內(nèi)側(cè)前額葉皮質(zhì)區(qū)核氧化還原蛋白對(duì)卒中后抑郁小鼠抑郁樣行為的影響及其機(jī)制

［摘 要］ 目的：探討內(nèi)側(cè)前額葉皮質(zhì) （mPFC） 區(qū)核氧化還原蛋白 （NXN） 對(duì)小鼠卒中后抑郁（PSD）的影響，并闡明其可能的作用機(jī)制。方法：80只C57BL/6小鼠，隨機(jī)選取42只分為NXN過(guò)表達(dá)腺相關(guān)病毒感染組（AAV-NXN-OE 組，n=21） 和陰性對(duì)照腺相關(guān)病毒感染組（AAV-NC 組，n=21）， 剩余小鼠分為假手術(shù)組（n=20） 和PSD 組（n=18）， 注射N(xiāo)XN 過(guò)表達(dá)腺相關(guān)病毒后， 將AAV-NXN-OE 組和AAV-NC 組剩余小鼠分為PSD+AAV-NC 組（n=18） 和PSD+AAV-NXN-OE組（n=18）。術(shù)前3 周，采用腦立體定位法向小鼠腦組織mPFC 區(qū)注射N(xiāo)XN 過(guò)表達(dá)腺相關(guān)病毒，顯微鏡下觀察病毒在小鼠腦組織mPFC 區(qū)表達(dá)情況，Western blotting 法檢測(cè)小鼠腦組織中NXN 蛋白表達(dá)水平。采用線(xiàn)栓法建立大腦中動(dòng)脈閉塞（MCAO） 卒中模型，術(shù)后1 周使用慢性不可預(yù)見(jiàn)的中等應(yīng)激（CUMS） 結(jié)合孤養(yǎng)法持續(xù)干預(yù)3 周，構(gòu)建PSD 模型小鼠。造模期間監(jiān)測(cè)小鼠體質(zhì)量變化，造模結(jié)束后采用糖水偏好實(shí)驗(yàn)、懸尾實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)觀察各組小鼠抑郁樣行為學(xué)表現(xiàn)，生化法檢測(cè)各組小鼠腦組織mPFC 區(qū)中丙二醛（MDA） 和還原型谷胱甘肽（GSH） 水平及超氧化物歧化酶（SOD） 活性，2'，7'-二氯熒光素二乙酸酯（DCFH-DA） 熒光探針標(biāo)記法檢測(cè)各組小鼠腦組織mPFC 區(qū)中活性氧（ROS） 水平，Western blotting 法檢測(cè)各組小鼠腦組織mPFC 區(qū)、杏仁核區(qū)和海馬組織中NXN 蛋白表達(dá)水平。結(jié)果：PSD小鼠腦組織 mPFC區(qū)有大量綠色熒光，表明攜帶 ZsGreen綠色熒光蛋白標(biāo)簽的AAVs 病毒在PSD 小鼠腦組織mPFC 區(qū)成功感染并表達(dá)。與AAV-NC 組比較，AAV-NXN-OE 組小鼠腦組織mPFC 區(qū)中NXN 蛋白表達(dá)水平明顯升高（Plt;0. 05）。與假手術(shù)組比較，PSD 組小鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)緩慢（Plt;0. 05），糖水偏好率明顯降低（Plt;0. 05），小鼠在懸尾實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中不動(dòng)時(shí)間均明顯增加（Plt;0. 05）；與假手術(shù)組比較，PSD+AAV-NC 組小鼠糖水偏好率明顯降低（Plt;0. 05），小鼠在懸尾實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中不動(dòng)時(shí)間均明顯增加（Plt;0. 05）； 與PSD+AAV-NC 組比較，PSD+AAV-NXN-OE 組小鼠糖水偏好率明顯升高（Plt;0. 05），小鼠在懸尾實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中不動(dòng)時(shí)間均明顯減少（Plt;0. 05）。與假手術(shù)組比較， PSD+AAV-NC 組小鼠腦組織mPFC 區(qū)中MDA 和ROS 水平均明顯升高（Plt;0. 05），GSH 水平和SOD 活性均明顯降低（Plt;0. 05）；與PSD+AAV-NC組比較，PSD+AAV-NXN-OE 組小鼠腦組織mPFC 區(qū)中MDA 和ROS 水平均明顯降低（Plt;0. 05），GSH 水平和SOD 活性均明顯升高（Plt;0. 05）。與假手術(shù)組比較，PSD 組小鼠腦組織mPFC 區(qū)中NXN蛋白表達(dá)水平明顯降低（Plt;0. 05）， 杏仁核區(qū)和海馬組織中NXN 蛋白表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pgt;0. 05）。結(jié)論：小鼠腦組織mPFC區(qū)中NXN過(guò)表達(dá)可改善PSD小鼠抑郁樣行為，其作用機(jī)制可能與調(diào)節(jié)氧化還原平衡有關(guān)。

