恒清Ⅴ號方干預(yù)海人藻酸致癲癇小鼠的作用機制研究

摘要" 目的：探討恒清Ⅴ號方干預(yù)海人藻酸致癲癇小鼠的作用機制。方法：選取雄性野生型C57BL/6J小鼠40只，隨機分為正常對照組、模型組、恒清Ⅴ號方干預(yù)組及丙戊酸鈉干預(yù)組，每組10只。恒清Ⅴ號方干預(yù)組給予恒清Ⅴ號方灌胃，丙戊酸鈉干預(yù)組給予丙戊酸鈉溶液腹腔注射，正常對照組及模型組給予生理鹽水灌胃，每日1次，持續(xù)10 d。最后1次給藥干預(yù)后，模型組、恒清Ⅴ號方干預(yù)組及丙戊酸鈉干預(yù)組均給予海人藻酸腹腔注射以誘發(fā)小鼠癲癇發(fā)作，觀察各組小鼠行為變化及空間工作記憶能力。觀察結(jié)束后檢測各組小鼠海馬組織中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）和總抗氧化能力（T-AOC）水平。結(jié)果：與正常對照組比較，模型組小鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)時間明顯延長，癲癇潛伏期縮短，Ⅲ級以上驚厥發(fā)作次數(shù)增加，新異臂探索次數(shù)、新異臂探索時間及新異臂探索路程均減少，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。與模型組比較，恒清Ⅴ號方干預(yù)組與丙戊酸鈉干預(yù)組癲癇持續(xù)狀態(tài)時間均明顯縮短，癲癇潛伏期延長，Ⅲ級以上驚厥發(fā)作次數(shù)減少，新異臂探索次數(shù)、新異臂探索時間及新異臂探索路程均增加，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。與丙戊酸鈉干預(yù)組比較，恒清Ⅴ號方干預(yù)組癲癇持續(xù)狀態(tài)時間縮短，癲癇潛伏期時間延長，Ⅲ級以上驚厥發(fā)作次數(shù)減少，新異臂探索次數(shù)、新異臂探索時間及新異臂探索路程均增加，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。與正常對照組比較，模型組小鼠海馬組織中MDA水平升高（P＜0.01），SOD、CAT及T-AOC水平下降（P＜0.01）。與模型組比較，恒清Ⅴ號方干預(yù)組、丙戊酸鈉干預(yù)組小鼠海馬組織中MDA水平均下降（P＜0.01），SOD、CAT及T-AOC水平均升高（P＜0.01）。與丙戊酸鈉干預(yù)組比較，恒清Ⅴ號方干預(yù)組小鼠海馬組織中MDA水平均下降（P＜0.05），SOD、CAT及T-AOC水平均升高（P＜0.05）。結(jié)論：恒清Ⅴ號方可以干預(yù)海人藻酸誘導(dǎo)小鼠癲癇發(fā)作，改善癲癇發(fā)作癥狀及其認(rèn)知功能，其作用優(yōu)于丙戊酸鈉。恒清Ⅴ號方可能是通過抗氧化應(yīng)激來發(fā)揮抗癲癇作用。

關(guān)鍵詞" 癲癇；恒清Ⅴ號方；海人藻酸；氧化應(yīng)激；超氧化物歧化酶；實驗研究

doi：10.12102/j.issn.1672-1349.2024.19.012

Effects of Hengqing Ⅴ Prescription on Epilepsy Mice Induced by Kainic Acid

DENG Chujun， ZHU Wenlei， TANG Jianfei， SHEN Jie， CHEN Huize， YUAN Jing， MENG Shengxi

Shanghai Sixth People′s Hospital Affiliated to Shanghai Jiao Tong University School of Medicine， Shanghai 200233， China

Corresponding Author" MENG Shengxi， E-mail： mengsx163@163.com; YUAN Jing， E-mail： yuanjing1323@163.com

