大薊與小薊飲片的鑒別研究

宋曉光 劉曉靜 康帥 劉學(xué)杰 王軍棟 張惠惠 孫福東 許紅

【摘 要】 ??目的： 對(duì)大薊和小薊飲片進(jìn)行鑒別研究，為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的完善和提升提供思路參考。 方法： 應(yīng)用體式顯微鏡和光學(xué)顯微鏡等設(shè)備及數(shù)碼成像技術(shù)，從葉片、莖、苞片、冠毛等細(xì)節(jié)特征，以及橫切面、粉末的顯微特征，對(duì)大薊與小薊飲片進(jìn)行鑒別研究；采用硅膠GF254薄層板，以乙酸乙酯-甲酸-水（8∶ 1∶ 1）為展開(kāi)劑，在紫外燈254nm下檢視，建立薄層鑒別方法。 結(jié)果： 通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，大薊和小薊的葉片、莖、苞片、冠毛存在明顯差別，顯微特征差異性較小，粉末特征只在下表皮細(xì)胞上存在一定差異，薄層鑒別方法靈敏度高、重現(xiàn)性好，專屬性強(qiáng)。 結(jié)論： 通過(guò)研究歸納了大薊和小薊飲片的鑒別特征，可為二者的鑒別提供一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)支持，并為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的完善提供有益思路。

【關(guān)鍵詞】 ?大薊；小薊；鑒別；薄層鑒別

【中圖分類號(hào)】R282.5 ??【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A ???【文章編號(hào)】1007-8517（2024）08-0054-07

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2024.08.zgmzmjyyzz202408012

Studyonthe Identification of Traditional Chinese Medicine Pieces of Cirsii Japonici Herba and Cirsii Herba

SONG Xiaoguang 1 LIU Xiaojing 1 KANG Shuai ?2* ?LIU Xuejie 1 WANG Jundong 1 ZHANG Huihui 1 SUN Fudong 3 XU Hong 1

1.Yantai Institutes for Food and Drug Control，Yantai 264003，China;

2.National Institutes for Food and Drug Control， Beijing 100050，China;

3.Yantai Yuhuangding Hospital， Yantai 264000，China

Abstract： ?Objective ?To study the identification of Cirsii Japonici Herba and Cirsll Herba and toprovide ideas for the improvement of their quality standards. Methods ?Stereo microscope and optical microscopeanddigital imaging technologywere used to observe and record the characters of Cirsii Japonici Herba and Cirsii Herba，including leaves， stems， bracts， crown hairs，powder，transverse section.Using silica gel Gf254 thin-layer plate， ethyl acetate-formic acid-water（8∶ 1∶ 1） as developing agent and examined under UV lamp 254 nm. Results ?There are obviously differences in leaves， stems， bracts， crown hairs between them， andlittle difference in lower epidermal cell;the TLC method has high sensitivity，good reproducibilityand more specificity. Conclusion ?Through research， the identification characteristics of Cirsii Japonici Herba and Cirsii Herba decoction pieces were summarized， it can provide some experimental support for the identification of them， and provide useful ideas for the improvement of their quality standards.

Key words： Cirsii Japonici Herba; Cirsii Herba;Identification;TLC

大薊為菊科植物薊 Cirsium japonicum ?Fisch．ex DC．的干燥地上部分，具有涼血止血、散瘀解毒消癰的功效，用于衄血、吐血、尿血、便血、崩漏、外傷出血、癰腫瘡毒 ?［1］ 。薊屬植物在我國(guó)分布有50余種，其中10余種可作藥用 ?［2］ 。小薊為菊科薊屬植物刺兒菜 Cirsium setosum （Willd.）MB.的干燥地上部分 ?［3］ 。大薊和小薊飲片外形相似，成分相近 ?［4］ ，但臨床應(yīng)用各有側(cè)重，不可混淆使用。《新修本草》載“大薊生山谷，根療癰腫；小薊生平澤，不能消腫也”；《本草備要》載“小薊力微，不能如大薊之消癰毒” ?［5-6］ 。筆者根據(jù)近期市場(chǎng)調(diào)研發(fā)現(xiàn)，商品藥材及飲片中存在小薊冒用大薊的情況。