［關(guān)鍵詞］ 卒中后抑郁； 核氧化還原蛋白； 內(nèi)側(cè)前額葉皮質(zhì)； 氧化還原平衡

［中圖分類(lèi)號(hào)］ R749.13 ［文獻(xiàn)標(biāo)志碼］ A

卒中后抑郁（post-stroke depression，PSD） 是卒中最常見(jiàn)的神經(jīng)精神并發(fā)癥之一，約三分之一的卒中幸存者會(huì)出現(xiàn)PSD［1］。PSD 患者不僅有抑郁相關(guān)的情緒癥狀，還伴隨自主神經(jīng)障礙癥狀，出現(xiàn)功能獨(dú)立性下降、認(rèn)知恢復(fù)不良和生活質(zhì)量下降等情況［2-3］。我國(guó)卒中人群眾多，確診和潛在的PSD患者數(shù)量也較為龐大， PSD 帶來(lái)的高致殘率和高死亡率給患者個(gè)人、家庭及社會(huì)都帶來(lái)沉重的負(fù)擔(dān)［4］。然而， PSD 發(fā)病機(jī)制具有復(fù)雜性、多元性和多樣性的特點(diǎn)，給其臨床治療帶來(lái)較大的挑戰(zhàn)，目前仍缺乏有效且不良反應(yīng)少的治療方法。

核氧化還原蛋白（nucleoredoxin，NXN） 屬于硫氧還蛋白家族中的一種氧化還原酶，通過(guò)氧化還原依賴(lài)的方式調(diào)節(jié)不同的信號(hào)通路，從而參與調(diào)節(jié)多種細(xì)胞生物學(xué)行為和不同病理機(jī)制［5］。研究［6］顯示：神經(jīng)元NXN 基因敲除小鼠的探索行為減少。NXN 平衡氧化還原功能的喪失會(huì)導(dǎo)致感覺(jué)神經(jīng)元發(fā)生不良變化，使神經(jīng)元NXN 基因敲除小鼠表現(xiàn)出多發(fā)性神經(jīng)病樣的冷回避和熱痛超敏反應(yīng)［7］。但NXN 在PSD 中的作用尚不明確。內(nèi)側(cè)前額葉皮質(zhì)（medial prefrontal cortex，mPFC） 功能損傷是多種精神疾病的基礎(chǔ)，包括抑郁和焦慮等［8］。本研究檢測(cè)NXN 在PSD 小鼠mPFC 中的表達(dá)水平， 探討mPFC 區(qū)NXN 對(duì)PSD 小鼠抑郁樣行為的影響，并闡明相關(guān)機(jī)制， 旨在為PSD 治療新策略的研發(fā)提供新的方向。

