白屈菜堿對(duì)小鼠肺癌細(xì)胞皮下移植瘤生長(zhǎng)和血管生成的抑制作用及其機(jī)制

［摘 要］ 目的：探討白屈菜堿對(duì)肺癌移植瘤小鼠腫瘤生長(zhǎng)和血管生成的影響，并闡明其作用機(jī)制。方法：選取 32 只健康 C57BL/6 小鼠，制備 Lewis 肺癌移植瘤小鼠模型。將小鼠隨機(jī)分為模型組（0. 9% 氯化鈉）、低劑量白屈菜堿組（25 mg·kg－1白屈菜堿）、高劑量白屈菜堿組（50 mg·kg－1白屈菜堿） 和陽(yáng)性對(duì)照組（60 mg·kg－1環(huán)磷酰胺），每組8 只。稱量各組小鼠移植瘤質(zhì)量并計(jì)算抑瘤率，計(jì)算各組小鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)，采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA） 法檢測(cè)各組小鼠血清中白細(xì)胞介素2（IL-2）、γ 干擾素（INF-γ） 和腫瘤壞死因子α （TNF-α） 水平，免疫組織化學(xué)法檢測(cè)各組小鼠腫瘤組織中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF） 蛋白表達(dá)情況并計(jì)算微血管密度（MVD） 及VEGF 蛋白表達(dá)評(píng)分，Western blotting 法檢測(cè)各組小鼠腫瘤組織中核因子κB （NF-κB） 和缺氧誘導(dǎo)因子1α （HIF-1α） 蛋白表達(dá)水平。結(jié)果：與模型組比較，低和高劑量白屈菜堿組及陽(yáng)性對(duì)照組小鼠移植瘤質(zhì)量均降低（Plt;0. 05）；與低劑量白屈菜堿組比較，高劑量白屈菜堿組和陽(yáng)性對(duì)照組小鼠移植瘤質(zhì)量均降低（Plt;0. 05），抑瘤率均升高（Plt;0. 05）；與高劑量白屈菜堿組比較，陽(yáng)性對(duì)照組小鼠移植瘤質(zhì)量均降低（Plt;0. 05），抑瘤率升高（Plt;0. 05）。與模型組比較，低和高劑量白屈菜堿組及陽(yáng)性對(duì)照組小鼠脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)均升高（Plt;0. 05）；與低劑量白屈菜堿組比較，高劑量白屈菜堿組和陽(yáng)性對(duì)照組小鼠脾臟指數(shù)及胸腺指數(shù)均升高（Plt;0. 05）；與高劑量白屈菜堿組比較，陽(yáng)性對(duì)照組小鼠脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)均升高（Plt;0. 05）。ELISA 法，與模型組比較，低和高劑量白屈菜堿組及陽(yáng)性對(duì)照組小鼠血清中IL-2、INF-γ 和TNF-α 水平均升高（Plt;0. 05）；與低劑量白屈菜堿組比較，高劑量白屈菜堿組和陽(yáng)性對(duì)照組小鼠血清中IL-2、INF-γ 和TNF-α 水平均升高（Plt;0. 05）；與高劑量白屈菜堿組比較，陽(yáng)性對(duì)照組小鼠血清中IL-2、INF-γ 和TNF-α 水平均升高（Plt;0. 05）。與模型組比較，低和高劑量白屈菜堿組及陽(yáng)性對(duì)照組小鼠腫瘤組織MVD 降低（Plt;0. 05）；與低劑量白屈菜堿組比較，高劑量白屈菜堿組和陽(yáng)性對(duì)照組小鼠腫瘤組織MVD 降低（Plt;0. 05）；與高劑量白屈菜堿組比較，陽(yáng)性對(duì)照組小鼠腫瘤組織中MVD 降低（Plt;0. 05）。與模型組比較，低和高劑量白屈菜堿組及陽(yáng)性對(duì)照組小鼠腫瘤組織中VEGF 蛋白表達(dá)量減少；與低劑量白屈菜堿組比較，高劑量白屈菜堿組和陽(yáng)性對(duì)照組小鼠腫瘤組織中VEGF 蛋白表達(dá)量減少；與高劑量白屈菜堿組比較，陽(yáng)性對(duì)照組小鼠腫瘤組織中VEGF 蛋白表達(dá)量減少；模型組、低劑量白屈菜堿組、高劑量白屈菜堿組和陽(yáng)性對(duì)照組小鼠腫瘤組織VEGF 蛋白表達(dá)評(píng)分比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0. 05）。Western blotting 法，與模型組比較，低和高劑量白屈菜堿組及陽(yáng)性對(duì)照組小鼠腫瘤組織中NF-κB 和HIF-1α 蛋白表達(dá)水平降低（Plt;0. 05）；與低劑量白屈菜堿組比較，高劑量白屈菜堿組和陽(yáng)性對(duì)照組小鼠腫瘤組織中NF-κB 和HIF-1α 蛋白表達(dá)水平降低（Plt;0. 05）；與高劑量白屈菜堿組比較，陽(yáng)性對(duì)照組小鼠腫瘤組織中NF-κB和HIF-1α蛋白表達(dá)水平降低 （Plt;0. 05）。結(jié)論：白屈菜堿能夠抑制Lewis 肺癌移植瘤小鼠腫瘤組織生長(zhǎng)、保護(hù)免疫器官和抑制腫瘤血管生成，可能通過(guò)靶向NF-κB/HIF-1α 信號(hào)通路和下調(diào)NF-κB 及HIF-1α 蛋白表達(dá)水平發(fā)揮治療作用。

