甜瓜抗枯萎病資源篩選及抗病生理指標(biāo)相關(guān)性分析

摘" " 要：為明確黑龍江地區(qū)甜瓜枯萎病生理小種，探究枯萎病脅迫下甜瓜生理指標(biāo)變化，完善甜瓜枯萎病抗病評價(jià)體系，利用表型鑒定結(jié)合分子標(biāo)記輔助選擇（MAS，marker-assisted selection）對24份甜瓜資源進(jìn)行抗病篩選。結(jié)果表明，黑龍江省尖孢鐮刀菌甜瓜專化型Fm-1為1號生理小種。分子標(biāo)記輔助選擇共篩選出抗病資源15份，感病資源9份，具有較高的篩選效率。其中野生型資源1314抗性最強(qiáng)，發(fā)病率僅為10%；栽培種22-152的感病程度最高。利用篩選的兩個抗性極端材料在幼苗期接種病原菌并于根部取樣，測定抗病生理指標(biāo)并進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果表明，枯萎病脅迫下的抗病和感病材料生理指標(biāo)響應(yīng)差異顯著，過氧化氫酶（CAT）、苯丙氨酸解氨酶（PAL）、超氧化物歧化酶（SOD）和過氧化物酶（POD）活性與發(fā)病率呈極顯著負(fù)相關(guān)；丙二醛含量和相對電導(dǎo)率與發(fā)病率呈極顯著正相關(guān)。綜上，利用功能性分子標(biāo)記可在早期實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)篩選甜瓜抗枯萎病品種，相對電導(dǎo)率和CAT及PAL活性可作為抗枯萎病評價(jià)的首選指標(biāo)。

關(guān)鍵詞：甜瓜；枯萎??；抗病資源篩選；生理指標(biāo)測定；相關(guān)性分析

中圖分類號：S652 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號：1673-2871（2024）07-059-08

Screening of melon resources resistant to Fusarium wilt and correlation analysis of physiological indexes of disease resistance

LIU Tai， WANG Di， XU Huichun， DU Zhiqiang， HU Xixi， ZHANG Ling， CHE Ye， QI Wenju

（Daqing Branch， Heilongjiang Academy of Agricultural Sciences， Daqing 163711， Heilongjiang， China）

Abstract： In order to identify the physiological race of melon Fusarium wilt in Heilongjiang province， and improve the evaluation system of melon Fusarium wilt disease resistance， 24 melon varieties were screened for disease resistance using phenotype identification combined with marker-assisted selection（MAS）. The results showed that the specific type Fm-1 of Fusarium oxysporum from Heilongjiang province was physiological race No. 1. A total of 15 resistant resources and 9 susceptible resources were screened by marker-assisted selection with high screening efficiency. The wild-type resource 1314 had the most resistant， the incidence of which was only 10%. The cultivated-type 22-152 had the highest degree of infection. Two resources with extreme resistance were inoculated with pathogens at seedling stage and sampled at root. The physiological indexes of resistance were determined and the correlation analysis was carried out. The results showed that the physiological indexes of resistant and susceptible materials were significantly different under wilt stress， and the activities of catalase（CAT）， phenylalanine aminolyase（PAL）， superoxide dismutase（SOD）and peroxidase（POD）were significantly negatively correlated with incidence rate. Malondialdehyde content and relative conductivity were significantly positively correlated with incidence rate. In conclusion， functional molecular markers can be used to accurately screen melon varieties resistance to Fusarium wilt at an early stage， and relative conductivity and CAT and PAL activities can be used as the preferred indicators for evaluation of Fusarium wilt resistance.

