幼化和外源激素對(duì)娜塔櫟嫩枝扦插生根的影響及其生根解剖學(xué)觀察

收稿日期Received：2022-09-01""" 修回日期Accepted：2023-06-21

基金項(xiàng)目：江蘇省林業(yè)科技創(chuàng)新與推廣項(xiàng)目（LYKJ38）。

第一作者：卜曉婷（1140573769@qq.com）。

*通信作者：李淑嫻（shuxianli@njfu.com.cn），教授。

引文格式：

卜曉婷，付威，李淑嫻，等. 幼化和外源激素對(duì)娜塔櫟嫩枝扦插生根的影響及其生根解剖學(xué)觀察. 南京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2024，48（2）：129-136.

BU X T， FU W， LI S X， et al. Effects of rejuvenation and hormone treatment on the rooting of softwood cuttings of Quercus texana and anatomical observations of rooting. Journal of Nanjing Forestry University （Natural Sciences Edition），2024，48（2）：129-136.

DOI：10.12302/j.issn.1000-2006.202209004.

摘要：【目的】研究幼化、激素處理對(duì)娜塔櫟（Quercus texana）嫩枝扦插生根的影響，觀察生根過(guò)程中插穗不定根的形成過(guò)程，探究娜塔櫟扦插生根困難的原因，為娜塔櫟的扦插繁殖提供理論依據(jù)和技術(shù)借鑒。【方法】以幼化（6 年生母樹(shù)平茬后的苗木）、6 年生母樹(shù)上剪取的當(dāng)年生半木質(zhì)化娜塔櫟插條為材料，分別用不同質(zhì)量濃度的吲哚丁酸（IBA）+萘乙酸（NAA）+間苯三酚（THB）的混合溶液浸泡插穗基部10 min，以清水處理相同時(shí)間為對(duì)照（CK），于扦插75 d后計(jì)算各處理插穗的愈傷率、生根率、根系指數(shù)和根系效果指數(shù)；同時(shí)，以幼化半木質(zhì)化娜塔櫟插條為材料，對(duì)不同生根階段的插穗用FAA標(biāo)準(zhǔn)固定液固定，采用石蠟切片技術(shù)對(duì)插穗不定根的形成過(guò)程進(jìn)行解剖觀察。【結(jié)果】植物激素處理能顯著提高娜塔櫟扦插的生根效果，幼化及6年生母樹(shù)插穗的生根率均表現(xiàn)出處理組的生根率高于對(duì)照組，其中生根率最高可達(dá)43.3%。雙因素方差分析表明，幼化處理是影響娜塔櫟扦插生根的重要因素，且各指標(biāo)的綜合分析排序發(fā)現(xiàn)，幼化插穗生根效果大于6年生母樹(shù)插穗的。利用石蠟切片法觀察娜塔櫟生根過(guò)程莖部的解剖構(gòu)造，發(fā)現(xiàn)剛剪取的插穗不含有潛伏狀根原基，屬于誘導(dǎo)根原基生根類(lèi)型；存在愈傷生根和皮部生根的，屬混合生根類(lèi)型；解剖學(xué)觀察還發(fā)現(xiàn)莖部韌皮部中連續(xù)的環(huán)狀厚壁細(xì)胞阻礙了不定根的伸長(zhǎng)生長(zhǎng)?！窘Y(jié)論】以IBA 500 mg/L+NAA 250 mg/L+THB 50 mg/L的混合溶液處理幼化娜塔櫟插穗基部10 min，其扦插生根效果最佳；但是否為最適濃度需進(jìn)一步驗(yàn)證。插穗屬于誘導(dǎo)根原基生根類(lèi)型；韌皮部存在環(huán)狀連續(xù)的韌皮纖維（厚壁細(xì)胞）是導(dǎo)致其生根困難的原因之一。不定根原基發(fā)生的方式有兩種：一種是愈傷組織內(nèi)發(fā)生不定根原基，另一種是形成層附近的細(xì)胞分裂形成根原基。

