乳酸菌與纖維素酶對丹參地上部分青貯品質(zhì)的影響

收稿日期：2024-01-18；修回日期：2024-04-08

基金項(xiàng)目：山東省重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（2019YYSP026）；浙江大學(xué)山東（臨沂）現(xiàn)代農(nóng)業(yè)研究院服務(wù)地方經(jīng)濟(jì)發(fā)展項(xiàng)目（ZDNY-2021-FWLY02004）資助

作者簡介：酆炳森（1997-），男，漢族，河北張家口人，碩士研究生，主要從事農(nóng)產(chǎn)品深加工研究，E-mail：fengbingsen2021@163.com；*通信作者Author for correspondence，E-mail：hanqingdian@lyu.edu.cn；yguoliu@163.com

摘要：為研究不同添加劑對丹參（Salvia miltiorrhiza Bunge）地上部分青貯發(fā)酵品質(zhì)和微生物群落多樣性的影響，以丹參地上部分為材料，自然發(fā)酵為對照組，添加乳酸菌（Lactobacillus）（1×10⁸ CFU）、添加纖維素酶（0.1 g·kg^-1）、組合添加（乳酸菌（1×10⁸ CFU、纖維素酶0.1 g·kg^-1）為試驗(yàn)組，60 d后取樣分析其品質(zhì)及微生物多樣性。結(jié)果表明：處理組對飼料的粗蛋白、總多糖、乳酸含量和pH值有顯著影響。與對照組相比，添加乳酸菌顯著提高飼料的粗蛋白含量，顯著降低氨態(tài)氮/總氮；添加纖維素酶顯著提高飼料乳酸含量，降低pH值、氨態(tài)氮/總氮；組合添加原飼料粗蛋白含量不變，顯著增加可溶性碳水化合物、總多糖、乳酸含量，降低pH值、氨態(tài)氮/總氮。發(fā)酵顯著增加了乳酸桿菌屬的相對豐度，降低了鏈球菌屬（Streptococcus）的相對豐度，乳酸桿菌屬在發(fā)酵過程中起主要作用?？傊?，處理組均能提高丹參地上部分青貯飼料的品質(zhì)，組合添加組的丹參地上部分青貯品質(zhì)最佳。

關(guān)鍵詞：丹參地上部分；青貯；發(fā)酵品質(zhì)；微生物多樣性

中圖分類號：S816.53 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1007-0435（2024）10-3313-07

Effects of Lactic Acid Bacteria and Cellulase on the Silage Quality of Above-ground Parts of Salvia miltiorrhiza

FENG Bing-sen¹， LIU Yu-shan²， LIU Ling-xiao³， WANG Xiao⁴， HAN Qing-dian^1*， LIU Yun-guo^1*

（1. School of Life Sciences， Linyi University， Linyi， Shandong Province 276005， China; 2. Shandong （Linyi） Modern Agricultural Research Institute of Zhejiang University， Linyi， Shandong Province 276000， China;3. Linyi Academy of Agricultural Sciences， Linyi， Shandong Province 276012， China;4. Pingyi Yuantong Herbal Medicine Technology Development Co.， Ltd， Pingyi， Shandong Province 273300， China）

Abstract：In order to study the effects of different additives on the silage fermentation quality and microbial community diversity of aboveground parts of Salvia miltiorrhiza Bunge，the aboveground parts of Salvia miltiorrhiza Bunge were used as the material，natural fermentation was used as the control group，and bacteria （1×10⁸ CFU），cellulase （0.1 g·kg^-1），and the combination of additives （bacteria 1 × 10⁸ CFU，cellulase 0.1 g·kg^-1） were added as the experimental group，and the samples were taken after 60 days of fermentation. The results showed that the treatment groups had a significant effect on the crude protein，total polysaccharide，pH value and lactic acid content of the feed. Compared to the control group，the addition of the lactic acid bacteria significantly increased the crude protein content of the feed and significantly decreased the ammoniacal nitrogen/total nitrogen. The addition of cellulase significantly increased the lactic acid content of the feeds and decreased the pH and ammoniacal nitrogen/total nitrogen. The combination of the additions maintained the original feeds’ crude protein content，significantly increased the content of the soluble carbohydrates，total polysaccharides，and lactic acid，and decreased the pH value and ammoniacal nitrogen/total nitrogen. Fermentation significantly increased the relative abundance of Lactobacillus and decreased the relative abundance of Streptococcus. Lactobacillus played a major role in the fermentation process. In conclusion，all treatment groups improved the quality of Salvia miltiorrhiza Bunge above-ground part silage，and the best quality of Salvia miltiorrhiza Bunge above-ground part silage was obtained in the combination addition group.