Key words：Melon; Fusarium wilt; Screening of resistant resources; Physiological index determination; Correlation analysis

甜瓜（Cucumis melo L.）是葫蘆科甜瓜屬一年生蔓性草本植物，具有極高的營養(yǎng)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值[1]。隨著設(shè)施園藝栽培技術(shù)的推廣，由尖孢鐮刀菌甜瓜專化型（Fusarium oxysporum f. sp. melonis）引起的枯萎病愈發(fā)嚴(yán)重，制約著世界范圍內(nèi)甜瓜生產(chǎn)和優(yōu)質(zhì)新品種選育[2]?？菸≡谔鸸先诰砂l(fā)生且傳播速度極快，具有極強(qiáng)的傳染性和較高的致死率，對甜瓜產(chǎn)量和品質(zhì)造成嚴(yán)重影響[3-4]。相關(guān)研究表明，植物的抗病性與組織結(jié)構(gòu)和防御酶活性等因素有著十分密切的關(guān)系[5]，特別是超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化物酶（POD）、過氧化氫酶（CAT）、苯丙氨酸解氨酶（PAL）等防御酶活性對病害響應(yīng)差異較大[6]?？菸【秩竞?，各級抗性植株體內(nèi)的抗氧化酶活性會出現(xiàn)不同程度的提高以快速清除由病害脅迫所產(chǎn)生的過量超氧自由基[7-11]。植株在枯萎病脅迫下所產(chǎn)生的超氧自由基誘導(dǎo)脂質(zhì)中的不飽和脂肪酸發(fā)生過氧化作用是造成細(xì)胞損傷的主要原因，而丙二醛（MDA）作為膜脂過氧化的主要產(chǎn)物之一，直接反映了細(xì)胞的脂質(zhì)過氧化水平和生物膜損傷程度。同時，損傷的膜結(jié)構(gòu)通透性增大，電解質(zhì)外滲，從而導(dǎo)致細(xì)胞浸提液的相對電導(dǎo)率（REC）增高。因此，MDA含量和REC可作為衡量植物抗病性的重要指標(biāo)[12-13]。

甜瓜具有豐富的基因型和復(fù)雜的抗病遺傳機(jī)制。自1976年Risser等[14]首次發(fā)布甜瓜抗尖孢鐮刀菌基因Fom-1和Fom-2后，截至目前共發(fā)現(xiàn)了5個抗枯萎病基因[15-17]。其中，研究較為深入的基因有Fom-1、Fom-2和Fom-3，目前已成功將Fom-1和Fom-2基因進(jìn)行了克隆[18-19]。不同甜瓜品種中所含有的抗病基因不同，對尖孢鐮刀菌各生理小種的抗性也有所差異。目前已經(jīng)鑒定出4個生理小種，分別為小種0、1、2和1.2[16，18-20]。品種Doublon和Hemed含有抗病基因Fom-1，抗甜瓜枯萎病?；蜕硇》N0和2，感生理小種1和1.2；品種CM17187和Makdimon-1含有抗病基因Fom-2，抗生理小種0和1，感生理小種2和1.2；品種MR-1、Top Mark和Perlita FR含有抗病基因Fom-3，抗生理小種0、1和2，感生理小種1.2[14，16，21-22]。以遺傳物質(zhì)中核苷酸差異為基礎(chǔ)的DNA標(biāo)記是不同生物品種在分子水平上的直接反映。自20世紀(jì)RFLP標(biāo)記技術(shù)用于檢測品種間遺傳變異多態(tài)性以來，SSR、CAPS、As-pcr等各種標(biāo)記方式都逐步應(yīng)用到了甜瓜的抗病分子育種實(shí)踐中。凌悅銘等[23]利用高抗和高感霜霉病甜瓜品種為親本構(gòu)建F2代分離群體，基于BSA-seq結(jié)果開發(fā)了許多Indel標(biāo)記，可用于區(qū)分抗病品種。王士偉[24]基于抗病和感病甜瓜材料Fom-2基因的LRR區(qū)單堿基差異，開發(fā)出功能性分子標(biāo)記，可較為精準(zhǔn)地篩選抗病品種。

