基于SSR標(biāo)記的圓葉桉遺傳多樣性分析

摘 要：【目的】摸清國(guó)內(nèi)圓葉桉Eucalyptus pulverulenta花卉資源遺傳多樣性概況，為種質(zhì)資源利用及分子育種提供參考?！痉椒ā坷枚鄳B(tài)性高的15個(gè)SSR標(biāo)記，對(duì)7個(gè)來(lái)源的59株圓葉桉進(jìn)行SSR基因分型和遺傳多樣性分析?！窘Y(jié)果】1）59株圓葉桉在15個(gè)SSR標(biāo)記共檢測(cè)到83個(gè)等位片段數(shù)（NA），平均每個(gè)標(biāo)記的等位片段數(shù)為5.5個(gè)，每個(gè)標(biāo)記的等位片段數(shù)2～10個(gè)，平均有效等位片段數(shù)（NE）2.4個(gè)。觀測(cè)雜合度（HO）和期望雜合度（HE）的平均值為0.401和0.491，多態(tài)性信息量（PIC）的平均值為0.455，具有較高的多態(tài)性。圓葉桉群體間遺傳分化系數(shù)（Fst）為0.208，即有20.8%的變異存在于不同群體間；2）個(gè)體間遺傳距離范圍為0.033～0.698，平均為0.377，群體間親緣關(guān)系較近，遺傳背景相對(duì)單一。圓葉桉群體分為兩個(gè)亞組，與其天然分布范圍一致；3）圓葉桉群體間的遺傳一致度為0.533～0.987，來(lái)自云南佳藝園藝和云南綠夢(mèng)花卉的圓葉桉遺傳一致度最高，推測(cè)二者可能為來(lái)源相同的品種。分子方差分析（AMOVA）結(jié)果表明個(gè)體間變異是方差分量的主要來(lái)源?！窘Y(jié)論】15個(gè)SSR標(biāo)記遺傳多態(tài)性較高，可用于圓葉桉的遺傳分化研究。個(gè)體間的分型結(jié)果表明，國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上常見(jiàn)的圓葉桉均為有性繁殖的實(shí)生苗，不同來(lái)源圓葉桉群體間的遺傳分化程度較小，遺傳變異主要發(fā)生在個(gè)體間。本研究對(duì)圓葉桉進(jìn)行遺傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu)分析，對(duì)種質(zhì)資源的評(píng)價(jià)和利用都具有重要意義。

關(guān)鍵詞：圓葉桉；SSR標(biāo)記；遺傳多樣性；遺傳關(guān)系

中圖分類號(hào)：S792.39 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1673-923X（2024）10-0157-08

基金項(xiàng)目：“十四五”國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（2022YFD2200203-2）；廣州市基礎(chǔ)研究計(jì)劃基礎(chǔ)與應(yīng)用基礎(chǔ)研究項(xiàng)目（202102080550）；廣東省林業(yè)科技創(chuàng)新項(xiàng)目（2023KJCX013）。

Genetic analysis of Eucalyptus pulverulenta based on SSR markers

ZHAO Jingyi1，2， QI Xiaohui3， QU Guanzheng1， WU Youjun2， LI Zhuo2， ZHOU Changpin1，2

Abstract：【Objective】In order to find out genetic diversity condition of Eucalyptus pulverulenta resources in China， and to provide reference for germplasm resources utilization and molecular breeding.【Method】15 SSR makers with high polymorphism were used for genotyping and genetic diversity analysis of 59 E. pulverulenta from 7 sources.【Result】1） A total of 83 alleles were detected by 15 SSR markers， averaging 5.5 alleles per marker， the number of alleles per marker ranged from 2 to 10， averaging 2.4 effective alleles per marker. The average value of observed heterozygosity and expected heterozygosity were 0.401 and 0.491， respectively. The general polymorphism was high with an average polymorphic information content of 0.455， indicating these markers were suitability for studying genetic differentiation of E. pulverulenta. The genetic differentiation coefficient between populations （Fst） was 0.208， it indicated that there occurred 20.8% genetic variation among populations； 2） The genetic distance varied from 0.033 to 0.698， with an average of 0.377. The results indicated that the genetic background was relatively single and the genetic relationship was close. The cluster analysis showed that 59 samples were clustered into two subgroups， which was consistent with the natural distribution of E. pulverulenta； 3） The genetic coefficient of the populations ranged from 0.533 to 0.987. The genetic coefficient of E. pulverulenta from Yunnan Jiayi Horticulture and Yunnan Lümeng Huahui was the highest， which suggested that the two populations might be from the same source. Analysis of molecular variance showed that individual variation is the main source of variance component.【Conclusion】This study used 15 SSR markers， which had high genetic polymorphisms and could be used to study the genetic differentiation of E. pulverulenta. The results of cluster analysis among individuals showed that the common E. pulverulenta in the domestic market are generative reproduced seedlings. The extent of genetic differentiation among different populations were at a low level， and most of variations existed within individuals. The results will be great significance for the germplasm resource evaluation and utilization in E. pulverulenta.

