電針對(duì)紫杉醇誘導(dǎo)大鼠神經(jīng)病理性疼痛的影響

摘要：目的 觀察電針（EA）對(duì)紫杉醇誘導(dǎo)神經(jīng)病理性疼痛大鼠脊髓背角NKCC1、KCC2表達(dá)和小膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響及其可能機(jī)制。方法 將48只雄性SD大鼠隨機(jī)分為溶媒組（Vehicle組）、紫杉醇組（PTX組）、紫杉醇+電針組（PTX+EA組）、紫杉醇+假電針組（PTX+Sham EA組），每組12只。采用腹腔注射PTX的方法建立PTX誘導(dǎo)的神經(jīng)病理性疼痛大鼠動(dòng)物模型，建模完成后，PTX+EA組給予“足三里”、“陽陵泉”電針刺激，連續(xù)7 d。于紫杉醇注射前2 d和注射后第1、3、5、7、14、21天進(jìn)行機(jī)械撤足閾值和熱縮足潛伏期痛行為學(xué)測(cè)試。利用免疫熒光染色技術(shù)和Western blot技術(shù)檢測(cè)脊髓背角組織中鈉鉀氯聯(lián)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1（NKCC1）、鉀氯聯(lián)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2（KCC2）和小膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物離子鈣結(jié)合銜接分子1（Iba1）表達(dá)的變化。結(jié)果 與Vehicle組比較，PTX組大鼠出現(xiàn)雙后足機(jī)械和熱痛覺過敏，脊髓背角組織中NKCC1表達(dá)升高和活化的小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)增加。與PTX組比較，PTX+EA組大鼠在第14、21天的機(jī)械和熱痛覺過敏得到顯著改善，脊髓背角組織中NKCC1和Iba1表達(dá)量降低，4組間KCC2表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 電針可有效緩解紫杉醇誘導(dǎo)的神經(jīng)病理性疼痛，其機(jī)制可能與抑制大鼠脊髓背角組織中NKCC1表達(dá)和小膠質(zhì)細(xì)胞活化有關(guān)。

關(guān)鍵詞：電針；紫杉醇；神經(jīng)痛；脊髓背角；小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞；鈉鉀氯化物協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)子；神經(jīng)病理性疼痛

中圖分類號(hào)：R245 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A DOI：10.11958/20240609

The effect of electroacupuncture on paclitaxel-induced neuropathic pain in rats

OUYANG Jie， ZHAO Haiqian， KONG Yun， NIU Qin， CHEN Ying， SI Yongyu△

Department of Anesthesiology， the Second Affiliated Hospital of Kunming Medical University， Kunming 650504， China

△Corresponding Author E-mail： siyongyu@kmmu.edu.cn

Abstract： Objective To observe the effect of electroacupuncture （EA） on the expression of NKCC1， KCC2 and activation of microglia in spinal dorsal horn of paclitaxel （PTX）-induced neuropathic pain rats and its possible mechanism. Methods Male SD rats were randomly divided into the vehicle group （vehicle）， the PTX group， the PTX + EA group and the PTX + sham EA group， with 12 rats in each group. The rat model of PTX-induced neuropathic pain was established by intraperitoneal injection of PTX. After modeling， EA was applied to \"Zusanli\" and \"Yanglingquan\" for 7 days in the PTX + EA group. Paw withdrawal threshold and paw withdrawal latency were tested at 2 days before and 1， 3， 5， 7， 14 and 21 days after PTX injection. Immunofluorescence and Western blot assay were used to detect expression levels of sodium-potassium-chloride cotransporter 1 （NKCC1）， potassium-chloride cotransporters 2 （KCC2） and" microglia markers - ionized calcium binding adapter molecule 1 （Iba1） in spinal dorsal horn. Results Compared with the vehicle group， mechanical and thermal hyperalgesia of both hind feet were found in the PTX group， and the expression of NKCC1 and the number of activated microglia in dorsal horn tissue of spinal cord were increased. Compared with the PTX group， mechanical and thermal hyperalgesia were significantly improved in the PTX+EA group at day 14 and 21， and the expression levels of NKCC1 and Iba1 in dorsal horn tissue of spinal cord were decreased. There was no significant difference in KCC2 expression between the four groups. Conclusion Electroacupuncture can effectively relieve paclitaxol-induced neuropathic pain， which may be related to the inhibition of NKCC1 expression and microglia activation in spinal dorsal horn of rats.