Abstract" Objective：To explore effects" of Hengqing Ⅴ Prescription on epilepsy mice induced by kainic acid.Methods：Forty male wild-type C57BL/6J mice were randomly divided into normal control group，model group，Hengqing Ⅴ Prescription intervention group，and valproate intervention group，with 10 mice in each group.The mice in intervention group of Hengqing Ⅴ Prescription were administrated with Hengqing Ⅴ Prescription by gavage.The mice in valproate intervention group were administrated with valproate by intraperitoneal injection，and the mice in normal control group and model group were administrated with physiological saline by gavage，once a day for 10 days.After the last administration，except for normal control group，the other groups were injected intraperitoneal with kainic acid to induce seizures.The behavioral changes and spatial working memory ability were observed.After the observation，the levels of malondialdehyde（MDA），superoxide dismutase（SOD），catalase （CAT），and total antioxidant capacity（T-AOC） in the hippocampus of mice in each group were measured.Results：Compared with normal control group，model group mice showed significantly longer duration of epileptic state，shorter latency of epilepsy，higher frequency of seizures above grade 3，and less number of new arm explorations，time of new arm explorations，and exploration distance of new arm explorations（all P＜0.01）.Compared with model group，the duration of epileptic state in Hengqing V Prescription intervention group and the intervention group of valproate" significantly shortened，the latency time of epilepsy" prolonged，the number of seizures above grade 3 reduced，number of new arm explorations，time of new arm explorations，and exploration distance of new arm explorations all increased（all P＜0.01）.Compared with valproate intervention group，mice in the Hengqing Ⅴ Prescription intervention group showed a shorter duration of epileptic state，a longer latency of epilepsy，fewer seizures above grade 3，and an increase in the number，time，distance of explorations in new arm explorations（all P＜0.05）.Compared with normal control group，MDA level in the hippocampal tissue of model group mice increased，while the levels of SOD，CAT，and T-AOC decreased（all P＜0.01）.Compared with model group，the levels of MDA in the hippocampus of mice in Hengqing Ⅴ Prescription intervention group of and valproate intervention group were significantly reduced， while the levels of SOD，CAT，and T-AOC were significantly increased（all P＜0.01）.Compared with valproate intervention group，MDA level in the hippocampus tissue of mice in the Hengqing Ⅴ Prescription intervention group decreased，while the levels of SOD，CAT，and T-AOC increased（all P＜0.05）.Conclusion：Hengqing Ⅴ Prescription can intervene seizures in kainic acid-induced mice， improve seizure symptoms，and improve cognitive function.Its effect is superior to that of valproate.Hengqing Ⅴ Precription may exert its anti-epileptic effect through anti-oxidative stress.

Keywords" epilepsy; Hengqing Ⅴ prescription; kainic acid;" oxidative stress; superoxide dismutase; experimental study

基金項目" 上海市第六人民醫(yī)院“腦科學(xué)與類腦研究”腦項目功能和針灸腦圖譜光聲成像技術(shù)應(yīng)用研究（No.ynnkxyb202415）；上海市第六人民醫(yī)院醫(yī)療服務(wù)能級提升工程臨床醫(yī)療技術(shù)骨干隊伍培育項目（No.20220213）；上海市第六人民醫(yī)院院級課題（No.ynxg202218）；上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院“大學(xué)生創(chuàng)新訓(xùn)練計劃”項目（No.1723Z002，1824021）；上海市進(jìn)一步加快中醫(yī)藥傳承創(chuàng)新發(fā)展三年行動計劃項目（2021—2023年）［No.ZY（2021-2023）-0205-04］；華東片區(qū)及市級中醫(yī)專科專病聯(lián)盟建設(shè)項目［No.ZY（2021-2023）-0302］

作者單位" 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第六人民醫(yī)院（上海 200233）

通訊作者" 孟勝喜，E-mail：mengsx163@163.com；袁菁，E-mail：yuanjing1323@163.com

引用信息" 鄧楚珺，竺聞雷，唐劍飛，等.恒清Ⅴ號方干預(yù)海人藻酸致癲癇小鼠的作用機制研究［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2024，22（19）：3529-3533.