關(guān)鍵詞：娜塔櫟；扦插；激素處理；幼化處理；解剖學(xué)觀察

中圖分類(lèi)號(hào)：S688.9；S718""""" 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A開(kāi)放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

文章編號(hào)：1000-2006（2024）02-0129-08

Effects of rejuvenation and hormone treatment on the rooting of softwood cuttings of Quercus texana and anatomical observations of rooting

BU Xiaoting1， FU Wei1， LI Shuxian1*， XU Zhibiao2， PENG Daqing2， XU Linqiao2

（1. State Key Laboratory of Tree Genetics and Breeding， Co-Innovation Center for Sustainable Forestry in Southern China， Key Laboratory of Tree Genetics and Biotechnology of Ministry of Education， Key Laboratory of Tree Genetics and Silvicultural Sciences of Jiangsu Province，" College of Forestry and Grassland， Nanjing Forestry University， Nanjing 210037， China; 2.Yancheng Forest Farm of Jiangsu Province， Yancheng 224136， China）

Abstract： 【Objective】This study was performed to investigate the effects of rejuvenation and hormone treatment on the rooting of Quercus texana cuttings and obverse the formation process of adventitious roots during the rooting process. This was done to explain the reasons behind the difficulty of rooting Q. texana cuttings to provide a theoretical basis and technical reference for the subsequent cutting propagation of Q. texana.【Method】Using the rejuvenated （seedlings after the flat stubble of the six-year-old parent stocks） and the annual semi-woody branches cut from the six-year-old seedlings as materials to make cuttings， the bases of the cuttings were treated with the mixed solution of IBA， NAA， THB and soaked for 10 min. Furthermore， cuttings treated with water for the same duration were taken as the control （CK）. After cutting for 75 days， we determined the callus rate， rooting rate， root index and root effect index of the cuttings of each treatment. Meanwhile， the formation process of the adventitious roots of cuttings from semi-woody branches of rejuvenated Q. texana was anatomically observed with the paraffin section technique.【Result】Hormone treatments could significantly improve the rooting effect of Q. texana cuttings， and the results showed that the rooting rates of the treatment groups were higher than that of the control group in both the rejuvenated and six-year-old cuttings， with the highest rooting rate reaching 43.3%. The two-factor analysis indicated that the rejuvenation treatment was a crucial factor affecting the rooting of Q. texana cuttings. Additionally， through the comprehensive analysis and ranking of various indicators， we found that the rooting effect of the rejuvenated cuttings was better than that of the six-year-old cuttings. The anatomical structure of the stem during the rooting process of Q. texana was observed with the paraffin section method， and it was found that the stem of new cuttings did not contain latent primordia， which belonged to the induced root primordium rooting type. Callus and skin rooting existed， which were classified into the mixed rooting type. Moreover， anatomical observation found that the phloem of the stem contained continuous annular thick-walled tissue， which hindered adventitious root elongation.【Conclusion】The best rooting effect of the cuttings was achieved when the cuttings were made from rejuvenated Q. texana seedlings， with the base part soaked in the IBA （500 mg/L），NAA （250 mg/L） and THB （50 mg/L） mixed solution for 10 min. Anatomical observation of the stem during the rooting process revealed that the stem did not contain latent root primordia， which belonged to the type of induced primordium rooting. The presence of annular continuous phloem fibers （thick-walled tissue） in the phloem is one of the reasons for rooting difficulty. There are two pathways in which adventitious root primordia can occur： one is through the emergence of adventitious root primordia from the callus， and the other is through cells that divide near the cambia to form root primordia.

