人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對大鼠肺成纖維細(xì)胞分泌Smad2蛋白、結(jié)締組織生長因子的影響

【摘要】目的 探究人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（hUC-MSCs）對轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）誘導(dǎo)的大鼠肺成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化的過程及結(jié)局的影響。方法 從10只健康雌性無特定病原體級(jí)（SPF級(jí)）大鼠中提取肺成纖維細(xì)胞，用5 ng/mL TGF-β處理大鼠原代肺成纖維細(xì)胞的同時(shí)，給予不同濃度的hUC-MSCs對其共培養(yǎng)，其中A組（模型組，加入40 μL TGF-β）、B組（5×105 hUC-MSCs治療組，加入40 μL TGF-β和1 mL 5×105個(gè)hUC-MSCs）、C組（2×106 hUC-MSCs治療組，加入40 μL TGF-β和1 mL 2×106個(gè)hUC-MSCs）、D組[正常組，加入磷酸鹽緩沖液（PBS）40 μL]，采用蛋白免疫印跡法檢測各組細(xì)胞內(nèi)膠原蛋白Ⅰ（Collagen Ⅰ）、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（a-SMA）蛋白表達(dá)量；采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）法檢測各組細(xì)胞內(nèi)結(jié)締組織生長因子（CTGF），Smad2 mRNA的相對表達(dá)量。用5 ng/mL TGF-β處理大鼠原代肺成纖維細(xì)胞48 h后，將其誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞，再和不同濃度的hUC-MSCs共培養(yǎng)24 h，其中A組（模型組，加入40 μL TGF-β）、B組（5×105 hUC-MSCs治療組，加入1 mL 5×105個(gè)hUC-MSCs）、C組（2×106 hUC-MSCs治療組，加入1 mL 2×106個(gè)hUC-MSCs）、D組（正常組，不用40 μL TGF-β誘導(dǎo)，加入PBS 40 μL），采用蛋白免疫印跡法檢測各組肌成纖維細(xì)胞內(nèi)Collagen Ⅰ、a-SMA蛋白表達(dá)量；采用RT-PCR檢測各組肌成纖維細(xì)胞CTGF、Smad2 mRNA的相對表達(dá)量。結(jié)果 在TGF-β誘導(dǎo)的大鼠肺成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化過程中，A、B、C、D組大鼠Collagen Ⅰ和a-SMA的蛋白表達(dá)量均呈現(xiàn)降低趨勢（均P<0.05）；A、B、C、D組大鼠CTGF和Smad2 mRNA的相對表達(dá)量均呈現(xiàn)逐漸降低趨勢（均P<0.05）；大鼠原代肺成纖維細(xì)胞誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞后與不同濃度的hUC-MSCs共培養(yǎng)中，A、B、C、D組小鼠Collagen Ⅰ蛋白相對表達(dá)量和a-SMA蛋白相對表達(dá)量均呈現(xiàn)降低趨勢（均P<0.05），但A組和B組小鼠Collagen Ⅰ蛋白相對表達(dá)量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；A、B、C、D組大鼠CTGF和Smad2 mRNA的相對表達(dá)量均呈現(xiàn)逐漸降低趨勢（均P<0.05），但B組和C組大鼠Smad2 mRNA相對表達(dá)量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05）。結(jié)論 hUC-MSCs可減少TGF-β誘導(dǎo)大鼠肺成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞過程中表達(dá)Collagen、a-SMA蛋白及CTGF、Smad2 mRNA，降低肌成纖維細(xì)胞表達(dá)Collagen Ⅰ、a-SMA蛋白及CTGF、Smad2 mRNA，且高濃度的hUC-MSCs效果最顯著。

【關(guān)鍵詞】人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞 ; 大鼠肺成纖維細(xì)胞 ; α-平滑肌肌動(dòng)蛋白 ; 膠原蛋白 Ⅰ ; Smad2 ; 結(jié)締組織生長因子

【中圖分類號(hào)】R563.1 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】2096-3718.2024.12.0018.05

