青錢柳二倍體和四倍體葉特征比較研究

摘要：【目的】比較青錢柳（Cyclocarya paliurus）二倍體和四倍體葉表型特征、解剖結(jié)構(gòu)和氣孔特征等方面的差異，旨在獲得不同倍性青錢柳葉片特征的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。【方法】以青錢柳二倍體和四倍體苗木為材料，對32項葉片特征指標(biāo)進行測定，并進行獨立樣本t檢驗、相關(guān)性分析和主成分分析?！窘Y(jié)果】除中部小葉的最大葉寬位置和鋸齒寬度在倍性間無顯著差異外，其余30項葉特征在倍性間均達到顯著或極顯著差異。其中，四倍體小葉數(shù)量極顯著少于二倍體，而復(fù)葉面積和比葉質(zhì)量極顯著大于二倍體；四倍體頂端小葉和中部小葉的葉長、葉寬和葉面積極顯著大于二倍體，而葉形指數(shù)極顯著小于二倍體；四倍體鋸齒密度極顯著小于二倍體；四倍體葉片厚度、上表皮厚度、下表皮厚度、柵欄組織厚度和海綿組織厚度均極顯著大于二倍體，而柵海比和緊密度極顯著小于二倍體；四倍體氣孔長度和氣孔寬度極顯著大于二倍體，而氣孔密度極顯著小于二倍體。相關(guān)性分析結(jié)果表明，青錢柳表型特征與解剖結(jié)構(gòu)和氣孔特征各指標(biāo)間存在廣泛而顯著的相關(guān)關(guān)系。主成分分析提取了反映兩種倍性青錢柳葉特征差異的指標(biāo)，分別為小葉葉寬、小葉面積、葉形指數(shù)、海綿組織厚度、氣孔長度、柵欄組織厚度和緊密度?！窘Y(jié)論】青錢柳二倍體和四倍體的葉特征存在顯著差異，小葉葉寬、小葉面積和葉形指數(shù)等葉表型特征可用于青錢柳二倍體和四倍體初篩。

關(guān)鍵詞：青錢柳；多倍體；表型特征；解剖結(jié)構(gòu)；氣孔特征

中圖分類號：S722"""""" 文獻標(biāo)志碼：A開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼（OSID）：

文章編號：1000-2006（2024）04-0076-09

A comparative study on leaf characters between diploid and tetraploid" of Cyclocarya paliurus

LIU Xialan1，SONG Ziqi1，HU Fengrong2，SHANG Xulan1*

（1. Co-Innovation Center for Sustainable Forestry in Southern China，" College of Forestry and Grassland， Nanjing Forestry University， Nanjing 210037， China; 2. College of Landscape Architecture， Nanjing Forestry University， Nanjing 210037， China）

Abstract： 【Objective】 To compare the differences in leaf phenotypes characters， anatomical structures" and stomatal characteristics between diploid and tetraploid Cyclocarya paliurus， we obtained"" data on the leaf characteristics of C. paliurus with different ploidy. 【Method】 Diploid and tetraploid seedlings of C. paliurus were used as study materials， and 32 leaf traits were measured. Independent samples t-tests， a correlation analysis， and principal component analysis （PCA） were conducted. 【Result】 There were no significant differences between diploid and tetraploid seedlings for sawtooth width and the position of the" maximum leaf width of the middle leaflet. For the other 30 leaf traits， there were significant or extremely significant differences between diploid and tetraploid seedlings. Among them， the number of leaflets of tetraploids was significantly less than that of diploids， while the area and specific leaf weight of compound leaves of tetraploids were significantly greater than those of diploids. The length， width" and area of the terminal and middle leaflets of tetraploids were significantly greater than those of diploids， while the leaf shape index was significantly smaller than that of diploids. The sawtooth density of tetraploids was significantly smaller than that of diploids. The leaflet thickness， the" upper epidermis thickness， lower epidermis thickness， palisade tissue thickness， and sponge tissue thickness of tetraploids were all significantly higher than those of diploids， while the ratio of palisade tissue to sponge tissue and cell tense ratio were significantly smaller than those of diploids. The stomatal length and width of tetraploids were significantly greater than those of diploids， while the stomatal density was significantly smaller than that of diploids. The correlation analysis results indicated that there were broad and significant correlations between the phenotypic characteristics， anatomical structure， and stomatal characteristics of C. paliurus. The indicators reflecting the differences of leaf characteristics between diploid and tetraploid C. paliurus were extracted by a PCA， including leaflet width， leaflet area， leaf shape index， sponge tissue thickness， stomatal length， palisade tissue thickness" and cell tense ratio. 【Conclusion】 There were significant differences in leaf traits between diploid and tetraploid C. paliurus， and leaf phenotypic characteristics， such as leaflet width， leaflet area， and leaf shape index， can be used for the preliminary screening of diploid and tetraploid C. paliurus.