本文應(yīng)用體式顯微鏡、光學(xué)顯微鏡對(duì)大薊和小薊進(jìn)行了性狀和顯微鑒別研究，通過(guò)體式顯微鏡及其數(shù)字化成像系統(tǒng)對(duì)大薊和小薊的葉片、莖、苞片、 冠毛進(jìn)行鑒別研究；通過(guò)光學(xué)顯微鏡及其數(shù)字化成像系統(tǒng)對(duì)二者的葉片、莖的橫切面及其粉末進(jìn)行鑒別研究。在此基礎(chǔ)上，以兩者差異成分柳穿魚(yú)葉苷為對(duì)照物質(zhì)，建立薄層色譜鑒別方法。

1 儀器與材料

1.1 儀器 尼康D780型數(shù)碼相機(jī)（尼康公司）；Olympus BX51 型透射光顯微鏡及DP74 型CCD 成像系統(tǒng)（OLYMPUS 公司）； Olympus SZX7型體式顯微鏡（OLYMPUS 公司）；CM1950型冷凍切片機(jī)（徠卡公司）；METTLER TOLEDO XPE205D電子天平（梅特勒-托利多國(guó)際貿(mào)易（上海）有限公司）；KQ-500B型超聲清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）；CAMAG TLC Visualizer 2 薄層色譜數(shù)碼成像系統(tǒng)（瑞士卡瑪公司）；CAMAG ATS 4全自動(dòng)點(diǎn)樣儀（瑞士卡瑪公司）。

1.2 試劑 水合氯醛（中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)工業(yè)公司），丙三醇（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)有限公司），乙醇等試劑為分析純?cè)噭ū本┗S）；薄層層析硅膠GF254板（煙臺(tái)市化學(xué)工業(yè)研究所），聚酰胺薄膜（浙江省臺(tái)州市路橋四甲生化塑料廠）。乙醇、三氯化鋁、硫酸、甲苯、乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙酰丙酮、丁酮，以上均購(gòu)于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；甲酸（天津市標(biāo)準(zhǔn)科技有限公司），以上均為分析純。甲醇（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），為色譜純。

蒙花苷（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：111528-201911）；大薊對(duì)照藥材（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：121411-201903）；柳穿魚(yú)葉苷（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：111728-201703）；小薊對(duì)照藥材（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：121436-201803）。

1.3 樣品 5批大薊樣品均來(lái)自中心內(nèi)合格檢品。5批小薊樣品為自采及市場(chǎng)收集，由煙臺(tái)市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心王軍棟副主任中藥師分別鑒定為菊科植物薊 Cirsium japonicum ?Fisch. ex DC.、菊科植物刺兒菜 Cirsium setosum （Willd.）MB.的干燥地上部分。

2 方法

2.1 性狀特征

2.1.1 整體性狀觀察 將樣品放在白色背景臺(tái)面上，用數(shù)碼相機(jī)進(jìn)行拍攝。

2.1.2 特征性狀觀察 挑選樣品中葉片、苞片，放入水中浸軟后，用擦鏡紙吸去表面水分，壓平后蓋上載玻片，在Olympus SZX7型體式顯微鏡下觀察并拍攝記錄特征；將冠毛壓平后蓋上載玻片，在Olympus SZX7型體式顯微鏡下觀察并拍攝記錄特征。將莖在Olympus SZX7型體式顯微鏡下，分別對(duì)表面和斷面進(jìn)行觀察并拍攝特征。

2.2 顯微特征

2.2.1 橫切面 挑選樣品中葉片、莖，放入水中浸泡4 h后，用擦鏡紙吸去表面水分，切制成大小適宜的塊片，在冷凍切片機(jī)冷臺(tái)底部滴加少量包埋劑，放入冷凍機(jī)中，待溫度降至-20 ℃包埋劑基本固化后，將樣品置于包埋劑中，包埋劑逐層包埋至樣品被完全包埋為止。將樣品預(yù)凍后，置于-40 ℃樣平臺(tái)上冷凍10 min后，將冷凍好的樣品固定好，在-20 ℃下進(jìn)行切制，選取平整薄片置于載玻片上，加水合氯醛2滴，加熱，透化，蓋上蓋玻片，放冷后置顯微鏡下觀察并拍攝特征。