DOI：10.3969/j.issn.2096-3718.2024.12.006

間質(zhì)性肺?。╥nterstitial lung disease，ILD）是指累及肺間質(zhì)不同程度的炎癥和纖維化，其病理機(jī)制是活化的成纖維細(xì)胞受轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）刺激后，通過轉(zhuǎn)換因子信號(hào)通路（TGF-β/Smad通路）向細(xì)胞內(nèi)傳遞調(diào)控信號(hào)，調(diào)控成纖維細(xì)胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)化過程，致其分化為肌成纖維細(xì)胞，肌成纖維細(xì)胞是引發(fā)廣泛的膠原沉積的主要細(xì)胞[1]。因此，減輕肺成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞的過程，減少肌成纖維細(xì)胞表達(dá)膠原蛋白Ⅰ（Collagen Ⅰ）、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（a-SMA）對減緩ILD的病理過程有重要影響。結(jié)締組織生長因子（CTGF）是一種新發(fā)現(xiàn)的可刺激成纖維細(xì)胞增殖和膠原沉積的細(xì)胞因子，也是肺纖維化嚴(yán)重程度的重要指標(biāo)，抑制CTGF的表達(dá)是減輕肺纖維化的新方法[2]?，F(xiàn)有的抗肺纖維化藥物僅能緩解其癥狀，卻無法改善患者的生存質(zhì)量[3]。間充質(zhì)干細(xì)胞作為一種新型的治療手段，已被廣泛應(yīng)用于多種炎癥及變性疾病的治療中。有研究發(fā)現(xiàn)，間充質(zhì)干細(xì)胞能夠募集至受損部位，并發(fā)揮較強(qiáng)的免疫調(diào)控作用，從而促進(jìn)創(chuàng)面上皮的修復(fù)[4]?；诖?，本研究旨在研究人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（hUC-MSCs）對大鼠肺間質(zhì)纖維化的作用及機(jī)制，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、主要藥物、試劑及儀器

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選擇健康雌性無特定病原體級(jí)（SPF級(jí)）大鼠10只，體質(zhì)量200～250 g，大鼠均6周齡。購自北京維通利華驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，動(dòng)物許可證編號(hào)：SCXK（京）2021-0006。所有動(dòng)物均飼養(yǎng)于徐州醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，飼養(yǎng)環(huán)境為層流潔凈飼育室，適應(yīng)喂養(yǎng)1周，觀察無不良反應(yīng)后，納入實(shí)驗(yàn)。本研究經(jīng)徐州醫(yī)科大學(xué)倫理委員會(huì)審查（倫理審批號(hào)：202212S008）。

1.1.2 主要藥物與試劑 hUC-MSCs完全培養(yǎng)基由博雅干細(xì)胞科技有限公司提供；高糖DMEM培養(yǎng)基、牛血清白蛋白（BSA）、熒光二抗488、總核糖核酸（RNA）抽提試劑（Trizol）、乙二胺四乙酸（EDTA）、脫氧核糖核酸酶Ⅰ（DNase Ⅰ）、膠原酶Ⅰ、Ⅳ（Co Ⅰ、Ⅳ）、磷酸鹽緩沖液（PBS）均來自賽默飛世爾科技公司；重組人轉(zhuǎn)化生長因子-β干粉、a-SMA一抗、波形蛋白（Vimentin）一抗、Collagen Ⅰ一抗、3-磷酸甘油醛脫氫酶（GAPDH）一抗、二抗均來自武漢三鷹生物技術(shù)有限公司；胎牛血清（FBS）來自西瓊生物科技；抗熒光淬滅劑、細(xì)胞核染料（DAPI）、蛋白裂解液（RIPA）均來自上海碧云天生物技術(shù)研究所；反轉(zhuǎn)錄 - 聚合酶鏈反應(yīng)試劑盒來自寶日醫(yī)生物技術(shù)（北京）有限公司等。

1.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）反應(yīng)儀（美國艾本德公司，型號(hào)：Mastercycler? nexus）；電泳槽（美國伯樂公司，型號(hào)：Mini TBC）；轉(zhuǎn)膜儀（美國伯樂公司，型號(hào)：Mini-Trans Blot）；凝膠成像儀（德國基伊埃公司，型號(hào)：Image Quant LA）；共聚焦顯微鏡（德國蔡司公司，型號(hào)：LSM 900）；實(shí)時(shí)熒光定量檢測儀（德國羅氏公司，型號(hào)：LightCycler480 Ⅱ）；細(xì)胞培養(yǎng)箱（美國賽默飛公司，型號(hào)：Heracell 150i GP）等。