Key words：Above-ground parts of Salvia miltiorrhiza;Silage;Fermentation quality;Microbial diversity

丹參（Salvia miltiorrhiza Bunge）是唇形科多年生草本植物，在國內(nèi)種植面積約1.3萬km²，主要分布于山東臨沂、四川中江、山西萬榮等地^［1-2］。丹參具有活血止痛、通經(jīng)止痛、寧心安神、涼血消癰等功效，在臨床上主要用于治療痛經(jīng)經(jīng)閉、胸痹心痛，脘腹脅痛等疾病^［3-4］。丹參的藥用部分主要是其根和根莖，而丹參的地上的組成部分占植株總生物量的60%～70%，花、莖、葉等非藥用部位未被充分利用，造成資源浪費(fèi)^［5］。研究發(fā)現(xiàn)，丹參的地上部分具有和地下部分類似的生物活性和化學(xué)成分^［6］。丹參葉含有多種化學(xué)成分包括包酚類、黃酮類、萜類化合物等，其中有效成分為蘆丁、異槲皮素、山奈酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖糖苷、丹參素、咖啡酸等物質(zhì)^［7-9］。

丹參地上部分含有較高含量的粗纖維、蛋白質(zhì)和多糖等物質(zhì)，可以作為優(yōu)質(zhì)的牧草資源。纖維素酶被廣泛用作飼料添加劑，可有效破壞細(xì)胞壁，將細(xì)胞壁中的纖維素降解成還原糖，通過增強(qiáng)纖維消化來提高日糧的營養(yǎng)價(jià)值，并提高反芻動物的生產(chǎn)性能^［10］。乳酸菌可以迅速在青貯飼料中生長繁殖，形成優(yōu)勢菌群，并有效抑制有害微生物的生長，改良青貯飼料的發(fā)酵品質(zhì)^［11］。青貯可以提高丹參地上部分的適口性和利用率，也可緩解冬季粗飼料的不足。目前為止，關(guān)于丹參地上部分在飼料中的應(yīng)用及研究鮮有報(bào)道，特別是利用乳酸菌和纖維素酶單一及組合添加對丹參地上部分影響的研究未見報(bào)道。

本試驗(yàn)旨在探究乳酸菌、纖維素酶及組合添加對丹參地上部分青貯飼料發(fā)酵品質(zhì)的影響，為丹參地上部分資源的開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)，為優(yōu)質(zhì)牧草的青貯發(fā)酵提供理論支持。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

青貯原料為‘魯?shù)?號’，收集結(jié)實(shí)期的丹參地上部分。經(jīng)測定丹參地上部分青貯前的干物質(zhì)（Dry matter，DM）含量為37.8%，粗蛋白（Crude protein，CP）含量為6.41%，中性洗滌纖維（Neutral detergent fiber，NDF）含量為20.8%，酸性洗滌纖維（Acid detergent fiber，ADF）含量為12.0%，可溶性碳水化合物（Water soluble carbohydrate，WSC）含量為3.08%、總多糖（Total polysaccharide，TP）含量為0.49%。乳酸菌（植物乳桿菌Lactobacillus plantarum，保存于臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院食品實(shí)驗(yàn)室菌種庫）添加量為1×10⁸ CFU·mL^-1，纖維素酶制劑購買于上海源葉生物科技有限公司，酶活力50 U·mg^-1。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)以丹參地上部分為原材料，設(shè)置自然青貯（CK_60）、添加植物乳桿菌（R_60），添加纖維素酶（M_60），添加植物乳桿菌+纖維素酶（RM_60）四個處理。R組植物乳桿菌添加量為2 × 10⁸ CFU·kg^-1，M組纖維素酶添加量為 0.1 g·kg^-1，R+M組植物乳桿菌和纖維素酶添加量與R組和M組相同。每個處理進(jìn)行3個重復(fù)。