Keywords：Quercus texana; cutting; hormone treatment; rejuvenation; anatomical observation

娜塔櫟（Quercus texana）為殼斗科（Fagaceae）櫟屬（Quercus）落葉喬木，主干通直，樹(shù)皮灰色或棕色，樹(shù)冠塔狀。葉片形狀奇特，邊緣深裂呈鋸齒狀，每年11月初葉片開(kāi)始變紅或呈黃色，掛葉期可至翌年1月，觀賞價(jià)值極高，可在庭院、廣場(chǎng)、公園中孤植，亦可營(yíng)建片林或作為行道樹(shù)，是國(guó)際上公認(rèn)的優(yōu)良園林綠化樹(shù)種。娜塔櫟木材白色或淺棕色，堅(jiān)實(shí)沉重，紋理美觀，是高檔家具及裝飾的優(yōu)良用材樹(shù)種，具有廣闊的應(yīng)用前景。

娜塔櫟以種子繁殖為主，但該樹(shù)種要10 a后才能開(kāi)花結(jié)實(shí)，且種子存在大小年現(xiàn)象，很難滿足育苗生產(chǎn)的需求。隨著無(wú)性系林業(yè)的推廣，扦插繁殖已成為林木繁殖的一種重要方式。外源激素處理特別是混合激素處理是促進(jìn)插穗生根的重要措施之一。娜塔櫟屬扦插難生根樹(shù)種，其插穗切口易產(chǎn)生較高含量的單寧等物質(zhì)抑制生根，使用外源激素浸泡切口能有效提高娜塔櫟的扦插生根率。陳晨等研究表明，使用質(zhì)量濃度為200 mg/L的生根粉（ABT）溶液浸泡插穗基部，生根率為33.3%，顯著高于未處理插穗。卜曉婷等研究表明，母樹(shù)年齡是影響娜塔櫟扦插生根的因素之一，樹(shù)齡越大，生根率越低，而幼化處理是提高林木扦插生根率的重要技術(shù)手段之一;其次，插穗基部的解剖學(xué)結(jié)構(gòu)與植物扦插生根有著密切關(guān)系，但以往關(guān)于娜塔櫟扦插這兩方面的研究?jī)?nèi)容鮮有報(bào)道。另外，娜塔櫟扦插時(shí)插穗極易腐爛，對(duì)扦插期間的管理技術(shù)要求極高，盡管喬孝祿等的研究中扦插生根率較高，但8月外界環(huán)境溫度較高，給扦插期間的管理帶來(lái)很大麻煩，因此有必要探求其他扦插時(shí)間娜塔櫟的生根效果。本研究擬用6 年生的娜塔櫟為采穗母樹(shù)，以當(dāng)年新抽生的嫩枝為材料，從幼化處理、外源激素濃度兩個(gè)方面探索9月最適合其扦插生根的條件，同時(shí)探究形態(tài)解剖結(jié)構(gòu)與插穗生根的關(guān)系，旨在進(jìn)一步了解娜塔櫟的扦插生根特性，為其扦插育苗生產(chǎn)提供指導(dǎo)。

1" 材料與方法

1.1" 試驗(yàn)地概況

扦插材料取自南京市溧水區(qū)白馬鎮(zhèn)南京林業(yè)大學(xué)白馬教學(xué)科研基地（119.02°E，31.65°N），屬亞熱帶季風(fēng)氣候，年均氣溫15.5 ℃，年均日照時(shí)間2 180 h，年均降水量1 057 mm，四季分明。土壤有機(jī)質(zhì)含量低，較為貧瘠。扦插試驗(yàn)地位于江蘇省南京市溧水區(qū)南京朋合農(nóng)業(yè)開(kāi)發(fā)有限公司，扦插池位于基地搭建的塑料大棚內(nèi)，大棚上方設(shè)有自動(dòng)噴水設(shè)施和遮陰網(wǎng)。

1.2" 扦插床的制備

扦插池南北走向，規(guī)格1.2 m×20.0 m。扦插前1～2 d將太陽(yáng)暴曬過(guò)的泥炭和珍珠巖按體積比7∶3混合拌勻后鋪在扦插池中，厚度約20 cm，再用1 000 mg/L高錳酸鉀溶液澆透?jìng)溆?。扦插完成后，在扦插池上方使用透明塑料薄膜搭建小拱棚進(jìn)行保濕，拱棚外覆蓋1層遮陰網(wǎng)。