Key words： electroacupuncture; paclitaxel; neuralgia; spinal cord dorsal horn; microglia; sodium-potassium-chloride symporters; neuropathic pain

紫杉醇（paclitaxel，PTX）是被廣泛應(yīng)用的一線化療藥物，周圍神經(jīng)病變是紫杉醇化療中常見的不良反應(yīng)［1］，表現(xiàn)為肢端呈手套襪子狀麻木、四肢感覺喪失和肌肉疼痛等神經(jīng)病理性疼痛（neuropathic pain，NP）?，F(xiàn)有研究表明，電針（electroacupuncture，EA）可以緩解包括紫杉醇誘導(dǎo)的NP在內(nèi)的多種類型的病理性疼痛［2-4］，但其具體機(jī)制尚不清楚。脊髓背角的小膠質(zhì)細(xì)胞激活，鈉鉀氯聯(lián)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1（sodium-potassium-chloride co-transporter 1，NKCC1）和鉀氯聯(lián)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2（potassium-chloride cotransporters 2，KCC2）的功能失調(diào)導(dǎo)致氯離子穩(wěn)態(tài)改變，被認(rèn)為是NP發(fā)病的關(guān)鍵因素［5-6］。然而，電針能否通過調(diào)控小膠質(zhì)細(xì)胞活化及NKCC1/KCC2緩解紫杉醇誘導(dǎo)的NP尚鮮見報(bào)道。本研究建立了紫杉醇誘導(dǎo)的NP大鼠模型，觀察針刺“足三里（ST36）”和“陽陵泉（GB34）”穴位對(duì)模型大鼠疼痛行為學(xué)的改變，檢測(cè)脊髓背角小膠質(zhì)細(xì)胞活化狀態(tài)與NKCC1/KCC2表達(dá)的變化，探討電針改善紫杉醇誘導(dǎo)的NP的可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 SPF級(jí)雄性SD大鼠48只，體質(zhì)量180～200 g，購于昆明醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（滇）K2020-0004。大鼠分籠飼養(yǎng)，12 h/12 h明暗交替，自由攝食攝水。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。利用隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠分為4組：溶媒組（Vehicle組）、紫杉醇組（PTX組）、紫杉醇+電針組（PTX+EA組）、紫杉醇+假電針組（PTX+Sham EA組），每組12只。本實(shí)驗(yàn)過程嚴(yán)格遵守《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見》。所有動(dòng)物飼養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)操作程序已經(jīng)通過昆明醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（倫理批號(hào)：kmmu20220723）。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器 紫杉醇（上海麥克林生物科技有限公司）；異氟醚（深圳瑞沃德生命科技有限公司）；聚氧乙烯蓖麻油（山東優(yōu)索化工科技有限公司）；無水乙醇（天津致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司）；RIPA裂解液、BCA蛋白定量檢測(cè)試劑盒（武漢賽維爾生物科技有限公司）；4%多聚甲醛溶液、超敏ECL化學(xué)發(fā)光液、通用型抗體稀釋液、山羊血清、脫脂奶粉、TBST緩沖液、PBS緩沖液、含DAPI的抗熒光淬滅封片劑（合肥白鯊生物科技有限公司）；PAGE彩色快速凝膠制備試劑盒、SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液（蘇州優(yōu)逸蘭迪生物科技有限公司）。一抗：兔源NKCC1、兔源離子鈣結(jié)合銜接分子1（Iba1）、小鼠源GAPDH（武漢三鷹生物技術(shù)有限公司），小鼠源KCC2（美國CST公司）。二抗：HRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG、HRP標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG、Elab Fluor 488山羊抗兔IgG、Elab Fluor 594山羊抗兔和山羊抗小鼠IgG（武漢伊萊瑞特生物科技有限公司）。電針儀、一次性使用無菌電針（蘇州醫(yī)療用品廠）；電泳及成像系統(tǒng)（美國Bio-Rad公司）；切片機(jī)（美國Leica公司）；共聚焦熒光顯微鏡（日本Olympus公司）；機(jī)械痛測(cè)試用Von Frey纖維絲（美國Ugo basile公司）；熱痛刺激儀（成都泰盟有限公司）；小動(dòng)物麻醉機(jī)（深圳瑞沃德生命科技有限公司）。

