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    內(nèi)源激素對(duì)銀杏扦插生根率影響的研究

    2024-12-31 00:00:00潘雪雷邢友武
    安徽農(nóng)學(xué)通報(bào) 2024年13期
    關(guān)鍵詞:扦插繁殖內(nèi)源激素樹(shù)齡

    摘要 本文從影響銀杏扦插生根的內(nèi)部因子入手,研究了不同樹(shù)齡、不同采條時(shí)間的銀杏母樹(shù)當(dāng)年生枝條中內(nèi)源激素與枝條的扦插生根率關(guān)系。試驗(yàn)結(jié)果表明,枝條中吲哚乙酸(IAA)、玉米素(Z)和赤霉酸(GA3)的含量與銀杏枝條的扦插生根率成正相關(guān),與脫落酸(ABA)的含量成負(fù)相關(guān)關(guān)系。同時(shí),銀杏的扦插生根率也受到IAA、Z和ABA的含量,及IAA/Z、IAA/ABA比值的影響,比值高有利于生根,反之對(duì)生根不利;銀杏扦插繁殖具有明顯的年齡效應(yīng),隨著母樹(shù)樹(shù)齡的增加,扦插生根率呈下降趨勢(shì);銀杏扦插繁殖具有明顯的時(shí)間性,一年內(nèi),隨著采條時(shí)間的推移,生根率逐漸降低。因此,在進(jìn)行大面積育苗中,早春季節(jié)的幼嫩枝條較適宜銀杏扦插生根。

    關(guān)鍵詞 銀杏;扦插繁殖;樹(shù)齡;采條時(shí)間;內(nèi)源激素

    中圖分類號(hào) S722"" 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A

    文章編號(hào) 1007-7731(2024)13-0049-06

    銀杏(Ginkgo biloba L.)俗名白果[1-2],其葉、果具有很高的藥用價(jià)值和食用價(jià)值[3-4]。銀杏的繁殖方法很多[5],其中扦插繁殖的方法簡(jiǎn)單、成本低且育苗時(shí)間短,能夠保持母本的優(yōu)良性狀,獲得個(gè)體比較一致的無(wú)性系[6]。邢世巖等[7]研究發(fā)現(xiàn),植物扦插繁殖不定根的形成是一個(gè)復(fù)雜的生理過(guò)程,是植物體內(nèi)部因子與外界環(huán)境共同作用的結(jié)果。丁靜等[8]研究認(rèn)為,植物激素是植物體內(nèi)天然存在、含量較少的,對(duì)植物體的生長(zhǎng)、發(fā)育和分化起調(diào)控作用的特殊調(diào)節(jié)物質(zhì)。趙曉菊等[9]研究認(rèn)為,植物激素中的吲哚類物質(zhì)在吲哚乙酸氧化酶等酶系統(tǒng)的作用下絡(luò)合成一種共軛化合物,能夠誘導(dǎo)根原基的孕育。目前,對(duì)銀杏生理生化指標(biāo)的變化與扦插生根關(guān)系方面的研究較少。因此,本研究從一年內(nèi)不同時(shí)間采集的不同樹(shù)齡銀杏母樹(shù)當(dāng)年生枝條中內(nèi)源激素含量等內(nèi)部因子入手,測(cè)定銀杏的扦插繁殖生根率,提取和測(cè)定內(nèi)源激素含量,以探索銀杏扦插生根的規(guī)律,掌握銀杏扦插繁殖特性。

    1 材料與方法

    1.1 樣品采集與保存

    5—8月和11月,每月分別從不同樹(shù)齡(4、5、10、20和50年)的銀杏樹(shù)上剪取生長(zhǎng)旺盛的當(dāng)年生枝條作為試驗(yàn)材料,進(jìn)行扦插生根試驗(yàn)(11月的休眠枝須經(jīng)沙藏,次年扦插)。材料均取自中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院和槐樹(shù)居苗圃栽植的銀杏樹(shù)。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 銀杏的扦插繁殖生根率測(cè)定" 銀杏枝條采集后,用利刃將枝條截成6~8 cm的插穗,每個(gè)枝條留2~3個(gè)飽滿芽,上下端切口平切,下切口靠近腋芽部位,保留1~2枚葉片,蛭石為基質(zhì),上搭塑料拱棚,隨采隨插。試驗(yàn)采用常規(guī)方法分區(qū)扦插,每區(qū)20株,設(shè)3個(gè)重復(fù),60 d后調(diào)查生根率[10]。