Keywords：Cyclocarya paliurus; polyploid; phenotypic characters; anatomical structure; stomatal characteristics

多倍體普遍存在于植物界，多倍化是推動植物進化的重要因素[1]。多倍化常伴隨著植物細胞、形態(tài)和生理特性的改變[2]。而葉片作為植物進行光合作用和蒸騰作用的重要器官，其形態(tài)對于植物的生長發(fā)育至關(guān)重要[3]。大多數(shù)多倍體植株的葉片在橫向上常表現(xiàn)為葉大小、葉基部、葉尖形態(tài)和葉長寬比等方面異于二倍體；在縱向上，葉片厚度因角質(zhì)層、表皮層或柵欄組織等組織的細胞大小、層數(shù)和細胞間隙的改變也不同于二倍體[4]。

青錢柳（Cyclocarya paliurus）是胡桃科青錢柳屬植物，是中國特有的單種屬植物[5]，集藥用、材用和觀賞價值于一身[6]。青錢柳葉中多糖類[7]、黃酮類[8]和三萜類[9]等活性物質(zhì)的含量較高，具有降血糖、降血脂、降血壓等多種藥用價值[10]。目前對青錢柳的研究多集中在葉生物活性物質(zhì)的調(diào)控[11]、優(yōu)良品種的選育[12-13]以及無性快繁[14]等方面。南京林業(yè)大學(xué)青錢柳課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，青錢柳的自然種群中同時存在二倍體和四倍體兩種倍性的植株[15]，但有關(guān)青錢柳倍性的研究甚少[16-17]，鑒于染色體加倍會導(dǎo)致青錢柳葉片性狀產(chǎn)生何種變化鮮見報道。本研究以二倍體和四倍體苗木為材料，比較葉表型特征、解剖結(jié)構(gòu)和氣孔特征等方面的差異，旨在獲得不同倍性青錢柳葉片特征的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，為進一步的研究和開發(fā)利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試材料

試驗地位于南京林業(yè)大學(xué)白馬教學(xué)科研基地（119°09′E，31°35′N）。2019年11月從湖北省五峰縣購買1年生青錢柳實生苗，栽植于無紡布容器中，2020年3月平茬，5月定干，采用染色體計數(shù)法確定所有植株的倍性。2020年9月末，選無病蟲害的健康二倍體（2n = 2x = 32）和四倍體（2n = 4x = 64）平均株各23株進行相關(guān)指標(biāo)測定。

1.2 性狀觀測方法

1.2.1 表型特征觀測

采集兩種倍性所有植株從上往下數(shù)第4片完全展開的功能復(fù)葉，放入自封袋并用冰盒保鮮帶回掃描，60 ℃烘干至質(zhì)量恒定，測定復(fù)葉干質(zhì)量，比葉質(zhì)量（specific leaf weight，SLW）為單位葉面積的葉干質(zhì)量。

