腺樣體肥大患兒腺樣體組織中半胱氨酰白三烯受體1的表達(dá)及其影響因素

張冰 管仁政 金蓉 林榮軍 王學(xué)海

［摘要］ 目的

分析半胱氨酰白三烯受體1（CysLTR1）在腺樣體肥大（adenoid hypertrophy，AH）患兒腺樣體組織中的表達(dá)特點(diǎn)，探究CysLTR1在AH形成中的作用機(jī)制及CysLTR1表達(dá)的影響因素。

方法 選取2020年10月1日—2021年10月1日在威海市立醫(yī)院耳鼻咽喉科行腺樣體切除術(shù)患兒71例，對(duì)其切除標(biāo)本行CysLTR1免疫組化染色，根據(jù)染色結(jié)果分為CysLTR1高表達(dá)組及低表達(dá)組。收集兩組患兒性別、年齡、腺樣體肥大程度、有無(wú)變應(yīng)性鼻炎、有無(wú)其他合并癥（分泌性中耳炎、慢性鼻竇炎、呼吸睡眠暫停綜合征）等資料并進(jìn)行比較，通過(guò)多因素logistic回歸分析影響AH患兒CysLTR1表達(dá)的危險(xiǎn)因素。

結(jié)果 免疫組化染色結(jié)果顯示，CysLTR1在71例AH患兒腺樣體組織中均有表達(dá)，高表達(dá)組患兒的腺樣體肥大程度、有無(wú)變應(yīng)性鼻炎及有無(wú)其他合并癥與低表達(dá)組相比差異有顯著性（χ2=9.003～49.196，P＜0.05）。多因素logistic回歸分析顯示，重度腺樣體肥大、變應(yīng)性鼻炎以及有其他合并癥均為影響AH患兒CysLTR1表達(dá)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05）。

結(jié)論

CysLTR1在AH患兒腺樣體組織中表達(dá)與腺樣體肥大程度、有無(wú)變應(yīng)性鼻炎及其他合并癥相關(guān)，且上述3指標(biāo)為CysLTR1高表達(dá)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

［關(guān)鍵詞］ 鼻炎，變應(yīng)性，季節(jié)性；增殖腺；肥大；受體，白三烯；免疫組織化學(xué)；因素分析，統(tǒng)計(jì)學(xué)

［中圖分類號(hào)］ R766.3??? ［文獻(xiàn)標(biāo)志碼］ A

腺樣體是感染性疾病的“警示燈”[1]，在人體液和細(xì)胞免疫中發(fā)揮重要的作用[2]。當(dāng)腺樣體過(guò)度增生時(shí)，可引起呼吸睡眠暫停綜合征、分泌性中耳炎、阻塞性鼻竇炎等并發(fā)癥[3]。引起腺樣體肥大（adenoid hypertrophy，AH）的重要原因是反復(fù)的慢性炎癥刺激，且AH的發(fā)生與變態(tài)反應(yīng)性疾病密切相關(guān)[4]。因此早期診斷和治療變態(tài)反應(yīng)性疾病，有助于減少腺樣體肥大的發(fā)生[5-6]。白三烯（LT）是參與變應(yīng)性鼻炎、哮喘等氣道炎癥反應(yīng)重要介質(zhì)。在哮喘發(fā)病過(guò)程中，半胱氨酸白三烯受體1（CysLTR1）mRNA表達(dá)水平也明顯升高[7]。研究發(fā)現(xiàn)AH所致打鼾兒童的外周血B、T細(xì)胞CysLTR呈較高表達(dá)[8]。陳榮等[9]研究也發(fā)現(xiàn)，特應(yīng)性體質(zhì)感染后咳嗽患兒的血清LT水平顯著高于非特應(yīng)性體質(zhì)的患兒。手術(shù)是AH患兒首選治療方式[10]，有中耳炎、鼻-鼻竇炎病史以及合并過(guò)敏性疾病的AH患兒手術(shù)以后復(fù)發(fā)率比較高[11-12]，因此積極治療腺樣體合并疾病及控制過(guò)敏性疾病發(fā)生也可減少腺樣體肥大的術(shù)后復(fù)發(fā)率[13]。本研究探究AH患兒腺樣體組織中CysLTR1表達(dá)特點(diǎn)，旨在為患兒的高效治療提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020年10月1日—2021年10月1日于威海市立醫(yī)院耳鼻咽喉科行腺樣體切除術(shù)的患兒71例?；純杭{入標(biāo)準(zhǔn)：①通過(guò)鼻內(nèi)鏡檢查確診為AH，并符合手術(shù)指征，手術(shù)切除組織病理檢查結(jié)果亦符合AH；②術(shù)前1個(gè)月內(nèi)未行抗過(guò)敏藥物治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①支氣管哮喘患兒；②患有特異反應(yīng)性皮炎等其他嚴(yán)重系統(tǒng)性疾病患兒。