1.3 青貯調(diào)制

將丹參地上部分剪碎至1 cm以內(nèi)，每個處理組稱取500 g，置入聚乙烯真空包裝袋中，排除空氣并封口。在28℃恒溫培養(yǎng)箱避光保存60 d后開封，進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)測定分析。

1.4 測定指標(biāo)和方法

營養(yǎng)指標(biāo)分析：原料及青貯飼料的CP含量采用凱氏定氮法^［12］測定；ADF和NDF含量參考嚴(yán)小龍等人的方法^［13］測定；WSC含量采用蒽酮-硫酸比色法測定，參考余汝華等的方法測定^［14］；TP含量采用苯酚-硫酸法^［15］測定；DM含量測定方法參考GB/T 6435-2014^［16］測定。

發(fā)酵品質(zhì)分析：pH值采用pH計(jì)測定；氨態(tài)氮（Ammonia nitrogen，AN）含量采用凱氏定氮法測定^［17］；乳酸（Lactic acid，LA）、乙酸（Acetic acid，AA）、丙酸（Propionic acid，PA）、丁酸（Butyrate，BA）含量采用液相色譜法測定^［18］。

微生物多樣性的測定：使用E.Z.N.A^TM Mag-Bind Soil DNA Kit（Omega，美國）試劑盒對樣品中微生物的總DNA進(jìn)行提取。選取細(xì)菌16S rRNA基因的V3-V4可變區(qū)，使用細(xì)菌16S rRNA通用引物F（CCTACGGGNGGCWGCAG）和R（GACTACHVGGGTATCTAATCC）對提取的DNA模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增（95℃下保持3 min，95℃保持30 s，45℃保持30 s，72℃保持30 s循環(huán)5次，然后95℃保持30 s，55℃保持30 s，72℃保持30 s循環(huán)20次，最后72℃延伸5 min）。使用Illumina MiSeq平臺（Illumina Corporation，San Diego，美國）進(jìn)行測序。

1.5 數(shù)據(jù)分析

使用Microsolft Eecel進(jìn)行數(shù)據(jù)整理，Graphpad prism 9.0軟件進(jìn)行方差分析和多重比較。數(shù)據(jù)結(jié)果以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同處理對丹參地上部分青貯飼料營養(yǎng)成分的影響

丹參地上部分的DM含量為 379 g·kg^-1，CP含量為 63.77 g·kg^-1，NDF含量為209.67 g·kg^-1，ADF含量為122.33 g·kg^-1，WSC含量為30.67 g·kg^-1，TP含量為4.93 g·kg^-1。丹參地上部分青貯后，DM，CP，NDF，WSC，TP含量降低，ADF含量增加。添加乳酸菌和纖維素酶對丹參地上部分的營養(yǎng)成分影響情況如表1所示。

各處理組的DM含量均顯著低于對照組（P<0.05），添加纖維素酶組的DM含量最低為346.33 g·kg^-1。乳酸菌處理的CP含量高于對照組，但組合添加處理的CP含量低于對照組，纖維素酶處理的CP含量顯著低于對照組（P<0.05）。乳酸菌和纖維素酶處理的NDF含量均顯著低于對照組（P<0.05），組合添加處理的NDF含量也低于對照組。乳酸菌、纖維素酶及組合添加處理的ADF含量均顯著低于對照組（P<0.05）。乳酸菌處理的WSC含量顯著低于對照組（P<0.05），纖維素酶和組合添加處理的WSC含量均顯著高于對照組（P<0.05）。乳酸菌處理的TP含量低于對照組，纖維素酶和組合添加處理的TP含量均顯著高于對照組（P<0.05）。

2.2 不同處理對丹參地上部分青貯飼料發(fā)酵品質(zhì)的影響

丹參地上部分的pH值為6.28，AN/TN為1.63，LA含量為3.33 g·kg^-1，乙酸含量為8.30 g·kg^-1，丙酸含量為0.85 g·kg^-1。丹參地上部分青貯后，飼料品質(zhì)有明顯變化，pH值和AA含量顯著降低，AN/TN，LA，PA含量顯著增加（P<0.05）。乳酸菌、纖維素酶和組合添加處理對丹參地上部分青貯飼料發(fā)酵品質(zhì)的影響如表2所示。

