中藥枇杷花藥用部位表述的合理性研究

摘要 ［目的］研究中藥枇杷花藥用部位與非藥用部位的差異，以及非藥用部位混入的影響。［方法］色譜柱SHIMSEN Anklyo C18（4.6 mm×100 mm，5 μm），流動(dòng)相為甲醇（A）-0.1%醋酸銨溶液（B），梯度洗脫；流速1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)210、355 nm；柱溫35 ℃；進(jìn)樣量10 μL；測(cè)定中藥枇杷花藥用部位和非藥用部位中金絲桃苷、異槲皮苷、槲皮苷、槲皮素、熊果酸、齊墩果酸、科羅索酸這7種成分的含量，并對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。［結(jié)果］枇杷花的花和花蕾中各成分的含量和分布規(guī)律較為接近；其他部位中各成分的含量和分布規(guī)律與枇杷花的花或花蕾比較具有一定差異。［結(jié)論］枇杷花的藥用部位表述為“干燥帶花蕾的花序”要更為清晰合理。

關(guān)鍵詞 枇杷花；活性成分；藥用部位；非藥用部位

中圖分類(lèi)號(hào) R 284 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A

文章編號(hào) 0517-6611（2024）22-0167-04

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2024.22.035

開(kāi)放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

Research on the Rationality of Describing the Medicinal Parts of Loquat Flower

HU Kong-xing，HE Peng

（Wuhu Testing Center for Food and Drug Control，Wuhu，Anhui 241000）

Abstract ［Objective］To study the differences between medicinal and non medicinal parts of loquat flowers，as well as the effects of mixing non medicinal parts.［Method］HPLC was performed on a column of SHIMSEN Anklyo C18（4.6 mm×100 mm，5 μm） using methanol（ A） and 0.1% ammonium acetate（ B） as the mobile phase in a gradient elution;the flow rate was 1.0 mL/min;the detection wavelength was 210 and 355 nm;the column temperature was 35 ℃and the injection volume was 10 μL;determined the content of seven chemical components，including hyperoside，isoquercitrin，quercitrin，quercetin，ursolic acid，oleanolic acid and corosolic acid，in the medicinal and non medicinal parts of loquat flowers;and analyzed the data.［Result］The content and distribution patterns of various chemical components in the flowers and buds of loquat flowers were relatively similar;there were certain differences in the content and distribution patterns of various chemical components in other parts compared to the flowers or buds of loquat flowers.［Conclusion］The medicinal part of loquat flowers is more clearly and reasonably described as a “dry inflorescence with buds”.

Key words Loquat flowers;Active ingredients;Medicinal parts;Non medicinal parts

枇杷花為薔薇科植物枇杷 ［Eriobotrya japonica（Thunb.）Lindl.］的干燥花蕾及花序^［1］，主產(chǎn)于四川，江蘇、浙江等地亦產(chǎn)^［2］，其藥用歷史由來(lái)已久，始載于明代《本草綱目》^［3］，具有疏風(fēng)止咳的功效^［4］?，F(xiàn)代研究表明，枇杷花富含多種活性成分，如綠原酸、類(lèi)黃酮、槲皮苷、異槲皮苷、山楂酸、熊果酸、齊墩果酸等^［5］。我國(guó)是世界上最大的枇杷生產(chǎn)國(guó)，且枇杷的花期長(zhǎng)，花量多^［6］，具備巨大的應(yīng)用及研究潛力。四川、安徽等地也針對(duì)枇杷花制定了相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，其中對(duì)其藥用部位的規(guī)定為“干燥花”^［7］、“干燥花序”^［8］、“干燥花蕾”^［9］或“干燥帶花蕾的花序”^［10］等，但筆者在日常研究及工作中發(fā)現(xiàn)，市售及日常使用的枇杷花藥材或飲片中多為花蕾，并帶有少量或大量已開(kāi)放的花，且發(fā)現(xiàn)多數(shù)枇杷花藥材及飲片中混有部分枇杷葉，或留有較長(zhǎng)花梗。關(guān)于此種現(xiàn)象是否合理，以及對(duì)藥用效果是否有影響，尚未得到考證及研究。因此，此次研究選取了枇杷花中研究較多且藥效作用比較明確的異槲皮苷、熊果酸、金絲桃苷、槲皮素、齊墩果酸、槲皮苷、科羅索酸這7種有效成分為指標(biāo)性成分，建立枇杷花多成分同時(shí)測(cè)定的分析方法，對(duì)不同產(chǎn)地的枇杷花藥用部位及非藥用部位進(jìn)行有效成分分析，以期為中藥枇杷花的資源開(kāi)發(fā)利用與質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。