1.3 造模方法 適應(yīng)性飼養(yǎng)后，參照Polomano等［7］的方法，PTX組于第0、2、4、6天腹腔注射紫杉醇溶液（2 mg/kg），總量達(dá)到8 mg/kg，以此構(gòu)建NP模型。Vehicle組在相同時(shí)間點(diǎn)腹腔注射等體積的溶劑。紫杉醇溶液配制方法如下：采用聚氧乙烯蓖麻油和無水乙醇等體積混合將紫杉醇溶解至5 g/L后，再用0.9%氯化鈉注射液稀釋至1 g/L。溶劑按照聚氧乙烯蓖麻油∶無水乙醇∶0.9%氯化鈉 = 1∶1∶8體積配制。大鼠機(jī)械撤足閾值下降至基線的50%或以下為建模成功。

1.4 干預(yù)手段 PTX+EA組大鼠于第8天開始電針治療，持續(xù)7 d，參照文獻(xiàn)［8］穴取“足三里”和“陽陵泉”。大鼠經(jīng)0.5%～1.5%異氟醚吸入淺麻醉后固定并剃毛消毒，然后使用一次性無菌針垂直進(jìn)針2～3 mm，連接神經(jīng)刺激儀，選用2 Hz/100 Hz交替波脈沖電流連續(xù)刺激，刺激強(qiáng)度為1.5 mA，針刺30 min/次。Vehicle組、PTX組給予麻醉和固定相同的時(shí)長，PTX+Sham EA組予以麻醉固定以及針刺，但不通電刺激。實(shí)驗(yàn)流程見圖1。

1.5 觀察指標(biāo)及測(cè)試方法 于紫杉醇注射前2 d和注射后第1、3、5、7、14、21天進(jìn)行痛行為學(xué)測(cè)試。機(jī)械撤足閾值參照Chaplan等［9］報(bào)道的“Up-Down”法進(jìn)行測(cè)定，基線測(cè)試開始前3 d對(duì)大鼠進(jìn)行適應(yīng)性訓(xùn)練。正式測(cè)試時(shí)將大鼠置于測(cè)試網(wǎng)上適應(yīng)30 min。從2 g開始，纖毛通過測(cè)試網(wǎng)眼垂直刺向大鼠后爪的足底皮膚，用力至其稍彎成S形，保持3～5 s，觀察大鼠反應(yīng)。大鼠在刺激時(shí)間內(nèi)出現(xiàn)舔足或縮足反應(yīng)記為陽性反應(yīng)；若無，則記為陰性。陽性使用相鄰遞減力量的纖毛刺激，陰性則遞增。結(jié)束測(cè)試的原則為：（1）使用至最大或最小刺激強(qiáng)度時(shí)仍然沒有出現(xiàn)陽性反應(yīng)。（2）出現(xiàn)陽性反應(yīng)后，依據(jù)測(cè)量規(guī)則測(cè)3次。熱縮足潛伏期：按Hargreaves等［10］報(bào)道的方法將大鼠置于測(cè)試玻璃板上適應(yīng)環(huán)境30 min后開始測(cè)試。為避免熱灼傷，設(shè)置刺激上限為20 s。在測(cè)量基礎(chǔ)值時(shí)調(diào)整熱輻射刺激強(qiáng)度，使熱縮足潛伏期基礎(chǔ)值維持在9～12 s，記錄此時(shí)的輻射強(qiáng)度，接下來的測(cè)試均固定使用此強(qiáng)度進(jìn)行。測(cè)試時(shí)調(diào)整測(cè)試玻璃板下的輻射光源，輻射點(diǎn)對(duì)準(zhǔn)大鼠后足掌心后啟動(dòng)，當(dāng)大鼠出現(xiàn)縮足反應(yīng)后，輻射自動(dòng)停止，記錄此時(shí)的時(shí)間。每只大鼠每側(cè)足測(cè)量3次后取平均值，每次至少間隔5 min。