乳酸菌處理降低了青貯飼料的pH值，纖維素酶和組合添加處理的pH值均顯著低于對照組（P<0.05），組合添加處理的pH值最低為4.43。乳酸菌、纖維素酶和組合添加處理的AN/TN值均顯著低于對照組（P<0.05），纖維素酶處理的AN/TN值最低，為2.30，與對照組相比下降了59.22%。乳酸菌處理的LA含量顯著低于對照組（P<0.05），達(dá)到最低值18.94 g·kg^-1，纖維素酶和組合添加處理的LA含量顯著高于對照組（P<0.05），纖維素酶處理的LA含量最高為21.34 g·kg^-1。乳酸菌、纖維素酶和組合添加處理的AA含量均顯著低于對照組（P<0.05），乳酸菌處理的AA含量最低，為4.27 g·kg^-1。乳酸菌、纖維素酶和組合添加處理的PA含量均顯著低于對照組（P<0.05），乳酸菌處理的PA含量最低為0.62 g·kg^-1。在原料和處理組樣品中均未檢測到BA。

2.3 青貯飼料微生物多樣性分析

通過16S rRNA基因擴(kuò)增子的高通量測序，一共得到205 347個細(xì)菌序列。基于生物信息學(xué)分析的結(jié)果，這些序列被聚類成了501個可操作的分類單元（Operational taxonomic units，OTU）。如表3所示，各樣本的OTUs范圍為56～128，對照原料的OTU最低為56，添加乳酸菌、纖維素酶及其組合的青貯后飼料的OTU均大于100，其中組合添加組的最高為128。不同樣品中的覆蓋率均達(dá)到0.99，可以代表樣品中的真實(shí)情況，Shannon指數(shù)、Chao指數(shù)和Ace指數(shù)和OTUs具有相似的趨勢，接種乳酸菌組和添加纖維素酶組以及組合添加組的細(xì)菌豐度高。組合添加組的Shannon指數(shù)和Ace指數(shù)最高，Chao指數(shù)在添加纖維素酶組最高。對OTU數(shù)量進(jìn)行比對得到CK時(shí)期菌群結(jié)構(gòu)最簡單，RM60時(shí)期菌群結(jié)構(gòu)最復(fù)雜；Shannon指數(shù)越大，群落豐富度越高，Simpson指數(shù)與其相反，指數(shù)越大群落豐富度越低，說明了接種乳酸菌和纖維素酶的混合組群落豐富度最高。

5個處理組共獲得138 個OTU（圖1），其中共有OTU數(shù)量28個，占比20.29%。CK，CK_60，R_60，M_ 60和RM_60分別含有56，102，110，105和128，表明組合添加組的物種數(shù)目最多。CK，CK_60，R_60，M_ 60和RM_60特有的OTU數(shù)目分別含為3，0，2，4和33個，表明組合添加組的特有物種數(shù)目最大。

發(fā)酵后青貯飼料中微生物群落結(jié)構(gòu)發(fā)生顯著改變，在門水平下細(xì)菌微生物多樣性變化如圖2所示，藍(lán)細(xì)菌門（Cyanobacteria）是發(fā)酵前新鮮丹參葉最優(yōu)勢的菌門，占比87.61%，不同方式發(fā)酵后青貯飼料中厚壁菌門（Firmicutes）代替藍(lán)細(xì)菌門成為最優(yōu)勢菌門，從發(fā)酵前的0.16%，顯著增加至51.55%～80.34%。對比CK60，R60和M60三種不同處理方式，M60中厚壁菌門的相對豐度最高。在屬水平下不同方式發(fā)酵前后青貯飼料中微生物多樣性變化如圖3所示，發(fā)酵前后共有6種優(yōu)勢菌屬（物種豐度≥1%），分別為乳桿菌屬（Lactobacillus）、鏈球菌屬（Streptophyta）、片球菌屬（Pediococcus）、不動桿菌屬（Acinetobacter）、短波桿菌屬（Brevundimonas）、金黃桿菌屬（Chryseobacterium）。