1.2 研究方法

1.2.1 大鼠肺成纖維細(xì)胞的傳代培養(yǎng) 大鼠肺組織剪碎后置于50 mL離心管中，分別用20 mL消化液Ⅰ（高糖DMEM培養(yǎng)基+3% FBS+5 mmol EDTA），10 mL消化液Ⅱ（高糖DMEM培養(yǎng)基+2 mmol EDTA），10 mL消化液Ⅲ（0.5 mg/mL DNase Ⅰ+0.5 mg/mL Dispase+0.5 mg/mL Co Ⅰ+0.05 mg/mL Co Ⅳ+1640培養(yǎng)基）依次消化后。加10 mL消化液Ⅳ（1640培養(yǎng)基+3% FBS）終止消化。所有細(xì)胞懸液合并于50 mL離心管中，離心后重懸，鋪在大皿中，3 d后吸取上清再加入新的培養(yǎng)基，7 d后可正常傳代，傳代一次后可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 免疫熒光法鑒定大鼠肺成纖維細(xì)胞 接種原代肺成纖維細(xì)胞前，孔板底放入無菌蓋玻片，再鋪板；待細(xì)胞貼壁后棄去培養(yǎng)基，PBS慢搖浸洗，0.1% Triton-X-100（PBS配置）室溫通透20 min后PBS洗凈；BSA室溫封閉后用稀釋好的Vimentin一抗（1∶100）4 °C過夜孵育，第2天PBS緩慢搖洗后加入用PBS稀釋好的熒光二抗488（1∶500）避光室溫孵育1 h，PBS浸洗后，加入DAPI避光室溫染核完成在載玻片上滴加抗熒光淬滅劑后蓋在載玻片上，在共聚焦顯微鏡下觀察Vimmentin蛋白表達(dá)情況，若能穩(wěn)定表達(dá)則表示成功提取肺成纖維細(xì)胞。

1.2.3 分組方法 ⑴將提取的肺成纖維細(xì)胞均勻鋪于6孔板中，每孔細(xì)胞密度為1×105個(gè)，每孔培養(yǎng)基體積為1.96 mL。實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分為4組：A組（模型組）、B組（5×105 hUC-MSCs治療組）、C組（2×106 hUC-MSCs治療組）、D組（正常組），待細(xì)胞貼壁后，A組肺成纖維細(xì)胞孔內(nèi)加入40 μL TGF-β（2.5 μg/mL），誘導(dǎo)肺成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞；D組孔內(nèi)加入PBS 40 μL，其余2組孔內(nèi)分別加入40 μL TGF-β（3.75 μg/mL）保證培養(yǎng)基內(nèi)TGF-β終濃度為50 ng/mL處理肺成纖維細(xì)胞，同時(shí)B組嵌套小室（Transwell）加入1 mL 5×105個(gè)hUC-MSCs，C組嵌套小室（Transwell）加入1 mL 2×106個(gè)hUC-MSCs與肺成纖維細(xì)胞共培養(yǎng)96 h后，收取6孔板底部肺成纖維細(xì)胞。⑵將提取的肺成纖維細(xì)胞均勻鋪板于6孔板中，每孔細(xì)胞密度為1×105，每孔培養(yǎng)基體積為1.96 mL。實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分為4組：A組（模型組）、B組（5×105 hUC-MSCs治療組）、C組（2×106 hUC-MSCs治療組）、D組（正常組）。細(xì)胞貼壁后，除D組外，其余3組肺成纖維化細(xì)胞用40 μL TGF-β（2.5 μg/mL）誘導(dǎo)48 h后轉(zhuǎn)化成為肌成纖維細(xì)胞，保證培養(yǎng)基內(nèi)TGF-β終濃度為50wVm531XELlc+AXg+KNypEQ== ng/mL，重新更換培養(yǎng)基后，向B組和C組Transwell嵌套小室分別加入1 mL 5×105個(gè)hUC-MSCs和2×106個(gè)hUC-MSCs與肺肌成纖維細(xì)胞共培養(yǎng)48 h，收取6孔板底部肌成纖維細(xì)胞，總計(jì)10個(gè)板，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.3 觀察指標(biāo) ⑴通過蛋白免疫印跡法檢測hUC-MSCs對TGF-β誘導(dǎo)大鼠肺成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化過程中a-SMA、Collagen Ⅰ表達(dá)量的影響。⑵通過蛋白免疫印跡法檢測hUC-MSCs對已分化的肌成纖維細(xì)胞分泌a-SMA、Collagen Ⅰ表達(dá)量的影響。⑶通過實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）觀察hUC-MSCs對TGF-β誘導(dǎo)大鼠肺成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化過程中肺成纖維細(xì)胞表達(dá)CTGF和Smad2 mRNA表達(dá)的影響，同時(shí)也探究hUC-MSCs對已分化的肌成纖維細(xì)胞表達(dá)的CTGF和Smad2 mRNA表達(dá)的影響。按照Trizol試劑說明書提取RNA反轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)脫氧核糖核酸（cDNA），加入相應(yīng)的引物進(jìn)行擴(kuò)增，引物見表1。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 運(yùn)用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量資料均使用S-W法檢驗(yàn)證實(shí)服從正態(tài)分布，以（ x ±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠肺成纖維細(xì)胞的鑒定 原代大鼠肺內(nèi)提取的成纖維細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)能穩(wěn)定表達(dá)vimentin熒光，大鼠肺成纖維細(xì)胞細(xì)胞核被DAPI染成藍(lán)色，證明原代肺成纖維細(xì)胞提取成功，見圖1。