針對當(dāng)前黑龍江地區(qū)甜瓜枯萎病生理小種的研究較少，且基于甜瓜遺傳背景的復(fù)雜性和基因型的多樣性，進(jìn)一步完善甜瓜抗枯萎病鑒定評價(jià)體系對抗枯萎病甜瓜資源的篩選及選育抗病品種具有重要意義。筆者利用國際通用鑒別寄主在甜瓜幼苗期接種枯萎病菌，鑒定黑龍江地區(qū)枯萎病生理小種，利用表型鑒定結(jié)合分子標(biāo)記輔助選擇技術(shù)對24份甜瓜資源的抗病性進(jìn)行鑒定，同時利用篩選的高抗和高感品種對抗病生理生化指標(biāo)進(jìn)行測定和相關(guān)性分析，探索CAT、PAL、SOD和POD活性以及MDA含量和REC與甜瓜抗病性的關(guān)系，進(jìn)一步完善甜瓜抗枯萎病評價(jià)體系，以期為豐富甜瓜抗病種質(zhì)資源庫和甜瓜抗枯萎病育種提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

參試的24份甜瓜資源包含厚皮甜瓜西州密25號、金香翠蜜、22-178、22-173、22-128、22-138、22-155、22-165、22-176、22-172，薄皮甜瓜甘一美香、爭春二號、澤甜豹紋、澤甜早香蜜、澤甜翠蘋果、22-166、22-152、22-175、22-120、22-122、22-140、22-114、22-106和1份野生型資源1314。其中，西州密25號由河北粒爾田種業(yè)有限公司提供，金香翠蜜由大慶薩中種業(yè)提供，甘一美香、爭春二號、澤甜豹紋、澤甜早香蜜、澤甜翠蘋果由齊齊哈爾澤甜種業(yè)有限公司提供，其他資源為黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院大慶分院自主選育的高世代自交系。甜瓜幼苗皆種植于黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院安達(dá)育種基地，設(shè)置隨機(jī)區(qū)組試驗(yàn)。每份資源設(shè)3次生物學(xué)重復(fù)，各重復(fù)選取長勢一致的植株20株。待植株成長至兩片真葉期進(jìn)行接菌觀察。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1" " 枯萎病病原菌生理小種鑒定" " 參試病原菌菌株為2023年6月在黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院安達(dá)育種基地甜瓜病根分離獲得的尖孢鐮刀菌（F. oxysporum）Fm-1，全試驗(yàn)過程均在HDL超凈工作臺中進(jìn)行。為了保證病原菌的致病性并確定參試菌株的生理小種，筆者以4個國際通用生理小種鑒別寄主為試材，分別為 Charentais T、Doublon、CM17-187 和 MR-1，由黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝分院提供。不同鑒別寄主對生理小種的抗感性反應(yīng)見表1[25]。

1.2.2" " 甜瓜抗枯萎病篩選試驗(yàn)" " 2023年6月，挑選各品種飽滿種子25粒于安達(dá)育種基地內(nèi)進(jìn)行催芽育苗。2023年7月將分離獲得的尖孢鐮刀菌菌株在PDA培養(yǎng)基上活化復(fù)蘇，菌種復(fù)蘇后用無菌水將菌液稀釋至 1×106個·mL-1，用于接種。2023年7月中旬，待植株長至兩葉一心時挑選長勢一致的植株，使用蘸根法接菌。植株接種后置于接種室，室內(nèi)晝夜（16 h/8 h）交替，溫度為26 ℃/20 ℃。在接菌10 d后統(tǒng)計(jì)發(fā)病情況，參考劉朋義等[5]的方法對植株進(jìn)行病情分級，統(tǒng)計(jì)病情指數(shù)和品種抗性。病情指數(shù)計(jì)算公式如下：

DI=∑（SiNi）/4N×100；" " " " " " " " " " " " " " " " " " （1）

發(fā)病率（R）/%=發(fā)病株數(shù)/接種總株數(shù)×100。（2）

式中，DI為病情指數(shù)，Si為發(fā)病級別，Ni為相應(yīng)發(fā)病級別的株數(shù)，i為病情分級的各個級別，N為調(diào)查總株數(shù)。