1.2 研究方法

1.2.1 患兒資料的收集 收集所有患兒的性別、年齡、AH程度、有無(wú)變應(yīng)性鼻炎、有無(wú)其他合并癥（包括呼吸睡眠暫停綜合征、鼻竇炎、分泌性中耳炎）等一般資料及術(shù)后腺樣體組織的病理切片。

1.2.2 試劑與器材 CysLTR1兔抗人多克隆抗體、生物素標(biāo)記的羊抗兔IgG、辣根酶標(biāo)記的鏈酶親和素均購(gòu)買于北京博奧森生物技術(shù)公司，SP免疫組化檢測(cè)試劑盒（兔）購(gòu)買于上海鼎杰生物科技有限公司，二氨基聯(lián)苯胺/DAB染色試劑盒購(gòu)買于上海雅吉生物科技公司，BMIX生物組織包埋機(jī)、冷凍臺(tái)機(jī)購(gòu)買于日本櫻花公司，羅氏HE600HE染色機(jī)以及BenchMark ULTRA免疫組化儀均購(gòu)買于美國(guó)羅氏公司。

1.2.3 免疫組化染色檢測(cè)AH患兒腺樣體組織中CysLTR1表達(dá)情況 將腺樣體組織切片通過(guò)脫蠟、復(fù)水處理，以0.01 mol/L枸櫞酸鹽緩沖液沖洗后，以30 g/L過(guò)氧化氫溶液阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化氫酶，用含體積分?jǐn)?shù)0.10的山羊血清室溫濕盒封閉20 min，并滴加濃度1∶200的CysLTR1兔抗人多克隆抗體4 ℃下孵育過(guò)夜。然后使用生物素標(biāo)記的羊抗兔IgG、辣根酶標(biāo)記的鏈霉親和素按序各孵育20 min。滴加DAB顯色，然后行蘇木素復(fù)染、封片，于光學(xué)顯微鏡下觀察。陰性對(duì)照采用PBS代替一抗，其他步驟相同。在高倍鏡下于腺樣體組織的免疫組化切片上隨機(jī)選取上皮及生發(fā)中心以外的5個(gè)視野，采用Image ProPlus 6.0軟件計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)以及高倍鏡下視野總面積，CysLTR1表達(dá)情況以細(xì)胞陽(yáng)性率表示，細(xì)胞陽(yáng)性率=陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)/mm2，陽(yáng)性率＜50%為低表達(dá)，以陽(yáng)性率＞50%為高表達(dá)[14]。根據(jù)染色結(jié)果分為CysLTR1高表達(dá)組與低表達(dá)組。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 25.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料以例（率）表示，組間比較采用卡方檢驗(yàn)，卡方檢驗(yàn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的指標(biāo)采用多因素logistic回歸進(jìn)行危險(xiǎn)因素分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)? 果

2.1 患兒腺樣體組織中CysLTR1表達(dá)情況

71例AH患兒中，男54例，女17例；年齡1～14歲，平均（5.45±3.25）歲；其中CysLTR1高表達(dá)組35例，低表達(dá)組36例。對(duì)所有患兒的腺樣體組織切片及陰性對(duì)照切片進(jìn)行免疫組化染色，其中陰性對(duì)照切片未見染色（圖1A），CysLTR1陽(yáng)性表達(dá)切片的細(xì)胞膜和細(xì)胞漿均呈現(xiàn)棕黃色染色（圖1B）。

2.2 兩組患兒腺樣體組織CysLTR1表達(dá)情況比較

高表達(dá)組患兒的AH程度、有無(wú)變應(yīng)性鼻炎及有無(wú)其他合并癥與低表達(dá)組相比有顯著差異（χ2=9.003～49.196，P＜0.05），而性別、年齡與低表達(dá)組比較無(wú)顯著差異（P＞0.05）。見表1。

2.3 影響AH患兒腺樣體組織CysLTR1高表達(dá)的多因素logistic回歸分析

對(duì)兩組中差異顯著指標(biāo)進(jìn)行多因素logistic回歸分析，以CysLTR1在腺樣體組織的陽(yáng)性率

表達(dá)作為因變量，將高陽(yáng)性率表達(dá)賦值為1，而將低陽(yáng)性率表達(dá)賦值為0，以AH程度、有無(wú)變應(yīng)性鼻炎、有無(wú)其他合并癥三因素作為自變量，其結(jié)果顯示重度AH、有變應(yīng)性鼻炎、有其他合并癥均為AH患兒腺樣體組織中CysLTR1高表達(dá)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05）。見表2。