癲癇（epilepsy，EP）是以大腦神經(jīng)元異常放電引起的短暫性中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能失常為特征的慢性腦部疾病。癲癇具有突發(fā)和反復(fù)發(fā)作的特點，其臨床表現(xiàn)為運動、感覺、意識及行為等功能障礙［1］。癲癇屬于中醫(yī)學(xué)“癇證”等范疇，最早記載于《黃帝內(nèi)經(jīng)》。關(guān)于癲癇的治療，由于癲癇的發(fā)病機制非常復(fù)雜，西醫(yī)治療的靶點相對單一，而中醫(yī)藥具有多靶點、多途徑、多通路、多層次的作用特點和優(yōu)勢，治療癲癇療效顯著且不良反應(yīng)小，可以減輕不同類型癲癇發(fā)作，改善病人生活質(zhì)量。中藥復(fù)方恒清Ⅴ號方是本課題組經(jīng)過長期臨床總結(jié)治療癲癇療效確切的臨床經(jīng)驗方?；诖耍狙芯刻接懼兴帍?fù)方恒清Ⅴ號方對海人藻酸（kainic acid，KA）誘導(dǎo)癲癇小鼠的作用及其機制。

1" 材料與方法

1.1" 材料

1.1.1" 實驗動物

無特定病原體（SPF）級野生型雄性C57BL/6J小鼠40只，體質(zhì)量18～22 g，購于上海斯萊克實驗動物有限責(zé)任公司，許可證號碼：SCXK（滬）2017-003。在實驗之前，所有動物均被放置于上海吉凱基因化學(xué)技術(shù)有限公司動物房適應(yīng)1周。飼養(yǎng)條件為：溫度20～24 ℃，相對濕度45%～50%，12 h光暗循環(huán)，喂食過濾水和營養(yǎng)飼料。實驗符合上海市第六人民醫(yī)院動物福利倫理委員會要求，并按照國家的實驗動物使用指南執(zhí)行。

1.1.2" 試劑與藥物

海人藻酸購自美國Sigma公司（產(chǎn)品編號：K0250）。丙戊酸鈉（VPA）由湖南省湘中制藥有限公司生產(chǎn)（批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字H43020873，規(guī)格：每片200 mg，批號：050123）。中藥復(fù)方恒清Ⅴ號方組成：膽南星15 g，僵蠶10 g，全蝎2 g，石菖蒲15 g，蟬蛻10 g，川芎15 g。由上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第六人民醫(yī)院中藥房提供，均符合2015年版《中國藥典》要求。按處方比例稱取藥材，加10倍量水浸泡0.5 h，煎煮3次，每次40 min，過濾，合并3次濾液，37 ℃水浴加熱濃縮，根據(jù)臨床的實際用藥情況，對藥液進(jìn)行濃縮處理，并以中質(zhì)量濃度匹配臨床的實際用藥濃度計。中質(zhì)量濃度濃縮至0.535 g/mL，放入4 ℃冰箱貯存?zhèn)溆?。丙二醛（malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、過氧化氫酶（catalase，CAT）和總抗氧化能力（total antioxidant capacity，T-AOC）的酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）試劑盒均購自美國Sigma-Aldrich公司。