    1.2.2 內(nèi)源激素的提取和測(cè)定" 使用Waters 244型高效液相色譜儀(HPLC)開(kāi)展內(nèi)源激素測(cè)定。

    (1)HPLC樣品的提取與制備。精確稱取新鮮銀杏樣品1 g,在研缽中剪碎并加80%冰甲醇10 mL,研細(xì)后轉(zhuǎn)至150 mL三角瓶中,加20 mL 80%冰甲醇后超聲波振蕩2 h(不斷加冰塊,保持溫度不超過(guò)4 ℃)。過(guò)濾,濾得濾渣后加20 mL 80%冰甲醇,搖勻后在冰箱中放置一晚再過(guò)濾,合并濾液。取10 mL濾液過(guò)Sep pak C18固相萃取小柱,棄去濾出液,然后用2 mL乙腈沖洗Sep pak C18柱,收集洗出液,經(jīng)0.45 μm濾膜過(guò)濾后,上清液用HPLC分析[8]。

    (2)HPLC檢測(cè)。測(cè)定玉米素(Zeatin,Z)時(shí),使用Kromasil C18(0.4 cm×15 cm)色譜柱,UV 254 nm×0.1 AUFS檢測(cè)器,流動(dòng)相為15%乙腈、10%甲醇、75%水,流速0.7 mL/min,外標(biāo)法定量。測(cè)定吲哚乙酸(Indole-3-acetic acid,IAA)、脫落酸(Abscisic acid,ABA)和赤霉酸(Gibberellic acid,GA3)時(shí),使用Kromasil C18(0.4 cm×15 cm)色譜柱,UV 254 nm×0.1 AUFS檢測(cè)器,流動(dòng)相為20%乙腈、20%甲醇、60%水(用磷酸調(diào)pH至3.0),流速0.7 mL/min,外標(biāo)法定量。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 銀杏扦插繁殖的生根情況

    2.1.1 不同樹(shù)齡母樹(shù)當(dāng)年生枝條扦插生根率變化" 6月,分別自4、5、10、20和50年生銀杏母樹(shù)采集當(dāng)年生枝條作為插穗,不經(jīng)任何生根劑處理,進(jìn)行扦插生根試驗(yàn)。方差分析表明,不同樹(shù)齡母樹(shù)插穗的扦插生根率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.05)(表1)。

    由圖1可知,銀杏扦插繁殖具有明顯的年齡效應(yīng),隨著母樹(shù)樹(shù)齡的增加,枝條扦插生根率呈下降趨勢(shì)。其中4年生的嫩枝條生根能力最強(qiáng),生根率最高;10、20年生的母樹(shù)枝條扦插生根率明顯降低,50年生母樹(shù)枝條扦插生根率最低,約20%。

    2.1.2 不同時(shí)間采集的銀杏當(dāng)年生枝條扦插生根率變化" 5—8和11月,每月分別自10年生銀杏母樹(shù)上采集生長(zhǎng)旺盛的當(dāng)年生枝條作為插穗,不用生根劑處理,進(jìn)行扦插生根試驗(yàn)。方差分析表明,不同時(shí)間采集的枝條扦插生根率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.05)(表2)。

    由圖2可知,一年中,隨著時(shí)間的推移,不同時(shí)間采集的銀杏當(dāng)年生枝條扦插生根率整體逐漸降低。其中,以5月采集的枝條的扦插生根率最高,可達(dá)70%,6—8和11月采集的枝條扦插生根率40%~50%,且隨時(shí)間變化差異不太明顯。因此,以頂芽尚未形成、枝條正處于生長(zhǎng)旺盛期(5月)的嫩枝扦插生根效果較好。

