血漿miRNA在子宮內膜異位癥中的診斷價值

[摘要]目的探討血漿微小核糖核酸（microRNA，miR）-451a、miR-3613-5p和miR-125b-5p在子宮內膜異位癥（endometriosis，EMT）中的診斷價值。方法選取2021年12月至2023年2月就診于福建中醫(yī)藥大學附屬人民醫(yī)院婦科的子宮內膜異位癥患者35例作為病例組，同期選取30名健康體檢無異常的育齡女性作為對照組。采用實時熒光定量逆轉錄聚合酶鏈反應技術檢測兩組納入者的miR-451a、miR-3613-5p和miR-125b-5p表達水平，并通過受試者操作特征曲線（receiveroperatingcharacteristiccurve，ROC曲線）評價其在EMT診斷中的價值。結果①病例組患者血漿中miR-451a、miR-3613-5p和miR-125b-5p的表達水平均高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。②病例組中輕中度（Ⅱ～Ⅲ期）患者及重度（Ⅳ期）患者間miRNA表達水平比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），血漿中的糖類抗原125（carbohydrateantigen125，CA125）表達水平差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。③通過ROC分析miRNA對EMT的診斷效能，miR-451a的敏感度為85.7%，特異性為40.0%；miR-3613-5p的敏感度為60.0%，特異性為90.0%；miR-125b-5p的敏感度為60.0%，特異性為76.7%；三者聯(lián)合診斷的敏感度為48.6%，特異性為96.7%。結論相較于健康女性，miR-451a、miR-3613-5p和miR-125b-5p在EMT患者血漿中表達水平升高，且不受臨床分期影響，有望作為EMT無創(chuàng)診斷的候選標志物。

[關鍵詞]子宮內膜異位癥；微小核糖核酸-451a；微小核糖核酸-3613-5p；微小核糖核酸-125b-5p

[中圖分類號]R711.71[文獻標識碼]A?;[DOI]10.3969/j.issn.1673-9701.2024.21.007

DiagnosticvalueofplasmamiRNAinendometriosis

HANChunlong，CHENJie，PENGZijie

DepartmentofGynecology，theAffiliatedPeople’sHospitalofFujianUniversityofTraditionalChineseMedicine，F(xiàn)uzhou350004，F(xiàn)ujian，China

[Abstract]ObjectiveToexplorethediagnosticvalueofmicroRNA（miR）-451a，miR-3613-5pandmiR-125b-5pinendometriosis（EMT）.MethodsAtatolof35patientswithEMTintheDepartmentofGynecology，theAffiliatedPeople’sHospitalofFujianUniversityofTraditionalChineseMedicinewereselectedasthecasegroupfromDecember2021toFebruary2023，30healthywomenofchildbearingagewereselectedasthecontrolgroupoverthesameperiod.TheexpressionlevelsofmiR-451a，miR-3613-5pandmiR-125b-5pintheplasmaoftwogroupsweremeasuredusingreal-timequantitativereversetranscriptionpolymerasechainreaction，thediagnosticvalueofthesemiRNAsinEMTwasevaluatedbyusingreceiveroperatingcharacteristic（ROC）curve.Results①TheexpressionlevelsofmiR-451a，miR-3613-5pandmiR-125b-5pincasegroupwerehigherthanthoseincontrolgroup，thedifferencewasstatisticallysignificant（P<0.05）.②Incasegroup，therewasnosignificantdifferenceinmiRNAexpressionlevelsbetweenmild-moderatepatients（stageⅡ-Ⅲ）andseverepatients（stageⅣ）（P>0.05）.Theexpressionlevelsofcarbohydrateantigen125（CA125）inplasmawassignificantlydifferent（P<0.05）.③ThediagnosticefficacyofmiRNAforEMTwasevaluatedthroughROCanalysis，withasensitivityof85.7%andspecificityof40.0%formiR-451a，asensitivityof60.0%andspecificityof90.0%formiR-3613-5p，andasensitivityof60.0%andspecificityof76.7%formiR-125b-5p.Combinedwithasensitivityof48.6%andspecificityof96.7%.ConclusionComparedtohealthywomen，theexpressionlevelsofmiR-451a，miR-3613-5pandmiR-125b-5pinplasmaofEMTareincreased，whicharenotaffectedbyclinicalstage，andareexpectedtobecandidatemarkersforthenon-invasivediagnosisofEMT，andarenotaffectedbyclinicalstaging，makingthempromisingcandidatebiomarkersfornon-invasivediagnosisofEMT.