1.1.3" 主要實驗儀器

SMART 2.0軟件系統(tǒng)（PanLab，Barcelona，Spain）為深圳瑞沃德公司引進(jìn)的西班牙產(chǎn)品。

1.2" 方法

1.2.1" 實驗動物及分組

將雄性C57BL/6J小鼠40只，按照隨機數(shù)字表法分為正常對照組、模型組、恒清Ⅴ號方干預(yù)組及丙戊酸鈉干預(yù)組，每組10只。

1.2.2" 癲癇模型造模

模型組小鼠在清醒狀態(tài)下，適應(yīng)環(huán)境15 min后，腹腔注射海人藻酸10 mg/kg［2］，誘導(dǎo)小鼠癲癇行為發(fā)生。正常對照組小鼠在清醒狀態(tài)下，適應(yīng)環(huán)境15 min后，腹腔注射同體積的生理鹽水；恒清Ⅴ號方干預(yù)組、丙戊酸鈉干預(yù)組在末次給藥30 min后，腹腔注射海人藻酸10 mg/kg，誘導(dǎo)小鼠癲癇發(fā)作，并觀察各組小鼠癲癇行為，包括癲癇持續(xù)時間、癲癇發(fā)作頻率、癲癇發(fā)作的潛伏期等。

1.2.3" 給藥方法

丙戊酸鈉干預(yù)組腹腔注射丙戊酸鈉20 μg/（g·d）［3］，每天1次，連續(xù)10 d。恒清Ⅴ號方干預(yù)組：每天給予恒清Ⅴ號方灌胃，連續(xù)10 d；恒清Ⅴ號方給藥濃度依據(jù)人和動物體表面積折算系數(shù)［4］換算為14.8 g/kg。正常對照組、模型組給予同體積的生理鹽水灌胃，每天1次，連續(xù)10 d。

1.2.4" 癲癇行為分級

按照Racine［5］評級標(biāo)準(zhǔn)（0～Ⅴ級）擬定。0級：無任何發(fā)作跡象；Ⅰ級：凝視，頭面部輕微顫動；Ⅱ級：點頭或濕狗樣抖動（wet dog shakes，WDS）；Ⅲ級：前肢局限性驚厥；Ⅳ級：具有后肢站立的全身強制性驚厥；Ⅴ級：具有站立伴摔倒的全身強直-陣攣性發(fā)作。

1.2.5" 觀察空間工作記憶能力

Y迷宮儀器，共有3個臂（起始臂、熟悉臂和新異臂），每個臂夾角為120°。每個臂尺寸：30 cm×8 cm×15 cm（長×寬×高）。該實驗由兩部分組成：第1個階段（訓(xùn)練期）、第2個階段（檢測期）。新異臂：在實驗的第1個階段即訓(xùn)練期時用隔板遮擋住，在第2個階段即檢測期時打開；起始臂：小鼠進(jìn)入迷宮時所在的臂。實驗過程中一直打開起始臂和熟悉臂，動物能夠自由出入。Y迷宮上方1.5 m處裝有攝像鏡頭，可以全過程拍攝錄像。第1個階段（訓(xùn)練期）：隔板擋住新異臂，小鼠自起始臂放入，在起始臂和熟悉臂中自由活動10 min，訓(xùn)練結(jié)束后，放回小鼠到飼養(yǎng)籠。2 h后開始第2個階段（檢測期）：撤掉新異臂的擋板，小鼠自起始臂放入，在3個臂中自由探索活動5 min。攝像鏡頭會記錄5 min內(nèi)每只小鼠在各個臂停留的時間和穿梭次數(shù)。

1.2.6" 小鼠海馬組織中MDA、SOD、CAT和T-AOC水平檢測

實驗結(jié)束后，麻醉、處死所有的實驗小鼠。取各組小鼠的海馬組織，海馬組織按質(zhì)量/體積比1∶9加入磷酸緩沖鹽溶液（PBS），組織研磨儀勻漿，勻漿液4 ℃、12 000 r/min離心10 min，取上清液。按照ELISA試劑盒說明書檢測各組小鼠海馬組織中MDA、SOD、CAT和T-AOC水平。

1.3" 統(tǒng)計學(xué)處理

使用SPSS 25.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。符合正態(tài)分布的定量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，方差齊時，多組比較采用單因素方差分析，不同組別之間采用LSD法進(jìn)行兩兩比較，方差不齊時采用Kruskal-Wallis秩和檢驗；定性資料以例數(shù)或百分比（%）表示。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2" 結(jié)" 果