    2.2 內(nèi)源激素含量的變化情況

    2.2.1 不同樹(shù)齡母樹(shù)枝條中內(nèi)源激素含量差異" 采用HPLC法測(cè)定6月不同樹(shù)齡母樹(shù)枝條中IAA、ABA、Z和GA3的含量,方差分析結(jié)果表明,不同樹(shù)齡母樹(shù)枝條中不同內(nèi)源激素的含量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.05)(表3)。

    如圖3所示,6月銀杏母樹(shù)當(dāng)年生枝條中內(nèi)源IAA的含量隨著母樹(shù)樹(shù)齡的增加呈下降趨勢(shì)。采自4年生母樹(shù)的當(dāng)年生枝條中IAA含量較高,為0.650"μg/g"FW,5、10和20年生母樹(shù)枝條中,隨著樹(shù)齡的增加,IAA含量逐年下降;50年生母樹(shù)枝條中IAA含量?jī)H約為4年生的1/3。

    枝條中的Z和GA3含量的變化趨勢(shì)與IAA相似,隨著母樹(shù)樹(shù)齡的增加,枝條中Z和GA3的含量皆呈下降趨勢(shì),且各樹(shù)齡間變化都比較明顯,其中Z的變化范圍為0.280~0.560"μg/g"FW,GA3的變化范圍在0.120~0.460"μg/g"FW(圖3)。

    ABA的含量隨著母樹(shù)樹(shù)齡增加而增加。4年生母樹(shù)枝條中ABA含量比較低,僅有0.060"μg/g"FW,5、10和20年生母樹(shù)枝條中ABA含量分別為0.073、0.093和0.107"μg/g"FW,逐年增加;50年生母樹(shù)枝條中ABA含量較高,為0.167 μg/g"FW(圖3)。

    2.2.2 不同時(shí)間采集的銀杏當(dāng)年生枝條中內(nèi)源激素含量變化" 5—8和11月,每月分別從10年生銀杏母樹(shù)上采集當(dāng)年生枝條進(jìn)行內(nèi)源激素含量的測(cè)定,方差分析結(jié)果表明,不同時(shí)間采集的母樹(shù)枝條中IAA、ABA、Z和GA3的含量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.05)(表4)。

    如圖4所示,銀杏母樹(shù)的當(dāng)年生枝條中,內(nèi)源IAA含量隨著采條時(shí)間的變化呈下降趨勢(shì)。5月采集的幼嫩枝條中IAA含量較高,為0.790"μg/g"FW;6月IAA含量下降了2/3,為0.270"μg/g"FW;7、8月下降幅度不大;11月休眠枝中IAA含量非常低,僅為0.070"μg/g"FW。GA3的變化趨勢(shì)與IAA相似。5月幼嫩枝條中GA3含量較高;6月枝條中GA3含量大幅度下降50%以上;7、8月GA3下降幅度略緩;之后下降速度又增加,11月休眠枝中GA3的量最低,僅為0.120 μg/g"FW。Z的含量隨著枝條成熟度的增加逐漸減少,且不同時(shí)間下降幅度都比較明顯,Z含量在0.110~0.610 μg/g"FW。而枝條中ABA的含量與IAA含量的變化趨勢(shì)恰恰相反,隨著時(shí)間的推移,ABA含量呈上升趨勢(shì)。5月枝條中ABA含量最低;6—8月含量增加緩慢;而在11月的休眠枝中,ABA含量急劇增加,達(dá)到0.400 μg/g"FW(表4)。