[Keywords]Endometriosis;miR-451a;miR-3613-5p;miR-125b-5p

子宮內膜異位癥（endometriosis，EMT）作為常見的婦科病癥，在育齡期女性中的發(fā)病率約為10%，其可導致痛經、慢性盆腔痛、性交痛及不孕等一系列癥狀，嚴重影響女性的身心健康和生活質量[1]。EMT的發(fā)病機制目前仍未完全明確，也缺乏準確的診斷方法[2]，由于早期可能缺乏典型癥狀，患者癥狀明顯時病情往往已經較為嚴重。因此，對EMT的早期診斷顯得尤為關鍵[3]。目前，糖類抗原125（carbohydrateantigen125，CA125）是輔助診斷EMT的常用生物標志物，但其特異性在單獨使用時并不理想。腹腔鏡檢查可作為診斷EMT的“金標準”，但其高昂的成本和侵入性操作使其在臨床上的應用受到限制。鑒于此，研究者們一直在尋找具有高特異性和敏感度的非侵入性診斷標志物。微小核糖核酸（microRNA，miR）是一類由大約22個核苷酸組成的單鏈RNA分子，并在多種細胞過程中發(fā)揮關鍵調節(jié)作用[4]。研究表明miRNA在EMT的發(fā)生和發(fā)展過程中扮演重要角色，并有可能成為EMT的無創(chuàng)診斷標志物[5]。本研究旨在通過分析EMT患者與健康女性血漿中miR-451a、miR-3613-5p和miR-125b-5p的表達差異，并采用受試者操作特征曲線（receiveroperatingcharacteristiccurve，ROC曲線）評估其在EMT診斷中的應用價值，期望能為EMT的早期診斷提供新的策略。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2021年12月至2023年2月就診于福建中醫(yī)藥大學附屬人民醫(yī)院婦科的35例EMT患者作為病例組，同期選取30名健康體檢無異常的育齡女性作為對照組。病例組患者的年齡（32.23±5.07）歲，體質量指數(shù)（21.38±2.31）kg/m2，對照組納入者的年齡（32.50±4.45）歲，體質量指數(shù)（21.26±2.85）kg/m2，兩組納入者的一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。病例組按術中所見以美國生殖醫(yī)學會（AmericanSocietyforReproductiveMedicine，ASRM）修正的子宮內膜異位癥分期法[6]進行分期：Ⅱ期患者4例，Ⅲ期患者11例，Ⅳ期患者20例。病例組納入標準：①接受腹腔鏡手術且術后病理確診EMT；②既往月經規(guī)律；③本人及其家屬同意加入本研究，并簽署知情同意書。排除標準：①術前3個月內接受促性腺激素釋放激素激動劑類似物或激素類藥物治療；②同時患有其他婦科疾病或嚴重器質性疾病者。本研究經福建中醫(yī)藥大學附屬人民醫(yī)院倫理委員會批準（倫理審批號：2021-051-02）。

1.2試劑與設備

mRNA逆轉錄試劑盒及miRNA逆轉錄試劑盒均購自北京康為世紀生物科技有限公司。Trizol試劑購自美國Thermo公司，CA125酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）試劑盒購自南京博研生物科技有限公司。miR-451a、miR-3613-5p、miR-125b-5p及U6（內參）引物由北京擎科合成。熒光定量聚合酶鏈反應儀購自美國Thermo公司，型號PIKOREAL96；多功能酶標分析儀購自瑞士Tecan公司，型號Infinite200Pro。

1.3實驗方法

1.3.1標本收集所有納入者在清晨空腹狀態(tài)下抽取5ml靜脈血，靜置于含抗凝劑的試管中，常溫3000轉/min離心15min取血漿，存于無菌離心管并冷凍于–80℃待測。

1.3.2miRNA檢測Trizol法提取細胞總RNA，分光光度計測定濃度并計算純度。先利用反轉錄試劑盒逆轉錄成cDNA，以cDNA為模板進行擴增，再進行實時熒光定量逆轉錄聚合酶鏈反應。選用U6作為內參，以Ct值為基礎，采用2-△△Ct法計算血漿miR-451a、miR-3613-5p及miR-125b-5p的相對表達量。引物序列見表1。

1.3.3CA125檢測使用ELISA試劑盒進行測定，嚴格遵守試劑盒說明書的規(guī)范步驟進行操作。

1.4統(tǒng)計學方法

采用SPSS26.0統(tǒng)計學軟件對數(shù)據進行處理分析。符合正態(tài)分布的計量資料以均數(shù)±標準差（）表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗；不符合正態(tài)分布的計量資料以中位數(shù)（四分位數(shù)間距）[M（Q1，Q3）]表示，兩組間比較采用Mann-WhitnelyU檢驗。診斷價值的比較采用ROC曲線分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結果

2.1病例組與對照組的血漿miRNA指標比較

病例組患者的血漿miR-451a、miR-3613-5p和miR-125b-5p水平均高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表2。

2.2病例組不同分期患者血漿miRNA和CA125的比較

輕中度（Ⅱ～Ⅲ期）患者及重度（Ⅳ期）患者血漿miR-451a、miR-3613-5p和miR-125b-5p的相對表達量差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；輕中度與重度CA125對比差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表3。