1 材料與方法

1. 1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、病毒、主要試劑和儀器 80只 8周齡SPF 級(jí)雄性C57BL/6 小鼠， 體質(zhì)量22～24 g，購(gòu)自武漢大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK （鄂） 2019-0004。適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周，飼養(yǎng)條件為晝夜明暗交替12 h 循環(huán)，室溫22 ℃～24 ℃，自由進(jìn)食和飲水。攜帶ZsGreen 綠色熒光蛋白標(biāo)簽的NXN 過(guò)表達(dá)腺相關(guān)病毒pHBAAV-CMV-MCS-3flag-EF1-ZsGreen （AAV-NXN-OE） 及其陰性對(duì)照慢病毒（AAV-NC） 由漢恒生物科技（上海） 有限公司提供。丙二醛（malondialdehyde， MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase， SOD）、還原型谷胱甘肽（reduced glutathione， GSH） 和活性氧（reactive oxygen species， ROS） 測(cè)定試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所，RIPA 裂解液和BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司， 兔抗NXN 單克隆抗體和兔抗GAPDH 多克隆抗體購(gòu)自英國(guó)Abcam 公司。熒光顯微鏡購(gòu)自日本尼康公司，冰凍切片機(jī)購(gòu)自上海賽默飛世爾科技有限公司，熒光酶標(biāo)儀購(gòu)自杭州奧盛儀器有限公司， 電泳儀購(gòu)自北京六一生物科技有限公司。

1. 2 腦立體定位注射病毒 隨機(jī)選取42只C57BL/6小鼠， 分為NXN 過(guò)表達(dá)腺相關(guān)病毒感染組（AAV-NXN-OE 組，n=21） 和陰性對(duì)照腺相關(guān)病毒感染組（AAV-NC 組，n=21），采用3% 戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉小鼠，濃度為30 mg·kg－1，并將小鼠固定在腦立體定位儀上。使用帶有32 號(hào)針頭的Hamilton 微量注射器吸取NXN 過(guò)表達(dá)腺相關(guān)病毒或陰性對(duì)照病毒5×1012 v. g·mL－1，雙側(cè)注射入小鼠腦組織mPFC 區(qū)，單側(cè)注射400 nL 病毒，注射位點(diǎn)坐標(biāo)：前囟前+1. 90 mm，中縫左右±1. 00 mm，顱骨平面下－2. 10 mm。以0. 1 μL·min－1 速度進(jìn)行緩慢注射，注射結(jié)束后，將針頭放置9 min，再緩慢抽出。病毒注射3 周后，每組取3 只小鼠mPFC組織，制備冰凍切片，在顯微鏡下觀察病毒在小鼠腦組織mPFC 區(qū)的表達(dá)情況， 并采用Westernblotting 法檢測(cè)小鼠腦組織中NXN 蛋白表達(dá)水平。

1. 3 實(shí)驗(yàn)分組和小鼠 PSD 模型構(gòu)建 隨機(jī)選取18 只未感染腺相關(guān)病毒的小鼠作為PSD 組（n=18），剩下的20 只未感染腺相關(guān)病毒的小鼠作為假手術(shù)組，并將其分為2 個(gè)亞組，每組10 只，再將“1. 3”中剩余的AAV-NXN-OE 感染小鼠作為PSD+AAV-NXN-OE 組（n=18）， 剩余AAV-NC 感染小鼠作為PSD+AAV-NC 組（n=18）。