［關(guān)鍵詞］ 白屈菜堿； 核因子κB； 缺氧誘導(dǎo)因子1α； 肺癌移植瘤； 血管生成

［中圖分類號(hào)］ R392 ［文獻(xiàn)標(biāo)志碼］ A

肺癌是目前常見(jiàn)的惡性腫瘤，也是全球死亡率和發(fā)病率最高的惡性腫瘤，嚴(yán)重威脅患者的生命健康［1-3］。肺癌的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，與吸煙、空氣污染、職業(yè)致癌因子、飲食和遺傳等因素密切相關(guān)［4-5］。對(duì)于早期肺癌患者而言， 手術(shù)切除是最佳治療方法，但大部分患者就診時(shí)病情已發(fā)展至中晚期，治療手段有限，因此患者預(yù)后較差［6-7］。白屈菜為罌粟科白屈菜屬多年生草本植物白屈菜全草，其化學(xué)成分主要包括白屈菜堿、白屈菜紅堿和原阿片堿等， 具有抗菌、鎮(zhèn)痛和興奮平滑肌的作用， 在腸炎、慢性支氣管炎和百日咳等疾病及多種惡性腫瘤中發(fā)揮重要作用［8-9］。本研究通過(guò)建立肺癌移植瘤小鼠模型，探討白屈菜堿對(duì)腫瘤生長(zhǎng)、免疫功能及血管生成的影響，并闡明其作用機(jī)制，為后續(xù)研究提供依據(jù)。

1 材料與方法

1. 1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、細(xì)胞、藥物、主要試劑和儀器

健康清潔級(jí)C57BL/6 小鼠32 只，雌雄各半，6～8 周齡，體質(zhì)量18～22 g，購(gòu)自杭州子源實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技有限公司，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK （浙） 2019-0004。Lewis 肺腺癌細(xì)胞購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞資源中心。白屈菜堿（批號(hào)150706， 純度≥98%） 購(gòu)自成都普菲德生物技術(shù)有限公司。環(huán)磷酰胺購(gòu)自美國(guó)Sigma-Aldrich 公司，多聚甲醛購(gòu)自武漢塞維爾生物科技有限公司，酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzyme-linkedimmunosorbent assay，ELISA） 試劑盒購(gòu)自江蘇菲亞生物科技有限公司，SP 試劑盒購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司， DAB 顯色試劑盒和蘇木精染色劑購(gòu)自武漢塞維爾生物科技有限公司。游標(biāo)卡尺購(gòu)自西安艾瑞澤商貿(mào)有限公司，101-1AB 型恒溫鼓風(fēng)干燥箱購(gòu)自北京偉科永興有限公司，離心機(jī)購(gòu)自湖南長(zhǎng)沙湘儀儀器有限公司，電泳儀購(gòu)自北京君意公司， 凝膠成像系統(tǒng)購(gòu)自法國(guó)VILBER BIOIMAGING 公司。