1.6 脊髓組織取材 大鼠置于小動(dòng)物麻醉機(jī)與麻醉揮發(fā)罐相連接的麻醉誘導(dǎo)盒內(nèi)，保持氣體流量2 L/min，維持揮發(fā)罐異氟醚濃度為4%～5%，利用吸入過量異氟醚的麻醉方法處死大鼠。利用隨機(jī)數(shù)字表法每組抽取5只大鼠，剪開胸腔，經(jīng)主動(dòng)脈灌注PBS溶液約200 mL后灌注4%多聚甲醛約300 mL固定，完整取出大鼠腰膨大部位的脊髓組織，放入30%蔗糖溶液脫水備用。每組中剩下的7只大鼠，經(jīng)主動(dòng)脈灌注PBS溶液約400 mL后取出腰膨大部位的脊髓組織，液氮速凍后放入-80 ℃冰箱備用。

1.7 免疫熒光染色評(píng)估脊髓背角組織中NKCC1、KCC2、Iba1表達(dá)變化 脫水完畢的組織，通過包埋、切片（厚度10 μm），切片收集于0.01 mol/L的PBS液中，挑選適宜數(shù)量的脊髓切片轉(zhuǎn)移至盛有PBST液的24孔板中，PBST洗片3次，每次5 min后吸干液體，10%山羊血清封閉1 h、4 ℃孵一抗NKCC1（1∶200）、KCC2（1∶150）、Iba1（1∶200）過夜，PBST洗片3次，每次5 min，室溫避光孵育熒光二抗（1∶200）2 h，用PBS液洗滌3遍后，用含DAPI的抗熒光淬滅的封片劑進(jìn)行封片。最后于共聚焦顯微鏡下拍照，用Image J軟件分析脊髓背角陽性表達(dá)百分比。

1.8 Western blot檢測(cè)脊髓背角組織中NKCC1、KCC2、Iba1蛋白表達(dá)變化 于腰膨大部位的脊髓背角組織加入300 μL的RIPA裂解液，勻漿后離心，BCA法測(cè)定蛋白濃度。電泳時(shí)，上樣蛋白總量為40 μg，轉(zhuǎn)膜，封閉后，4 ℃一抗NKCC1（1∶1 000）、KCC2（1∶1 000）、Iba1（1∶1 000）孵育過夜。經(jīng)TBST洗滌后室溫孵育二抗（1∶5 000）2 h，TBST洗滌后用ECL顯影液顯影拍照，用Image J軟件分析條帶灰度值。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 用GraphPad Prism 10.0繪圖和統(tǒng)計(jì)分析，所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（[x] ±s）表示。大鼠體質(zhì)量、行為學(xué)測(cè)試的結(jié)果進(jìn)行重復(fù)測(cè)量資料的雙因素方差分析，Western blot和免疫熒光檢測(cè)結(jié)果采用單因素方差分析，組間多重比較用Tukey檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠體質(zhì)量變化 隨著飼養(yǎng)時(shí)間的延長，各組大鼠的體質(zhì)量均呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，相同時(shí)間點(diǎn)的體質(zhì)量差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見圖2。

2.2 大鼠機(jī)械撤足閾值變化 各組大鼠機(jī)械撤足閾值在紫杉醇注射前2 d和注射后第1天差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與Vehicle組相比，PTX組、PTX+Sham EA組大鼠的機(jī)械撤足閾值在第3、5、7、14、21天降低（P＜0.05），PTX+EA組在第3、5、7、14天降低（P＜0.05）。與PTX組相比，PTX+EA組大鼠的機(jī)械撤足閾值在第14和21天時(shí)升高（P＜0.05），見表1。

2.3 大鼠熱縮足潛伏期變化 各組大鼠熱縮足潛伏期在紫杉醇注射前2 d和注射后第1天差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與Vehicle組相比，PTX組、PTX+Sham EA組大鼠的熱縮組潛伏期在第3、5、7、14、21天均降低（P＜0.05），PTX+EA組在第3、5、7天降低（P＜0.05）。與PTX組相比，PTX+EA組大鼠的熱縮足潛伏期在第14和21天時(shí)增加（P＜0.05），見表2。