1 試驗(yàn)儀器與試藥

1.1 儀器

賽默飛UltiMate 3000液相色譜儀（配備DAD）；梅特勒XP205電子天平；賽多利斯ME36S電子分析天平；elma P120H超聲儀。

1.2 試藥

異槲皮苷（ 批號(hào)111809-201804，含量97.2%） 、金絲桃苷（ 批號(hào)111521-201809，含量94.9%） 、槲皮素（批號(hào)100081-201610，含量99.8%）、熊果酸（ 批號(hào)110742-201823，含量99.9%）、槲皮苷（ 批號(hào)111538-202007，含量 93.5%）、 齊墩果酸（批號(hào)110709-201808，含量91.1%） 均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院，科羅索酸（ 批號(hào)drk-1416-980219，含量98.0%） 購(gòu)自西安匯林生物科技有限公司；甲醇（色譜純）；超純水；其他試劑均為分析純。

試驗(yàn)用枇杷花分別為四川產(chǎn)枇杷花（采購(gòu)自安徽亳州藥材市場(chǎng)）、福建產(chǎn)枇杷花（采購(gòu)自安徽亳州藥材市場(chǎng)）、廣東產(chǎn)枇杷花（采購(gòu)自廣西玉林藥材市場(chǎng)），經(jīng)蕪湖市食品藥品檢驗(yàn)中心中藥室鑒定為薔薇科植物枇杷的花，試驗(yàn)所用枇杷花的花、花蕾、葉、花梗均分離自各相應(yīng)批次。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為SHIMSEN Anklyo C18（4.6 mm×100 mm，5 μm），流動(dòng)相A為甲醇，B為0.1%醋酸銨溶液，按表1規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；流速1.0 mL/min；柱溫35 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm（齊墩果酸、科羅索酸、熊果酸）、355 nm（槲皮苷、槲皮素、異槲皮苷、金絲桃苷）；進(jìn)樣量10 μL。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

取對(duì)照品異槲皮苷、金絲桃苷、槲皮素、熊果酸、槲皮苷、齊墩果酸、科羅索酸適量，精密稱(chēng)定，加甲醇溶解并稀釋?zhuān)謩e制成適宜濃度的對(duì)照品貯備液。精密量取各對(duì)照品貯備液適量置同一容量瓶中，加甲醇稀釋?zhuān)瑩u勻，制成每1 mL含異槲皮苷196.0 μg、金絲桃苷469.6 μg、槲皮素224.0 μg、熊果酸481.6 μg、槲皮苷217.6 μg、齊墩果酸388.8 μg、科羅索酸380.0 μg的混標(biāo)溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