采用Adobe Photoshop CC 2019軟件對所有復(fù)葉的掃描圖像（圖1）進行指標(biāo)的記錄和測定。

具體指標(biāo)為小葉數(shù)量（number of leaflets，LN）和復(fù)葉面積（compound leaf area，CLA），以及頂端小葉和中部小葉（奇數(shù)對最中間左側(cè)小葉，偶數(shù)對取除去頂端小葉最中間小葉）的葉長（length of leaflets，LL）（葉片基部到頂端的長度）、葉寬（width of leaflets，LW）（葉片最寬處的寬度）、小葉面積（area of leaflets，LA）和葉最寬處至葉尖的距離，葉形指數(shù)（leaf shape index，LSI）為葉長與葉寬之比，最大葉寬位置（position of maximum leaf width，MLWP）為葉最寬處至葉尖的距離與葉長之比。按復(fù)葉長度將葉片等分為3部分，參考熊中人[18]和郭燕等[19]的方法，測定頂端小葉和中部小葉的葉緣周長和鋸齒數(shù)量，計算鋸齒密度（sawtooth density，SD），另從每片復(fù)葉的頂端小葉和中部小葉中部隨機選取10個鋸齒，測定鋸齒寬度（sawtooth width，SWW）、鋸齒深度（sawtooth depth，SWD）和鋸齒與葉緣間的角度（the angle between sawtooth and leaf margin，LSA），并通過鋸齒數(shù)量與葉周長之比計算鋸齒密度。

1.2.2 解剖結(jié)構(gòu)觀測

采集兩種倍性所有植株從上往下數(shù)第3片完全展開的功能復(fù)葉中部的1片小葉，避開葉片主脈切取約5 mm×5 mm的葉塊，快速放入70% FAA固定液（體積分數(shù)70% 乙醇、冰醋酸、甲醛按照18∶1∶1的體積比混合）中固定保存，采用常規(guī)石蠟切片法制片（切片厚度8 μm），番紅-固綠對染法染色，每個植株制作3個切片，利用光學(xué)顯微鏡（Olympus" BX41）鏡檢，DP72 系統(tǒng)采集圖像，每個切片隨機選取3個圖像，采用Adobe Photoshop CC 2019軟件測量上表皮厚度（upper epidermis thickness，UE）、柵欄組織厚度（palisade tissue thickness，PT）、海綿組織厚度（spongy tissue thickness，ST）和下表皮厚度（lower epidermis thickness，LE），葉片厚度（leaf thickness，LT）為上表皮厚度、柵欄組織厚度、海綿組織厚度與下表皮厚度的總和，柵海比（ratio of thickness of palisade tissue to sponge tissue，P/S）為柵欄組織厚度與海綿組織厚度之比，緊密度（cell tense ratio，CTR）為柵欄組織厚度與葉片厚度之比，疏松度（sponge ratio，SR）為海綿組織厚度與葉片總厚度之比。

1.2.3 氣孔特征觀測

上午9：00左右，采集兩種倍性所有植株從上往下數(shù)第3片完全展開的功能復(fù)葉中部的1片小葉，采用指甲油印跡法[20]，每個植株制作3個氣孔樣本，利用光學(xué)顯微鏡（Olympus" BX41，日本）鏡檢，DP72 系統(tǒng)采集圖像，每個樣本隨機選取3個視野記錄氣孔數(shù)，氣孔密度（stomata density，STD）為單位視野面積中的氣孔數(shù)。另從每個視野隨機選取10個氣孔，采用Adobe Photoshop CC 2019軟件測量氣孔長度（stomata length，SL）和氣孔寬度（stomata width，SW）。

1.3 數(shù)據(jù)處理與分析

運用Excel 2019對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計，計算平均值（mean）、標(biāo)準(zhǔn)差（SD）和變異系數(shù)（coefficient of variation，CV）。運用SPSS 26.0對倍性間各性狀的顯著性進行獨立樣本t檢驗，對32項倍性間具有顯著差異的性狀進行相關(guān)性（Pearson）分析和主成分（PCA）分析，采用OriginPro 2021 軟件繪制主成分（PCA）排序圖和相關(guān)性（Pearson）熱圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 兩種倍性青錢柳葉表型特征的差異