1.3" 插穗的制作與處理

以娜塔櫟6年生的母樹(shù)及幼化（6 年生母樹(shù)在2020年春平茬后萌生）的枝條作為采穗植株，于2020年9月15日早上選擇生長(zhǎng)健壯、芽飽滿且無(wú)病蟲(chóng)害的當(dāng)年生半木質(zhì)化枝條做插條，剪取插條后做好保濕工作，及時(shí)運(yùn)往南京朋合農(nóng)業(yè)開(kāi)發(fā)有限公司。插條運(yùn)往公司后及時(shí)將其剪制成長(zhǎng)度為8～10 cm的插穗，上端保留1～2片葉子，每片葉子剪去1/2，插穗上端平切，距上芽約1 cm，下端45°斜切。每30根插穗為1捆，用濕毛巾覆蓋，置于陰涼處待用。采用幼化、外源激素雙因素隨機(jī)區(qū)組試驗(yàn)，外源激素質(zhì)量濃度參照喬孝祿等的方法，采用低（L）、中（M）、高（H）梯度濃度的吲哚乙酸（IBA）+萘乙酸（NAA） + 間苯三酚（THB）混合激素（按體積比1∶1∶1混合）浸泡插穗基部10 min，以清水處理相同時(shí)間為對(duì)照（CK）；每處理重復(fù)3次，每重復(fù)30根插穗。具體處理方法見(jiàn)表1。

1.4" 生根情況統(tǒng)計(jì)

扦插后定期觀察插穗基部的變化，并做好記錄。扦插75 d后（2020年12月1日）從各重復(fù)組中隨機(jī)抽取10根插穗，進(jìn)行生根指標(biāo)的測(cè)定和計(jì)算。測(cè)定指標(biāo)包括愈傷率（%）、生根率（%）、平均一級(jí)根數(shù)（條）和平均一級(jí)根長(zhǎng)（cm），計(jì)算生根指數(shù)、根系效果指數(shù)。采用主成分分析法和隸屬函數(shù)值法，對(duì)各處理的生根效果進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。各指標(biāo)計(jì)算公式如下：愈傷率為形成愈傷組織的插穗數(shù)占插穗總數(shù)百分比；生根率為形成不定根的插穗數(shù)量占插穗總數(shù)百分比；生根指數(shù)為生根率、平均根數(shù)、平均根長(zhǎng)的乘積；根系效果指數(shù)為平均根長(zhǎng)、生根數(shù)量的乘積占扦插穗總條數(shù)的比例。參照文獻(xiàn)計(jì)算綜合指標(biāo)值（Z）。

隸屬函數(shù)值：U（Zj）=Zj-ZminZmax-Zmin，j=1，2，……

式中：Zj表示第j個(gè)因子的得分值;Zmin表示第j個(gè)因子得分的最小值;Zmax表示第j個(gè)因子得分的最大值。

權(quán)重：Wj=Pj∑nj=1Pj，j=1，2，……

式中：Wj表示第j個(gè)主因子的權(quán)重;Pj表示第j個(gè)主因子的方差貢獻(xiàn)率。

綜合評(píng)價(jià)：D=∑nj=1。

式中：D為插穗在各處理用綜合指標(biāo)計(jì)算的綜合評(píng)價(jià)值，D值越大，代表該處理效果越好。

1.5" 插穗基部解剖學(xué)觀察

以幼化娜塔櫟為材料，每隔15 d取樣1次，直至生根結(jié)束。樣品做好標(biāo)記后置于冰盒內(nèi)帶回實(shí)驗(yàn)室處理。對(duì)不同生根階段的插穗用FAA固定液固定，送至南京賽維爾生物公司進(jìn)行包埋、石蠟切片的制作，經(jīng)番紅固綠染色后用Nikon Eclipse E100顯微鏡進(jìn)行觀察并采集圖像。

1.6" 數(shù)據(jù)處理

采用Excel 2010、SPSS 17.0、Case Viewer 2.4進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，其中生根率、愈傷組織率指標(biāo)需經(jīng)過(guò)平方根反正弦標(biāo)準(zhǔn)化后再進(jìn)行方差分析。