2.2.2 粉末特征 將各樣品粉末過(guò)5號(hào)篩，挑取少許置載玻片上，滴加水合氯醛試液1～2滴，蓋上蓋玻片，置于 OLYMPUS BX51-DP74透射光顯微鏡及CCD數(shù)碼成像系統(tǒng)下觀察并拍攝特征。

2.3 薄層鑒別

2.3.1 對(duì)照品溶液的制備 取柳穿魚(yú)葉苷對(duì)照品、蒙花苷對(duì)照品適量，精密稱定，分別加甲醇制成每1 mL含1 mg的對(duì)照品溶液，即得。

2.3.2 對(duì)照藥材溶液的制備 稱取大薊對(duì)照藥材、小薊對(duì)照藥材各1 g，加甲醇10 mL，超聲處理 ?30 min ，濾過(guò)，即得。

2.3.3 供試品溶液的制備 ?［8］ ?采用中國(guó)藥典大薊薄層色譜方法進(jìn)行試驗(yàn)，柳穿魚(yú)葉苷斑點(diǎn)清晰，所以繼續(xù)沿用甲醇為溶劑，超聲提取的方法，即“取本品粉末1 g，加甲醇10 mL，超聲處理30 min，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液”。

2.3.4 展開(kāi)與檢視照 《中國(guó)藥典2020年版》四部中薄層色譜法 （通則0502）試驗(yàn)，吸取上述對(duì)照品溶液、供試品溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254板上，以乙酸乙酯-甲酸-水（8∶ 1∶ 1）為展開(kāi)劑，飽和20 min，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外燈（254 nm）下檢視。

3 結(jié)果

3.1 性狀特征 大薊：呈不規(guī)則的段。莖短圓柱形，表面綠褐色，有數(shù)條縱棱，被絲狀毛；切面灰白色，髓部疏松或中空。葉皺縮，多破碎，邊緣具不等長(zhǎng)的針刺；兩面均具灰白色絲狀毛。頭狀花序多破碎。氣微，味淡。葉片葉脈突出，葉刺是從葉脈延伸出來(lái)，長(zhǎng)的葉刺比較粗硬；冠毛主干毛比較直，分支出更細(xì)的枝干毛；苞片邊緣具三角狀的緣毛；莖的斷面具較大的裂隙，木部具針眼狀孔洞，相連成環(huán)狀。如圖1、圖2所示。

小薊：呈不規(guī)則的段。莖呈圓柱形，表面灰綠色或帶紫色，具縱棱，極少數(shù)被白色柔毛。切面中空。葉片多皺縮或破碎，葉齒尖具針刺；兩面均具白色柔毛。頭狀花序，總苞鐘狀；花紫紅色。氣微，味苦。葉片葉脈不突出，葉刺不從葉脈延伸出來(lái)，葉刺比較細(xì)??；冠毛主干毛波狀彎曲，分支出更細(xì)的枝干毛；苞片邊緣無(wú)緣毛；莖的斷面呈淡黃色，木部具針眼狀孔洞，相連成環(huán)狀。如圖1、圖2所示。

3.2 顯微特征

3.2.1 橫切面特征

3.2.1.1 大薊 莖橫切面：莖表皮細(xì)胞1列，大多皺縮，有時(shí)可見(jiàn)非腺毛。在棱脊處的厚角組織明顯。皮層薄壁細(xì)胞徑向延長(zhǎng)。維管束外韌型，排列較為緊密。韌皮纖維和木纖維均微木化。韌皮部由數(shù)列薄壁細(xì)胞組成。髓部常中空。如圖3所示。