2.1" 各組小鼠行為學(xué)觀察

小鼠腹腔注射海人藻酸后，模型組、恒清Ⅴ號方干預(yù)組及丙戊酸鈉干預(yù)組均從安靜狀態(tài)轉(zhuǎn)為胡須抽動、面部肌肉痙攣、點頭癥狀、頭部間歇性抽動。模型組：部分有前肢痙攣、站立的Ⅳ級及以上驚厥癥狀，恒清Ⅴ號方干預(yù)組和丙戊酸鈉干預(yù)組均未出現(xiàn)Ⅳ級及以上驚厥癥狀。待癲癇持續(xù)狀態(tài)結(jié)束后，小鼠恢復(fù)至腹腔注射海人藻酸前的安靜狀態(tài)。實驗中正常對照組未出現(xiàn)驚厥癥狀。

2.2" 各組小鼠癲癇狀態(tài)持續(xù)時間比較

與正常對照組比較，模型組小鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)時間明顯延長（P＜0.01）；與模型組比較，丙戊酸鈉干預(yù)組、恒清Ⅴ號方干預(yù)組癲癇狀態(tài)持續(xù)時間均明顯縮短（P＜0.01）；與丙戊酸鈉干預(yù)組相比，恒清Ⅴ號方干預(yù)組癲癇狀態(tài)持續(xù)時間縮短（P＜0.05）。詳見表1。

2.3" 各組小鼠癲癇潛伏期比較

與正常對照組比較，模型組小鼠癲癇潛伏期明顯延長（P＜0.01）；與模型組比較，丙戊酸鈉干預(yù)組、恒清Ⅴ號方干預(yù)組癲癇潛伏期均明顯延長（P＜0.01）；與丙戊酸鈉干預(yù)組相比，恒清Ⅴ號方干預(yù)組癲癇潛伏期明顯延長（P＜0.05）。詳見表2。

2.4" 各組小鼠Ⅲ級以上驚厥發(fā)作次數(shù)比較

與正常對照組比較，模型組Ⅲ級以上驚厥發(fā)作次數(shù)明顯增加（P＜0.01）；與模型組比較，丙戊酸鈉干預(yù)組、恒清Ⅴ號方干預(yù)組Ⅲ級以上驚厥發(fā)作次數(shù)均明顯減少（P＜0.01）；與丙戊酸鈉干預(yù)組相比，恒清Ⅴ號方干預(yù)組Ⅲ級以上驚厥發(fā)作次數(shù)均明顯減少（P＜0.05）。詳見表3。

2.5" 各組空間工作記憶能力比較

與正常對照組比較，模型組新異臂探索次數(shù)、新異臂探索時間及新異臂探索路程均減少，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；與模型組比較，恒清Ⅴ號方干預(yù)組、丙戊酸鈉干預(yù)組新異臂探索次數(shù)、新異臂探索時間及新異臂探索路程均明顯增加，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；與丙戊酸鈉干預(yù)組相比，恒清Ⅴ號方干預(yù)組小鼠新異臂探索次數(shù)、新異臂探索時間及新異臂探索路程均明顯增加，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。詳見表4。

2.6" 各組海馬組織中MDA含量及SOD、T-AOC、CAT水平比較

與正常對照組比較，模型組小鼠海馬組織中MDA水平升高，SOD、CAT及T-AOC水平下降，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；與模型組比較，恒清Ⅴ號方干預(yù)組、丙戊酸鈉干預(yù)組小鼠海馬組織中MDA水平均下降，SOD、CAT及T-AOC水平均升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。與丙戊酸鈉干預(yù)組比較，恒清Ⅴ號方干預(yù)組小鼠海馬組織中MDA水平下降，SOD、CAT及T-AOC水平均升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。詳見表5。