發(fā)酵后乳桿菌屬的相對豐度增加，從發(fā)酵前的0.04%，顯著增加至發(fā)酵后49.55%～76.30%，表明乳桿菌屬在不同處理方式的發(fā)酵過程中均起主要作用。鏈球菌屬的相對豐度降低，從87.62%下降至15.87%～27.04%。

3 討論

3.1 不同處理對丹參地上部分青貯飼料營養(yǎng)品質(zhì)和發(fā)酵指標(biāo)的影響

飼料的營養(yǎng)成分是評價(jià)飼料品質(zhì)最直觀的指標(biāo)，測定飼料營養(yǎng)成分的含量可以對飼料品質(zhì)進(jìn)行初步評估^［19］。飼料的DM含量是反映飼料營養(yǎng)價(jià)值的重要指標(biāo)之一^［20］，在青貯過程中，添加劑組的DM含量顯著下降，該結(jié)果與牛瓊梅等研究的青貯飼料在不同處理組的DM含量下降結(jié)果一致^［21］。該結(jié)果可能由于青貯前期，有氧環(huán)境中的好氧微生物將CP迅速分解并產(chǎn)生AN/TN，同時(shí)消耗大量營養(yǎng)物質(zhì)，導(dǎo)致青貯飼料中DM含量降低。該試驗(yàn)中添加乳酸菌的CP含量高于空白對照組，可能是因?yàn)槿樗峋龠M(jìn)LA發(fā)酵，同時(shí)抑制腐敗菌等有害微生物的生長繁殖，降低了蛋白質(zhì)和氨基酸的降解。三個處理組中，添加纖維素酶組的CP含量最低，添加乳酸菌組的CP含量最高，因此添加乳酸菌可以獲得CP含量較高的飼料。

NDF和ADF可以反映飼料的纖維含量，纖維素含量影響動物的采食率和消化率^［22］。丹參地上部分原料中NDF和ADF含量較高，青貯后NDF含量下降，ADF含量增加，與對照組相比乳酸菌、纖維素酶及組合添加均降低了NDF，ADF含量。有研究表明，添加乳酸菌和纖維素酶可以降低青貯飼料中的纖維含量，這與本研究結(jié)果一致^［23-24］。原因可能為乳酸菌發(fā)酵過程中利用了纖維素而導(dǎo)致其含量降低，纖維素酶促使細(xì)胞壁分解，細(xì)胞內(nèi)容物泄漏，導(dǎo)致飼料的纖維含量下降，并轉(zhuǎn)化為發(fā)酵底物^［25-26］。WSC是青貯飼料發(fā)酵品質(zhì)的重要指標(biāo)^［27］，原料中WSC和TP含量較高，青貯后顯著下降，與對照組相比添加纖維素酶和組合添加中的WSC和TP含量較高，可能因?yàn)樘砑觿┨幚砗?，降解組織細(xì)胞，導(dǎo)致NDF和ADF含量降低，而轉(zhuǎn)化為糖類物質(zhì)，該結(jié)果與楊紅、張歡等的研究結(jié)果相一致^［28-29］。

不同處理組對青貯飼料的pH值，AN，LA，AA和PA含量有顯著影響（P<0.05）。pH值是評價(jià)青貯飼料品質(zhì)的重要指標(biāo)，較低的pH值可以抑制有害微生物的生長繁殖，當(dāng)飼料的pH值小于4.5時(shí)說明飼料品質(zhì)較好^［30］。AN/TN可以判斷有害微生物分解青貯飼料蛋白質(zhì)的程度，比值越低，品質(zhì)越好^［31］。本研究中添加纖維素酶和組合添加組青貯飼料的pH值均在4.5以下，且顯著低于對照組（P<0.05）。三個處理組均顯著提高了青貯飼料的LA含量，顯著降低了AN/TN以及AA和PA含量，該結(jié)果與鄭明揚(yáng)、魏曉斌等的研究結(jié)論相一致^［32-33］。