精密稱(chēng)取枇杷花各部位的樣品粉末（過(guò)24目篩）1 g，置于100 mL的具塞磨口錐形瓶中，精密加入25 mL甲醇試劑，稱(chēng)重，超聲處理（功率600 W，頻率37 kHz）30 min，放冷至室溫，再次稱(chēng)重，用甲醇補(bǔ)足所減少的重量，搖勻后，濾過(guò)，取續(xù)濾液。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線(xiàn)性關(guān)系考察。取“2.2”項(xiàng)下混標(biāo)溶液，并加甲醇逐級(jí)稀釋?zhuān)凑铡?.1”色譜條件分別進(jìn)行測(cè)定，以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)（X，μg/mL）、峰面積為縱坐標(biāo)（Y）建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，結(jié)果詳見(jiàn)表2。結(jié)果顯示，相關(guān)系數(shù)（r）均為0.999 9，表明所建立的試驗(yàn)方法和選用的分析儀器具有良好的適用性。

2.4.2 精密度試驗(yàn)。精密吸取同一混標(biāo)溶液10 μL，注入液相色譜儀，連續(xù)測(cè)定6次，記錄HPLC色譜圖，測(cè)定相應(yīng)成分的峰面積。異槲皮苷、熊果酸、金絲桃苷、槲皮素、齊墩果酸、槲皮苷、科羅索酸的峰面積的 RSD 分別為0.91%、0.84%、0.72%、1.28%、1.31%、1.19%、1.01%，表明該儀器精密度良好。

2.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)。精密吸取同一枇杷花供試品溶液10 μL，分別在0、4、8、12、24、48 h進(jìn)樣測(cè)定，記錄HPLC色譜圖，測(cè)定相應(yīng)成分的峰面積。異槲皮苷、熊果酸、金絲桃苷、槲皮素、齊墩果酸、槲皮苷、科羅索酸的峰面積的RSD 分別為 0.95%、0.78%、0.67%、0.93%、0.82%、1.01%、0.95%，表明供試品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.4 重復(fù)性試驗(yàn)。分別取同一份枇杷花樣品粉末（過(guò)24目篩），平行制備供試品溶液6份，記錄HPLC色譜圖，測(cè)定相應(yīng)成分的峰面積。計(jì)算異槲皮苷、熊果酸、金絲桃苷、槲皮素、齊墩果酸、槲皮苷、科羅索酸的峰面積的 RSD分別為0.35%、0.74%、0.52%、0.87%、1.49%、0.91%、1.13%，表明供試品制備方法重復(fù)性良好。

2.4.5 回收率試驗(yàn)。精密稱(chēng)取6份已知含量的枇杷花樣品粉末（過(guò)24目篩）0.5 g，置于100 mL錐形瓶中，分別精密添加相應(yīng)含量的混標(biāo)液，測(cè)定相應(yīng)成分的峰面積，計(jì)算各成分的回收率以及各回收率的 RSD。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，異槲皮苷、熊果酸、金絲桃苷、槲皮素、齊墩果酸、槲皮苷、科羅索酸的平均回收率分別為 97.53%、98.24%、100.31%、103.15%、96.49%、101.11%、104.05%，RSD 均小于3%，符合定量分析要求。

2.5 樣品的含量測(cè)定

取各批次枇杷花不同部位的粉末（過(guò)24目篩）約1 g，精密稱(chēng)定，按照“2.3”供試品溶液制備方法制備所需溶液，按“2.1”色譜條件進(jìn)行測(cè)定分析，記錄熊果酸、金絲桃苷等7種有效成分的峰面積，然后采用外標(biāo)法計(jì)算樣品中各成分的含量，所得結(jié)果見(jiàn)表3，混合對(duì)照品和各樣品典型色譜圖見(jiàn)圖1。