3" 討" 論

癲癇是一類大腦異常放電的腦部疾病，超過7 000萬人被這種疾病所困擾，患病率為0.5%～1.0%。癲癇病人不定時、無規(guī)律的癲癇發(fā)作，并具有許多神經(jīng)異常、認(rèn)知障礙和心理等疾?。?］。癲癇屬中醫(yī)學(xué)“癲疾”“癇證”等范疇。其病因與痰、火、驚、風(fēng)、氣關(guān)系密切，特別是以痰邪作祟為主。肝風(fēng)內(nèi)動、痰瘀互結(jié)是癲癇的根本病機。因此，息風(fēng)化痰、活血化瘀應(yīng)作為本病的主要治法。

恒清Ⅴ號方是本課題組經(jīng)過長期臨床實踐總結(jié)、歸納和驗證的治療癲癇療效確切的中藥經(jīng)驗復(fù)方［7］。恒清Ⅴ號方的組成：膽南星15 g，僵蠶10 g，全蝎2 g，石菖蒲15 g，蟬蛻10 g，川芎15 g。其中，膽南星性涼，味苦、微辛，歸肺、肝、脾經(jīng)，具有清熱化痰、息風(fēng)定驚的功效；僵蠶性平，味咸、辛，歸肝、肺、胃經(jīng)，具有息風(fēng)止痙、祛風(fēng)化痰的功效，兩者共為君藥。全蝎，辛平，歸肝經(jīng)，具有息風(fēng)止痙、解毒散結(jié)、通絡(luò)止痛的功效；石菖蒲，辛溫，歸心、胃經(jīng)，具有祛痰開竅、化濕、寧神益智的功效；蟬蛻，甘寒，歸肺、肝經(jīng)，具有疏散風(fēng)熱、息風(fēng)止痙的功效；川芎，辛溫，歸肝、膽、心包經(jīng)，具有活血行氣、祛風(fēng)止痛的功效，以上四味藥物共為臣藥。全方具有息風(fēng)化痰、定驚、活血化瘀之功效，從而能夠治療癲癇。

現(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，膽南星治療癲癇可能的有效成分包括β-谷甾醇、植物甾醇、鵝去氧膽酸（CDCA）和化合物2R-B-3-A，與之相關(guān)的靶點包括γ-氨基丁酸受體亞基α1（GABRA）家族成員、溶質(zhì)載體家族6成員4（SLC6A4）、胱天蛋白酶3（CASP3）和5-羥色胺2A 受體（HTR2A）等，涉及的信號通路包括配體-受體相互作用、5-羥色胺能突觸和γ-氨基丁酸（GABA）能突觸等。β-谷甾醇和CDCA能夠有效降低小鼠海馬CA1錐體神經(jīng)元興奮性［8］。米泔制僵蠶粉末的息風(fēng)止痙作用機制與調(diào)節(jié)大鼠海馬中GABA信號通路相關(guān)mRNA和蛋白的表達(dá)有關(guān)，其可以調(diào)控白細(xì)胞介素1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）和糖皮質(zhì)激素受體α（GRα）的分泌，使GABA、谷氨酸水平及神經(jīng)-免疫-內(nèi)分泌網(wǎng)絡(luò)趨于平衡［9］。趙晉煒等［10］提取和分離了18種單味中藥，發(fā)現(xiàn)全蝎醇提物抗最大電休克驚厥實驗（MES）能力最佳、效價最大，可持續(xù)作用7 h。王坤芳等［11］建立了4種動物驚厥模型，發(fā)現(xiàn)石菖蒲揮發(fā)油可以提高大鼠電刺激皮層驚厥閾值，持續(xù)作用時間較長，且呈劑量依賴性。何欣嘏［12］研究發(fā)現(xiàn)，蟬蛻醇提物對最大電休克驚厥實驗（MES）模型、戊四唑驚厥（MET）發(fā)作和青霉素點燃驚厥發(fā)作均有對抗作用。川芎嗪與苯妥英鈉聯(lián)合應(yīng)用可以提高癲癇大鼠腦內(nèi)苯妥英鈉濃度并提高苯妥英鈉治療癲癇的效果，川芎嗪對苯妥英鈉抗不同時間（急性期）癲癇等級評分有明顯的降低作用［13］。