除假手術(shù)組外，其余各組小鼠均采用線(xiàn)栓法建立大腦中動(dòng)脈閉塞（middle cerebral arteryocclusion，MCAO） 模型［9］：戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉小鼠， 切開(kāi)頸部中央皮膚， 暴露右側(cè)頸總動(dòng)脈、頸內(nèi)動(dòng)脈和頸外動(dòng)脈。采用7-0 手術(shù)線(xiàn)于頸外動(dòng)脈遠(yuǎn)心端結(jié)扎，使用另一根7-0 手術(shù)線(xiàn)穿過(guò)頸外動(dòng)脈在靠近頸總動(dòng)脈分叉處打1 個(gè)活結(jié)，于活結(jié)上方1. 5 mm 處的頸外動(dòng)脈上剪1 個(gè)小口，將表面涂膠的線(xiàn)栓插入小口，進(jìn)入頸內(nèi)動(dòng)脈盒大腦中動(dòng)脈，插入線(xiàn)栓約為1 cm。缺血60 min 后， 拔掉線(xiàn)栓，縫合皮膚。假手術(shù)組小鼠僅切開(kāi)頸部中央皮膚，暴露右側(cè)頸動(dòng)脈。術(shù)后24 h，采用Longa 5 分法［10］ 對(duì)小鼠神經(jīng)功能進(jìn)行評(píng)分以判斷MCAO 模型是否成功，選取Longa 評(píng)分為1～3 分的小鼠，于術(shù)后第7 天開(kāi)始采用慢性不可預(yù)見(jiàn)的中等應(yīng)激（chronicunpredictable mild stimulus， CUMS） 結(jié)合孤養(yǎng)法構(gòu)建PSD 小鼠模型［11］：在孤籠飼養(yǎng)的基礎(chǔ)上，每天采用隨機(jī)和不連續(xù)的應(yīng)激方法刺激小鼠，刺激包括冰水游泳（5 min）、夾尾（15 min）、潮濕墊料（24 h）、禁食（24 h）、禁水（24 h） 和晝夜顛倒（12 h/12 h），持續(xù)刺激21 d。CUMS 期間，每周測(cè)定1 次小鼠體質(zhì)量。MCAO 術(shù)后1 周內(nèi)假手術(shù)組小鼠無(wú)死亡，PSD組小鼠死亡6只，PSD+AAV-NC組小鼠死亡6 只， PSD+AAV-NXN-OE 組小鼠死亡5 只，而CUMS 期間各組均無(wú)小鼠死亡。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，各造模組最終均隨機(jī)選擇10 只小鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1. 4 行為學(xué)實(shí)驗(yàn)觀察各組小鼠抑郁樣行為 所有小鼠在PSD 造模結(jié)束后進(jìn)行行為學(xué)檢測(cè)。① 糖水偏好實(shí)驗(yàn)：將所有小鼠單籠飼養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)前1 d 進(jìn)行糖水適應(yīng)訓(xùn)練，禁食24 h。將分別裝有1% 蔗糖水和普通飲用水的飲水瓶放于鼠籠中，8 h 后取出飲水瓶。記錄實(shí)驗(yàn)前、后飲水瓶中的液體體積（ mL），計(jì)算糖水偏好率，糖水偏好率=糖水消耗量（ mL）/總液體消耗量 （mL）×100%。② 懸尾實(shí)驗(yàn)： 用膠帶纏繞小鼠尾尖1 cm 處并倒懸于40 cm×40 cm×40 cm 的懸尾測(cè)試箱中，小鼠頭部距離測(cè)試箱底部約25 cm，小鼠適應(yīng)2 min 后，記錄隨后4 min 累計(jì)不動(dòng)時(shí)間，不動(dòng)時(shí)間定義為除正常呼吸外，無(wú)其他任何肢體掙扎動(dòng)作。③強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)：將小鼠單獨(dú)放入水深15 cm，水溫25 ℃的高30 cm 和直徑20 cm塑料圓筒中，小鼠適應(yīng)2 min 后，記錄隨后4 min 不動(dòng)時(shí)間。

1. 5 生化法檢測(cè)各組小鼠腦組織mPFC區(qū)中MDA和GSH水平及SOD活性 行為學(xué)檢測(cè)結(jié)束后，采用戊巴比妥鈉麻醉假手術(shù)組、PSD+AAV-NC 組和PSD+AAV-NXN-OE 組小鼠后斷頭取腦，于冰上迅速分離小鼠雙側(cè)mPFC 組織并放入－80 ℃環(huán)境中凍存。將小鼠腦組織mPFC 區(qū)勻漿，取上清液。根據(jù)生化檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，分別檢測(cè)小鼠腦組織mPFC 區(qū)中MDA 和GSH 水平及SOD 活性。