3.2 丹參地上部分青貯飼料的微生物多樣性

在門水平下，發(fā)酵后青貯飼料中厚壁菌門代替藍(lán)細(xì)菌門成為最優(yōu)勢菌門，這與吳陸處等人的研究結(jié)果相一致。厚壁菌門是起主要作用的發(fā)酵菌門，可以有效地分解植物飼料中的粗纖維，從而提高飼料的適口性^［34］。對比三種不同添加方式，在添加纖維素酶的飼料中厚壁菌門的相對豐度最高，由此可知添加纖維素酶處理的青貯飼料可以提高厚壁菌門的相對豐度，與Mu等的結(jié)果相一致^［35］。厚壁菌門本身就具有以纖維素作為營養(yǎng)物質(zhì)分解纖維素的效果^［36］，所以在RM60中纖維素酶本身分解了一部分纖維素，同時(shí)添加了植物乳桿菌，菌種數(shù)量大幅度增加導(dǎo)致營養(yǎng)不足出現(xiàn)了爭搶現(xiàn)象，最終導(dǎo)致了厚壁菌門在RM60時(shí)相對豐度較低的現(xiàn)象。

在屬水平下，可能由于纖維素酶降解了一部分乳桿菌生長代謝所需的營養(yǎng)物質(zhì)，或纖維素酶分解代謝產(chǎn)物更有利于鏈球菌屬、片球菌屬等微生物生長，使得在添加酶的樣品中的乳桿菌比重比自然發(fā)酵和乳酸菌單菌發(fā)酵的樣品中低。纖維素酶在青貯飼料發(fā)酵過程中起到的主要作用為將植物中的纖維素降解成還原糖，同時(shí)還可以起到破壞植物的細(xì)胞壁使得胞內(nèi)的蛋白質(zhì)等營養(yǎng)物質(zhì)釋放到環(huán)境中的作用；發(fā)酵后的對照組和添加乳酸菌組Shannon指數(shù)、Chao指數(shù)和Ace指數(shù)低于添加纖維素酶及組合添加組，表明自然發(fā)酵和添加乳酸菌減少了微生物群落的豐富性，這與Li等人的研究結(jié)果一致^［37］。這可能是丹參地上部分含有較多乳桿菌及乳桿菌接種迅速降低了pH值，因此許多微生物被抑制并被乳桿菌取代^［38］。鏈球菌屬是一種在室外空氣中常見的高度交叉污染的菌株^［39］。鏈球菌屬在發(fā)酵前豐度較高，說明其在丹參地上部分大量附著，發(fā)酵后鏈球菌屬豐度降低，可能是低pH值、溫度或無氧環(huán)境抑制其生長繁殖。發(fā)酵后增加了青貯飼料中有益菌的相對豐度，不僅可以抑制腐敗菌致病菌等有害菌的生長，還可以降低養(yǎng)分的消耗^［40］。

4 結(jié)論

綜上，單獨(dú)添加或組合添加乳酸菌、纖維素酶提高了青貯飼料的粗蛋白、洗滌纖維、可溶性碳水化合物等營養(yǎng)成分含量，提高了pH值和氨態(tài)氮含量。飼料的青貯過程影響了微生物結(jié)構(gòu)，青貯增加了飼料中的有益微生物豐度，提高了青貯飼料的品質(zhì)和適口性。綜合分析，組合處理組的丹參地上部分青貯飼料質(zhì)量最佳。

參考文獻(xiàn)

［1］詹志來，鄧愛平，彭華勝，等. 基于歷代本草產(chǎn)地變遷的藥材道地性探討—以黃芪、丹參為例［J］. 中國中藥雜志，2016，41（17）：3202-3208

［2］顧俊菲，宿樹蘭，彭珂毓，等. 丹參地上部分資源價(jià)值發(fā)現(xiàn)與開發(fā)利用策略［J］. 中國現(xiàn)代中藥，2017，19（12）：1659-1664

［3］趙澤偉，李小娟. 丹參治療糖尿病及其并發(fā)癥的研究進(jìn)展［J］. 實(shí)用中醫(yī)內(nèi)科雜志，2024，38（9）：84-87

［4］MEI X D，CAO Y F，CHE Y Y，et al. Danshen：a phytochemical and pharmacological overview［J］. Chinese Journal of Natural Medicines，2019，17（1）：59-80