對二倍體和四倍體青錢柳的復(fù)葉面積、比葉質(zhì)量和小葉數(shù)量3個指標(biāo)進行比較可知（表1），倍性間存在極顯著差異。其中，四倍體青錢柳的復(fù)葉面積和比葉質(zhì)量極顯著大于二倍體（Plt;0.01），四倍體分別為二倍體的1.80倍和1.56倍。小葉數(shù)量則表現(xiàn)為四倍體極顯著小于二倍體（Plt;0.01），四倍體小葉多為9枚，其次為11枚，少見8或10枚，平均為10.17枚；二倍體小葉多為13枚，其次為11或15枚，少見12或14枚，平均為12.83枚。

對兩種倍性青錢柳頂端小葉和中部小葉形態(tài)指標(biāo)進行比較，結(jié)果（表2）可知，頂端小葉各指標(biāo)在倍性間均存在極顯著差異（Plt;0.01）；中部小葉除最大葉寬位置和鋸齒寬度外，其余各指標(biāo)均存在顯著或極顯著差異。

四倍體青錢柳頂端小葉和中部小葉的葉長、葉寬和葉面積極顯著大于二倍體（Plt;0.01），而葉形指數(shù)和鋸齒密度極顯著小于二倍體（Plt;0.01）。其中，四倍體頂端小葉的葉長、葉寬和葉面積分別為二倍體的1.39倍、1.61倍和2.33倍；四倍體中部小葉的葉長、葉寬和葉面積分別為二倍體的1.33倍、1.55倍和2.26倍。二倍體頂端小葉和中部小葉的葉形指數(shù)分別為2.63和3.02，最大葉寬位置分別為0.86和0.58，說明二倍體青錢柳頂端小葉葉形為倒長橢圓形，中部小葉為長橢圓狀披針形。四倍體頂端小葉和中部小葉的葉形指數(shù)分別為2.27和2.58，最大葉寬位置分別為0.48和0.51，說明四倍體青錢柳頂端小葉為橢圓形，中部小葉為長橢圓形。

四倍體頂端小葉和中部小葉的鋸齒密度分別為4.60和3.89，分別僅為二倍體的65.53%和73.12%。四倍體頂端小葉鋸齒寬度和鋸齒與葉緣間角度分別為二倍體的1.65和1.35倍，而四倍體頂端小葉的鋸齒深度僅是二倍體的71.19%；四倍體中部小葉鋸齒寬度、鋸齒深度和鋸齒與葉緣間角度分別為二倍體的1.07、1.63和1.17倍。由此可以看出，二倍體葉緣鋸齒細小且致密，四倍體葉緣鋸齒較大且排列較為寬松，而且兩個倍性在頂端小葉葉緣鋸齒方面的差異大于中部小葉。

2.2 兩種倍性青錢柳葉解剖結(jié)構(gòu)的差異

對青錢柳葉解剖結(jié)構(gòu)進行觀測（圖2）發(fā)現(xiàn)，二倍體和四倍體青錢柳葉均為背腹型葉，二倍體和四倍體的上、下表皮細胞排列均較緊密，形狀較規(guī)則，葉肉皆分化為柵欄組織和海綿組織。柵欄組織呈長柱形整齊排成1列，而海綿組織排列較疏且不規(guī)則。

比較青錢柳二倍體和四倍體葉的解剖結(jié)構(gòu)見表3。

由表3可知，除緊密度呈顯著性差異（Plt;0.05），其余指標(biāo)均為極顯著差異（Plt;0.01）。其中四倍體的葉片厚度、上表皮厚度、下表皮厚度、柵欄組織厚度、海綿組織厚度和疏松度極顯著大于二倍體（Plt;0.01），柵海比極顯著小于二倍體（Plt;0.01），緊密度顯著小于二倍體（Plt;0.05）。具體表現(xiàn)為四倍體的葉片厚度、上表皮厚度、下表皮厚度、柵欄組織厚度、海綿組織厚度和疏松度分別是二倍體的1.31、1.12、1.44、1.24、1.46和1.12倍，四倍體的柵海比和緊密度是二倍體的83.89%和93.48%。由此可知，四倍體葉片各組織均比二倍體厚，但柵海比和緊密度顯著小于二倍體。

