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    48份小麥品種(系)抗條銹病和條銹病基因的分子標(biāo)記檢測(cè)及其抗性評(píng)價(jià)

    2024-11-07 00:00:00刁文達(dá)李超玲李昭燕權(quán)衡亢玲閆曉翠
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2024年18期

    摘要:為明確寧夏小麥品種(系)對(duì)小麥條銹病和赤霉病的抗病水平,采用與已知抗病基因緊密連鎖的特異性標(biāo)記法對(duì)48份小麥材料進(jìn)行分子標(biāo)記檢測(cè),并對(duì)供試小麥品種(系)進(jìn)行系譜分析。通過對(duì)抗條銹病和抗赤霉病典型代表基因Yr5、Yr9、Yr10、Yr15、Yr18、Yr26、Yr30和Fhb1進(jìn)行檢測(cè),并對(duì)其在寧夏小麥中的分布頻率進(jìn)行分析。結(jié)果表明,在48份參試品種(系)中,分別含有Yr5、Yr9、Yr10、Yr15、Yr18、Yr26、Yr30抗性基因的小麥材料有41、15、5、16、20、45、26份,占供試材料的85%、31%、1%、33%、41%、93%、54%;在所測(cè)的小麥品系中有42份供試材料攜帶Fhb1基因,占供試材料的87%。本研究,通過選用中國(guó)寧夏48份典型小麥品種(系)進(jìn)行抗條銹病和赤霉病的分子標(biāo)記檢測(cè),為作物育種和遺傳研究提供有效遺傳信息。

    關(guān)鍵詞:小麥;條銹病;分子標(biāo)記;基因檢測(cè);種質(zhì)資源;抗性評(píng)價(jià)

    中圖分類號(hào):S435.121.4+2 文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

    文章編號(hào):1002-1302(2024)18-0154-06

    收稿日期:2023-10-31

    基金項(xiàng)目:華北作物改良與調(diào)控國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室、河北農(nóng)業(yè)大學(xué)引進(jìn)人才項(xiàng)目(編號(hào):NCCIR2021RC-6)。

    作者簡(jiǎn)介:刁文達(dá)(1999—),男,河北邢臺(tái)人,碩士研究生,從事玉米、小麥抗病性研究。E-mail:d16632233175@163.com。

    通信作者:亢 玲,從事小麥抗病性研究,E-mail:kangling1005@163.com;閆曉翠,講師,主要從事玉米、小麥抗病遺傳育種,E-mail:yxc1234jy@163.com。

    小麥(Triticum aestivum L.)是我國(guó)重要的糧食作物,對(duì)我國(guó)糧食的供給作出了重大貢獻(xiàn)[1。而小麥條銹病是世界上影響范圍zsx+9fWw+SUeXo6v7PRE8RA8MXn+BRvdZJ3QSgZwCrI=較大的小麥病害之一,也是寧夏小麥產(chǎn)區(qū)主要病害之一,每年都會(huì)對(duì)寧夏小麥的產(chǎn)量造成嚴(yán)重?fù)p失,因此對(duì)寧夏小麥產(chǎn)區(qū)的遺傳多樣性進(jìn)行分析,并為小麥抗病育種提供一些參考價(jià)值。小麥條銹病是一種由小麥條銹菌(Puccinia striiformis f. sp. tririci)引起的氣傳性真菌類病害,它的變異類型較多,分布范圍較廣,可降低感病品種的籽粒數(shù)量和品質(zhì),進(jìn)而使產(chǎn)量減少40%[2-4。小麥條銹病病原體可在種植季節(jié)的大部分生長(zhǎng)階段都感染小麥植株,主要是降低小麥的光合效率,進(jìn)而導(dǎo)致植物有機(jī)物的合成減少。此外,赤霉病隨氣候的變化也對(duì)小麥的產(chǎn)量造成了嚴(yán)重影響。至目前為止,小麥赤霉病常發(fā)區(qū)已擴(kuò)展到我國(guó)黃淮海南部麥區(qū),且西北麥區(qū)也已日益加重,該病害已成為我國(guó)小麥產(chǎn)區(qū)常發(fā)性的重大小麥病害。已有研究人員發(fā)現(xiàn),來源于望水白的Fhb1是目前抗性最高且應(yīng)用廣泛的抗赤霉病基因。利用已知分子標(biāo)記對(duì)抗赤霉病基因Fhb1進(jìn)行快速檢測(cè),從而篩選出獲得小麥抗赤霉病的種質(zhì)資源,為小麥抗赤霉病育種選擇提供依據(jù),但當(dāng)前抗病資源匱乏、抗性遺傳基礎(chǔ)狹窄是我國(guó)小麥在抗病育種中面臨的主要問題[5-6。要解決以上問題,必須發(fā)掘新的抗病種質(zhì),挖掘新的抗病基因,才能豐富其遺傳多樣性7。然而,噴施農(nóng)藥對(duì)小麥條銹病和赤霉病進(jìn)行防治,盡管能夠達(dá)到一定的控制效果,但它的成本昂貴,而且還會(huì)對(duì)生態(tài)環(huán)境造成影響,而使用抗銹品種是減少各種作物病害損害的最經(jīng)濟(jì)和有效的方法8-9。