對枯萎病抗性評價(jià)參考顧衛(wèi)紅[26]的評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)（表2）。

1.2.3" " 分子標(biāo)記輔助選擇" " 參考王懷松等[27]的方法提取植物基因組DNA。試驗(yàn)所使用的分子標(biāo)記為王士偉[24]開發(fā)的FOM-2功能性分子標(biāo)記，正向引物2-3F1：5'-GTGTAACACAAATTCCTCAACA-3'，反向引物2-3R1：5'-GTGTAACACAAATTCCTCATCA-3'，以樣本DNA為模板，用AS-pcr（Allele-specific pcr）法篩選抗病、感病品種，擴(kuò)增程序?yàn)椋?4 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性30 s；62 ℃退火30 s；72 ℃延伸30 s；72 ℃后延伸10 min，共35個循環(huán)。最終產(chǎn)物經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測。

1.2.4" " 生理指標(biāo)測定" " 接種處理和未接種對照（CK）在相同時間點(diǎn)取根部樣本進(jìn)行生理指標(biāo)檢測。取樣時間為接種前（0 d）， 接種后每隔1 d取樣，連續(xù) 5次，設(shè)3次重復(fù)。按照南京建成生物工程研究所的試劑盒說明書進(jìn)行POD、SOD、CAT 活性和 MDA 含量的測定。使用上海博耀生物科技有限公司的酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒測定PAL活性。用酶標(biāo)儀在450 nm波長下測定光密度（D450 nm），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中的酶活性。以每分鐘光密度變化0.01所需酶量為1個酶活性單位（U）。參考Alpaslan的方法[28]，采用電導(dǎo)率儀測定相對電導(dǎo)率。

1.3 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)表示為3次獨(dú)立重復(fù)的平均值±SD，采用SPSS 26.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，同一甜瓜材料相同時間點(diǎn)接種處理與未接種對照生理指標(biāo)采用Microsoft Excel進(jìn)行差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 病原菌生理小種鑒定

筆者利用國際通用鑒別寄主對參試病原菌的抗感情況進(jìn)行鑒定，詳見表3。根據(jù)枯萎病的接種方法，利用尖孢鐮刀菌Fm-1對各鑒別寄主進(jìn)行接種，5 d后調(diào)查病情指數(shù)。Charentais T和Doublon的病情指數(shù)分別為98.67和83.73，屬于高度感??；CM17-187病情指數(shù)為12.5，屬于高抗品種；MR-1病情指數(shù)為23.63，屬于抗病品種。根據(jù)表1中不同鑒別寄主對不同生理小種的接種鑒定反應(yīng)，黑龍江地區(qū)尖孢鐮刀菌Fm-1屬于生理小種1號。

2.2 病情指數(shù)及發(fā)病率

24份甜瓜資源對枯萎病的抗性鑒定結(jié)果見表4，有15份材料表現(xiàn)抗性，其中4份材料表現(xiàn)高抗（HR），即1314、22-122、22-138和22-173；抗?。≧）和中抗（MR）品種11份。野生型甜瓜資源1314的病情指數(shù)及發(fā)病率在供試材料中均最低，分別為8.4和13.33%，顯著低于其他資源。感?。⊿）材料6份，高感（HS）材料3份；其中栽培種甜瓜22-152的病情指數(shù)及發(fā)病率最高，分別為85.67和96.67%，顯著高于其他資源。由表4數(shù)據(jù)可知，病情指數(shù)與發(fā)病率呈正相關(guān)，變化趨勢基本一致。

2.3 分子標(biāo)記輔助選擇技術(shù)篩選抗性品種

利用功能性分子標(biāo)記輔助選擇體系，以24份甜瓜資源DNA為模板，采用As-pcr擴(kuò)增技術(shù)，PCR產(chǎn)物經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測。結(jié)果（圖1）表明，15個品種擴(kuò)增出清晰條帶，說明含有抗病基因Fom-2，推測為抗病品種；9個品種未擴(kuò)增出目標(biāo)條帶，說明不含F(xiàn)om-2抗病基因，推測為感病品種。