1. 2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物造模、分組和給藥

收集Lewis肺腺癌細(xì)胞， 調(diào)整細(xì)胞懸液濃度至6×106 mL－1， 每只小鼠右側(cè)腋部皮下注射細(xì)胞懸液0. 2 mL， 建立皮下移植瘤小鼠模型。接種后8～10 d， 可觸摸到腫瘤， 腫瘤直徑約為2～3 mm， 成瘤率為100%。將32 只C57BL/6 小鼠按照數(shù)字表法隨機(jī)分為模型組、低劑量白屈菜堿組、高劑量白屈菜堿組和陽(yáng)性對(duì)照組，每組8 只。建模10 d 后給藥，模型組小鼠腹腔注射0. 200 mL 0. 9% 氯化鈉， 低劑量白屈菜堿組和高劑量白屈菜堿組小鼠腹腔注射0. 125 mL（25 mg·kg－1） 和0. 250 mL （50 mg·kg－1） 白屈菜堿，陽(yáng)性對(duì)照組小鼠腹腔注射0. 300 mL （60 mg·kg－1）環(huán)磷酰胺，每日1 次，連續(xù)給藥14 d。給藥結(jié)束7 d 后處死小鼠，剝離小鼠腫瘤組織，部分組織置于4% 多聚甲醛液中固定，剩余組織置于－80 ℃冰箱凍存?zhèn)溆谩?/p>

1. 3 稱量各組小鼠移植瘤質(zhì)量并計(jì)算抑瘤率

稱量各組小鼠腫瘤組織質(zhì)量， 并計(jì)算各組小鼠抑瘤率。抑瘤率= （模型組小鼠腫瘤組織平均質(zhì)量－給藥組小鼠腫瘤組織平均質(zhì)量） /模型組小鼠腫瘤組織平均質(zhì)量×100%。

1. 4 計(jì)算各組小鼠脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)

離各組小鼠脾臟組織和胸腺組織，計(jì)算各組小鼠脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)。脾臟指數(shù)=脾臟質(zhì)量（mg） /小鼠體質(zhì)量（g）；胸腺指數(shù)=胸腺質(zhì)量（mg） /小鼠體質(zhì)量（g）。

1. 5 采用ELISA法檢測(cè)各組小鼠血清中白細(xì)胞介素 2（interleukin-2，IL-2）、γ 干擾素（interferon- γ，INF-γ）和腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）水平

小鼠處死后眼眶取血，存放至無(wú)抗凝劑的試管中， 室溫靜置30 min， 移液器吸取上層淡黃色血清， 轉(zhuǎn)移至離心管中， 3 000 g 離心15 min。取上清液， 采用ELISA 法檢測(cè)各組小鼠血清中IL-2、INF-γ 和TNF-α 水平。

1. 6 免疫組織化學(xué)法檢測(cè)各組小鼠腫瘤組織中血管 內(nèi) 皮 生 長(zhǎng) 因 子（vascular endothelial growthfactor，VEGF）蛋 白 表 達(dá) 情 況 和 微 血 管 密 度（microvessel density，MVD）

10% 多聚甲醛固定小鼠腫瘤組織，石蠟切片，免疫組織化學(xué)染色按照SP 試劑盒操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。VEGF 蛋白陽(yáng)性表達(dá)為腫瘤細(xì)胞中細(xì)胞漿或細(xì)胞膜上的陽(yáng)性物質(zhì)呈棕黃色。采用Bresalier 半定量法計(jì)算各組小鼠VEGF 蛋白表達(dá)評(píng)分［10］。細(xì)胞染色程度評(píng)分：0 分為不顯色，1 分為淺黃色，2 分為棕黃色，3 分為棕褐色；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)評(píng)分：0 分為陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≤5%，1 分為陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)gt;5% 且≤25%， 2 分為陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)gt;25%且≤50%，3 分為陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)gt;51% 且≤75%，4 分為陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)gt;75%。VEGF 蛋白表達(dá)評(píng)分=細(xì)胞染色程度評(píng)分+陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)評(píng)分。VEGF 蛋白表達(dá)評(píng)分0～1 分為（－）， 2～3 分為（＋）， 4～5 分為（＋＋）， 6～7 分為（＋＋＋）。采用Weidner 法計(jì)算各組小鼠腫瘤組織中微血管數(shù)，在低倍鏡（×40） 下選取小鼠組織切片中微血管數(shù)最多的3 個(gè)區(qū)域，并在高倍鏡（×400） 下計(jì)數(shù)［11］。其中被CD34 抗體染成棕黃色孤立的內(nèi)皮細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞簇團(tuán)且與鄰近微血管分開(kāi)，即為一個(gè)微血管，以3 個(gè)視野下微血管數(shù)平均值代表MVD。