Keywords： Eucalyptus pulverulenta； SSR marker； genetic diversity； genetic relationship

圓葉桉Eucalyptus pulverulenta又名銀葉山桉，是桃金娘科Myrtaceae桉屬Eucalyptus L’Hérit.藍(lán)桉組Section Maidenaria樹(shù)種，多為灌木或小喬木，幼態(tài)葉對(duì)生，圓形或心形無(wú)柄，被藍(lán)灰色臘粉，幼莖呈藍(lán)灰色，其自然分布于澳大利亞新南威爾士州和塔斯馬尼亞州，屬地中海氣候區(qū)[1]。圓葉桉多為種子繁殖，大量的宿芽使其具有強(qiáng)大的萌蘗能力，枝條多用于鮮切花插花和花藝等，具有極高的園藝觀賞價(jià)值和商業(yè)價(jià)值[2]。研究人員對(duì)引種的26種芳香植物種的觀賞性狀（株型、葉片）、生態(tài)適應(yīng)性（抗性、花期）以及擴(kuò)繁價(jià)值等進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，圓葉桉被評(píng)為“極優(yōu)”[3]。圓葉桉在美國(guó)、意大利和日本等國(guó)家被廣泛引種，近年來(lái)相繼推出‘藍(lán)寶貝’、‘銅錢桉’、‘冰點(diǎn)’和‘藍(lán)夢(mèng)’等品種[4]。當(dāng)前在云南昆明、曲靖等地區(qū)大面積栽培，在浙江和福建等省份亦有少量種植，表現(xiàn)出一定的適應(yīng)性，但在我國(guó)華南地區(qū)難以過(guò)夏，種植情況普遍不佳。

簡(jiǎn)單重復(fù)序列（Simple sequence repeat，SSR）是一組以1～6個(gè)核苷酸為重復(fù)單位串聯(lián)成的重復(fù)序列，具有共顯性、多態(tài)性高、標(biāo)記數(shù)量多、覆蓋范圍廣等優(yōu)點(diǎn)[5]。SSR不僅在巨桉E.grandis、尾葉桉E.urophylla、細(xì)葉桉E.tereticornis、赤桉E.camaldulensis、檸檬桉E.citriodora、粗皮桉E.pellida和大花序桉E.cloeziana等桉樹(shù)的連鎖圖譜構(gòu)建、種質(zhì)資源鑒定[6-7]、遺傳多樣性分析[8-9]、群體結(jié)構(gòu)分析[10-11]、數(shù)量性狀位點(diǎn)定位[12]和關(guān)聯(lián)分析[13]等研究中廣泛應(yīng)用，而且也多用于花卉等的品種鑒定[14]。目前，對(duì)于圓葉桉的研究仍較少，且多集中在引種、苗木繁育、生理生化等方面[15]，關(guān)于遺傳多樣性、群體遺傳結(jié)構(gòu)分析等分子水平的研究尚未有報(bào)道。

圓葉桉觀賞價(jià)值高，市場(chǎng)潛力巨大。當(dāng)前，國(guó)內(nèi)種植的圓葉桉花卉遺傳基礎(chǔ)不明確，具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的新品種缺乏等問(wèn)題突出，制約了圓葉桉產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。本研究利用多態(tài)性高的15個(gè)SSR標(biāo)記[16-17]，對(duì)國(guó)內(nèi)市場(chǎng)銷售及不同來(lái)源的 59株圓葉桉進(jìn)行遺傳多樣性分析，以推動(dòng)圓葉桉種質(zhì)資源的評(píng)價(jià)和利用。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料及DNA提取

參試材料為國(guó)內(nèi)在售和來(lái)自澳大利亞林木種子中心種子繁育的圓葉桉花卉，7個(gè)來(lái)源共59株（表1）。采集葉片后-80 ℃下保存，DNA提取采用改良CTAB法[18]，使用NanoDrop 2000（Thermo Scientific，美國(guó)）對(duì)DNA的濃度和純度進(jìn)行檢測(cè)。