2" 結(jié)果與分析

2.1" 娜塔櫟扦插生根進(jìn)程觀察

綜合各處理的生根進(jìn)程，可以將娜塔櫟插穗的生根過(guò)程大致分為4個(gè)階段：①愈傷組織誘導(dǎo)期，扦插15 d后，插穗基部的切口部位開(kāi)始膨大，在切口位置產(chǎn)生白色透明的愈傷組織（圖1b）。②不定根誘導(dǎo)期，扦插15～30 d后，愈傷組織顏色加深、繼續(xù)膨大，并伴有少量插穗長(zhǎng)出白色芽狀不定根（圖1c、1d）。③不定根形成期，扦插30 d后，插穗的不定根開(kāi)始形成，從愈傷組織或插穗皮部伸出，此時(shí)根系顏色淺、根脆弱（圖1e、1f）。④不定根伸長(zhǎng)生長(zhǎng)期，扦插后45～60 d，不定根開(kāi)始伸長(zhǎng)、加粗，且不定根數(shù)量增多，顏色變深，完成生根過(guò)程（圖1g、1h、1i）。

2.2" 幼化和激素處理對(duì)娜塔櫟插穗生根的影響

幼化和激素處理對(duì)娜塔櫟各扦插生根指標(biāo)有著不同的影響（表2），幼化處理后，同一質(zhì)量濃度激素處理的插穗，各個(gè)生根指標(biāo)總體上均優(yōu)于6年生母樹(shù)的插穗。其中，各幼化處理插穗采用激素處理后生根率、一級(jí)根數(shù)、生根指數(shù)和根系效果指數(shù)共4個(gè)指標(biāo)與6年生材料差異顯著（P＜0.05），各處理幼化插穗的平均生根率較6年母樹(shù)的插穗提高了110.6%，幼化插穗的平均一級(jí)根數(shù)和生根指數(shù)較6年生分別高出了92.3%和277.8%，說(shuō)明幼化處理在一定程度上可以提高娜塔櫟插穗的生根效果。

外源激素是影響娜塔櫟嫩枝扦插生根的因素之一。從表2可以發(fā)現(xiàn)，無(wú)論是幼化材料，還是6年生母樹(shù)的插穗，激素處理后各生根指標(biāo)整體優(yōu)于對(duì)應(yīng)的CK組，經(jīng)激素處理的插穗平均生根率較CK組高出了122.7%；其中，幼化插穗的L1處理后其愈傷率和生根率最優(yōu)，分別為65.6%、43.3%；而6年母樹(shù)插穗經(jīng)900 mg/L混合溶液處理的愈傷率和生根率最高，為60.0%和21.1%。隨著激素濃度的升高，幼化插穗生根率呈現(xiàn)下降的變化趨勢(shì)，而6年母樹(shù)插穗的生根率則持續(xù)上升，說(shuō)明母樹(shù)年齡越大，提高生根率所需的激素濃度越高，但濃度過(guò)高則會(huì)抑制幼齡母樹(shù)的插穗生根。

幼化和激素濃度對(duì)娜塔櫟生根指標(biāo)影響的雙因素方差分析見(jiàn)表3。由表3可以發(fā)現(xiàn)，除二者的交互作用對(duì)生根指數(shù)無(wú)顯著性差異外，其余各因素與生根指標(biāo)間均存在極顯著差異（P＜0.01），說(shuō)明激素濃度和幼化處理對(duì)娜塔櫟扦插生根均有較顯著的影響。各因素對(duì)插穗生根效果的影響大小順序?yàn)椋河谆幚恚炯に貪舛龋居谆幚怼良に貪舛?，說(shuō)明幼化處理是影響插穗生根的重要因素。