    自20世紀(jì)50年代條銹病廣泛流行以來,我國(guó)對(duì)該病的流行和管理進(jìn)行了廣泛的研究。小麥的病害防治對(duì)于小麥的產(chǎn)量來說至關(guān)重要,迄今,在國(guó)際上以Yr系統(tǒng)正式命名的主效抗條銹病基因共有84個(gè)位點(diǎn),即Yr1~Yr84[10-11;其中大多數(shù)在小麥的所有生長(zhǎng)階段對(duì)葉銹病都有效,在苗期很容易被識(shí)別,這被稱為全生育期抗性(all stage resistance,簡(jiǎn)稱ASR),這種類型的抗性通常由1個(gè)在幼苗期開始表達(dá)的單一基因控制(幼苗抗性)。然而,一些Lr基因通常在成株期階段表達(dá),這種類型的抗性被稱為成株植物抗性(adult plant resistance,簡(jiǎn)稱APR),進(jìn)一步分為小種?;禺愋院头切》N?;禺愋?種類型[12-13。由于小麥的抗病基因?qū)ζ贩N小種的?;院軓?qiáng),在生產(chǎn)上使用的抗病基因很容易隨著毒力的頻繁變化而失去抗性[14-16。由于小麥可以在不同的地理和氣候條件下種植,銹病病原體在不同的環(huán)境條件下也展現(xiàn)了增強(qiáng)的適應(yīng)能力。如果氣候條件適合銹病,并在大面積內(nèi)種植單一抗性小麥品種,這些品種便可以產(chǎn)生抗性。

    本研究利用分子標(biāo)記檢測(cè)和系譜分析方法對(duì)48份供試材料進(jìn)行抗病基因篩選,其目的是通過分子標(biāo)記診斷和家系分析來鑒定小麥品種(系)和改良種質(zhì)的抗性。了解這些小麥品種(系)的抗性,挖掘新的抗性種質(zhì)資源,對(duì)我國(guó)小麥抗銹性育種的篩選具有重要價(jià)值。

    1 試驗(yàn)材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    48份供試寧夏小麥材料(表1)(感條銹病的對(duì)照品種Avocet S、感赤霉病對(duì)照品種Tatara以及含有已知抗赤霉病基因的品種Yr27),由寧夏農(nóng)林科學(xué)院農(nóng)作物研究所提供。已知條銹病抗性基因陽性對(duì)照材料包括Yr5(T.spelta Album)、Avocet S*6/Yr9、Avocet S*6/Yr10/6、Avocet S*6/Yr15/6、Avocet S*6/Yr18、Avocet S*6/Yr26、Yr30(Opata85)、Avocet S;鄭州5389作為陰性對(duì)照材料;赤霉病以Tatara品種為陽性對(duì)照、鄭州5389為陰性對(duì)照。條銹病和赤霉病分子標(biāo)記檢測(cè)于2022—2023年間在河北農(nóng)業(yè)大學(xué)華北作物種質(zhì)資源研究與利用省部共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室完成。