本研究發(fā)現(xiàn)，小鼠腹腔注射海人藻酸后，模型組、恒清Ⅴ號方干預(yù)組及丙戊酸鈉干預(yù)組均出現(xiàn)胡須抽動、面部肌肉痙攣、點頭癥狀、頭部出現(xiàn)間歇性抽動。這表明海人藻酸誘導(dǎo)小鼠癲癇模型造模成功。與正常對照組比較，模型組小鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)時間明顯延長，癲癇潛伏期縮短，3級以上驚厥發(fā)作次數(shù)增加，新異臂探索次數(shù)、新異臂探索時間及新異臂探索路程均減少（P＜0.01）。與模型組比較，恒清Ⅴ號方干預(yù)組與丙戊酸鈉干預(yù)組小鼠的癲癇持續(xù)狀態(tài)時間均明顯縮短，癲癇潛伏期時間延長，Ⅲ級以上驚厥發(fā)作次數(shù)減少，新異臂探索次數(shù)、新異臂探索時間及新異臂探索路程均增加（P＜0.01）。與丙戊酸鈉干預(yù)組比較，恒清Ⅴ號方干預(yù)組癲癇持續(xù)狀態(tài)時間縮短，癲癇潛伏期時間延長，Ⅲ級以上驚厥發(fā)作次數(shù)減少，新異臂探索次數(shù)、新異臂探索時間及新異臂探索路程均增加（P＜0.05）。

氧化應(yīng)激即由于體內(nèi)活性氧（ROS）的產(chǎn)生與清除失衡導(dǎo)致的組織和細(xì)胞的氧化損傷，是由于機體氧自由基（OFR）生成增多或抗氧化系統(tǒng)清除能力下降，致使ROS在機體內(nèi)大量堆積而誘發(fā)一系列氧化損傷過程。生理狀況下，氧化應(yīng)激產(chǎn)生的氧自由基可通過體內(nèi)抗氧化系統(tǒng)及時清除，但是在病理狀態(tài)下氧化應(yīng)激程度加重，氧自由基的產(chǎn)生超出自身清除能力，損傷細(xì)胞膜磷脂造成細(xì)胞不可逆損傷，這有可能是導(dǎo)致癲癇發(fā)生的原因之一［14］。動物實驗及臨床試驗均表明氧化應(yīng)激存在于癲癇的發(fā)生發(fā)展過程中［15］。SOD、CAT可清除氧自由基，反映機體清除氧自由基的能力。MDA是氧化應(yīng)激的代謝產(chǎn)物，可間接反映機體氧化損傷的程度。SOD、CAT可反映機體清除氧自由基的能力。SOD在清除氧自由基的過程中有著重要的作用，可以直接清除超氧陰離子自由基，起到抗氧化作用［16］。CAT可通過清除氧自由基，保護(hù)細(xì)胞免受損傷而起到保護(hù)作用。血漿T-AOC水平能有效體現(xiàn)出機體總體的抗氧化能力［17］。

本研究結(jié)果顯示，與正常對照組比較，模型組小鼠海馬組織中MDA水平升高，SOD、CAT及T-AOC水平下降（P＜0.01）；與模型組比較，恒清Ⅴ號方干預(yù)組、丙戊酸鈉干預(yù)組小鼠海馬組織中MDA水平均下降，SOD、CAT及T-AOC水平均升高（P＜0.01）；與丙戊酸鈉干預(yù)組比較，恒清Ⅴ號方干預(yù)組小鼠海馬組織中MDA水平下降，SOD、CAT及T-AOC水平均升高（P＜0.05）。

綜上所述，恒清Ⅴ號方可以干預(yù)癲癇模型小鼠的癲癇發(fā)作，改善癲癇發(fā)作癥狀及認(rèn)知功能，其作用優(yōu)于丙戊酸鈉。恒清Ⅴ號方可能通過抗氧化應(yīng)激來發(fā)揮抗癲癇作用。

參考文獻(xiàn)：

［1］" FALCO-WALTER J.Epilepsy-definition，classification，pathophysiology，and epidemiology［J］.Seminars in Neurology，2020，40（6）：617-623.