將得到的枇杷花各部位7種有效成分含量測(cè)定數(shù)據(jù)（表3）使用SPSS 19.0軟件采用t檢驗(yàn)進(jìn)行分析比較，結(jié)果顯示各批次枇杷花的花蕾與花的成分含量差異不顯著（P>0.05），結(jié)合含量測(cè)定數(shù)據(jù)和色譜圖來(lái)看，發(fā)現(xiàn)花和花蕾中這7種有效成分的含量和分布規(guī)律較為接近。而枇杷葉中這7種有效成分的含量與枇杷花的花蕾和花進(jìn)行比較，差異顯著（P<0.05），結(jié)合含量測(cè)定數(shù)據(jù)來(lái)看，枇杷葉中含量較高的有效成分為熊果酸和科羅索酸，均遠(yuǎn)高于同批次的花和花蕾，此外枇杷葉中的金絲桃苷和異槲皮苷遠(yuǎn)低于花和花蕾，表明枇杷葉中這7種有效成分的含量及分布的規(guī)律與花或花蕾相比具有一定差異。枇杷花的花梗與花蕾和花進(jìn)行比較，差異不顯著（P>0.05），但結(jié)合含量測(cè)定數(shù)據(jù)和色譜圖來(lái)看，花梗與花或花蕾的有效成分含量分布規(guī)律并不一致，花梗中槲皮苷、科羅索酸、齊墩果酸、熊果酸含量較高，金絲桃苷、異槲皮苷、槲皮素的含量則極低，且遠(yuǎn)低于同批次的花和花蕾，但在枇杷花的花和花蕾中金絲桃苷、熊果酸、異槲皮苷、槲皮素的含量相對(duì)較高，其中金絲桃苷含量遠(yuǎn)高于同批次其他部位。

3 結(jié)論與討論

該試驗(yàn)結(jié)果顯示，在枇杷花的花及花蕾中，含量較高的成分是金絲桃苷、熊果酸，且金絲桃苷、異槲皮苷的含量遠(yuǎn)高于葉和花梗。但在現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中，均選取熊果酸作為枇杷花的含量測(cè)定成分，指標(biāo)較為單一，且專(zhuān)屬性不強(qiáng)，摻入少量枇杷葉便能提高整體熊果酸含量，不利于控制枇杷花的雜質(zhì)及非藥用部位的混入。若同時(shí)選取金絲桃苷、異槲皮苷、熊果酸這3種成分作為含量測(cè)定的指標(biāo)成分，可以綜合評(píng)價(jià)枇杷花的品質(zhì)，并可控制雜質(zhì)及非藥用部位混入的影響，從而更好地控制枇杷花的質(zhì)量。另外，基于試驗(yàn)結(jié)果中枇杷花各產(chǎn)地各部位7種有效成分的含量差異情況，后續(xù)還可在此基礎(chǔ)上進(jìn)行指紋圖譜或特征圖譜的研究，這樣便能更全面地把控枇杷花的質(zhì)量。

該研究發(fā)現(xiàn)枇杷花的花和花蕾中7種有效成分的分布規(guī)律基本一致，表明從這7種有效成分分布的角度來(lái)說(shuō)，枇杷花的花和花蕾成分接近，作藥用時(shí)，二者差異可能較小，這與各地相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)中所規(guī)定的枇杷花藥用部位為“干燥花”“干燥花序”“干燥花蕾”或“干燥帶花蕾的花序”等是相統(tǒng)一的，但表述為“干燥帶花蕾的花序”要更為清晰合理，也有利于擴(kuò)大藥源。而枇杷花的花梗和枇杷葉中這7種有效成分的含量分布規(guī)律相較于枇杷花及花蕾有一定差異，在枇杷花的生產(chǎn)中若混入了較多花?；蛉~對(duì)含量測(cè)定結(jié)果可能會(huì)有較大影響，這從有效成分的角度表明在日常生產(chǎn)和使用時(shí)在枇杷花中摻入部分枇杷葉或留有較長(zhǎng)花梗的現(xiàn)象是不合理的。但現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中均未強(qiáng)制規(guī)定枇杷花的雜質(zhì)限量及花梗長(zhǎng)度，建議增加雜質(zhì)限量規(guī)定，或在標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定中明確“除去花梗及雜質(zhì)”，以引導(dǎo)枇杷花藥材及飲片規(guī)范化生產(chǎn)銷(xiāo)售，保證枇杷花的用藥質(zhì)量與安全。

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