3 討? 論

組胺、LT等炎性分子是參與氣道炎癥反應(yīng)的重要介質(zhì)[15]。研究發(fā)現(xiàn)重度變應(yīng)性鼻炎患者鼻氣道阻力在LTD4鼻激發(fā)試驗(yàn)后顯著升高[16]。半胱氨酸白三烯（CysLTs）被認(rèn)為是病毒感染激發(fā)哮喘發(fā)作的關(guān)鍵介質(zhì)，LT受體拮抗劑孟魯司特能明顯減輕哮喘所致的嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，并降低血清白細(xì)胞介素-13（IL-13）、IL-9和趨化因子3水平，從而減輕氣道高反應(yīng)性[17]。云靖婷等[18]研究顯示，通過(guò)下調(diào)CysLTR1 mRNA的表達(dá)及干預(yù)CysLTR1介導(dǎo)的哮喘炎癥通路，可達(dá)到防治哮喘的目的。本研究中CysLTR1高表達(dá)組患兒的性別、年齡與低表達(dá)組無(wú)顯著差異，而隨著AH程度增高，CysLTR1表達(dá)水平顯著提高。這與既往研究中腺樣體組織及外周血清中LT（LTB4、LTC4）水平的高低與AH程度呈正相關(guān)的結(jié)論一致[3]，表明CysLTs參與了AH的形成。而CysLTs可能是嗜酸性粒細(xì)胞-嗜堿性粒細(xì)胞克隆單位形成的促進(jìn)因子，還能引起鼻黏膜上皮內(nèi)嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)及腺體分泌亢進(jìn)[19]，故推測(cè)使用CysLTR1阻滯劑可能減少嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，緩解炎癥反應(yīng)的發(fā)生，進(jìn)而減輕AH程度。

變應(yīng)性鼻炎發(fā)生時(shí)，其鼻黏膜炎癥反應(yīng)產(chǎn)生的分泌物及變應(yīng)性鼻炎后期鼻后滴漏綜合征產(chǎn)生的分泌物反復(fù)刺激腺樣體，導(dǎo)致AH[20]。研究結(jié)果顯示CysLTR1在人鼻黏膜多種細(xì)胞（包括中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞等）中呈高表達(dá)[21]。CysLTs合成蛋白及CysLTR在季節(jié)性變應(yīng)性鼻炎患者的鼻腔灌洗液中也呈現(xiàn)出高表達(dá)[22]。上述結(jié)果與本研究合并變應(yīng)性鼻炎的AH患兒腺樣體組織中CysLTR1高表達(dá)的結(jié)果相一致，印證了變應(yīng)性鼻炎促進(jìn)AH發(fā)生的理論，因此在治療合并變應(yīng)性鼻炎的AH患兒時(shí)，可首選CysLTR1阻滯劑。

本研究71例患兒中49例伴隨其他合并癥，其中包括呼吸睡眠暫停綜合征[23]、慢性鼻竇炎、分泌性中耳炎等。研究顯示上述疾病的發(fā)生發(fā)展與AH以及CysLTs水平相關(guān)[24-27]。本研究亦證實(shí)伴有其他合并癥的AH患兒CysLTR1的表達(dá)水平更高。有研究結(jié)果顯示，孟魯司特治療可使76%的呼吸睡眠暫停綜合征患兒腺樣體縮小，改善睡眠不適、打鼾以及張口呼吸等癥狀[28]。同時(shí)孟魯司特還可以抑制CysLTs信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，降低細(xì)胞因子以及黏蛋白的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)伴有鼻息肉的慢性鼻炎竇炎患者的恢復(fù)[29-30]。當(dāng)AH合并分泌性中耳炎時(shí)，往往采取綜合治療的方式。

CysLTR1在AH患兒腺樣體組織中的表達(dá)與重度AH、變應(yīng)性鼻炎及有其他合并癥相關(guān)，這與既往研究結(jié)果基本一致[31-32]，說(shuō)明CysLTR1是參與AH形成的重要因素，研究CysLTR1的表達(dá)情況，對(duì)研究AH的形成機(jī)制有重要意義。本研究對(duì)上述因素進(jìn)行了多因素logistic回歸分析，發(fā)現(xiàn)這3個(gè)因素是CysLTR1在AH患兒腺樣體組織中高表達(dá)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。因此，臨床上對(duì)AH程度高、有變應(yīng)性鼻炎及有其他合并癥的AH患兒，或可首選CysLTR1阻滯劑作為非手術(shù)治療的一線藥物。本研究也存在一定局限性，比如樣本量不足，病例對(duì)照研究的證據(jù)等級(jí)較低等，因此還需后續(xù)進(jìn)行更深入研究以進(jìn)一步探究和驗(yàn)證以上結(jié)論。

倫理批準(zhǔn)和知情同意：本研究涉及的所有試驗(yàn)均已通過(guò)威海市立醫(yī)院倫理委員會(huì)的審核批準(zhǔn)（文件號(hào)2023019）。所有試驗(yàn)過(guò)程均遵照《臨床試驗(yàn)質(zhì)量管理規(guī)范》 的條例進(jìn)行。受試對(duì)象或其親屬已經(jīng)簽署知情同意書。

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