亳州地區(qū)圍產(chǎn)期B族鏈球菌基因分型及耐藥性研究

【摘要】目的 探討亳州地區(qū)圍產(chǎn)期孕婦B族鏈球菌（GBS）感染狀況、血清學(xué)分型及耐藥基因分布特征，為圍產(chǎn)期孕婦GBS感染的防治提供實驗依據(jù)。方法 回顧性分析2022年1月至2023年6月于亳州市中醫(yī)院婦產(chǎn)科產(chǎn)檢的310例35～37周圍產(chǎn)期孕婦的產(chǎn)檢資料，進(jìn)行陰道和直腸拭子聯(lián)合采樣，經(jīng)細(xì)菌培養(yǎng)后選取可疑GBS菌落，通過革蘭染色、環(huán)磷酸腺苷試驗（CAMP）后采用全自動細(xì)菌鑒定儀獲得GBS菌株，采用全自動細(xì)菌鑒定儀及配套AST-GP67藥敏卡進(jìn)行GBS藥敏試驗。采用膠乳凝集法和多位點序列分型（MLST）法對GBS進(jìn)行血清分型和基因分型，分別記錄每株GBS對應(yīng)的血清型和基因型，采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）法檢測GBS耐藥基因。統(tǒng)計GBS菌株的血清分型及基因分型情況、GBS菌株耐藥情況及不同血清型的GBS紅霉素耐藥基因分布情況。結(jié)果 310例孕婦中GBS陽性的51例，陽性率為16.45%；血清學(xué)分型有5種類型，分別為Ⅰa、Ⅰb、Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ型，以Ⅲ、Ⅰb、Ⅰa型為主，占比分別為47.06%、23.53%、19.61%，主要的基因分型為ST19型、ST23型，其中ST19型占比最高，為39.22%，高于其他基因分型占比（均P<0.05）；GBS對紅霉素、克林霉素、四環(huán)素、左氧氟沙星均表現(xiàn)出不同程度的耐藥，其中紅霉素耐藥率最高為78.34%，其次是克林霉素耐藥率為70.59%，四環(huán)素耐藥率為58.58%。GBS攜帶耐藥性基因包括ermA、ermB、ermTR、mefE及mefA，其中ermB和mefE占比最高，均為54.90%。GBS血清學(xué)分型與基因分型的比較中，GBS基因型在Ⅰa型中ST23占比最高，在Ⅰb型中ST19占比最高，在Ⅲ型中ST19占比最高，在三者分布比較中，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P<0.05）。GBS血清學(xué)分型與其攜帶的耐藥基因的比較中，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P>0.05）。結(jié)論 亳州地區(qū)圍產(chǎn)期孕婦GBS感染率較高，最常見的血清型是Ⅲ型，基因型以ST19型為主。對紅霉素、克林霉素、四環(huán)素、左氧氟沙星具有較高的耐藥率，主要攜帶的耐藥基因為ermB、ermA、ermTR，臨床應(yīng)根據(jù)藥敏結(jié)果選用合理的抗菌藥物，規(guī)范治療GBS感染的圍產(chǎn)期孕婦。

【關(guān)鍵詞】圍產(chǎn)期孕婦 ; B族鏈球菌 ; 血清學(xué)分型 ; 基因分型 ; 耐藥性基因

【中圖分類號】R466.5 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【文章編號】2096-3718.2024.20.0106.04

DOI：10.3969/j.issn.2096-3718.2024.20.034

B族鏈球菌（GBS）是一種溶血性革蘭氏陽性的鏈球菌，又被稱為無乳鏈球菌，通常寄生于人的陰道和直腸。GBS莢膜多糖成分不同，血清分型亦不同，通常分為Ⅰa、Ⅰb、Ⅱ ～ Ⅺ等10種血清型[1]，其中Ⅰa、Ⅰb、Ⅱ、Ⅲ及Ⅴ型是全球流行的主要血清型，且以Ⅲ型對人類危害最大[2]。研究表明，GBS定植的妊娠期女性，尤其是圍產(chǎn)期孕婦極易被感染，進(jìn)而導(dǎo)致孕婦子宮內(nèi)膜炎、早產(chǎn)、產(chǎn)褥期感染等情況的發(fā)生[3]。近年來，國內(nèi)臨床對新生兒GBS感染關(guān)注和重視不夠，導(dǎo)致GBS感染率逐漸增高，尤其是新生兒人群[4]。隨著醫(yī)療環(huán)境的改善，孕婦與新生兒的健康問題引起了社會廣泛關(guān)注，由GBS引發(fā)的嚴(yán)重感染病例已經(jīng)得到了重視。部分地區(qū)建議