2.4 大鼠脊髓背角組織中NKCC1、KCC2、Iba1蛋白表達(dá)量變化 Western blot結(jié)果表明，與Vehicle組比較，PTX組、PTX+Shane EA組NKCC1和Iba1蛋白表達(dá)量均顯著增加，與PTX組比較，PTX+EA組NKCC1和Iba1蛋白表達(dá)量均明顯下調(diào)（均P＜0.05），4組間KCC2蛋白表達(dá)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見圖3、表3。

2.5 大鼠脊髓背角組織中NKCC1、KCC2、Iba1陽性染色面積占比變化 免疫熒光染色結(jié)果表明，與Vehicle組比較，PTX組、PTX+Sham EA組NKCC1和Iba1陽性染色面積占比顯著增加；與PTX組比較，PTX+EA組NKCC1和Iba1陽性染色面積占比明顯下調(diào)（均P＜0.05），4組間KCC2陽性染色面積占比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表4、圖4。

3 討論

目前紫杉醇誘導(dǎo)的NP發(fā)病機(jī)制尚不清楚，西醫(yī)臨床治療以緩解疼痛癥狀為主，但長期服用易出現(xiàn)不良反應(yīng)［11］。中醫(yī)針刺緩解NP的效果得到肯定而且有良好的應(yīng)用前景［12］。在既往研究中，不同類型的NP多以下肢近端取穴為主，表明針刺可以通過調(diào)控神經(jīng)遞質(zhì)及受體，調(diào)控膠質(zhì)細(xì)胞和細(xì)胞因子等中樞和外周機(jī)制，起到緩解NP的作用［13-14］。研究表明，針刺足三里可以通過內(nèi)源性阿片系統(tǒng)有效緩解奧沙利鉑誘導(dǎo)的NP［15］。本研究采用大鼠腹腔注射紫杉醇以建立NP動(dòng)物模型，建模成功后選取足三里、陽陵行持續(xù)1周的電刺激，與PTX組對(duì)比，PTX+EA組大鼠機(jī)械撤足閾值和熱縮足潛伏期顯著提高，表明電針可以有效緩解紫杉醇誘導(dǎo)的NP。

小膠質(zhì)細(xì)胞相當(dāng)于腦和脊髓內(nèi)的“巨噬細(xì)胞”，但過度的激活會(huì)引發(fā)神經(jīng)毒性［16-17］。小膠質(zhì)細(xì)胞是神經(jīng)病理性疼痛發(fā)生和維持的關(guān)鍵細(xì)胞類型之一［18］。其對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷反應(yīng)靈敏，能迅速增殖、活化，釋放大量細(xì)胞因子和多種細(xì)胞毒性物質(zhì)，誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞中受體及相關(guān)信號(hào)通路功能改變，加劇神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)生和維持，甚至在沒有神經(jīng)損傷的正常生理狀態(tài)下，誘導(dǎo)活化小膠質(zhì)細(xì)胞也會(huì)出現(xiàn)痛覺過敏［19］。在本研究中，紫杉醇誘導(dǎo)的NP大鼠脊髓背角的小膠質(zhì)細(xì)胞活化增加，電針刺激減少了NP大鼠脊髓背角的小膠質(zhì)細(xì)胞的活化，說明電針緩解紫杉醇誘導(dǎo)的NP與其抑制了小膠質(zhì)細(xì)胞的增殖和活化有關(guān)。此外，研究發(fā)現(xiàn)小膠質(zhì)細(xì)胞可以通過BDNF-TrkB-KCC2通路改變神經(jīng)元氯離子穩(wěn)態(tài)，從而導(dǎo)致脊髓背角γ-氨基丁酸（GABA）能神經(jīng)元去抑制誘發(fā)痛覺超敏［20］。NKCC1和KCC2是主要的陽離子-氯離子共轉(zhuǎn)運(yùn)體，NKCC1將氯離子運(yùn)至胞內(nèi)，提高胞內(nèi)氯離子濃度，KCC2則將氯離子運(yùn)至胞外，降低胞內(nèi)氯離子濃度，生理狀態(tài)下，NKCC1和KCC2處于動(dòng)態(tài)平衡，共同維持細(xì)胞膜內(nèi)外氯離子濃度梯度，使胞內(nèi)維持在一個(gè)低氯狀態(tài)，這也是γ-氨基丁酸A型受體（GABAAR）發(fā)揮抑制作用的基礎(chǔ)［21］。病理狀態(tài)下，NKCC1和KCC2功能或表達(dá)異常，導(dǎo)致胞內(nèi)氯離子異常升高，GABA能神經(jīng)元去抑制，GABAAR發(fā)揮興奮性效應(yīng)，介導(dǎo)病理性疼痛的產(chǎn)生。本研究結(jié)果表明，與Vehicle組相比，PTX組大鼠脊髓背角的NKCC1表達(dá)量增加，KCC2表達(dá)量沒有改變。同時(shí)，電針刺激可明顯逆轉(zhuǎn)紫杉醇誘導(dǎo)NKCC1的表達(dá)增加和小膠質(zhì)細(xì)胞活化。Chen等［22］研究證實(shí)，在紫杉醇誘導(dǎo)的NP大鼠模型中，脊髓背角NKCC1的蛋白水平顯著增加，KCC2表達(dá)量未發(fā)生變化，且抑制NKCC1可有效緩解紫杉醇誘導(dǎo)的大鼠痛覺過敏，這與本研究結(jié)果一致。