1.2 SSR分型與多態(tài)性檢測(cè)

利用桉樹(shù)中已開(kāi)發(fā)的15個(gè)多態(tài)性高的SSR標(biāo)記[16-17]，對(duì)59株圓葉桉樣品進(jìn)行PCR擴(kuò)增和多態(tài)性檢測(cè)。引物由上海生工公司合成，前向引物5′端采用FAM、HEX、TAM或ROX進(jìn)行熒光修飾。PCR采用10 μL體系，包括：10×Buffer 1 μL、25 μmol/L dNTPs、0.5 μmol/L前向引物和后向引物、0.1 U Taq聚合酶（申能博彩生物科技有限公司）及5 ng DNA模版，ddH2O補(bǔ)齊至10 μL。PCR擴(kuò)增程序?yàn)椋?4 ℃預(yù)變性4 min；35個(gè)循環(huán)：94 ℃變性30 s、60 ℃退火30 s、72 ℃延伸30 s；最終72 ℃延伸10 min，4 ℃保存。取1 μLPCR產(chǎn)物、9.34 μL超純甲酰胺（Applied Biosystems，美國(guó)）、0.16 μL GeneScan 500-LIZ內(nèi)標(biāo)（Applied Biosystems，美國(guó)）混勻，95 ℃變性5 min，迅速冰浴冷卻，利用ABI 3130XL測(cè)序儀（Applied Biosystems，美國(guó)）進(jìn)行SSR標(biāo)記分型，按照儀器說(shuō)明進(jìn)行上機(jī)操作。

1.3 數(shù)據(jù)分析

利用GeneMapper 4.0軟件統(tǒng)計(jì)樣品的熒光檢測(cè)結(jié)果；使用PowerMarker 3.25軟件[19]計(jì)算等位片段數(shù)（NA）、有效等位片段數(shù)（NE）、多態(tài)性信息含量（PIC）和Nei’s遺傳距離；使用GenAlEx 6.5.1軟件[20]計(jì)算等位片段范圍（ASR）、觀測(cè)雜合度（HO）、期望雜合度（HE）、香農(nóng)信息指數(shù)（I）、主要等位基因頻率（MAF）、遺傳分化系數(shù)（Fst），進(jìn)行分子方差分析（AMOVA）；使用NTSYSpc2.1軟件進(jìn)行聚類分析并構(gòu)建遺傳聚類圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 SSR標(biāo)記的遺傳多樣性檢測(cè)

本研究提取的59株圓葉桉DNA的OD260/OD280在1.80～2.00之間，符合后續(xù)試驗(yàn)要求。利用15個(gè)SSR熒光標(biāo)記（表2）對(duì)59株圓葉桉進(jìn)行了PCR擴(kuò)增，并利用毛細(xì)管電泳法進(jìn)行分型檢測(cè)，分型結(jié)果帶型清晰，易于片段統(tǒng)計(jì)。圖1為多態(tài)性高的2個(gè)SSR（EUCeSSR204和EUCeSSR1128）標(biāo)記對(duì)5個(gè)待測(cè)樣品（A01、HNQS1、HNYXFF3、SHDSL1、YN01）的分型結(jié)果。15個(gè)SSR標(biāo)記共檢測(cè)到83個(gè)等位片段（Number of Alleles，NA），平均每個(gè)標(biāo)記的等位片段數(shù)為5.5個(gè)，EUCeSSR176和EUCeSSR1044擴(kuò)增出的NA最多，為10個(gè)，EUCeSSR263擴(kuò)增出的NA最少，僅2個(gè)。平均每個(gè)標(biāo)記的有效等位片段數(shù)（Effective number of alleles，NE）為2.4個(gè)，等位片段范圍（Allele size range，ASR）為128～464 bp。觀測(cè)雜合度（Observed heterozygosity，Ho）的變化范圍為0.034（EUCeSSR263）～0.695（EUCeSSR204），平均值為0.401。期望雜合度（Expected Heterozygosity，HE）的變化范圍為0.033～0.801（標(biāo)記同HO），平均值為0.491，為中等水平。15個(gè)標(biāo)記的多態(tài)性信息含量（Polymorphic Information Content，PIC）存在差異，變化范圍為0.033～0.776，平均值為0.455，按PIC≥0.5為高多態(tài)性標(biāo)記，0.25≤PIC<0.5為中度多態(tài)性標(biāo)記，PIC<0.25為低多態(tài)性標(biāo)記的標(biāo)準(zhǔn)[21]，15個(gè)標(biāo)記中有7個(gè)高多態(tài)性標(biāo)記、5個(gè)中度多態(tài)性標(biāo)記和3個(gè)低多態(tài)性標(biāo)記。主要等位片段頻率（Major allele frequency，MAF）的變化范圍為0.331～0.983，平均值為0.644（表2）。不同SSR標(biāo)記的遺傳分化系數(shù)（Fst）差異較明顯，變化范圍為0.061（EUCeSSR1044）～0.508（EUCeSSR475），平均值為0.208，即有20.8%的變異存在于不同群體間，近79%的變異存在于圓葉桉個(gè)體間，說(shuō)明各群體間的遺傳分化程度較低。