2.3" 娜塔櫟生根指標(biāo)的主成分分析和各處理的綜合評(píng)價(jià)值

對(duì)不同處理下各生根指標(biāo)進(jìn)行主成分分析，可將各指標(biāo)分為兩個(gè)主成分：主成分1包括生根率、一級(jí)根數(shù)、一級(jí)根長(zhǎng)、生根指數(shù)和根系效果指數(shù)；主成分2中僅含有愈傷率。主成分1和主成分2的變異貢獻(xiàn)率分別為61.10%、15.30%，二者的累計(jì)貢獻(xiàn)率為76.40%，表明這兩個(gè)主成分可代表6個(gè)測(cè)定指標(biāo)76.40%的信息。根據(jù)變異貢獻(xiàn)率求得主成分1和主成分2的權(quán)重系數(shù)分別為0.80、0.20。根據(jù)兩個(gè)主成分信息，計(jì)算綜合指標(biāo)值Z1、Z2，隸屬函數(shù)值U1、U2。對(duì)不同年齡和激素處理下各生根指標(biāo)進(jìn)行隸屬函數(shù)值綜合分析，其綜合評(píng)價(jià)及排序見(jiàn)表4。各組合D值由大到小依次為：L1＞M1＞H1＞M6＞H6＞L6＞CK1＞CK6，由此可以推出L1組合即IBA 500mg/L+NAA 250 mg/L+THB 50 mg/L的混合溶液處理幼化插穗為娜塔櫟嫩枝扦插的最優(yōu)組合；而6年生材料的最優(yōu)處理組合為IBA 700 mg/L+NAA 350 mg/L+THB 50 mg/L的混合溶液。綜合排序結(jié)果進(jìn)一步說(shuō)明了幼化插穗的生根效果優(yōu)于6年生母樹(shù)的插穗，同時(shí)證明了激素處理可以提高插穗的生根效果。

2.4" 娜塔櫟嫩枝扦插繁殖的生根解剖學(xué)觀察

2.4.1" 娜塔櫟插穗莖部解剖構(gòu)造

對(duì)未經(jīng)處理（扦插0 d）的娜塔櫟插穗的橫切面進(jìn)行解剖學(xué)觀察，發(fā)現(xiàn)插穗基部由周皮、皮層和維管組織3部分組成（圖2a）。最外層為周皮，由數(shù)層形狀規(guī)則、排列整齊的長(zhǎng)方形細(xì)胞組成，包括木栓層、木栓形成層和栓內(nèi)層。皮層位于周皮以?xún)?nèi)，由長(zhǎng)橢圓形的多層薄壁細(xì)胞組成，細(xì)胞間有一定空隙，排列較為疏松（圖2b方框內(nèi)）。皮層內(nèi)是維管組織系統(tǒng)，由表及里依次為韌皮部、維管形成層、木質(zhì)部和髓（圖2b）。韌皮部?jī)?nèi)含有1層較寬且成團(tuán)的厚壁組織細(xì)胞，即韌皮纖維。維管形成層位于韌皮部與木質(zhì)部之間，由若干層排列緊密的分生細(xì)胞構(gòu)成。木質(zhì)部在形成層以?xún)?nèi)，在莖的橫切面上占的面積最大。切片中心是髓，由較大的薄壁細(xì)胞構(gòu)成，細(xì)胞內(nèi)含有貯藏物質(zhì)如淀粉粒等。觀察發(fā)現(xiàn)，莖內(nèi)部不存在潛伏根原基，說(shuō)明娜塔櫟嫩枝扦插生根屬于誘生根原基類(lèi)型。

2.4.2" 插穗不定根形成過(guò)程

經(jīng)觀察發(fā)現(xiàn)，娜塔櫟生根過(guò)程中生根包括愈傷組織生根和皮部生根兩種類(lèi)型。

1）愈傷組織生根型。

扦插后插穗基部形成層細(xì)胞恢復(fù)分生能力，分裂產(chǎn)生體積較大、排列疏松的薄壁細(xì)胞，構(gòu)成愈傷組織（圖3a）。隨后，愈傷組織進(jìn)一步增殖，體積增加突破周皮（圖3b）。圖3c顯示愈傷組織增殖迅速，覆蓋在韌皮部纖維細(xì)胞外側(cè)，后期在愈傷組織中特化形成不定根的結(jié)構(gòu)（圖3d），最終不定根突破插穗基部愈傷組織及其周皮（圖3d）。

