺蓋牛肝菌在我國云南地區(qū)被稱為“黃癩頭”，在各地的農(nóng)貿(mào)市場有銷售，頗受人們歡迎。暗褐脈柄牛肝菌又名“黑牛肝”，個體非常大，菌蓋直徑有時可超過20 cm，是牛肝菌目中第一種可以人工栽培的種類，在我國已成功實現(xiàn)大規(guī)模人工栽培。中華腐生牛肝菌已于2021 年在云南成功實現(xiàn)小規(guī)模人工栽培[28]，成為世界上第二種可人工栽培的牛肝菌。本研究調(diào)查到的褶孔牛肝菌屬（Phylloporus）物種均可食用。此外，通過訪談了解到，海南當(dāng)?shù)乩枳灏傩找矔墒扯柜R勃（Pisolithus arhizus）幼嫩的子實體。

2.2.2 藥用菌資源 鸚哥嶺片區(qū)牛肝菌目中可藥用的種類占總數(shù)的4.88%， 它們是橙牛肝菌（Crocinoboletus rufoaureus）、暗褐脈柄牛肝菌、豆馬勃和多根硬皮馬勃（Scleroderma polyrhizum）。有研究表明，橙牛肝菌粗多糖的抗氧化活性較顯著，具有開發(fā)為天然抗氧化劑的潛力[29]。暗褐脈柄牛肝菌具有對急性肝損傷及神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用，同時還具有抗氧化、抗高血壓、抗菌、抗癌等活性[30]。豆馬勃具有止血、消腫的功效，并具有殺菌、抗氧化及抗腫瘤的活性。多根硬皮馬勃具有消腫止血的功效，可用于治療外傷出血、凍瘡流水，此外其液體發(fā)酵液還具有抗炎鎮(zhèn)痛作用。

2.2.3 毒菌資源 鸚哥嶺片區(qū)牛肝菌目中有毒的種類占總數(shù)的9.76%。其中黑紫變黑牛肝菌毒性較大，中毒后潛伏期及持續(xù)時間相對較短，可引起頭暈、頭痛、視力模糊、四肢無力、紅眼、肌肉抽筋甚至顫抖等癥狀，可能屬于神經(jīng)型毒蘑菇種類[31]；誤食隱紋條孢牛肝菌、日本網(wǎng)孢牛肝菌、芝麻厚瓤牛肝菌、褐點粉末牛肝菌、褐糙粉末牛肝菌和淡紅粉末牛肝菌則會引起胃腸炎癥狀，應(yīng)避免采食。

2.3 鸚哥嶺片區(qū)牛肝菌目真菌資源保護(hù)和可持續(xù)利用

2.3.1 鸚哥嶺片區(qū)牛肝菌目真菌資源的保護(hù) 團(tuán)隊在對鸚哥嶺牛肝菌目真菌資源進(jìn)行研究的同時，發(fā)現(xiàn)有些物種的野外分布區(qū)域較為狹窄，一旦受到人為干擾很容易致危，如果不加以有效保護(hù)，其野外生存狀況堪憂。為此，應(yīng)對這些物種進(jìn)行長期監(jiān)測并開展就地保護(hù)。

2022年《海南熱帶雨林國家公園優(yōu)先保護(hù)物種名錄》[32]正式向社會公開發(fā)布，保護(hù)物種包括海南熱帶雨林國家公園范圍內(nèi)分布的脊椎動物、植物、大型真菌3個類群。鸚哥嶺片區(qū)牛肝菌目真菌中有21個物種列于該名錄中。因此，鸚哥嶺片區(qū)的牛肝菌目真菌資源亟待保護(hù)。建議從以下兩個方面著手：第一，加強(qiáng)宣傳。通過深入村委會、學(xué)校進(jìn)行大型真菌科普教育等方式來提高海南熱帶雨林國家公園周邊社區(qū)百姓對大型真菌資源的保護(hù)意識。第二，加強(qiáng)科學(xué)研究。開展牛肝菌目真菌資源常態(tài)化監(jiān)測，同時加強(qiáng)對受威脅物種的研究；對于可培養(yǎng)的種類，可通過菌種分離，保存其種質(zhì)資源，并加強(qiáng)人工栽培技術(shù)的研究，以期緩解其野外生存壓力。

2.3.2 牛肝菌目真菌資源的可持續(xù)性利用 牛肝菌目中的大多種類能夠與殼斗科、松科、龍腦香科等植物形成互共生關(guān)系，因此較難實現(xiàn)人工栽培。暗褐脈柄牛肝菌在云南地區(qū)已經(jīng)成功實現(xiàn)仿野生栽培。在鸚哥嶺片區(qū)的低海拔闊葉林及村子周邊的榕樹林，均發(fā)現(xiàn)有該牛肝菌生長。因此，可以嘗試在海南仿野生栽培暗褐脈柄牛肝菌，發(fā)展林下經(jīng)濟(jì)，努力探索將綠水青山轉(zhuǎn)化為金山銀山的轉(zhuǎn)化路徑，助力海南熱帶雨林國家公園建設(shè)。此外，針對鸚哥嶺片區(qū)牛肝菌目真菌中的大部分物種，尤其是新發(fā)現(xiàn)的物種，人們目前對它們的潛在價值尚不清楚，后續(xù)有必要對其子實體化學(xué)成分、藥理活性等進(jìn)行研究，為熱帶真菌資源的開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

3 討論

本研究對鸚哥嶺片區(qū)牛肝菌目真菌資源進(jìn)行調(diào)查、分類和鑒定，共發(fā)現(xiàn)該目真菌5 科37 屬82 種。大多數(shù)牛肝菌是外生菌根真菌，鸚哥嶺片區(qū)豐富的牛肝菌資源與區(qū)域內(nèi)豐富的宿主植物資源關(guān)系密切， 該片區(qū)分布有殼斗科青岡屬（Cyclobalanopsis）、錐屬（Castanopsis）、柯屬（Lithocarpus）、櫟屬（Quercus），松科植物海南五針?biāo)桑?Pinus fenzeliana ） 和廣東松（ P.kwangtungensis）等植物，這些植物為牛肝菌的生長提供了必要條件。同時，豐富的牛肝菌目真菌資源也可作為海南熱帶雨林生態(tài)系統(tǒng)平衡的一項生物指征，從一定程度上反映生態(tài)系統(tǒng)的狀況。除了該類真菌，鸚哥嶺片區(qū)還分布著很多其他種類的大型真菌，這些類群與牛肝菌目真菌均是海南熱帶雨林國家公園生物多樣性的重要組成部分?；谇捌诘难芯浚茰y該區(qū)域還蘊(yùn)藏著大量有待發(fā)現(xiàn)的新種或新記錄種。因此，建議海南熱帶雨林國家公園管理部門持續(xù)關(guān)注大型真菌資源研究，進(jìn)一步加強(qiáng)布局和統(tǒng)籌，增加研究經(jīng)費(fèi)的投入，組織相關(guān)領(lǐng)域的專家學(xué)者對包括鸚哥嶺片區(qū)在內(nèi)的海南熱帶雨林國家公園的大型真菌資源進(jìn)行長期、持續(xù)、深入的調(diào)查研究，同時對各片區(qū)的科研及管護(hù)人員進(jìn)行業(yè)務(wù)知識培訓(xùn)，培養(yǎng)更多大型真菌分類人才和“鄉(xiāng)土專家”。在此基礎(chǔ)上，深入了解海南熱帶雨林國家公園大型真菌多樣性情況，這對公園生物多樣性的保護(hù)以及可持續(xù)利用等均具有重要意義。