2.2 圓葉桉個(gè)體間遺傳關(guān)系聚類分析

基于15個(gè)SSR標(biāo)記分型檢測(cè)數(shù)據(jù)計(jì)算59株圓葉桉的遺傳距離，采用不加權(quán)算術(shù)平均組對(duì)方法（Unweighted pair-group method using arithmetic average，UPGMA）進(jìn)行聚類分析，構(gòu)建遺傳聚類圖（圖2）。59株圓葉桉樣品的遺傳距離的范圍為0.033（YN02和YN11）～0.698（A10和HNQS3），平均為0.377，表明不同來(lái)源的圓葉桉之間存在著一定差異。利用15個(gè)SSR標(biāo)記可對(duì)59株圓葉桉進(jìn)行有效的鑒定，表明當(dāng)前國(guó)內(nèi)圓葉桉花卉均采用種子種植的方式進(jìn)行繁育。

聚類分析結(jié)果表明，在遺傳距離為0.56時(shí)，59株圓葉桉可分為2個(gè)亞組，來(lái)自澳大利亞林木種子中心、云南佳藝園藝、云南綠夢(mèng)花卉、湖南丘山園藝、上海大森林園藝、湖南衣想菲菲的全部圓葉桉和來(lái)自福建宏優(yōu)家居的SHH1被分在第一亞組，來(lái)自福建宏優(yōu)家居的4株圓葉桉（SHH2、SHH3、SHH4、SHH5）被分在第二亞組。這與圓葉桉天然分布于澳大利亞?wèn)|南部的新南威爾士州和塔斯馬尼亞州的溫帶地區(qū)2個(gè)種源的分類結(jié)果一致[1]。59株圓葉桉品種具有一定的遺傳多樣性，可劃分為2個(gè)群體，但親緣關(guān)系較近，遺傳背景相對(duì)單一。

2.3 圓葉桉群體間遺傳多樣性檢測(cè)

對(duì)7個(gè)不同來(lái)源的圓葉桉群體進(jìn)行遺傳多樣性檢測(cè)（表3），NA、NE、I、HO、HE參數(shù)均有差異，但相差均不大，HO與HE差距很小。其中來(lái)自云南佳藝園藝的圓葉桉NE、I、HE參數(shù)值最高，分別為2.4、0.890、0.506，遺傳多樣性豐富；來(lái)自澳大利亞林木種子中心的圓葉桉NA最高，為3.3；來(lái)自湖南丘山園藝的圓葉桉HO最高，為0.560。來(lái)自湖南衣想菲菲的圓葉桉參數(shù)值均為最低，說(shuō)明該圓葉桉群體遺傳多樣性較低。

利用15個(gè)SSR標(biāo)記，對(duì)7個(gè)不同來(lái)源的圓葉桉群體進(jìn)行遺傳多樣性分析（表4），7個(gè)群體的遺傳一致度為0.533～0.987，遺傳一致度最小（0.533）的兩個(gè)群體為來(lái)自福建宏優(yōu)家居（R5）和云南佳藝園藝（R6）的圓葉桉；遺傳一致度最大（0.987）的為來(lái)自云南佳藝園藝（R6）和云南綠夢(mèng)花卉（R7）的圓葉桉，結(jié)合聚類分析結(jié)果（圖3），推測(cè)R6和R7圓葉桉為來(lái)源相同的圓葉桉品種。7個(gè)群體間的遺傳距離為0.013～0.628，平均遺傳距離為0.262，表明不同來(lái)源的圓葉桉群體間遺傳差異較小。