綜上，電針緩解了紫杉醇誘導(dǎo)的NP，其機(jī)制可能與其抑制脊髓背角小膠質(zhì)細(xì)胞活性，以及降低NKCC1表達(dá)量有關(guān)。本研究對(duì)電針在臨床上應(yīng)用以緩解化療藥物誘導(dǎo)的NP具有積極作用，但未探索小膠質(zhì)細(xì)胞活化與NKCC1和KCC2表達(dá)是否存在上下游調(diào)控關(guān)系，這也將是本課題組后續(xù)研究的重點(diǎn)內(nèi)容。

參考文獻(xiàn)

［1］ WANG C，CHEN S，JIANG W. Treatment for chemotherapy-induced peripheral neuropathy：a systematic review of randomized control trials［J］. Front Pharmacol，2022，13：1080888. doi：10.3389/fphar.2022.1080888.

［2］ WU Q，ZHENG Y，YU J，et al. Electroacupuncture alleviates neuropathic pain caused by SNL by promoting M2 microglia polarization through PD-L1［J］. Int Immunopharmacol，2023，123：110764. doi：10.1016/j.intimp.2023.110764.

［3］ MAO J J，LIOU K T，BASER R E，et al. Effectiveness of electroacupuncture or auricular acupuncture vs usual care for chronic musculoskeletal pain among cancer survivors：the peace randomized clinical trial［J］. JAMA Oncol，2021，7（5）：720-727. doi：10.1001/jamaoncol.2021.0310.

［4］ 張昆龍，薛白潔，肖瑋，等. 重復(fù)經(jīng)顱磁刺激對(duì)神經(jīng)病理性疼痛患者疼痛和情緒的影響［J］. 中國現(xiàn)代神經(jīng)疾病雜志，2022，22（11）：940-947. ZHAN K L，XUE B J，XIAO W，et al. Effects of repetitive transcranial magnetic stimulation on pain and emotion of patients with neuropathic pain［J］.Chin J Contemp Neurol Neurosurg，2022，22（11）：940-947. doi：10.3969/j.issn.1672-6731.2022.11.005.

［5］ SUN C，DENG J，MA Y，et al. The dual role of microglia in neuropathic pain after spinal cord injury：detrimental and protective effects［J］. Exp Neurol，2023，370：114570. doi：10.1016/j.expneurol.2023.114570.

［6］ TALIFU Z，PAN Y，GONG H，et al. The role of KCC2 and NKCC1 in spinal cord injury：from physiology to pathology［J］. Front Physiol，2022，13：1045520. doi：10.3389/fphys.2022.1045520.

［7］ POLOMANO R C，MANNES A J，CLARK U S，et al. A painful peripheral neuropathy in the rat produced by the chemotherapeutic drug，paclitaxel［J］. Pain，2001，94（3）：293-304. doi：10.1016/S0304-3959（01）00363-3.

［8］ 中國針灸學(xué)會(huì). 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物常用穴位名稱與定位第2部分：大鼠［J］. 針刺研究，2021，46（4）：351-352. China Association of Acupuncture-Moxibustion.Names and localization of commonly used acupoints in laboratory animals Part 2：Rats［J］. Acupuncture Research，2021，46（4）：351-352.