葉橫切面：葉片細(xì)胞通常皺縮。上下表皮均為1列細(xì)胞，多斷裂，非腺毛易于脫離。上下表皮內(nèi)側(cè)均有下皮厚角組織，突起處尤為明顯。葉下部波浪狀彎曲，靠近中脈下表皮處凸起尤其明顯。維管束外韌型，散在。韌皮纖維和木纖維均微木化。如圖4所示。

3.2.1.2 小薊 莖橫切面：莖表皮細(xì)胞1列。棱脊處略有下皮厚角組織。皮層由多列細(xì)胞組成，徑向延長(zhǎng)。維管束外韌型，排列十分緊密，微木化。韌皮部由數(shù)列小方形薄壁細(xì)胞組成。髓部常中空。如圖3所示。

葉橫切面：上下表皮均為1列細(xì)胞，非腺毛易于脫離。上下表皮內(nèi)側(cè)均有下皮厚角組織，突起處尤為明顯。葉肉細(xì)胞主要由海綿細(xì)胞組成。維管束外韌型，連接較為緊密。韌皮纖維和木纖維均微木化。如圖4所示。

3.2.2 粉末特征

3.2.2.1 大薊 粉末特征：粉末黃棕色。多細(xì)胞非腺毛多斷裂，頂端甚細(xì)長(zhǎng)，彎曲或扭曲。單細(xì)胞非腺毛長(zhǎng)短不一，先端較尖或稍鈍圓。葉上表皮細(xì)胞類多角形，垂周壁稍增厚或者略成連珠狀；下表皮細(xì)胞類長(zhǎng)方形，壁波狀彎曲，上下表皮都有細(xì)微的角質(zhì)紋理。上下表皮均有氣孔，保衛(wèi)細(xì)胞3～5個(gè)。葉肉細(xì)胞中含有草酸鈣結(jié)晶，偏光下顯天藍(lán)色。花粉粒類圓形，表面有刺。苞片下表皮細(xì)胞表面觀條形，垂周壁連珠狀增厚。莖纖維細(xì)長(zhǎng)。導(dǎo)管為螺紋、網(wǎng)紋和具緣紋孔導(dǎo)管。如圖5所示。

3.2.2.2 小薊 粉末特征：粉末黃棕色或棕綠色。與大薊粉末特征基本一致，只在葉下表皮細(xì)胞特征上略有差別，小薊下表皮細(xì)胞類方形或類長(zhǎng)方形，壁稍波狀彎曲，角質(zhì)紋理不明顯。如圖6所示。

3.3 薄層色譜鑒別 在薄層色譜中顯示，大薊對(duì)照藥材有兩個(gè)斑點(diǎn)，上斑點(diǎn)為蒙花苷，下斑點(diǎn)為柳穿魚(yú)葉苷，小薊對(duì)照藥材有1個(gè)斑點(diǎn)，斑點(diǎn)為蒙花苷，斑點(diǎn)清晰，專屬性強(qiáng)，可用于兩者的薄層鑒別。如圖7所示。

4 結(jié)論

4.1 性狀特征 大薊和小薊藥材通過(guò)葉片形狀、大小等特征很容易區(qū)分，但經(jīng)切制等工藝制成飲片后，葉片多皺縮破碎，不易觀察整體葉形和大小，本文通過(guò)體式顯微鏡對(duì)葉片葉脈、葉刺的長(zhǎng)出方式進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)大薊的葉片葉脈突出，葉片邊緣的刺是從葉脈延伸出來(lái)，長(zhǎng)的葉刺比較粗硬，而小薊葉片葉脈不突出，葉片邊緣的刺是不從葉脈延伸出來(lái)，葉刺比較細(xì)小。通過(guò)體式顯微鏡對(duì)冠毛、苞片邊緣及莖進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)大薊的主干毛比較直，小薊的主干毛呈波狀彎曲；大薊苞片邊緣有緣毛，而小薊沒(méi)有；大薊的莖多被白色絲狀毛，切面灰白色，而小薊大多數(shù)莖不被白色毛，切面淡黃色，針眼狀孔洞十分密集。以上區(qū)別點(diǎn)可作為兩者飲片鑒別的簡(jiǎn)便方法。