    1.2 小麥基因組DNA的提取與分子檢測(cè)

    將供試小麥材料種植于育苗盤內(nèi),以營(yíng)養(yǎng)土和蛭石3∶1的比例進(jìn)行種植,播種20~25粒/盆飽滿的種子,覆土,在底部澆水,使其吸收并直至土壤濕潤(rùn)移出,放到22~25 ℃室內(nèi)培養(yǎng)6~8 d,待用。待幼苗長(zhǎng)到3葉期時(shí)用CTAB法提取基因組DNA[17,然后進(jìn)行Yr基因檢測(cè),用于檢測(cè)分子標(biāo)記引物,該引物由北京擎科生物科技股份有限公司合成(表2)。

    1.3 PCR擴(kuò)增

    選取國(guó)際上主效抗條銹病基因Yr5[18、Yr9[19、Yr10[20、Yr15[21、Yr18[22、Yr26[23、Yr30[24以及抗赤霉病基因Fhb1[25共8個(gè)緊密連鎖分子標(biāo)記,對(duì)所供試的48份小麥材料進(jìn)行鑒定。PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系:2×Taq Master Mix 10 μL;10 μmol/L上游特異引物 0.5 μL,終濃度為0.1~0.3 μmol/L;10 μmol/L下游特異引物0.5 μL,終濃度為0.1~0.3 μmol/L;模板DNA 2 μL;補(bǔ)水至20 μL。PCR擴(kuò)增反應(yīng)程序:預(yù)變性95 ℃ 3 min;變性95 ℃ 15 s,退火55~62 ℃ 15 s,延伸 72 ℃ 15 s,35次循環(huán);延伸72 ℃ 5 min。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 已知抗條銹病基因分子標(biāo)記檢測(cè)結(jié)果

    48份供試材料是來自于寧夏小麥主產(chǎn)區(qū),所有供試材料可能攜帶的基因均列在表3。以感病材料Acocet S為陽性對(duì)照,對(duì)其供試材料的抗條銹病基因Yr5、Yr9、Yr10、Yr15、Yr18、Yr26、Yr30已知標(biāo)記檢測(cè)。結(jié)果(表3)顯示:以Avocet S為陽性對(duì)照,在寧春32號(hào)、寧春33號(hào)和寧春35號(hào)等41份材料中,均可以擴(kuò)增出100 bp的目的條帶,表明這些材料中可能含有Yr5這個(gè)基因;Avocet S*6/Yr9為陽性對(duì)照,發(fā)現(xiàn)在15份小麥材料可以擴(kuò)增出1 500 bp的抗條銹病基因Yr9目的條帶(圖1),說明這些供試材料中均攜帶有Yr9;寧春33號(hào)、34號(hào)、35號(hào)、36號(hào)和寧春39號(hào)5份材料中鑒定出含有Yr10,且目的條帶為543 bp的條帶;以Avocet S*6/Yr15為陽性對(duì)照,在寧春32號(hào)、隴春7號(hào)和春山4號(hào)等16份供試材料中,可以擴(kuò)增出與Yr15緊密連鎖的目的條帶190 bp,表明在這些材料中均攜帶有Yr15抗病基因;用Avocet S*6/Yr18為陽性對(duì)照,在寧春32號(hào)、33號(hào)和寧春44號(hào)等20份小麥材料中,均可以擴(kuò)增出150 bp的Yr18目的條帶(圖2),這表明這21份供試小麥材料中含有Yr18抗病基因;同理,以AvocetS*6/Yr26為陽性對(duì)照,在春山1號(hào)、索諾拉64和隴春7號(hào)等45份材料,均攜帶有抗條銹病基因Yr26(圖3);索諾拉64、隴春7號(hào)和寧春44號(hào)等26份材料,均含有抗條銹病基因Yr30(圖4)。此外,分別對(duì)這8個(gè)已知廣譜抗條銹病基因在所有供試小麥材料中進(jìn)行占比分析,結(jié)果表明:其攜帶有抗條銹病基因Yr5、Yr9、Yr10、Yr15、Yr18、Yr26、Yr30,分別占供試材料的85%、31%、1%、33%、41%、93%、54%。