2.4 生理指標(biāo)分析

酶活性測定結(jié)果表明，抗病資源1314和感病資源22-152的CAT活性整體呈升高趨勢（圖2-A），接菌后5 d，1314的CAT活性達(dá)到峰值，是CK的2.72倍；22-152同時也達(dá)到最高值，是22-152 CK的2.23倍?？菸【秩菊T導(dǎo)根部CAT活性升高，抗病品種的CAT活性在侵染第5天顯著高于感病品種，抗氧化能力增強(qiáng)。接菌后，抗病品種1314和感病品種22-152的PAL活性也呈上升趨勢（圖2-B）。接種后5 d，1314的PAL活性是CK的3.19倍，1314與22-152的PAL活性在5 d時差異最大，抗病資源比感病資源的PAL活性顯著提高40.15%。

1314和22-152在接菌后5個時期的SOD活性呈先升高后降低的變化趨勢（圖2-C）。在接菌初期，1314的SOD活性略高于22-152，相差較小。在接菌2 d時，1314的酶活性迅速升高并于第3 天達(dá)到峰值，比同期的22-152提高6.89%；而感病資源的SOD活性達(dá)到峰值的時間略遲，且低于抗病資源。POD活性在抗感病資源間的變化與SOD基本相似，呈先上升后下降的變化趨勢（圖2-D）?？共≠Y源1314的POD活性在接菌后第3天達(dá)到峰值，為同期CK的2.24倍。值得注意的是，在監(jiān)測全過程中抗病資源的POD活性大多高于感病資源，且二者的差異在接菌后3 d最大，1314的POD活性比22-152顯著提高30.12%。

抗病和感病資源在CK和接菌處理下的MDA含量差異顯著（圖2-E）。兩份材料接菌后MDA含量呈上升趨勢且均高于相應(yīng)的CK。感病資源22-152在接菌4～5 d時的MDA含量超過1314，并在5 d時達(dá)到峰值，比抗病資源提高8.69%。總體來看，感病資源感染病菌后細(xì)胞膜脂過氧化更嚴(yán)重，MDA含量隨感病程度加重而升高。感病資源的相對電導(dǎo)率隨病情程度加重呈上升趨勢，在接菌5 d時，22-152的相對電導(dǎo)率達(dá)到最高，比接菌的1314提高37.17%；而抗病資源1314接菌后的相對電導(dǎo)率變化幅度較?。▓D2-F），表明抗病資源在病原菌侵染后具有更強(qiáng)的細(xì)胞穩(wěn)定性。

2.5 生理指標(biāo)與抗病性相關(guān)性分析

各生理指標(biāo)與甜瓜對枯萎病抗性的相關(guān)性分析結(jié)果如表5所示，各生理指標(biāo)與發(fā)病率間均存在極顯著相關(guān)性，其中，CAT、PAL、POD和SOD活性與發(fā)病率呈極顯著負(fù)相關(guān)；MDA含量和相對電導(dǎo)率則與發(fā)病率呈極顯著正相關(guān)。相對電導(dǎo)率、CAT活性、PAL活性與發(fā)病率的相關(guān)系數(shù)絕對值較高，分別為0.983、0.979和0.974，因此在建立甜瓜抗枯萎病評價(jià)系統(tǒng)時，可將這3個生理指標(biāo)作為首選測定參數(shù)。