2.2 hUC-MSCs對TGF-β誘導(dǎo)大鼠肺成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化過程a-SMA、Collagen I表達(dá)的影響 通過蛋白免疫印跡法檢測發(fā)現(xiàn)，A、B、C、D組大鼠Collagen Ⅰ和a-SMA的蛋白表達(dá)量均呈現(xiàn)降低趨勢，組間兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05），見圖2、表2。

2.3 hUC-MSCs對肌成纖維細(xì)胞分泌a-SMA、Collagen I表達(dá)的影響 C組和D組小鼠Collagen Ⅰ蛋白相對表達(dá)量均低于A組和B組，D組低于C組，A、B、C、D組小鼠a-SMA蛋白相對表達(dá)量呈現(xiàn)降低趨勢，且組間兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05），但A組和B組小鼠Collagen Ⅰ蛋白相對表達(dá)量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見圖3、表3。

2.4 hUC-MSCs對TGF-β誘導(dǎo)過程中大鼠成纖維細(xì)胞CTGF及Smad2 mRNA表達(dá)量的影響 通過RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)，A、B、C、D組大鼠CTGF和Smad2 mRNA的表達(dá)量均呈現(xiàn)逐漸降低趨勢，且組間兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05），見表4。

2.5 hUC-MSCs對大鼠肺肌成纖維細(xì)胞CTGF和Smad2 mRNA相對表達(dá)量的影響 通過RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)，A、B、C、D組大鼠CTGF和Smad2 mRNA的表達(dá)量均呈現(xiàn)逐漸降低趨勢，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05），但B組和C組大鼠Smad2 mRNA相對表達(dá)量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05），見表5。

3 討論

TGF-β是一種較強(qiáng)的促纖維化因子，成纖維細(xì)胞被TGF-β激活后可通過TGF-β1/Smad2途徑將調(diào)節(jié)信號(hào)傳導(dǎo)至胞內(nèi)，誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化[5]。因此本研究采用TGF-β誘導(dǎo)肺成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化作為體外研究的模型。

正常生理情況下，肺成纖維細(xì)胞合成和分泌細(xì)胞外基質(zhì)蛋白，修復(fù)損傷和保護(hù)肺泡正常生理活性。當(dāng)肺組織受損時(shí)，肺成纖維細(xì)胞增殖分化為肌成纖維細(xì)胞，其分泌細(xì)胞外基質(zhì)的能力是肺成纖維細(xì)胞的4～5倍，導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)大量沉積，加速肺纖維化的進(jìn)展。成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為肌成纖維細(xì)胞是纖維化應(yīng)答過程中的關(guān)鍵性事件，肌成纖維細(xì)胞的特征介于成纖維細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞之間，其表達(dá)a-SMA的能力要明顯高于成纖維細(xì)胞，這是成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的一個(gè)標(biāo)志[6]。正常情況下，細(xì)胞外基質(zhì)的合成和分解處于動(dòng)態(tài)平衡，有助于維持肺組織的正常結(jié)構(gòu)和功能，Collagen Ⅰ是細(xì)胞外基質(zhì)的主要組成成分之一，由肺成纖維細(xì)胞和轉(zhuǎn)分化后的肌成纖維細(xì)胞合成，當(dāng)肺組織受損時(shí)，肺成纖維細(xì)胞增殖并分化成肌成纖維細(xì)胞，產(chǎn)生過多的細(xì)胞外基質(zhì)，并在肺間質(zhì)內(nèi)過度蓄積，造成肺實(shí)質(zhì)廣泛損傷和重塑，觸發(fā)肺纖維化[7]。間充質(zhì)干細(xì)胞是一類具有自我復(fù)制和多向分化潛能的成體干細(xì)胞，能分化成許多種組織細(xì)胞，如神經(jīng)細(xì)胞、肝細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞等，具有廣闊的臨床應(yīng)用前景。hUC-MSCs來源于分娩時(shí)遺棄的臍帶，取材方便，原代培養(yǎng)即可獲取大量細(xì)胞，細(xì)胞增殖能力強(qiáng)、擴(kuò)增速度快，分離成功率高，是一種從人臍帶組織華爾通膠分離培養(yǎng)出的具有多向分化潛能的成纖維樣細(xì)胞，其在體外可定向分化成各種類型的細(xì)胞，并可通過抑制炎癥反應(yīng)、抑制纖維化，從而改善各種原因所致的肺損傷[8]。本實(shí)驗(yàn)中hUC-MSCs對TGF-β誘導(dǎo)大鼠肺成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化過程分泌a-SMA、Collagen Ⅰ表達(dá)量的研究結(jié)果表明，A、B、C、D組大鼠Collagen Ⅰ和a-SMA的蛋白表達(dá)量均呈現(xiàn)降低趨勢，這表明hUC-MSCs可減少TGF-β誘導(dǎo)大鼠肺成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞過程中表達(dá)Collagen和a-SMA蛋白，且高濃度的hUC-MSCs效果最顯著。