2.3 兩種倍性青錢柳氣孔特征的差異

對青錢柳二倍體和四倍體的氣孔特征進行比較（圖3、表4）可知，氣孔長度、氣孔寬度和氣孔密度在兩種倍性間均存在極顯著差異。其中，四倍體的氣孔長度和氣孔寬度極顯著大于二倍體（Plt;0.01），四倍體的氣孔長度和氣孔寬度是二倍體的1.30和1.26倍，而氣孔密度極顯著小于二倍體（Plt;0.01），四倍體的氣孔密度僅是二倍體的54.98%。可見，與二倍體相比，四倍體的氣孔更大、氣孔密度更小。

2.4 兩種倍性青錢柳葉特征相關(guān)性分析

由青錢柳32項葉特征的相關(guān)性分析結(jié)果（圖4）可知，青錢柳葉片特征的各指標(biāo)間呈極顯著相

關(guān)的有327對，其中極顯著正相關(guān)184對，極顯著負相關(guān)143對；性狀間呈顯著相關(guān)有76對，其中正相關(guān)和負相關(guān)各38對。

小葉數(shù)量（LN）與大部分性狀間具有顯著或極顯著相關(guān)性，其中小葉數(shù)量（LN）與復(fù)葉面積（CLA）、比葉質(zhì)量（SLW）、頂端小葉葉長（TLL）、中部小葉葉長（MLL）、頂端小葉葉寬（TLW）、中部小葉葉寬（MLW）、頂端小葉面積（TLA）、中部小葉面積（MLA）、頂端小葉鋸齒寬度（TSWW）和中部小葉鋸齒深度（MSWD）呈顯著或極顯著負相關(guān)；與頂端小葉最大葉寬位置（TMLWP）、頂端小葉鋸齒密度（TSD）、中部小葉鋸齒密度（MSD）、頂端小葉葉形指數(shù)（TLSI）和中部小葉葉形指數(shù)（MLSI）呈顯著或極顯著正相關(guān)。

頂端小葉的葉長（TLL）、葉寬（TLW）和葉面積（TLA）3個葉形指標(biāo)與中部小葉各葉形指標(biāo)呈極顯著正相關(guān)，說明頂端小葉大的，其中部小葉也相應(yīng)較大。頂端小葉的葉長（TLL）、葉寬（TLW）和葉面積（TLA）3個葉形指標(biāo)與頂端小葉鋸齒密度（TSD）均呈極顯著負相關(guān)，中部小葉葉形指標(biāo)與其鋸齒密度也呈極顯著負相關(guān)。

解剖結(jié)構(gòu)和氣孔特征與表型特征間大多呈顯著相關(guān)。其中，葉片厚度（LT）、下表皮厚度（LE）、柵欄組織厚度（PT）、海綿組織厚度（ST）、氣孔長度（SL）和氣孔寬度（SW）與頂端小葉和中部小葉的葉長、葉寬和葉面積等葉形指標(biāo)均呈極顯著正相關(guān)；而緊密度（CTR）和氣孔密度（STD）與頂端小葉和中部小葉的葉長、葉寬和葉面積等葉形指標(biāo)均呈極顯著負相關(guān)。

以上相關(guān)性分析表明，青錢柳葉片形態(tài)與解剖結(jié)構(gòu)和氣孔特征各指標(biāo)間存在廣泛而顯著的相關(guān)關(guān)系，主要表現(xiàn)為：小葉數(shù)量少的，其復(fù)葉面積大，頂端小葉和中部小葉的葉長、葉寬和葉面積均較大，而葉形指數(shù)小，葉緣鋸齒較稀較圓鈍，葉片較厚，氣孔大但密度小。