3 討論與結(jié)論

植物在正常生理代謝活動中細(xì)胞器、脂膜會產(chǎn)生如H2O2等活性氧物質(zhì)（ROS）[29]。而枯萎病病菌侵染等脅迫條件下會打破植物細(xì)胞內(nèi)ROS的代謝平衡，使其大量累積引發(fā)膜脂過氧化作用，從而使膜系統(tǒng)喪失完整性，引起電解質(zhì)外滲，最終形成植物細(xì)胞膜脂過氧化產(chǎn)物MDA，過量MDA會傷害甜瓜細(xì)胞和組織，導(dǎo)致植株黃化、枯萎，嚴(yán)重時甚至?xí)?dǎo)致植株死亡[30-31]。因此在植物抗性生理研究中，MDA含量與相對電導(dǎo)率通常作為衡量膜脂過氧化作用的指標(biāo)[32-33]。在本研究中，相對電導(dǎo)率與發(fā)病率呈極顯著正相關(guān)，其數(shù)值隨感病程度加重而明顯升高，相關(guān)系數(shù)較大，可在后續(xù)研究中作為衡量感病程度的重要指標(biāo)。

甜瓜在脅迫條件下所產(chǎn)生的過量ROS對脂膜造成的損傷稱為過氧化損傷，然而植物細(xì)胞中也形成了一系列抗氧化機(jī)制來維持細(xì)胞相對穩(wěn)定性。SOD催化超氧離子發(fā)生歧化反應(yīng)產(chǎn)生H2O2，隨后被POD、CAT清除[34]。丁玉梅等[35]研究表明，枯萎病影響下的抗病南瓜品種主要依賴SOD、POD和CAT來清除體內(nèi)的活性氧。不僅如此，與感病品種相比，抗病南瓜還具有更高效的分子調(diào)控機(jī)制以維持高水平的抗氧化酶活性。筆者以抗感資源在枯萎病誘導(dǎo)下的抗氧化酶活性指標(biāo)為依據(jù)，發(fā)現(xiàn)抗病資源1314在接菌后，SOD、CAT、POD反應(yīng)迅速，可以快速形成抗氧化機(jī)制，而感病資源22-152的抗氧化機(jī)制在反應(yīng)時間和活性水平上均長于或低于抗病資源。

PAL是植保素、木質(zhì)素、酚類物質(zhì)合成的關(guān)鍵酶，活性與酚類化合物的合成密切相關(guān)，在植物抗病、抗蟲、抗逆境脅迫等方面也起著重要作用[36]。研究表明，在枯萎病脅迫下，西瓜葉片PAL活性顯著升高，且抗病品種酶活性峰值出現(xiàn)早于感病品種。Sadeghpour等[6]測定了甜瓜枯萎病高抗品種Shante-F1和感病品種Shahabadi在接菌后PAL等8種抗氧化酶的活性變化，結(jié)果表明，抗病相關(guān)基因的上調(diào)表達(dá)是甜瓜抗病性的關(guān)鍵因素。Madadkhah等[37]測定了45份甜瓜種質(zhì)在接菌后根部的CAT和PAL活性等指標(biāo)，結(jié)果表明，抗病和感病品種的酶活性在接菌后都有不同程度的升高，但抗病品種要顯著高于感病品種；研究同時發(fā)現(xiàn)，酶和酚類物質(zhì)在誘導(dǎo)甜瓜增強(qiáng)抗性方面發(fā)揮重要作用。在本研究中，枯萎病脅迫下甜瓜的PAL和CAT活性隨著感病時間總體呈上升趨勢，比CK均有大幅提高，且抗病資源PAL活性顯著高于感病資源，與前人的研究結(jié)果一致。在相關(guān)性研究結(jié)果中發(fā)現(xiàn)，CAT和PAL活性與抗病程度有較高的相關(guān)性，可以與相對電導(dǎo)率共同作為判斷品種抗病能力的重要指標(biāo)。