1. 7 Western blotting法檢測(cè)各組小鼠腫瘤組織中核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）和缺氧誘導(dǎo)因子 1α（hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α）蛋白表達(dá)水平

取各組小鼠腫瘤組織，預(yù)冷RIPA裂解液提取細(xì)胞總蛋白，BCA 法定量蛋白，95 ℃震蕩5 min變性，10% SDS-PAGE 分離， 轉(zhuǎn)移至 PVDF 膜，5% 脫脂奶粉室溫封閉膜 1 h， 加入一抗 NF- κB（1∶500）、HIF-1α （1∶500） 和β-actin （1∶2 500），4 ℃ 孵育過(guò)夜， TBST 溶液洗滌 3 次， 加入二抗（1∶ 3 000）， 室溫孵育2 h， TBST 溶液洗滌3 次，ECL 顯影，采用Image J 軟件分析蛋白條帶灰度值，以β-actin 為內(nèi)參，計(jì)算目的蛋白表達(dá)水平。目的蛋白表達(dá)水平=目的蛋白條帶灰度值/內(nèi)參蛋白條帶灰度值。

1. 8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用 SPSS 22. 0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。各組小鼠移植瘤質(zhì)量、抑瘤率、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)、血清中IL-2、INF-γ 和TNF-α 水平、腫瘤組織中MVD、VEGF 蛋白表達(dá)評(píng)分和NF- κB 及HIF-1α 蛋白表達(dá)水平均符合正態(tài)分布，以x±s 表示， 多組間樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析，組間樣本均數(shù)兩兩比較采用獨(dú)立樣本t 檢驗(yàn)。以Plt;0. 05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2. 1 各組小鼠移植瘤質(zhì)量和抑瘤率

與模型組比較，低和高劑量白屈菜堿組及陽(yáng)性對(duì)照組小鼠移植瘤質(zhì)量均減?。≒lt;0. 05）。與低劑量白屈菜堿組比較，高劑量白屈菜堿組和陽(yáng)性對(duì)照組小鼠移植瘤質(zhì)量均減小（Plt;0. 05），抑瘤率均升高（Plt;0. 05）。與高劑量白屈菜堿組比較，陽(yáng)性對(duì)照組小鼠移植瘤質(zhì)量減?。≒lt;0. 05）， 抑瘤率升高（Plt;0. 05）。見(jiàn)表1。

2. 2 各組小鼠脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)

與模型組比較，低和高劑量白屈菜堿組及陽(yáng)性對(duì)照組小鼠脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)均升高（Plt;0. 05）。與低劑量白屈菜堿組比較，高劑量白屈菜堿組和陽(yáng)性對(duì)照組小鼠脾臟指數(shù)及胸腺指數(shù)均升高（Plt;0. 05）。與高劑量白屈菜堿組比較，陽(yáng)性對(duì)照組小鼠脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)均升高（Plt;0. 05）。見(jiàn)表2。

2. 3 各組小鼠血清中 IL-2、INF-γ 和 TNF-α 水平

與模型組比較， 低和高劑量白屈菜堿組及陽(yáng)性對(duì)照組小鼠血清中IL-2 、INF- γ 和TNF- α 水平均升高（Plt;0. 05）。與低劑量白屈菜堿組比較， 高劑量白屈菜堿組和陽(yáng)性對(duì)照組小鼠血清中IL-2、INF- γ 和TNF- α 水平均升高（Plt;0. 05）。與高劑量白屈菜堿組比較，陽(yáng)性對(duì)照組小鼠血清中IL-2、INF-γ 和TNF-α 水平均升高（Plt;0. 05）。見(jiàn)表3。

2. 4 各組小鼠腫瘤組織MVD

與模型組比較，低和高劑量白屈菜堿組及陽(yáng)性對(duì)照組小鼠腫瘤組織MVD 降低（Plt;0. 05）。與低劑量白屈菜堿組比較，高劑量白屈菜堿組和陽(yáng)性對(duì)照組小鼠腫瘤組織MVD 降低（Plt;0. 05）。與高劑量白屈菜堿組比較， 陽(yáng)性對(duì)照組小鼠腫瘤組織MVD 降低（Plt;0. 05）。見(jiàn)圖1 和表4。