35～37周妊娠晚期孕婦積極接受GBS篩查，盡早診斷、治療，有效改善妊娠結(jié)局。目前，β-內(nèi)酰胺類或大環(huán)內(nèi)酯類抗菌藥物是治療GBS感染的首選藥物，能夠有效改善感染的狀況，但隨著臨床上抗菌藥物的大量使用，導(dǎo)致了GBS耐藥性的發(fā)生，對常用的抗菌藥物像紅霉素、四環(huán)素等耐藥，但是相關(guān)的臨床研究數(shù)據(jù)報道較少。樊紅娟等[5]研究發(fā)現(xiàn)，GBS對紅霉素和四環(huán)素耐藥率較高，耐藥基因類型主要為紅霉素耐藥基因ermB、ermTR、emF基因型，四環(huán)素耐藥基因tetM、tetO基因型，其中ermB、

ermTR、emF占比較高。因此，本研究選取亳州市中醫(yī)院婦產(chǎn)科孕35～37周圍產(chǎn)期婦女310例為研究對象，分析GBS感染狀況、血清學(xué)分型、耐藥基因攜帶情況，旨在為本地區(qū)圍產(chǎn)期孕婦GBS感染的防治提供重要的實驗依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2022年1月至2023年6月于亳州市中醫(yī)院婦產(chǎn)科產(chǎn)檢的310例35～37周圍產(chǎn)期孕婦的產(chǎn)檢資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴符合《婦產(chǎn)科學(xué)》[6]中中、晚期妊娠的診斷標(biāo)準(zhǔn)；⑵妊娠35～37周的圍產(chǎn)期孕婦；⑶篩查前1周無抗菌藥物使用史、無陰道用藥史；⑷資料完整，并自愿完成GBS檢測。排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴雙胎妊娠；⑵已確診其他生殖道病原菌感染；⑶嚴(yán)重的肝、腎、心臟等重要器官功能異常。本研究經(jīng)亳州市中醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 檢測方法

1.2.1 GBS培養(yǎng)與鑒定 在不使用窺器的情況下，用拭子在納入的圍產(chǎn)期孕婦陰道下1/3處取樣，然后用同一拭子通過直腸括約肌在直腸內(nèi)聯(lián)合取樣。將采集的拭子標(biāo)本送至本院檢驗科微生物室，接種于血平板培養(yǎng)基，于37 ℃、5%二氧化碳孵箱中培養(yǎng)18～24 h。挑選血平板上中等大小、圓形、灰白色、周圍伴有β溶血環(huán)、觸酶試驗陽性的可疑菌落進(jìn)行革蘭染色鏡檢，革蘭染色陽性再進(jìn)行CAMP試驗鑒定，CAMP試驗陽性的菌落采用全自動微生物鑒定及藥敏分析儀（法國梅里埃公司，型號：VITEK 2 COMPACT）進(jìn)行GBS菌株最后確認(rèn)。

1.2.2 GBS血清學(xué)與基因分型 采用乳膠凝集法進(jìn)行GBS血清學(xué)分型，血清分型試劑盒購自丹麥SSI公司，嚴(yán)格按照試劑盒說明書對GBS株進(jìn)行分型，包括Ⅰa、Ⅰb、Ⅱ～Ⅸ10種血清型。采用多位點序列分型（MLST）聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）法擴增GBS的7個管家基因，擴增產(chǎn)物送至上海生工生物公司進(jìn)行Sanger測序，后與BLAST基因數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對，最終確定GBS基因分型。

1.2.3 GBS藥敏試驗 采用全自動微生物鑒定及藥敏分析儀，選擇配套的GP67藥敏卡，按操作說明配制合適麥?zhǔn)蠞舛鹊木鷳乙?，然后進(jìn)行GBS菌株藥敏試驗。質(zhì)控菌株為肺炎鏈球菌ATCC49619，金黃色葡萄球菌ATCC25923。