［2］" KITANO Y，KOMIYAMA C，MAKINO M，et al.Anticonvulsant and neuroprotective effects of the novel nootropic agent nefiracetam on kainic acid-induced seizures in rats［J］.Brain Research，2005，1057（1/2）：168-176.

［3］" 王玢.中藥復(fù)方對戊四氮致癇小鼠行為及生長變化的干預(yù)作用［J］.山東大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2010，48（8）：70-73.

［4］" 黃繼漢，黃曉暉，陳志揚，等.藥理試驗中動物間和動物與人體間的等效劑量換算［J］.中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2004，9（9）：1069-1072.

［5］" LTTJOHANN A，F(xiàn)ABENE P F，VAN LUIJTELAAR G.A revised Racine′s scale for PTZ-induced seizures in rats［J］.Physiology amp; Behavior，2009，98（5）：579-586.

［6］" FISHER R S，ACEVEDO C，ARZIMANOGLOU A，et al.ILAE official report：a practical clinical definition of epilepsy［J］.Epilepsia，2014，55（4）：475-482.

［7］" 陳慧澤，孟勝喜，霍清萍，等.恒清Ⅴ號方聯(lián)合丙戊酸鈉緩釋片治療癲癇的臨床研究［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2022，20（23）：4346-4350.

［8］" 陳思軟，趙姣嬌，孔德志，等.基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和實驗驗證探究膽南星對癲癇的作用機制［J］.藥學(xué)學(xué)報，2022，57（4）：1031-1043.

［9］" 胡美變，何麗英，王丹，等.基于GABA信號通路和神經(jīng)-免疫-內(nèi)分泌網(wǎng)絡(luò)探討米泔制僵蠶“粉末入藥”的“息風(fēng)止痙”作用機制［J］.中藥藥理與臨床，2022，38（5）：118-124.

［10］" 趙晉煒，程景民.18種單味中藥提取物抗驚厥作用的藥效學(xué)比較研究［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2015，13（5）：593-596.

［11］" 王坤芳，楊育同，梁志剛，等.石菖蒲揮發(fā)油抗驚厥作用及對癲癇大鼠海馬PKC表達(dá)的影響［J］.中藥藥理與臨床，2015，31（1）：97-100.

［12］" 何欣嘏.五種中藥醇提物抗驚厥作用的藥效學(xué)比較研究［D］.太原：山西醫(yī)科大學(xué)，2006.

［13］" 賴偉華，許百虹，夏晨.川芎嗪對癲癇大鼠腦內(nèi)苯妥英鈉濃度與療效的影響研究［J］.中藥材，2015，38（3）：598-600.

［14］" AGUIAR C C，ALMEIDA A B，ARAJO P V，et al.Oxidative stress and epilepsy：literature review［J］.Oxidative Medicine and Cellular Longevity，2012，2012：795259.

［15］" GERONZI U，LOTTI F，GROSSO S.Oxidative stress in epilepsy［J］.Expert Review of Neurotherapeutics，2018，18（5）：427-434.

［16］" LORIGADOS PEDRE L，GALLARDO J，MORALES CHACN L，et al.Oxidative stress in patients with drug resistant partial complex seizure［J］.Behavioral Sciences，2018，8（6）：59.

［17］" RUSZKIEWICZ J，ALBRECHT J.Changes of the thioredoxin system，glutathione peroxidase activity and total antioxidant capacity in rat brain cortex during acute liver failure：modulation by L-histidine［J］.Neurochemical Research，2015，40（2）：293-300.

（收稿日期：2023-07-11）

（本文編輯郭懷?。?/p>