2.3ROC曲線分析miRNA診斷效能

血漿miR-451a診斷EMT的截斷值為0.067，曲線下面積（areaunderthecurve，AUC）為0.653（95%CI：0.519～0.787），敏感度為85.7%，特異性為40.0%；血漿miR-3613-5p診斷EMT的截斷值為0.523，AUC為0.794（95%CI：0.688～0.900），敏感度為60.0%，特異性為90.0%；血漿miR-125b-5p診斷EMT的截斷值為0.671，AUC為0.694（95%CI：0.566～0.823），敏感度為60.0%，特異性為76.7%；三者聯(lián)合診斷EMT的截斷值為0.708，AUC為0.801（95%CI：0.697～0.905），敏感度為48.6%，特異性為96.7%，見圖1。

3討論

EMT是生育年齡婦女常見的婦科疾病，不僅對患者的生命質量產生負面影響，還給社會衛(wèi)生資源造成重大負擔[1]。因此，實現(xiàn)EMT的早期診斷和干預對改善患者預后至關重要[3]。發(fā)現(xiàn)非侵入性、具有高敏感度和特異性的生物標志物對EMT的診斷、緩解患者的不適、減少醫(yī)療費用、提升診斷的精確度和迅速性進而優(yōu)化患者的整體治療過程具有重要意義。

miRNA是一類由大約22個核苷酸組成的單鏈RNA分子，在真核生物中高度保守，可以多種方式調控基因的轉錄或翻譯，單個miRNA甚至可對一個靶基因進行雙重或多重調控[4]。近年來研究顯示miRNA在EMT的發(fā)生和發(fā)展中廣泛參與，包括細胞的增殖遷移、血管的生成、炎癥信號的傳導及激素的調節(jié)等多個方面，對EMT的進展具有決定性影響[5]。Bendifallah等[7]利用人工智能和機器學習技術開發(fā)基于miRNA的EMT診斷程序，其敏感度、特異性和AUC分別達96.8%、100.0%和98.4%，這表明miRNA作為診斷標志物具有巨大潛力。Moustafa等[8]采用miRNA檢測組合作為EMT的非侵入性診斷方法，發(fā)現(xiàn)miR-451a、miR-3613-5p和miR-125b-5p在EMT患者中的表達水平顯著高于健康對照者，而miR-3613-5p和let-7b水平則顯著低于健康對照者。Vanhie等[9]基于全基因組miRNA表達譜分析，識別包括miR-125b-5p、miR-451a和miR-3613-5p在內的42種具有區(qū)分潛力的血漿miRNA，并構建3種診斷模型。Gao等[10]的研究發(fā)現(xiàn)miR-451a在正常子宮內膜中的表達減少，其可能通過促進細胞增殖和減少凋亡促進EMT的發(fā)病。Li等[11]在小鼠EMT模型上使用miR-451a抑制劑治療后，觀察到EMT病變體積顯著減小。但根據Wang等[12]的研究，在患有EMT并伴有不孕癥狀的個體中，miR-451a在組織樣本及細胞系的表達水平顯著低于正常人群。Walasik等[13]的前瞻性研究也發(fā)現(xiàn)EMT患者血漿中的miR-451a和miR-3613-5p水平顯著降低，但miR-125b-5p和miR-199a-3p水平在EMT患者和健康對照者間沒有差異。Cosar等[14]研究發(fā)現(xiàn)在經過治療的狒狒EMT模型中，miR-451a和miR-150-5p水平顯著降低，而miR-3613-5p水平顯著升高。此外，研究發(fā)現(xiàn)miR-3613-3p在調節(jié)內皮細胞凋亡中發(fā)揮不可或缺的作用[15]。

盡管國內外已有許多研究致力于評估m(xù)iRNA作為EMT診斷標志物的潛力，并采取多種策略標準化miRNA表達數(shù)據，但所得結果卻并不一致[16]。這種不一致可歸因于采血時的月經周期時間、患者的炎癥狀態(tài)、樣本儲存時間或樣本溶血等[17]。另外本研究還使用ROC曲線評價miRNA對EMT的診斷效能，其中miR-451a具有較高的敏感度但特異性不足；相反，miR-3613-5p具有較高的特異性而敏感度不高，miR-125b-5p的敏感度和特異性均一般，三者聯(lián)合診斷時雖敏感度不足但特異性極高，有望彌補CA125單獨診斷EMT時特異性不足的缺點。

綜上所述，本研究在探索miRNA作為EMT診斷生物標志物方面取得一定的進展，但同時也暴露一些局限性。首先，研究的樣本量相對較小，其次，主要集中于中重度EMT患者，這可能限制研究結果在更廣泛人群中的適用性。為克服這些局限性，未來的研究應考慮擴大樣本量，進行多中心研究，并涵蓋不同臨床分期的EMT患者，為miRNA在EMT診斷中的應用提供更堅實的科學基礎。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。

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（收稿日期：2024–01–08）

（修回日期：2024–07–08）