4.2 顯微特征 通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，大薊莖的厚角組織較小薊明顯，小薊在棱脊處略有下皮厚角組織，小薊莖的維管束個(gè)數(shù)較少，木質(zhì)部?jī)?nèi)側(cè)纖維數(shù)量也較少。大薊葉上部較為平坦，葉下部波浪狀彎曲，靠近中脈下表皮處凸起尤其明顯，小薊葉肉為海綿細(xì)胞，木纖維數(shù)量較大薊少。大薊和小薊的粉末均具備多細(xì)胞非腺毛、單細(xì)胞非腺毛、葉上表皮細(xì)胞、下表皮細(xì)胞、草酸鈣結(jié)晶、花粉粒、苞片下表皮細(xì)胞、莖纖維、導(dǎo)管等特征，差異性不大，在葉上下表皮細(xì)胞的形狀及特征上略微有差別，大薊的上、下表皮細(xì)胞均有明顯的波狀角質(zhì)紋理，下表皮多呈類長(zhǎng)方形，小薊的上表皮角質(zhì)紋理較為明顯，下表皮多呈類方形或類長(zhǎng)方形，壁稍波狀彎曲，角質(zhì)紋理不明顯。

4.3 薄層鑒別 本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)不同顯色檢視方法、展開(kāi)劑等進(jìn)行了系統(tǒng)考察，并對(duì)展開(kāi)條件進(jìn)行了優(yōu)化。參照文獻(xiàn) ?［9-13］ 分別采用10%硫酸乙醇溶液，于105 ℃加熱顯色日光下檢視和紫外燈（254 nm）下檢視，紫外燈（254 nm）下檢視斑點(diǎn)更清晰，靈敏度更高，操作簡(jiǎn)便，故采用其為檢視方法。試驗(yàn)對(duì)多種展開(kāi)劑進(jìn)行篩選，選用甲苯-乙酸乙酯- 甲酸（9∶ 3∶ 1）、甲苯-甲酸乙酯-甲酸（ 10∶ 8∶ 1 ）、乙酸乙酯-水-甲酸-甲苯（ 17∶ 2∶ ?2∶ 0.8 ?）、乙酸乙酯-乙醇-水（5∶ 1∶ 1）、乙酸乙酯-甲酸-水（8∶ 1∶ 1）進(jìn)行了考察，結(jié)果表明，乙酸乙酯-甲酸-水（8∶ 1∶ 1）為展開(kāi)劑時(shí)，專屬性好，斑點(diǎn)清晰。此外，不同展開(kāi)溫度及相對(duì)濕度對(duì)展開(kāi)效果無(wú)明顯影響。

5 討論

《中國(guó)藥典》2020年版中對(duì)大薊飲片葉的特征描述為“葉皺縮，多破碎，邊緣具不等長(zhǎng)的針刺?！苯ㄗh標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)葉刺的描述細(xì)化為邊緣具從葉脈延伸出來(lái)的不等長(zhǎng)針刺。細(xì)化后大薊和的葉刺特征更明顯，也易與小薊進(jìn)行區(qū)別。

《中國(guó)藥典》2020年版中大薊與小薊的薄層鑒別項(xiàng)下使用的提取溶劑及方法、薄層展開(kāi)條件、顯色條件完全相同，且經(jīng)顯色劑顯色后，薄層色譜中蒙花苷斑點(diǎn)變成黃色熒光斑點(diǎn)，柳穿魚(yú)葉苷斑點(diǎn)不變色，這就失去了顯色的作用，大薊的判別標(biāo)準(zhǔn)為顯相同顏色的熒光主斑點(diǎn)，則易忽視差異成分柳穿魚(yú)葉苷的黑色斑點(diǎn)，易將小薊誤判為大薊，如圖8所示。為防止以上問(wèn)題發(fā)生，建議對(duì)中國(guó)藥典中大薊薄層色譜進(jìn)行修訂，在標(biāo)準(zhǔn)中添加柳穿魚(yú)葉苷對(duì)照物質(zhì)，并更改薄層展開(kāi)及顯色條件。

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（收稿日期：2023-08-07 編輯：劉 斌）