根據(jù)7個(gè)群體間的遺傳相似性按照UPAMA方法進(jìn)行聚類分析，構(gòu)建遺傳聚類圖（圖3）。當(dāng)遺傳相似性系數(shù)為0.74時(shí)，7個(gè)群體被分為兩大類群，第一類群為來(lái)自澳大利亞林木種子中心（R1）、湖南丘山園藝（R2）、湖南衣想菲菲（R3）、上海大森林（R4）、云南佳藝園藝（R6）、云南綠夢(mèng)花卉（R7）的圓葉桉；第二類群為來(lái)自福建宏優(yōu)家居（R5）的圓葉桉，該結(jié)果與圓葉桉個(gè)體間聚類分析的結(jié)果一致。分子方差分析（Analysis of molecular variances，AMOVA）結(jié)果（表5）表明群體間變異占總方差分量的19%，與Fst遺傳分化結(jié)果（20.8%）基本一致。個(gè)體間變異是方差分量的主要來(lái)源，占78%，群體內(nèi)個(gè)體間變異最少，占總方差分量的3%。

3 結(jié)論與討論

3.1 討 論

遺傳多樣性一般是物種內(nèi)部、群體間或種群內(nèi)部個(gè)體間遺傳變異的總和，林木遺傳多樣性的研究可以用于輔助改良品種、保存種質(zhì)資源以及解釋不同群體間的相關(guān)性等，是林木遺傳改良的基礎(chǔ)[22]。遺傳多樣性分析可通過(guò)形態(tài)學(xué)標(biāo)記[23]和分子標(biāo)記[24]等手段，從不同角度研究和分析林木的遺傳變異，然而可直接用于鑒別的形態(tài)學(xué)標(biāo)記數(shù)量有限，且多數(shù)形態(tài)學(xué)標(biāo)記還受到環(huán)境和基因互作等影響，判別過(guò)程較為困難。隨著分子標(biāo)記技術(shù)的發(fā)展，SSR技術(shù)成為研究植物遺傳多樣性分析、品種鑒定、親緣關(guān)系分析的重要工具。經(jīng)篩選，本研究所用的SSR標(biāo)記條帶干凈、整齊，便于分型，可用于遺傳多樣性分析，相關(guān)標(biāo)記可用于今后圓葉桉品種和無(wú)性系的鑒定。所選標(biāo)記在圓葉桉中均能較好地?cái)U(kuò)增，且表現(xiàn)出較高的多態(tài)性（中、高多態(tài)性標(biāo)記占總標(biāo)記的80%），表明SSR標(biāo)記在不同桉樹(shù)樹(shù)種中呈現(xiàn)較高的通用性，可被較好地應(yīng)用于種間遺傳多樣性分析、親緣關(guān)系鑒定等相關(guān)研究。

利用分子標(biāo)記開(kāi)展圓葉桉群體遺傳多樣性分析的研究尚未見(jiàn)研究報(bào)道。本研究中的15個(gè)SSR標(biāo)記，9個(gè)在巨桉中的PIC均值為0.529，HO均值為0.403[16]；6個(gè)在尾葉桉和細(xì)葉桉中的PIC均值為0.657，HO均值為0.451[17]，均為高多態(tài)性標(biāo)記。圓葉桉中的PIC均值為0.455，HO均值為0.401，HE均值為0.491，這與上述2個(gè)樹(shù)種的多樣性水平類似，但PIC均值略低，說(shuō)明相同的標(biāo)記在不同的樹(shù)種中的遺傳多樣性存在差異。前人利用等位酶分析法在4個(gè)圓葉桉群體中開(kāi)展了遺傳多樣性分析研究，但多態(tài)性較低，其中PIC均值為0.27，HE為0.07，HO為0.05[25]，說(shuō)明不同的研究方法對(duì)群體多態(tài)性水平檢測(cè)結(jié)果存在差異，當(dāng)然這也與參試材料的來(lái)源和數(shù)量有關(guān)?；赟SR標(biāo)記的圓葉桉遺傳多樣性水平普遍小于粗皮桉（PIC=0.718，HO=0.515，HE=0.722）[8]、大花序桉（PIC=0.771，HO=0.670，HE=0.804）[9]和巨桉（PIC=0.755，HO=0.631，HE=0.777）[13]等桉樹(shù)，這可能與圓葉桉自然分布窄以及觀賞性圓葉桉的人為選擇有關(guān)。本研究中，7個(gè)不同來(lái)源的圓葉桉群體遺傳多樣性參數(shù)存在差異，其中云南佳藝園藝圓葉桉群體的NE、I、HE參數(shù)值最高，NA和HO參數(shù)值高于平均值，該群體遺傳多樣性較為豐富；湖南衣想菲菲圓葉桉群體的遺傳多樣性較低，NA、NE、HO、HE和I等參數(shù)值最低。相關(guān)研究認(rèn)為，更多的標(biāo)記能使品種間鑒定結(jié)果更加準(zhǔn)確可靠，選擇較多的個(gè)體數(shù)量更能有效反映群體多樣性的水平[10]。本研究雖選擇了遺傳多樣性高的SSR標(biāo)記對(duì)來(lái)自澳大利亞林木種子中心種子繁育和國(guó)內(nèi)在售的圓葉桉花卉進(jìn)行基因分型，但并未進(jìn)行大規(guī)模的標(biāo)記篩選。在今后的研究中，可適當(dāng)增加或選擇雜合度更高的SSR標(biāo)記，對(duì)不同種源/家系的圓葉桉開(kāi)展遺傳多樣性的系統(tǒng)分析。