1.2.4 GBS耐藥基因檢測 采用北京天根公司的細(xì)菌脫氧核糖核酸（DNA）提取試劑盒提取GBS基因組DNA，采用實時熒光定量PCR儀（杭州博日科技有限公司，型號：FQD-96A）進(jìn)行PCR擴增，擴增產(chǎn)物送至生工生物公司進(jìn)行測序分析。引物合成、目標(biāo)基因測序均由上海生工生物公司完成。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 26.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，計數(shù)資料以[例（%）]表示，兩組間比較采用χ2檢驗，菌株血清型與基因分型、耐藥基因類型的多組間比較行χ2趨勢檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 GBS分型 310例標(biāo)本共檢出GBS菌株51例，陽性率為16.45%；血清分型以Ⅲ、Ⅰb、Ⅰa型為主，分別占比為47.06%、23.53%、19.61%?；蚍中椭袡z測出19種序列型，其中主要的基因分型為ST19型20株，占比為39.22%；其次是ST23型9株，占比為17.65%。GBS血清學(xué)分型與基因分型的比較中，血清Ⅰa型中基因型ST23占比最高，血清Ⅰb型中基因型ST19占比最高，血清Ⅲ型中基因型ST19占比最高，基因分型在血清型Ⅰa、Ⅰb、Ⅲ型中的分布差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P<0.05），見表1。

2.2 GBS耐藥情況分析 GBS對萬古霉素、青霉素、氨芐西林敏感，對頭孢曲松、左氧氟沙星、四環(huán)素、克林霉素及紅霉素均表現(xiàn)出不同程度的耐藥性，紅霉素耐藥率最高為78.34%，其次是克林霉素耐藥率為70.59%，四環(huán)素耐藥率為58.58%，見表2。

2.3 不同血清型GBS耐藥基因分布情況 不同血清型的GBS菌株攜帶不同的耐藥基因，以ermB、mefE、mefA為主，其中Ⅲ型以mefE和ermB為主，Ⅰb型以ermB和

mefE為主。GBS血清型與耐藥基因攜帶情況的比較中，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P>0.05），見表3。

3 討論

GBS是一種人畜共患的需氧型條件致病菌，通常寄生于人的結(jié)腸或陰道，無感染性癥狀的表現(xiàn)。而GBS定植于妊娠期女性后，不僅影響自身的健康，而且還容易導(dǎo)致新生兒侵襲性感染。研究表明，GBS感染的圍產(chǎn)期孕婦分娩時新生兒感染的風(fēng)險增加[7]，因此，對圍產(chǎn)期孕婦進(jìn)行生殖道 - 直腸GBS定植篩查，陽性人群在分娩前4 h采用抗生素預(yù)防感染，能夠有效降低新生兒感染率。然而，截止到目前，國內(nèi)大多數(shù)地區(qū)孕產(chǎn)婦生殖道 - 直腸GBS定植情況的篩查報告、GBS感染的相關(guān)數(shù)據(jù)報道較少。本研究結(jié)果顯示，310例圍產(chǎn)期孕婦陰道 - 直腸分泌物中檢出51例GBS，陽性率為16.45%，與劉巧方等[8]報道的15.00%較接近，明顯高于宋海燕[9]報道的GBS定植率4.3%，左麥紅等[10]報道的GBS定植率6.55%。本地區(qū)GBS感染的陽性率稍高于其他地區(qū)，可能與亳州地區(qū)經(jīng)濟水平稍低，衛(wèi)生防護意識差，女性多胎生育等因素有關(guān)；同時，國家沒有制定出圍生期孕婦GBS篩查的統(tǒng)一方案與標(biāo)準(zhǔn)化程序，不同地區(qū)研究對象選擇范圍不同，因此，GBS定植率存在明顯的差異性。