［5］張玉，劉謙，蒲高斌，等. 丹參非藥用部位藥用價(jià)值及開發(fā)利用研究進(jìn)展［J］. 中國現(xiàn)代中藥，2019，21（2）：266-270

［6］HOU M，HU W，HAO K，et al. Enhancing the potential exploitation of Salvia miltiorrhiza Bunge：Extraction，enrichment and HPLC-DAD analysis of bioactive phenolics from its leaves［J］. Industrial Crops and Products，2020，158：113019

［7］HONG C，QIN Z，WANG X，et al. Qualitative analysis and simultaneous quantification of phenolic compounds in the aerial parts of Salvia miltiorrhiza by HPLC-DAD and ESI/MS（n）［J］. Phytochemical Analysis，2011，22（3）：247-257

［8］YANG F，QI Y，LIU W，et al. Separation of five flavonoids from aerial parts of Salvia miltiorrhiza bunge using HSCCC and their antioxidant activities［J］. Molecules，2019，24（19）：3448

［9］PENG K Y，GU J F，SU S L，et al. Salvia miltiorrhiza stems and leaves total phenolic acids combination with tanshinone protect against DSS-induced ulcerative colitis through inhibiting TLR4/PI3K/AKT/mTOR signaling pathway in mice［J］. Journal of Ethnopharmacology，2020，264：113052

［10］AZZAZ H H，ABD EL TAWAB A M，KHATTAB M S A，et al. Effect of cellulase enzyme produced from Penicilliumchrysogenum on the milk production，composition，amino acid，and fatty acid profiles of Egyptian Buffaloes fed a high-forage diet［J］. Animals，2021，11（11）：3066

［11］MUCK R E，NADEAU E M G，MCALLISTER T A，et al. Silage review：Recent advances and future uses of silage additives［J］. Journal of Dairy Science，2018，101（5）：3980-4000

［12］張麗英. 飼料分析及飼料質(zhì)量檢測技術(shù)［M］. 北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2006：48-88

［13］嚴(yán)小龍，陳嶺峰，王修銘，等. 煙草中中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維測定方法的優(yōu)化［J］. 化學(xué)分析計(jì)量，2017，26（3）：92-95

［14］余汝華，趙麗華，莫放，等. 玉米秸稈青貯飼料中水溶性碳水化合物測定方法研究［J］. 飼料工業(yè)，2003，24（9）：2

［15］中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局. SN/T 4260-2015，出口植物源食品中粗多糖的測定，苯酚-硫酸法［S］. 北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2016：1-6

［16］中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會. GB/T 6435-2014，飼料中水分的測定［S］. 北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2015：1-11

［17］中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會. GB/T 6432-2018，飼料中粗蛋白的測定，凱氏定氮法［S］. 北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2018：1-6

［18］中華人民共和國國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會. GB 5009.157-2016，食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)，食品中有機(jī)酸的測定［S］. 北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2017：1-8

［19］丁良，原現(xiàn)軍，聞愛友，等. 添加劑對西藏啤酒糟全混合日糧青貯發(fā)酵品質(zhì)及有氧穩(wěn)定性的影響［J］. 草業(yè)學(xué)報(bào)，2016，25（7）：112-120

［20］陳鑫珠，鄒長連，張文昌，等. 纖維素酶對常規(guī)水分和低水分稻草青貯品質(zhì)的影響［J］. 草地學(xué)報(bào)，2018，26（2）：453-458

［21］牛瓊梅，初曉輝，李彥飛，等. 不同種類添加劑對全株玉米發(fā)酵特性及營養(yǎng)品質(zhì)的影響［J］. 飼料研究，2024，47（1）：93-98

［22］李喬仙，張美艷，薛世明，等. 全株大麥拉伸膜裹包青貯營養(yǎng)成分及發(fā)酵品質(zhì)動態(tài)變化研究［J］. 家畜生態(tài)學(xué)報(bào)，2021，42（1）：46-51