圓葉桉天然分布于澳大利亞?wèn)|南部的新南威爾士州和塔斯馬尼亞州[1]，兩州之間間隔巴斯海峽，存在一定程度的地理隔離，但地理位置上相距較近。本研究中的7個(gè)圓葉桉群體可分為2個(gè)亞組，其遺傳背景相對(duì)單一，群體分化水平較低，這與圓葉桉2個(gè)種源的天然分布情況一致。AMOVA分析結(jié)果表明，圓葉桉群體間變異占總方差分量的19%，高于大花序桉的3%[10]、細(xì)葉桉的1.2%，個(gè)體間變異占總方差分量的81%。圓葉桉群體間變異水平雖高于其他桉樹(shù)樹(shù)種，但主要的遺傳變異仍來(lái)源于個(gè)體間，這表明7個(gè)不同來(lái)源圓葉桉的分布范圍和氣候類型并未引起明顯的遺傳分化。在今后圓葉桉優(yōu)良性狀的遺傳改良研究中，可以充分利用個(gè)體間的遺傳變異。當(dāng)前，國(guó)內(nèi)市場(chǎng)主要種植‘藍(lán)寶貝’和‘銀水滴’等品種，隨著圓葉桉市場(chǎng)規(guī)模的擴(kuò)大，栽培中種植混亂、苗期優(yōu)良品種表型難以分辨，利用本研究選用的SSR分子標(biāo)記，亦可用于圓葉桉品種的鑒定工作。商品化圓葉桉群體聚類分析結(jié)果證實(shí)了國(guó)內(nèi)圓葉桉種苗均為有性繁育，種子繁育的實(shí)生苗在葉形、葉色等方面存在遺傳分化，一定程度上影響了花枝材的質(zhì)量等級(jí)。當(dāng)前國(guó)內(nèi)仍缺乏具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的圓葉桉花卉新品種（http：//cnpvp.flashfox. tech/），在今后的研究和生產(chǎn)中應(yīng)加強(qiáng)優(yōu)良品種選育，通過(guò)大范圍的引種試驗(yàn)探索適應(yīng)夏雨型氣候區(qū)的種植模式，挖掘適生范圍更廣的新種質(zhì)，以擴(kuò)大圓葉桉在我國(guó)的種植范圍；積極摸索圓葉桉的組培、扦插等無(wú)性擴(kuò)繁方法，以期獲得表現(xiàn)優(yōu)良、性狀穩(wěn)定、適生范圍廣泛的圓葉桉花枝材。

3.2 結(jié) 論

本研究利用SSR分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)59株圓葉桉種質(zhì)資源進(jìn)行遺傳多樣性分析和聚類分析，所用的15個(gè)SSR標(biāo)記在圓葉桉中均能穩(wěn)定擴(kuò)增，PIC均值為0.455，遺傳多態(tài)性較高，可用于圓葉桉的遺傳分化研究。圓葉桉個(gè)體間基因分型結(jié)果表明，國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上常見(jiàn)的圓葉桉均為有性繁殖的實(shí)生苗，聚類分析將其分為2個(gè)亞組，與圓葉桉天然分布情況一致。圓葉桉群體間的遺傳分化程度較小，81%的遺傳變異存在于個(gè)體間，為遺傳變異的主要來(lái)源。本研究為圓葉桉種質(zhì)資源保護(hù)和評(píng)價(jià)、親緣關(guān)系分析、品種分子鑒定等提供了理論基礎(chǔ)。

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[本文編校：吳 彬]