臨床上GBS主要致病類型為Ⅰa、Ⅰb、Ⅲ、Ⅴ型，本研究檢測到5種血清型，以Ⅲ型（47.06%）為主要類型，其次為Ⅰb型（23.53%）、Ⅰa型（19.61%），未檢出Ⅳ型、Ⅵ型、Ⅶ型、Ⅷ型及Ⅺ型。楊蘊濤等[11]研究中，共檢出6種血清型，以Ⅲ型（39.82%）為主要類型，其次為Ⅰb型（25.66%）、Ⅰa型（20.35%），未檢出Ⅱ型、Ⅳ型、Ⅶ型、Ⅷ型；陳華等[12]報道的2017年至2019年甘肅地區(qū)103株GBS主要血清型是Ⅲ型、Ⅴ型及Ⅰb型；覃德明[13]研究中，共檢出7種血清型，以Ⅰb型（35.11%）為主；林雅茵等[14]報道的2015年至2018年廈門地區(qū)299株妊娠晚期生殖道定植GBS菌Ⅲ型、Ⅰb型和Ⅰa型是主要血清型。以上研究均表明Ⅲ型、Ⅴ型、Ⅰa型和Ⅰb型是常見的流行型別，其中Ⅲ型是最主要的血清型，毒力最強，已被公認(rèn)為引發(fā)孕產(chǎn)婦和新生兒侵襲性感染的主要血清型。

GBS遺傳表型存在多樣性，本研究結(jié)果顯示，共檢測出19種GBS基因序列型，主要流行的型別分別為ST19、

ST23、ST12、ST103及ST17，與北京地區(qū)主要流行的型

ST19、ST10、ST12、ST1、ST17、ST23[15]和廈門地區(qū)妊娠晚期女性的主要流行型別ST19、ST862、ST12、ST10、

ST17、ST23[14]基本一致，均以ST19為主要型別。韓國妊娠婦女GBS主要流行是ST1、ST19和ST862[16]，加拿大多倫多地區(qū)健康妊娠婦女主要流行的是ST1、ST23、ST8、

ST12[17]，上述研究結(jié)果表明，GBS菌株的ST序列型可能與地域、人種等因素相關(guān)，與部分血清學(xué)類型有關(guān)，不同國家、地域和人種的孕婦攜帶GBS基因型存在很大的差異性。

孕婦感染GBS后應(yīng)使用抗菌藥物治療，盡可能避免孕婦與新生兒的不良結(jié)局，然而，由于抗菌藥物的濫用，導(dǎo)致了多種耐藥菌株的形成，增加了治療難度。本研究結(jié)果表明，GBS對萬古霉素、青霉素、氨芐西林敏感，對頭孢曲松、左氧氟沙星、四環(huán)素、克林霉素及紅霉素均表現(xiàn)出不同程度的耐藥性。目前，臨床上對GBS感染的治療主要選用β-內(nèi)酰胺類或者大環(huán)內(nèi)酯類抗菌藥物，由于臨床對抗菌藥物的濫用，導(dǎo)致GBS耐藥率近年來明顯升高。GBS菌株中含有多種致病相關(guān)基因，本研究發(fā)現(xiàn)，GBS攜帶的耐藥基因為ermA、ermB、ermTR、mefA及mefE，

ermB和mefE占比較高，與國內(nèi)其他地區(qū)研究的結(jié)果較為接近。 erm基因?qū)儆诖蟓h(huán)內(nèi)酯抗菌藥物的耐藥基因，可以介導(dǎo)菌體產(chǎn)生甲基化酶，從而阻礙大環(huán)內(nèi)酯類抗菌藥物結(jié)合核糖體亞基，參與細(xì)菌的耐藥過程[18]，而mef類基因可以調(diào)控大環(huán)內(nèi)酯類抗菌藥物的耐藥性[19]，而紅霉素是臨床上常用的大環(huán)內(nèi)酯類抗菌藥物，因此，GBS對紅霉素表現(xiàn)為較高的耐藥特性，與其攜帶的耐藥性基因明顯

相關(guān)。

綜上，本地區(qū)GBS感染情況較為嚴(yán)重，血清型以Ⅲ型、Ⅰb型為主，基因型以ST19型為主，耐藥基因主要攜帶ermB和mefE。但本研究存在樣本量較少，納入對象地域范圍較窄等相關(guān)問題，后期將擴大篩查范圍，加大樣本量，同時增加妊娠結(jié)局的研究，為本地區(qū)衛(wèi)生決策的制定和GBS防治提供重要依據(jù)。

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基金項目：亳州市重點研發(fā)計劃項目（編號：Bzzc2021059）

作者簡介：吳艷麗，碩士研究生，主任技師，研究方向：臨床微生物基因檢測。