［9］ CHAPLAN S R，BACH F W，POGREL J W，et al. Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw［J］. J Neurosci Methods，1994，53（1）：55-63. doi：10.1016/0165-0270（94） 90144-9.

［10］ HARGREAVES K，DUBNER R，BROWN F，et al. A new and sensitive method for measuring thermal nociception in cutaneous hyperalgesia［J］. Pain，1988，32（1）：77-88. doi：10.1016/0304-3959（88）90026-7.

［11］ ODLING-SMEE L. Chronic pain can be treated - so why are millions still suffering？［J］. Nature，2023，615（7954）：782-786. doi：10.1038/d41586-023-00869-6.

［12］ HEO I，SHIN B C，CHO J H，et al. Multicentre randomised controlled clinical trial of electroacupuncture with usual care for patients with non-acute pain after back surgery［J］. Br J Anaesth，2021，126（3）：692-699. doi：10.1016/j.bja.2020.10.038.

［13］ WU J，HUA L，LIU W，et al. Electroacupuncture exerts analgesic effects by restoring hyperactivity via cannabinoid type 1 receptors in the anterior cingulate cortex in chronic inflammatory pain［J］. Mol Neurobiol，2024，61（5）：2949-2963. doi：10.1007/s12035-023-03760-7.

［14］ HSIAO I H，YEN C M，HSU H C，et al. Chemogenetics modulation of electroacupuncture analgesia in mice spared nerve injury-induced neuropathic pain through TRPV1 signaling pathway［J］. Int J Mol Sci，2024，25（3）：1771. doi：10.3390/ijms25031771.

［15］ MOON H J，LIM B S，LEE D I，et al. Effects of electroacupuncture on oxaliplatin-induced neuropathic cold hypersensitivity in rats［J］. J Physiol Sci，2014，64（2）：151-156. doi：10.1007/s12576-013-0297-0.

［16］ TANSLEY S，GU N，GUZMáN A U，et al. Microglia-mediated degradation of perineuronal nets promotes pain［J］. Science，2022，377（6601）：80-86. doi：10.1126/science.abl6773.

［17］ LONG D D，ZHANG Y Z，LIU A，et al. Microglia sustain anterior cingulate cortex neuronal hyperactivity in nicotine-induced pain［J］. J Neuroinflammation，2023，20（1）：81. doi：10.1186/s12974-023-02767-0.

［18］ JIANG B C，DING T Y，GUO C Y，et al. NFAT1 orchestrates spinal microglial transcription and promotes microglial proliferation via c-MYC contributing to nerve injury-induced neuropathic pain［J］. Adv Sci （Weinh），2022，9（27）：e2201300. doi：10.1002/advs.202201300.

［19］ 劉靖芷，史可梅，王曉娟，等. 背根神經(jīng)節(jié)脈沖射頻術(shù)對(duì)炎性痛大鼠痛閾及脊髓膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響［J］. 天津醫(yī)藥，2019，47（4）：400-403. LIU J Z，SHI K M， WANG X J，et al. Effects of pulsed radiofrequency to dorsal root ganglia on pain threshold and the activation of spinal gliocytes in inflammatory pain model rats［J］. Tianjin Med J，2019，47（4）：400-403. doi：10.11958/20181158.

［20］ HU Z，YU X，CHEN P，et al. BDNF-TrkB signaling pathway-mediated microglial activation induces neuronal KCC2 downregulation contributing to dynamic allodynia following spared nerve injury［J］. Mol Pain，2023，19：17448069231185439. doi：10.1177/17448069231185439.

［21］ BA X，RAN C，GUO W，et al. Three-day continuous oxytocin infusion attenuates thermal and mechanical nociception by rescuing neuronal chloride homeostasis via upregulation KCC2 expression and function［J］. Front Pharmacol，2022，13：845018. doi：10.3389/fphar.2022.845018.

［22］ CHEN S R，ZHU L，CHEN H，et al. Increased spinal cord Na?-K?-2Cl? cotransporter-1 （NKCC1） activity contributes to impairment of synaptic inhibition in paclitaxel-induced neuropathic pain［J］. J Biol Chem，2014，289（45）：31111-31120. doi：10.1074/jbc.M114.600320.

（2024-05-16收稿 2024-06-20修回）

（本文編輯 李國琪）