2.5 兩種倍性青錢柳葉特征主成分分析

本研究的32項葉特征由于信息大量重疊，進行數(shù)據(jù)分析較為復(fù)雜，借助主成分分析對倍性間差異顯著的30項葉特征指標(biāo)進一步篩選，根據(jù)各主成分中每個指標(biāo)載荷量的絕對值大小篩選出貢獻較大的典型指標(biāo)[21]，并對二倍體和四倍體共46個樣本進行PCA排序。

對19項表型特征的指標(biāo)作主成分分析并繪制PCA排序圖，由圖5a可知所有樣本明顯地歸在兩個獨立的置信橢圓內(nèi)，一類是二倍體，另一類是四倍體，說明根據(jù)表型特征可以直接區(qū)分青錢柳二倍體和四倍體。由表5可知，前2個主成分的特征值大于1，第1主成分的貢獻率為61.455%，第2主成分的貢獻率為8.991%，累計貢獻率達到70.446%，前2個主成分能較好地概括葉片表型特征的大部分信息。其中第1主成分按貢獻值從大到小主要包括中部小葉葉寬（MLW）、中部小葉面積（MLA）、頂端小葉葉寬（TLW）和頂端小葉面積（TLA），第2主成分主要包括頂端小葉葉形指數(shù)（TLSI）和中部小葉葉形指數(shù)（MLSI），共提取出6個葉表型的典型性狀。

對11項解剖結(jié)構(gòu)和氣孔特征作主成分分析（表6）發(fā)現(xiàn)，前2個主成分的特征值大于1，第1主成分貢獻率為53.178%，第2主成分貢獻率為24.354%，累計貢獻率達到77.532%，說明前2個主成分已經(jīng)能夠代表樣本的大部分信息。其中第1主成分按貢獻值從大到小主要包括海綿組織厚度（ST）和氣孔長度（SL），第2主成分主要包括柵欄組織厚度（PT）和緊密度（CTR），共提取出4個典型性狀。從葉片解剖結(jié)構(gòu)和氣孔特征的PCA排序圖（圖5b）發(fā)現(xiàn)，二倍體和四倍體的置信橢圓具有部分重疊，說明二、四倍體的葉片解剖結(jié)構(gòu)和氣孔特征存在交叉重疊。

3 討 論

多倍體植物由于多個染色體組的累積，細胞和細胞核的增大，形態(tài)上常表現(xiàn)出植株更高、葉片更大更厚、氣孔數(shù)量增多等特征[22-23]，但一些植物在高倍性時也可能表現(xiàn)為發(fā)育畸形且生長緩慢[10]。本項研究表明，四倍體青錢柳的復(fù)葉面積極顯著大于二倍體，而小葉數(shù)量則極顯著小于二倍體，四倍體青錢柳小葉數(shù)量多為9枚，其次為11枚，而二倍體小葉數(shù)量多為13枚，其次為11枚。與二倍體相比，四倍體小葉還表現(xiàn)為鋸齒較疏松，鋸齒較圓鈍。唐軍榮等[24]的研究也發(fā)現(xiàn)，人工誘導(dǎo)的四倍體滇楊（Populus yunnanensis）的葉緣鋸齒巨大，二倍體滇楊的葉緣鋸齒則細小致密，青錢柳二倍體和四倍體的葉緣鋸齒特征與此相似。本研究結(jié)果還顯示，青錢柳四倍體頂端小葉和中部小葉的葉長、葉寬和葉面積均顯著大于二倍體，而葉形指數(shù)極顯著小于二倍體，這與棗（Ziziphus jujuba）[25]和枇杷（Eriobotrya japonica）[26]多倍體的表現(xiàn)一致。

大量研究表明，多倍體的葉片厚度較二倍體有所增加，如四倍體和三倍體枇杷[26]葉片比二倍體更大更厚；四倍體及嵌合體滇楊的葉片厚度和柵欄組織厚度均大于二倍體[24]。本研究中青錢柳四倍體的葉片厚度和不同組織的厚度都極顯著高于二倍體，這與大青楊（P. ussuriensis）[27]和滇楊[24]的研究結(jié)果相似。