1. 6 2'，7'- 二 氯 熒 光 素 二 乙 酸 酯（2'，7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate，DCFH-DA）熒光探針標(biāo)記法檢測(cè)各組小鼠腦組織 mPFC 區(qū)中ROS 水平 取假手術(shù)組、PSD+AAV-NC 組和PSD+AAV-NXN-OE 組小鼠腦組織mPFC 區(qū)凍存樣本，剪碎并進(jìn)行酶消化處理，加入預(yù)冷磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline， PBS） 終止消化，500 g 離心10 min，收集細(xì)胞沉淀。加入DCFH-DA重懸細(xì)胞沉淀， 室溫避光孵育30 min。1 000 g 離心10 min，收集細(xì)胞沉淀，加入PBS 緩沖液重懸，使用熒光酶標(biāo)儀于激發(fā)波長(zhǎng)500 nm 和發(fā)射波長(zhǎng)525 nm 處檢測(cè)熒光度值， 以假手術(shù)組小鼠腦組織mPFC 區(qū)熒光度值為1，以熒光度值代表各組小鼠ROS 水平。

1. 7 Western blotting法檢測(cè)各組小鼠腦組織不同腦區(qū)中 NXN蛋白表達(dá)水平 戊巴比妥鈉麻醉小鼠后斷頭取腦， 于冰上迅速分離小鼠腦組織mPFC區(qū)、杏仁核區(qū)和海馬組織。采用RIPA 裂解液裂解各組織樣本，提取總蛋白。使用BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒檢測(cè)蛋白濃度， SDS-PAGE 電泳分離蛋白。濕轉(zhuǎn)法將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF 膜，5% 脫脂奶粉4 ℃封閉過(guò)夜。加入一抗， NXN 抗體（1∶ 1 000）稀釋?zhuān)?GAPDH 抗體（1∶ 2 000）， 室溫孵育2 h。加入二抗，室溫孵育1 h。加入化學(xué)發(fā)光試劑，曝光顯影， 分析蛋白條帶灰度值， 以GAPDH 為內(nèi)參，計(jì)算目的蛋白表達(dá)水平。目的蛋白表達(dá)水平=目的蛋白條帶灰度值/內(nèi)參蛋白條帶灰度值。

1. 8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用 SPSS 22. 0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。各組小鼠糖水偏好率，懸尾實(shí)驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間，小鼠腦組織mPFC 區(qū)中MDA、GSH 和ROS 水平及SOD 活性， 腦組織mPFC 區(qū)、杏仁核區(qū)和海馬組織中NXN 蛋白表達(dá)水平均符合正態(tài)分布，以x±s 表示，多組間樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析，組間樣本均數(shù)兩兩比較采用LSD-t 檢驗(yàn)，2 組間樣本均數(shù)比較采用兩獨(dú)立樣本t 檢驗(yàn)。以Plt;0. 05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2. 1 PSD 小鼠腦組織 mPFC 區(qū)中 NXN 過(guò)表達(dá)效率 PSD 小鼠腦組織mPFC 區(qū)有大量綠色熒光，表明攜帶ZsGreen 綠色熒光蛋白標(biāo)簽的AAVs 病毒在PSD 小鼠腦組織mPFC 區(qū)成功感染并表達(dá)（圖1）。與AAV-NC 組（0. 15±0. 03） 比較， AAV-NXNOE組小鼠腦組織mPFC 區(qū)中NXN 蛋白表達(dá)水平（0. 44±0. 02） 明顯升高（Plt;0. 05）。見(jiàn)圖2。