2. 5 各組小鼠腫瘤組織中VEGF蛋白表達(dá)情況和VEGF蛋白表達(dá)評(píng)分

與模型組比較，低和高劑量白屈菜堿組及陽(yáng)性對(duì)照組小鼠腫瘤組織中VEGF蛋白表達(dá)量減少。與低劑量白屈菜堿組比較，高劑量白屈菜堿組和陽(yáng)性對(duì)照組小鼠腫瘤組織中VEGF蛋白表達(dá)量減少。與高劑量白屈菜堿組比較，陽(yáng)性對(duì)照組小鼠腫瘤組織中VEGF 蛋白表達(dá)量減少。模型組、低劑量白屈菜堿組、高劑量白屈菜堿組和陽(yáng)性對(duì)照組小鼠腫瘤組織VEGF 蛋白表達(dá)評(píng)分比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0. 05）。見(jiàn)圖2 和表5。

2. 6 各組小鼠腫瘤組織中NF-κB和HIF-1α蛋白表達(dá)水平

與模型組比較，低和高劑量白屈菜堿組及陽(yáng)性對(duì)照組小鼠腫瘤組織中NF-κB 和HIF-1α 蛋白表達(dá)水平降低（Plt;0. 05）。與低劑量白屈菜堿組比較，高劑量白屈菜堿組和陽(yáng)性對(duì)照組小鼠腫瘤組織中NF- κB 和HIF-1α 蛋白表達(dá)水平降低（Plt;0. 05）。與高劑量白屈菜堿組比較，陽(yáng)性對(duì)照組小鼠腫瘤組織中NF-κB 和HIF-1α 蛋白表達(dá)水平降低（Plt;0. 05）。見(jiàn)圖3 和表6。

3 討 論

肺癌是最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，近年來(lái)世界范圍內(nèi)肺癌的發(fā)病率和死亡率逐年升高，給人類的健康及生命安全帶來(lái)巨大威脅。目前，常見(jiàn)的放療、化療和分子靶向治療等方法雖能夠改善肺癌患者病情，但毒性和不良反應(yīng)顯著，因此發(fā)現(xiàn)有效治療肺癌的藥用植物材料具有重要的研究?jī)r(jià)值［12］。

白屈菜是罌粟科白屈菜屬種， 全草入藥有鎮(zhèn)痛、止咳、利尿和解毒等功效，白屈菜中具有藥理活性的主要有效成分是次生代謝產(chǎn)物中的生物堿類，如白屈菜堿、白屈菜紅堿、血根堿、小檗堿和黃連堿等 ［13］。其中白屈菜堿在治療直腸癌、胰腺癌和乳腺癌等多種癌癥中通過(guò)不同的機(jī)制發(fā)揮抗腫瘤作用，具有較好的臨床效果［14-15］。

研究［16］ 顯示：白屈菜堿對(duì)惡性腫瘤有特異性抑制作用，白屈菜堿可以抑制腫瘤細(xì)胞增殖，且白屈菜堿可作為抑制劑治療非小細(xì)胞肺癌的毒性。惡性腫瘤患者的病情進(jìn)展與腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)生長(zhǎng)密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示：不同劑量的白屈菜堿均具有明顯抑制Lewis 肺癌移植瘤小鼠移植瘤發(fā)展的作用，其移植瘤質(zhì)量減小且抑瘤率升高。提示白屈菜堿可以抑制Lewis 肺癌的發(fā)展，具有一定的抑瘤作用且呈現(xiàn)劑量依賴性。