［23］陳凌華，楊志堅(jiān)，程祖鋅. 添加酶制劑和乳酸菌對水稻秸稈青貯質(zhì)量的影響［J］. 中國飼料，2018（20）：81-85

［24］李菲菲，張凡凡，王旭哲，等. 同/異型發(fā)酵乳酸菌對全株玉米青貯營養(yǎng)成分和瘤胃降解特征的影響［J］. 草業(yè)學(xué)報(bào)，2019，28（6）：128-136

［25］王洋，姚權(quán)，孫娟娟，等. 乳酸菌添加劑對苜蓿青貯品質(zhì)和黃酮含量的影響［J］. 中國草地學(xué)報(bào)，2018，40（2）：48-53

［26］萬江春，于輝，張延輝，等. 纖維素酶及乳酸菌對棉花秸稈青貯飼料發(fā)酵品質(zhì)及體外消化率的影響［J］. 中國畜牧雜志，2019，55（4）：101-106

［27］HE L W，LV H J，XING Y Q，et al. The nutrients in Moringa oleifera leaf contribute to the improvement of stylo and alfalfa silage：Fermentation，nutrition and bacterial community［J］. Bioresource Technology，2020：301

［28］楊紅，張慶，侯建建，等. 生物添加劑對羊草青貯飼料超微結(jié)構(gòu)和纖維變化的影響［J］. 草業(yè)學(xué)報(bào)，2016，25（12）：94-101

［29］張歡，牟怡曉，張桂杰. 添加枸杞副產(chǎn)物對紫花苜蓿青貯發(fā)酵品質(zhì)及微生物多樣性的影響［J］. 草業(yè)學(xué)報(bào)，2022，31（4）：136-144

［30］劉海燕，王彥靖，王秀飛，等. 不同品種菊芋秸稈黃貯飼料的飼用價(jià)值評價(jià)［J］. 動物營養(yǎng)學(xué)報(bào)，2019，31（11）：5321-5328

［31］杜昭昌，王紅，閆艷紅，等. 稻殼和麥麩對鮮玉米秸稈青貯品質(zhì)的影響［J］. 草地學(xué)報(bào)，2021，29（7）：1549-1554

［32］鄭明揚(yáng)，吳碩，郭香，等. 添加乳酸菌和纖維素酶對砂仁葉青貯品質(zhì)的影響［J］. 草地學(xué)報(bào)，2021，29（5）：1113-1117

［33］魏曉斌，殷國梅，薛艷林，等. 添加乳酸菌和纖維素酶對紫花苜蓿青貯品質(zhì)的影響［J］. 中國草地學(xué)報(bào)，2019，41（6）：86-90

［34］吳陸處，易政宏，陳鑫艷，等. 西藏地區(qū)全株玉米與紫花苜?；旌锨噘A效果研究［J］. 飼料研究，2023，46（4）：108-112

［35］MU L，XIE Z，HU L X，et al. Cellulase interacts with Lactobacillus plantarum to affect chemical composition，bacterial communities，and aerobic stability in mixed silage of high-moisture amaranth and rice straw［J］. Bioresource Technology，2020，315：123772

［36］易政宏，商振達(dá)，陳鑫艷，等. 玉米粉對西藏巨菌草青貯發(fā)酵品質(zhì)及微生物多樣性的影響［J］. 飼料研究，2023，46（6）：85-89

［37］LI P，ZHANG Y，GOU W，et al. Silage fermentation and bacterial community of bur clover，annual ryegrass and their mixtures prepared with microbial inoculant and chemical additive［J］. Animal Feed Science and Technology，2019，247：285-293

［38］YAN Y，LI X，GUAN H，et al. Microbial community and fermentation characteristic of Italian ryegrass silage prepared with corn stover and lactic acid bacteria［J］. Bioresource Technology，2019，279：166-173

［39］LIM E S，KIM J J，SUL W J，et al. Metagenomic analysis of microbial composition revealed cross-contamination pathway of bacteria at a foodservice facility［J］. Frontiers in Microbiology，2021，12：636329

［40］李茂雅，成啟明，李平，等. 皇竹草與茅臺酒糟混合青貯對其養(yǎng)分含量、發(fā)酵品質(zhì)及微生物多樣性的影響［J］. 動物營養(yǎng)學(xué)報(bào)，2022，34（6）：4071-4080

（責(zé)任編輯 閔芝智）