2. 2 各組小鼠體質(zhì)量、糖水偏好率和懸尾實(shí)驗(yàn)及強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間 與假手術(shù)組比較，PSD 組小鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)緩慢（Plt;0. 05）， 糖水偏好率明顯降低（Plt;0. 05）， 小鼠在懸尾實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中的不動(dòng)時(shí)間均明顯增加（Plt;0. 05）。見(jiàn)圖3 和表1。與假手術(shù)組比較，PSD+AAV-NC 組小鼠糖水偏好率明顯降低（Plt;0. 05），小鼠在懸尾實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中不動(dòng)時(shí)間均明顯增加（Plt;0. 05）。與PSD+AAV-NC組比較，PSD+AAV-NXN-OE組小鼠糖水偏好率明顯升高（Plt;0. 05）， 小鼠在懸尾實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中不動(dòng)時(shí)間均明顯減少（Plt;0. 05）。見(jiàn)表2。

2. 3 各組小鼠腦組織 mPFC 區(qū)中 MDA、GSH 和ROS水平及 SOD活性 與假手術(shù)組比較，PSD+AAV-NC 組小鼠腦組織mPFC 區(qū)中MDA 和ROS水平均明顯升高（Plt;0. 05），GSH 水平和SOD 活性均明顯降低（Plt;0. 05）。與PSD+AAV-NC 組比較， PSD+AAV-NXN-OE 組小鼠腦組織mPFC區(qū)中MDA 和ROS 水平均明顯降低（Plt;0. 05），GSH 水平和SOD 活性均明顯升高（Plt;0. 05）。見(jiàn)表3。

2. 4 2組小鼠腦組織不同腦區(qū)NXN蛋白表達(dá)水平 與假手術(shù)組（mPFC 區(qū)：0. 80±0. 09，杏仁核區(qū)：0. 43±0. 06，海馬區(qū)：0. 28±0. 06） 比較，PSD 組小鼠腦組織mPFC 區(qū)中NXN 蛋白表達(dá)水平（0. 13±0. 04） 明顯降低（Plt;0. 05），PSD 組小鼠腦組織杏仁核區(qū)和海馬組織中NXN 蛋白表達(dá)水平（0. 41±0. 08 和0. 27±0. 08） 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pgt;0. 05）。見(jiàn)圖4。

3 討 論

PSD 發(fā)病機(jī)制復(fù)雜， 包含一些特殊的神經(jīng)生物學(xué)機(jī)制。隨著神經(jīng)成像和計(jì)算神經(jīng)科學(xué)的發(fā)展，人類(lèi)對(duì)PSD 發(fā)病的神經(jīng)基礎(chǔ)有了更深入的了解［12］。mPFC 區(qū)在多種認(rèn)知功能中起著重要的調(diào)節(jié)作用，研究［13］ 表明： mPFC 區(qū)是衰老和癡呆時(shí)認(rèn)知能力下降的神經(jīng)底物。研究［14］ 顯示：雙酚A 長(zhǎng)期暴露誘導(dǎo)小鼠出現(xiàn)抑郁和焦慮樣行為，其病理機(jī)制可能與mPFC 區(qū)錐體神經(jīng)元形態(tài)和功能受損有關(guān)。王存強(qiáng)等［15］ 通過(guò)臨床數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)：海馬組織及前額葉皮質(zhì)神經(jīng)元代謝異?？赡苁荘SD 的神經(jīng)生物學(xué)基礎(chǔ)。研究［16-18］ 顯示： 調(diào)節(jié)mPFC 區(qū)某個(gè)基因表達(dá)水平，可通過(guò)介導(dǎo)下游信號(hào)通路逆轉(zhuǎn)應(yīng)激誘導(dǎo)的小鼠抑郁相關(guān)行為表現(xiàn)。因此，mPFC 區(qū)成為抗抑郁藥物研發(fā)的關(guān)鍵靶向區(qū)域之一。本研究采用MCAO 和CUMS 結(jié)合孤養(yǎng)法構(gòu)建PSD 小鼠模型，小鼠出現(xiàn)抑郁樣行為表現(xiàn)，NXN 蛋白在PSD 小鼠腦組織mPFC 區(qū)中異常低表達(dá)，而其在杏仁核區(qū)和海馬組織中的表達(dá)無(wú)明顯變化， 提示mPFC 區(qū)中NXN 表達(dá)下調(diào)可能參與了PSD 發(fā)病機(jī)制。