甜瓜具有豐富的基因型和復(fù)雜的抗病調(diào)控機(jī)制，因而借助表型鑒定與分子標(biāo)記相結(jié)合的方式能夠獲得較為準(zhǔn)確的評價(jià)結(jié)果。邵元健等[38]利用Fom-2基因雙側(cè)連鎖分子標(biāo)記SSR430和STS296對甜瓜品種資源Fom-2基因的攜帶情況進(jìn)行分子鑒定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，標(biāo)記準(zhǔn)確率為93.3%，能夠較為準(zhǔn)確地篩選含有主效抗病基因的甜瓜品種。趙玉龍[39]根據(jù)MR-1和WI998的重測序結(jié)果，針對Fom-2的SCOP結(jié)構(gòu)功能域的核苷酸序列進(jìn)行擴(kuò)增，開發(fā)出與Fom-2緊密連鎖的CAPS分子標(biāo)記，獲得了較高的田間數(shù)據(jù)符合率。筆者參考王士偉[24]開發(fā)的分子標(biāo)記，進(jìn)行不同甜瓜資源的枯萎病抗性鑒定。然而，基于甜瓜抗病分子調(diào)控機(jī)制的復(fù)雜性，將分子標(biāo)記直接應(yīng)用于生產(chǎn)中還有待進(jìn)一步研究。邵元健等[38]研究發(fā)現(xiàn)，基于Fom-2分子標(biāo)記預(yù)測的15個感病基因型甜瓜品種中實(shí)際發(fā)病的僅過半數(shù)，能夠證明其不含抗枯萎病主基因Fom-2；而對于研究中的抗病品種僅說明其不攜帶Fom-2基因，但存在其他抗病基因參與調(diào)控。如Dolton和Canta loupe chaudo所攜帶的抗枯萎病基因?yàn)镕om-1；感病品種黃元帥兩側(cè)標(biāo)記基因型為抗病型，可能是由于雙側(cè)標(biāo)記間的染色體發(fā)生過雙交換，使抗病基因被交換[38]。筆者在本研究所使用的分子標(biāo)記針對抗枯萎病Fom-2基因所介導(dǎo)的枯萎病0號和1號生理小種具有較高的篩選效率，在植株生長初期便可檢測其對1號生理小種的抗性，為豐富黑龍江地區(qū)抗病甜瓜品種資源提供了更為便捷的檢測方法。

綜上所述，筆者利用國際通用鑒別寄主對黑龍江地區(qū)枯萎病生理小種進(jìn)行鑒定，最終認(rèn)為研究所分離純化的尖孢鐮刀菌菌株Fm-1為枯萎病1號生理小種。表型鑒定結(jié)果表明，24份資源中有4份高抗資源，抗病和中抗資源11份，感病資源6份，高感資源3份。分子標(biāo)記輔助篩選最終獲得15份抗病資源，9份感病資源，具有較高的篩選效率。試驗(yàn)通過對比高抗資源1314和高感資源22-152的6項(xiàng)生理指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)各指標(biāo)對病害響應(yīng)強(qiáng)烈且抗病資源防御酶活性均高于感病資源，而MDA含量和相對電導(dǎo)率在抗、感病資源中的差異較為顯著，與發(fā)病率呈極顯著正相關(guān)。通過對各項(xiàng)生理指標(biāo)與發(fā)病率的相關(guān)性進(jìn)行分析，相對電導(dǎo)率、CAT和PAL活性3項(xiàng)指標(biāo)的相關(guān)系數(shù)絕對值較高，可作為衡量甜瓜抗病性的首選指標(biāo)。

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收稿日期：2023-10-31；修回日期：2024-01-10

基金項(xiàng)目：黑龍江省農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新跨越工程優(yōu)青項(xiàng)目（CX22YQ32）；黑龍江省農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新跨越工程農(nóng)業(yè)特色產(chǎn)業(yè)項(xiàng)目（CX23TS11）；黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院院級課題（DQ-ZD-001）

作者簡介：劉" " 泰，男，助理研究員，研究方向?yàn)槲魈鸸戏肿舆z傳育種。E-mail：2250339510@qq.com

通信作者：王" " 迪，男，研究員，研究方向?yàn)槭卟嗽耘嗌砼c品質(zhì)調(diào)控。E-mai：dqnkywd@hotmail.com