CTGF能夠促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖，參與細(xì)胞外基質(zhì)的產(chǎn)生、積聚，對纖維細(xì)胞的增殖分化過程具有較強(qiáng)的調(diào)控作用，CTGF mRNA過度表達(dá)與纖維化疾病的發(fā)生密切相關(guān)[9]。TGF-β是強(qiáng)效的致纖維化細(xì)胞因子，但其在促進(jìn)纖維化發(fā)生發(fā)展的過程中，需要信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)的參與，Smad是把TGF-β與其受體結(jié)合后產(chǎn)生的信號(hào)從細(xì)胞質(zhì)傳遞到細(xì)胞核的中介分子，Smad中的Smad2可以使Ⅰ型受體（TβR Ⅰ）激活而發(fā)生磷酸化，從而增強(qiáng)TGF-β的信號(hào)傳導(dǎo)，因此抑制Smad2表達(dá)可有效切斷TGF-β信號(hào)傳導(dǎo)，從而阻斷TGF-β1介導(dǎo)的纖維化效應(yīng)[10]。本研究中發(fā)現(xiàn)，A、B、C、D組大鼠CTGF和Smad2 mRNA的表達(dá)量均呈現(xiàn)逐漸降低趨勢，低濃度和高濃度的hUC-MSCs可不同程度降低其表達(dá)量，這表明hUC-MSCs可能通過影響TGF-β1/Smad2途徑來抑制TGF-β誘導(dǎo)過程中肺成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞，從而減輕肺纖維化的嚴(yán)重程度。

ILD的發(fā)病原理仍未完全明確，該病的主要特點(diǎn)是大量肌成纖維細(xì)胞增殖、聚積以及細(xì)胞外基質(zhì)沉積，肌成纖維細(xì)胞是ILD的主要效應(yīng)細(xì)胞，其數(shù)量與疾病的嚴(yán)重程度和預(yù)后呈負(fù)相關(guān)[11]。本實(shí)驗(yàn)中A、B、C、D組肌成纖維細(xì)胞Collagen Ⅰ蛋白相對表達(dá)量和a-SMA蛋白相對表達(dá)量均呈現(xiàn)降低趨勢，但A、B組Collagen Ⅰ蛋白相對表達(dá)量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這表明hUC-MSCs可降低肌成纖維細(xì)胞表達(dá)Collagen Ⅰ和a-SMA蛋白，且高濃度間充質(zhì)干細(xì)胞效果最明顯。這表明結(jié)果，hUC-MSCs可能是減輕間質(zhì)性肺病肺纖維化的有效方法且療效與hUC-MSCs濃度有關(guān)。用RT-PCR法檢測發(fā)現(xiàn)，A、B、C、D組大鼠CTGF和Smad2 mRNA的表達(dá)量呈現(xiàn)逐漸降低趨勢，但B組和C組大鼠Smad2 mRNA相對表達(dá)量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這表明hUC-MSCs可以減少肌成纖維細(xì)胞Smad2和CTGF的mRNA表達(dá)量，在高濃度的間充質(zhì)干細(xì)胞作用下，該效果最顯著。分析其原因?yàn)?，hUC-MSCs可能通過影響TGF-β1/Smad2途徑逆轉(zhuǎn)肌成纖維細(xì)胞產(chǎn)生肺纖維化相關(guān)的膠原沉積，從而減輕肺纖維化的嚴(yán)重程度。

綜上，hUC-MSCs可減少TGF-β誘導(dǎo)大鼠肺成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞過程中表達(dá)Collagen和a-SMA蛋白，以及Smad2和CTGF mRNA，降低肌成纖維細(xì)胞表達(dá)Collagen Ⅰ和a-SMA蛋白，以及Smad2和CTGF mRNA，且高濃度的hUC-MSCs效果最顯著。但目前間質(zhì)性肺病的發(fā)病機(jī)制仍較為復(fù)雜，間充質(zhì)干細(xì)胞對間質(zhì)性肺病肺纖維化的嚴(yán)重程度調(diào)控仍需探索。

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