NXN 作為一種氧化還原調(diào)節(jié)蛋白， 在氧化還原動(dòng)態(tài)平衡調(diào)節(jié)過(guò)程中發(fā)揮重要作用，但在不同生理和病理環(huán)境中的作用機(jī)制并不一致。TRAN 等［6］發(fā)現(xiàn)：NXN 可以維持鈣調(diào)素激酶2a 的氧化狀態(tài)和活性，并支持突觸和線(xiàn)粒體蛋白的氧化及線(xiàn)粒體呼吸，當(dāng)依賴(lài)NXN 的促氧化功能喪失后，小鼠的過(guò)度動(dòng)機(jī)和活躍減少。研究［19］ 發(fā)現(xiàn)：在酒精性肝病體外細(xì)胞模型中，NXN 被ROS 靶向調(diào)控，而NXN過(guò)表達(dá)會(huì)與內(nèi)源性GSH 協(xié)同作為ROS 清除劑，降低細(xì)胞氧化應(yīng)激水平。同時(shí)，NXN 也被認(rèn)為是抗氧化系統(tǒng)與免疫反應(yīng)整合的關(guān)鍵成分。在植物細(xì)胞中，NXN 通過(guò)提高抗氧化能力和誘導(dǎo)熱休克蛋白保護(hù)細(xì)胞免受熱應(yīng)激誘導(dǎo)的氧化損傷和蛋白變性［20］。因此，NXN 在不同生理和病理環(huán)境中可能是氧化劑，也可能是還原劑，而NXN 平衡氧化還原功能的喪失則可能參與到相關(guān)病理機(jī)制中。氧化應(yīng)激在神經(jīng)精神類(lèi)疾病的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮關(guān)鍵性作用，也被認(rèn)為是PSD 的致病機(jī)制之一［21］。高水平的氧化應(yīng)激將產(chǎn)生過(guò)量的ROS 自由基，導(dǎo)致氧化還原失衡，具有潛在的神經(jīng)毒性［22］。研究［23-24］ 顯示： PSD 患者存在氧化應(yīng)激損傷， 以抗氧化應(yīng)激藥物治療PSD 患者取得了較好的改善效果。本研究結(jié)果顯示：PSD 小鼠腦組織mPFC 區(qū)中NXN 蛋白過(guò)表達(dá)使小鼠抑郁樣癥狀減輕，且腦組織mPFC區(qū)中ROS 水平降低，抗氧化酶SOD 活性和非酶抗氧化劑GSH 水平升高，脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物MDA 水平降低，即小鼠腦組織mPFC 區(qū)中氧化應(yīng)激水平被抑制，提示mPFC 區(qū)中NXN 過(guò)表達(dá)可降低氧化應(yīng)激水平，減少PSD 小鼠抑郁樣行為。

綜上所述，NXN 在PSD 小鼠腦組織mPFC 區(qū)中低表達(dá)，mPFC 區(qū)中過(guò)表達(dá)NXN 可緩解PSD 小鼠抑郁癥狀，其作用機(jī)制可能與調(diào)節(jié)mPFC 區(qū)氧化還原動(dòng)態(tài)平衡有關(guān)。

利益沖突聲明：所有作者聲明不存在利益沖突。

作者貢獻(xiàn)聲明：趙丹參與研究設(shè)計(jì)、實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)和論文撰寫(xiě)，史博參與實(shí)驗(yàn)操作和論文撰寫(xiě)，魏志玄參與實(shí)驗(yàn)操作，崔群建參與數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

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