    2.2 抗赤霉病基因Fhb1的分子標(biāo)記檢測(cè)結(jié)果

    對(duì)48份供試小麥品種(系)進(jìn)一步利用抗赤霉病基因Fhb1的特異功能連鎖SSR標(biāo)記Xbarc147進(jìn)行檢測(cè),且以Tatara(攜帶Fhb1)為陽性對(duì)照;結(jié)果表明(圖5),48份供試小麥材料中可成功擴(kuò)增出與Fhb1目的條帶(122 bp)相一致的材料有42份(如寧春34號(hào)、35號(hào)和寧春44號(hào)等),且占比達(dá)到87%。這表明在寧夏小麥材料中普遍攜帶有抗赤霉病基因,且對(duì)赤霉病有一定的抗性,為抗赤霉病遺傳育種的研究提供良好的供試材料。

    3 討論

    分子標(biāo)記為基因檢測(cè)提供了一種更有效和更經(jīng)濟(jì)的方法[26。本研究使用已知抗病基因緊密連鎖標(biāo)記來檢測(cè)8個(gè)已知抗病基因在48份寧夏小麥種質(zhì)資源上的分布情況。結(jié)果顯示,在同一供試材料中可能均攜帶有2個(gè)以上抗病基因存在,其寧春38號(hào)中攜帶有抗條銹病基因Yr5和Yr15,該品種由永T2945與永1265(Veer后代)雜交,經(jīng)寧夏永寧縣

    小麥育繁所育成,其具有良好的抗條銹病。至今,在國(guó)內(nèi)外Yr5和Yr15仍然是少有的幾乎對(duì)所有條銹病菌表現(xiàn)出廣譜抗性[27-28,且普遍應(yīng)用于西北(四川)和西南(寧夏)麥區(qū)的小麥育種中。Bastian材料中攜帶有抗葉銹病基因Lr26和抗赤霉病基因Fhb1,表明Bastian對(duì)葉銹病和赤霉病具有良好的抗性。寧春40號(hào)品種同時(shí)攜帶Yr5、Yr15、Yr26、Fhb1,該品種是寧夏大學(xué)以中寧58912和永1712進(jìn)行雜交,采用雜交系譜法選育優(yōu)良單株,系統(tǒng)選育而成,高抗銹病。

    目前我國(guó)在小麥21條染色體上已經(jīng)定位超過250個(gè)抗性位點(diǎn)[29-30,其中Fhb1是世界上公認(rèn)的主效基因,這個(gè)基因已經(jīng)被克隆,這為利用該基因進(jìn)行分子標(biāo)記輔助選擇提供了便利。本研究通過對(duì)48個(gè)供試小麥材料的遺傳分析,結(jié)果表明,這些標(biāo)記物穩(wěn)定,可用于基因檢測(cè)。在所有攜帶有抗條銹病基因分Yr5、Yr9、Yr10、Yr15、Yr18、Yr26和Yr30中,Yr26占比最大,說明Yr26作為抗銹病源仍廣泛用于生產(chǎn)品種中。但我們應(yīng)合理利用不同類型的抗性基因,發(fā)掘優(yōu)良抗源,為小麥抗病育種及病害精準(zhǔn)防控提供參考。

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