    對(duì)銀杏當(dāng)年生枝條中內(nèi)源激素的含量和扦插生根率進(jìn)行對(duì)比分析發(fā)現(xiàn),扦插生根率與枝條中IAA、Z和GA3的含量成正相關(guān)關(guān)系,與ABA的含量負(fù)相關(guān)。由圖1、3可知,不同樹(shù)齡母樹(shù)的當(dāng)年生枝條中IAA、Z和GA3的含量與扦插生根率的變化曲線較為吻合,4年生母樹(shù)的當(dāng)年生枝條中IAA、Z和GA3的含量較高,ABA的含量較低,扦插生根率也較高;5年生母樹(shù)枝條中IAA、Z和GA3含量較4年生母樹(shù)有所下降,而ABA的含量卻增加,扦插生根率比4年生母樹(shù)也有所下降;10、20年生母樹(shù)當(dāng)年生枝條中IAA、Z和GA3含量都較大幅度下降,ABA的含量仍在上升,10、20年生母樹(shù)扦插生根率與4年生母樹(shù)相比差異較大;50年生母樹(shù)枝條中,IAA、Z和GA3含量都較低,扦插生根率也比較低。

    不同時(shí)間采集的枝條中,IAA、Z和GA3含量與扦插生根率成正相關(guān),ABA的含量與扦插生根率成負(fù)相關(guān)。5月枝條中IAA、Z和GA3含量較高,ABA的含量卻最低,其扦插生根率也較高;隨著采條時(shí)間的推移,枝條中IAA、Z和GA3含量急劇下降,而ABA的含量卻在上升,6—8月采集的枝條與5月采集的枝條相比扦插生根率較低;11月的休眠枝條中,IAA、Z和GA3含量最低,ABA的含量卻上升到較高的水平,11月采集的枝條扦插生根率較低(圖2、4)。

    2.3 IAA/ABA和IAA/Z比值變化情況

    2.3.1 不同樹(shù)齡母樹(shù)當(dāng)年生枝條中IAA/ABA及IAA/Z比值差異" 對(duì)不同樹(shù)齡母樹(shù)枝條中IAA、ABA和Z的含量及其比值進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)IAA/ABA及IAA/Z的比值隨母樹(shù)樹(shù)齡不同的變化有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.05)(表5)。

    如圖5所示,隨著母樹(shù)樹(shù)齡增加,母樹(shù)當(dāng)年生枝條中IAA和ABA的含量變化趨勢(shì)相反,IAA含量逐漸下降,ABA含量則逐漸上升,兩者成明顯的負(fù)相關(guān)關(guān)系(相關(guān)系數(shù)r=-0.91)。IAA/ABA比值隨著銀杏母樹(shù)樹(shù)齡的增加而逐漸降低。在4年生母樹(shù)當(dāng)年生枝條中,IAA含量較高,ABA含量較低,IAA/ABA比值最大;5年生母樹(shù)枝條IAA/ABA比值比4年生下降了37%;10、20年生母樹(shù)枝條IAA/ABA比值持續(xù)降低,分別比4年生下降了67%、86%;50年生母樹(shù)枝條中IAA/ABA比值較小,僅為1.32。

    由圖6可知,銀杏的當(dāng)年生枝條中,IAA、Z的含量及IAA/Z比值隨著樹(shù)齡的增加呈下降趨勢(shì)。4年生銀杏母樹(shù)的當(dāng)年生枝條中IAA和Z的含量比較高,IAA含量明顯高于Z,有利于生根;隨著樹(shù)齡的增加,5年生枝條中IAA和Z的含量有所下降,IAA/Z比值也有所降低;10、20年生母樹(shù)當(dāng)年生枝條IAA、Z的含量大大降低,且IAA含量明顯低于Z,不利于不定根的形成;50年生母樹(shù)枝條中,IAA和Z的含量都較低,且IAA遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于Z的含量,對(duì)生根不利。

    2.3.2 不同時(shí)間采集的10年生銀杏當(dāng)年生枝條IAA/ABA及IAA/Z比值差異" 對(duì)不同時(shí)間采集的10年生銀杏母樹(shù)枝條中IAA、ABA和Z的含量及IAA/ABA和IAA/Z比值進(jìn)行方差分析,結(jié)果表明不同采條時(shí)間下,IAA/ABA及IAA/Z比值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表6)。