氣孔特征是穩(wěn)定遺傳的性狀，在倍性間具有重要的研究價值。氣孔大小和氣孔密度是鑒別多倍體的典型特征，該特征已普遍應(yīng)用于橡膠（Hevea brasiliensis）[28]、桂中報春苣苔（Primulina guizhongensis）[29]和黃連木（Pistacia chinensis）[30]等多倍體的鑒別。張源源等[28]對二倍體、三倍體和四倍體橡膠樹的研究發(fā)現(xiàn)，隨著倍性的提高，氣孔長度和氣孔寬度增大，而氣孔密度減小。本研究中，青錢柳二倍體的氣孔密度極顯著高于四倍體，但氣孔長度和寬度極顯著低于四倍體，說明青錢柳氣孔大小和倍性呈正比，氣孔密度和倍性呈反比，這與滇楊[24]、團花（Neolamarckia cadamba）[31]和毛竹（Phyllostachys edulis）[32]多倍體的表現(xiàn)一致。但也有研究表明倍性和氣孔沒有相關(guān)性，郗連連等[33]對花楸屬（Sorbus）植物的基因組大小與氣孔特征的研究發(fā)現(xiàn)，花楸屬植物的氣孔大小和密度與倍性的相關(guān)性不大。

青錢柳表型特征間具有較高程度的相關(guān)性，如葉長、葉寬、葉形指數(shù)與葉面積間的相關(guān)性較高，這與杜鵑葉山茶（Camellia azalea）[34]和荔枝（Litchi chinensis）[35]的研究結(jié)果一致。通過主成分分析提取了青錢柳兩種倍性葉特征的典型性狀，主要包括頂端小葉和中部小葉的葉寬、葉面積和葉形指數(shù)，以及海綿組織厚度、氣孔長度、柵欄組織厚度和緊密度，葉表型特征的PCA排序圖中兩種倍性樣本歸在兩個獨立的置信橢圓內(nèi)，說明根據(jù)葉表型可直接區(qū)分青錢柳二倍體和四倍體。

綜上所述，青錢柳二倍體和四倍體的葉片特征存在顯著差異，四倍體小葉多為9枚，而二倍體多為13枚；四倍體頂端小葉和中部小葉均較二倍體長，也較二倍體寬；四倍體頂端小葉和中部小葉的葉形指數(shù)均較二倍體小，二倍體頂端小葉為倒長橢圓形，中部小葉為長橢圓狀披針形，四倍體頂端小葉為橢圓形，中部小葉為長橢圓形；四倍體鋸齒較大，較稀疏，二倍體葉緣鋸齒較小，較密。在對二、四倍體青錢柳大規(guī)?；旌先后w進行鑒定時，為提高效率，可以通過小葉數(shù)量、小葉長度、小葉寬度和葉形指數(shù)等表型特征進行初篩，再結(jié)合海綿組織厚度、柵欄組織厚度、緊密度和氣孔長度等指標(biāo)進行鑒定，最后采用染色體計數(shù)或流式細胞分析法予以驗證。由于本研究測定所用葉片均采自盆栽苗，今后還需在不同種源、不同樹齡的人工林和天然林植株中開展大量的觀測，以進一步驗證其可靠性。

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（責(zé)任編輯 吳祝華）

收稿日期Received：2023-05-23""" 修回日期Accepted：2023-06-19

基金項目：國家自然科學(xué)基金項目（31971642，32271959）；江蘇省重點研發(fā)計劃（現(xiàn)代農(nóng)業(yè)）重點項目（BE2019388）。

第一作者：劉夏嵐（68465983@qq.com）。

*通信作者：尚旭嵐（shangxulan@njfu.edu.cn），副教授。

引文格式：劉夏嵐，宋子琪，胡鳳榮，等. 青錢柳二倍體和四倍體葉特征比較研究[J]. 南京林業(yè)大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2024，48（4）：76-84.

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DOI：10.12302/j.issn.1000-2006.202305024.