近年來(lái)，免疫系統(tǒng)在腫瘤微環(huán)境和癌癥進(jìn)展中的重要性逐漸被重視［17］。脾臟是重要的免疫器官，是細(xì)胞免疫及體液免疫的中心，其中含有大量淋巴細(xì)胞及巨噬細(xì)胞，在抗腫瘤過(guò)程中發(fā)揮巨大作用。胸腺是中樞免疫器官，具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫的作用，是T 淋巴細(xì)胞分化、發(fā)育和成熟的場(chǎng)所，胸腺可以通過(guò)分泌胸腺激素調(diào)節(jié)T 淋巴細(xì)胞［18］。本研究結(jié)果顯示：模型小鼠脾臟指數(shù)及胸腺指數(shù)升高且呈現(xiàn)劑量依賴性，提示白屈菜堿可以保護(hù)Lewis 肺癌小鼠的免疫器官。機(jī)體抗腫瘤免疫反應(yīng)需要多種淋巴細(xì)胞參與，而細(xì)胞因子在淋巴細(xì)胞成熟和功能中起重要作用， 已有多種細(xì)胞因子用于癌癥患者治療［19-20］。IL-2、INF- γ 和TNF- α 均具有廣泛活性，其中 IL-2、INF- γ 由輔助性T 淋巴細(xì)胞1 （helperT-lymphocytes 1，Th1） 分泌，能夠刺激 T 淋巴細(xì)胞增生增殖并增強(qiáng)其殺傷活性，具有抗病毒、抗腫瘤和增強(qiáng)機(jī)體免疫功能等作用。TNF-α 主要由單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，是一種能夠直接殺傷腫瘤細(xì)胞而對(duì)正常細(xì)胞無(wú)明顯毒性的細(xì)胞因子［21］。本研究結(jié)果顯示：經(jīng)白屈菜堿干預(yù)后，小鼠模型的血清IL-2、INF-γ 和TNF-α 水平均升高，提示白屈菜堿可通過(guò)升高血清IL-2、INF-γ 和TNF-α 水平調(diào)節(jié)免疫功能并發(fā)揮抗腫瘤作用。

腫瘤生長(zhǎng)、擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移與腫瘤新血管生成密切相關(guān)，隨著腫瘤體積增大，需生成新血管為其提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及氧氣，而生成的新血管結(jié)構(gòu)不完善，因此易被腫瘤細(xì)胞侵犯從而產(chǎn)生血行轉(zhuǎn)移，嚴(yán)重威脅患者生命。阻斷腫瘤新血管生成，可抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和侵襲， 對(duì)于腫瘤的治療具有重要意義［22］。MVD 能夠反映腫瘤的血管生成情況，VEGF 則是目前公認(rèn)的最強(qiáng)的血管生成促進(jìn)因子，能夠反應(yīng)血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)［23-24］。本研究結(jié)果顯示：經(jīng)白屈菜堿干預(yù)后，各組小鼠 MVD 降低，且 VEGF蛋白表達(dá)評(píng)分降低，提示白屈菜堿可以通過(guò)切斷腫瘤細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及氧氣、抑制內(nèi)皮細(xì)胞和抑制血管生成從而達(dá)到抗腫瘤作用。

NF-κB 蛋白是轉(zhuǎn)錄因子家族蛋白，在眾多生理過(guò)程中起重要作用，可以作為炎癥因子信號(hào)通路的開(kāi)關(guān)，調(diào)控IL-2、INF-γ 和TNF-α 等多個(gè)炎癥因子水平參與炎癥反應(yīng)； HIF-1α 是缺氧應(yīng)答因子， 能夠讓腫瘤細(xì)胞適應(yīng)缺氧狀態(tài)，在腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中扮演重要角色［23］。研究［24-25］ 顯示： 白屈菜堿可能通過(guò)肝內(nèi)磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol3-kinase， PI3K） /蛋白激酶B （protein kinase B，AKT） 信號(hào)通路發(fā)揮抗乳腺癌的作用， 且在黑色素瘤中， 白屈菜堿通過(guò)激活Wnt/β-catenin 信號(hào)通路抑制B16 細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)凋亡。本研究結(jié)果顯示： 白屈菜堿可以降低小鼠模型NF-κB 和HIF-1α蛋白表達(dá)水平， 提示白屈菜堿通過(guò)降低NF-κB 和HIF-1α 蛋白表達(dá)水平抑制腫瘤生長(zhǎng)和新血管生成，從而達(dá)到治療作用。

綜上所述，白屈菜堿能夠抑制Lewis 肺癌移植瘤小鼠腫瘤組織生長(zhǎng)，保護(hù)免疫器官，抑制腫瘤血管生成，并降低小鼠模型中NF-κB 和HIF-1α 蛋白表達(dá)水平。

利益沖突聲明：所有作者聲明不存在利益沖突。

作者貢獻(xiàn)聲明：金學(xué)軍參與實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、論文撰寫(xiě)和修改，盧楚沅參與實(shí)驗(yàn)研究、數(shù)據(jù)整理和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

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