    銀杏當(dāng)年生枝條中,IAA和ABA含量呈明顯的時(shí)間性消長(zhǎng),即IAA含量下降,ABA含量上升,兩者成負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.84)。5月采集的幼嫩枝條中,IAA含量較高,ABA的含量較少,且IAA/ABA比值較大,有利于生根;隨著時(shí)間的推移,枝條中IAA的含量快速下降,而ABA含量卻在增加。6—8月采集的枝條中,IAA/ABA變化幅度不大;11月,樹(shù)體進(jìn)入了休眠期,枝條中ABA含量激增,IAA下降到較低水平,IAA/ABA較小,對(duì)生根不利??傮w看來(lái),一年內(nèi),IAA/ABA隨著時(shí)間的變化呈逐漸降低趨勢(shì)(圖7)。

    5—11月,銀杏母樹(shù)當(dāng)年生枝條中IAA和Z的含量,隨著時(shí)間的推移也呈逐漸降低的趨勢(shì)。5月枝條中,IAA和Z的含量都比較高,且IAA高于Z,有利于生根;隨著時(shí)間的推移,枝條中IAA和Z含量大幅下降,到了6—7月IAA含量下降到低于Z的水平,對(duì)不定根的誘導(dǎo)不利;8月IAA下降速度開(kāi)始減慢,此時(shí)IAA含量又略高于Z,IAA/Z≥1;在11月休眠期,母樹(shù)中IAA和Z的含量都降到比較低,且IAA/Z比值較小,因此不利于生根??傮w來(lái)看,一年內(nèi),IAA/Z比值隨著時(shí)間的變化呈降低趨勢(shì)(圖8)。

    通過(guò)對(duì)銀杏當(dāng)年生枝條中IAA/ABA和IAA/Z的比值與扦插生根率比較,發(fā)現(xiàn)枝條中IAA/Z和IAA/ABA的比值對(duì)扦插生根率影響較大。試驗(yàn)結(jié)果表明,不同樹(shù)齡銀杏母樹(shù)的當(dāng)年生枝條中,IAA/Z和IAA/ABA比值與枝條的扦插生根率成正相關(guān)關(guān)系(rIAA/Z=0.81、rIAA/ABA=0.90)(圖5—6)。4年生母樹(shù)當(dāng)年生枝條中,IAA和Z的含量都比較高,IAA含量明顯高于Z,IAA/Z比值較大,且ABA的含量最低,有利于枝條生根,生根率最高;10、20年生母樹(shù)當(dāng)年生枝條中,IAA和Z含量相對(duì)于4年生母樹(shù)明顯下降,IAA下降到低于Z的水平,而ABA的水平上升,不利于不定根的誘導(dǎo),生根率降低;50年生母樹(shù)的當(dāng)年生枝條中,IAA和Z的含量普遍偏低,IAA/Z的比值也最小,而ABA的含量卻最高,因此生根率最低。

    不同時(shí)間采集的銀杏當(dāng)年生枝條,也得出相同的結(jié)果(圖7—8)。不同時(shí)間采集的銀杏當(dāng)年生枝條的扦插生根率與枝條中IAA/Z及IAA/ABA的比值成正相關(guān)(rIAA/Z=0.95、rIAA/ABA=0.95),5月采集枝條中IAA和Z的含量比較高,IAA含量高于Z,而ABA的含量較低,因此生根率比較高;隨著采條時(shí)間的推移,枝條中IAA和Z的含量有所降低,而ABA的含量有所上升,因此生根率逐漸降低。

    3 結(jié)論與討論

    銀杏扦插繁殖不定根的形成是一個(gè)復(fù)雜的生理過(guò)程。對(duì)影響銀杏扦插生根內(nèi)部因子的研究發(fā)現(xiàn),內(nèi)源生長(zhǎng)素(IAA、Z和GA3)的含量對(duì)不定根形成具有較大影響,枝條中內(nèi)源生長(zhǎng)素含量越高,對(duì)銀杏扦插生根越有利。IAA對(duì)不定根形成的作用也受到Z和ABA的調(diào)節(jié),在一定程度上,不定根的形成受IAA/Z和IAA/ABA比值的影響。在IAA和Z的含量都不過(guò)高的情況下,較高的IAA濃度與較低的Z濃度對(duì)不定根形成有利。ABA是植物體內(nèi)天然的生根抑制劑,對(duì)不定根的分化具有抑制作用。因此,保持較高的IAA/ABA比值有利于根原基的孕育。

    銀杏扦插繁殖具有明顯的年齡效應(yīng),即隨著樹(shù)齡的增加,母樹(shù)枝條的扦插生根率逐漸降低。因此,銀杏扦插繁殖時(shí)采條樹(shù)齡的選擇以4~5年生的幼年化母樹(shù)的枝條較好,幼年化母樹(shù)的枝條由于內(nèi)源生長(zhǎng)素等生根促進(jìn)物質(zhì)的含量比較高,而生根抑制劑ABA的含量較少,枝條本身的生根能力強(qiáng),生根率比較高。一般認(rèn)為,大齡母樹(shù)的枝條扦插不容易生根。本研究發(fā)現(xiàn),采用當(dāng)年生嫩枝作為插穗,10、20年生母樹(shù)枝條的扦插生根率可達(dá)40%,50年生母樹(shù)枝條的生根率也有20%。因此,生產(chǎn)上在材料來(lái)源較少的情況下,也可采用10年生以上母樹(shù)的當(dāng)年生嫩枝,但需添加一定的生根促進(jìn)劑,調(diào)整枝條內(nèi)部的激素比值,提高生根率。

    銀杏扦插繁殖也具有明顯時(shí)間性,一年內(nèi),即隨著采條時(shí)間的推移,枝條中IAA等內(nèi)源生長(zhǎng)素的含量減少,而生長(zhǎng)抑制劑ABA的含量增加,因此枝條的扦插生根率逐漸降低。

    通過(guò)對(duì)不同樹(shù)齡、不同采條時(shí)間的銀杏母樹(shù)當(dāng)年生枝條中內(nèi)源激素的含量與枝條的扦插生根率關(guān)系的研究,發(fā)現(xiàn)銀杏扦插生根具有以下規(guī)律。(1)枝條中內(nèi)源激素(IAA、Z和GA3)含量與銀杏枝條的扦插生根率成正相關(guān),而與生根抑制劑ABA的含量成負(fù)相關(guān)關(guān)系。同時(shí),銀杏的扦插生根率也受到IAA、Z和ABA的含量,及IAA/Z、IAA/ABA比值的影響,比值高有利于生根,比值低對(duì)生根不利。(2)銀杏扦插繁殖有明顯的年齡效應(yīng),隨著銀杏母樹(shù)樹(shù)齡的增加,扦插生根率呈下降趨勢(shì)。在銀杏扦插繁殖時(shí),應(yīng)選擇4~5年生以下的幼年母樹(shù)當(dāng)年生嫩枝作為插穗,扦插生根率較高。(3)銀杏扦插繁殖具有明顯的時(shí)間性,一年內(nèi),隨著采條時(shí)間的推移,扦插生根率逐漸降低。因此,在實(shí)際生產(chǎn)中,進(jìn)行銀杏大面積扦插繁殖,應(yīng)采用早春季節(jié)的當(dāng)年生嫩枝作為插穗,其內(nèi)部因子和外界環(huán)境對(duì)扦插生根都比較適宜,有利于不定根的形成。

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    [10] 王濤. 植物扦插繁殖技術(shù)[M]. 北京:北京科學(xué)技術(shù)出版社,1989.

    (責(zé)編:張 蓓)

    作者簡(jiǎn)介 潘雪雷(1969—),男,安徽蕪湖人,高級(jí)工程師,從事森林資源培育、良種選育、古樹(shù)保護(hù)和林業(yè)調(diào)查規(guī)劃等方面的工作。

    收稿日期 2024-05-09

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