2）皮部生根型。扦插一段時(shí)間后，形成層出現(xiàn)明顯加寬現(xiàn)象（圖4a）。同時(shí)，插穗內(nèi)的維管形成層與髓射線交匯處的薄壁細(xì)胞分裂活動(dòng)強(qiáng)烈，產(chǎn)生一小團(tuán)與周?chē)?xì)胞明顯不同、排列緊密、細(xì)胞質(zhì)較濃的薄壁細(xì)胞，即根原始體細(xì)胞（圖4b）。根原始體細(xì)胞不斷增殖，進(jìn)而形成不定根（圖4c）。不定根繼續(xù)發(fā)育，突破韌皮部、皮層和周皮，最終通過(guò)皮孔或樹(shù)皮開(kāi)裂處伸出，形成不定根，完成生根過(guò)程（圖4d）。

3" 討" 論

3.1" 幼化處理與娜塔櫟嫩枝扦插生根的關(guān)系

本研究發(fā)現(xiàn)幼化處理是影響插穗生根的重要因素，李永成等12〗在楸樹(shù)的扦插研究中也發(fā)現(xiàn)，1年生苗木經(jīng)平茬幼化后，其生根率最高可達(dá)90.3%。娜塔櫟幼化后插穗生根率提高，主要是由于幼化在保持植物組織幼嫩性的同時(shí)還可以增強(qiáng)生根激素的活性，從而促進(jìn)插穗生根。而6年生母樹(shù)因樹(shù)齡過(guò)大，其激素水平、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量降低，植物細(xì)胞的脫分化和再分化的能力降低，大大影響了插穗的生根率。另外，隨著采穗母樹(shù)年齡的增長(zhǎng)，插穗內(nèi)生根抑制物的含量也會(huì)不斷增加，這也可能是6年生娜塔櫟插穗生根率低的原因之一。

3.2" 外源激素濃度與娜塔櫟生根的關(guān)系

本研究發(fā)現(xiàn)，采用不同質(zhì)量濃度的IBA+NAA+THB混合激素溶液處理娜塔櫟插穗，可以提高其嫩枝扦插的生根率。高林等研究表明，適宜濃度的外源激素，如700 mg/L的ABT+IBA+NAA處理石生茶藨子（Ribes saxatile）后扦插效果最好，而質(zhì)量濃度過(guò)高如900 mg/L混合溶液處理插穗，則會(huì)抑制生根。本研究還發(fā)現(xiàn)，娜塔櫟嫩枝扦插的激素濃度需隨母樹(shù)年齡的變化而變化，這主要是由于樹(shù)齡較大時(shí)，需要較高濃度的激素處理來(lái)調(diào)動(dòng)插穗體內(nèi)物質(zhì)之間的轉(zhuǎn)化。綜合評(píng)價(jià)來(lái)看，IBA 500 mg/L+NAA 250 mg/L+THB 50 mg/L的混合激素處理幼化插穗為娜塔櫟嫩枝扦插的最優(yōu)組合，但該濃度為本研究的最低濃度，幼化娜塔櫟嫩枝扦插的最適濃度是否更低還有待進(jìn)一步探討。不過(guò)，生產(chǎn)上可從幼化母樹(shù)上剪取插穗，在9月進(jìn)行扦插能得到較高的生根率。

3.3" 插穗解剖結(jié)構(gòu)與娜塔櫟生根的關(guān)系

莖部的解剖學(xué)結(jié)構(gòu)與其生根難易程度有著密切的關(guān)系。莖部存在潛伏根原始體或誘導(dǎo)根原基發(fā)生的部位多，且插穗莖部不存在環(huán)狀厚壁組織或厚壁組織存在但不連續(xù)時(shí)，扦插生根相對(duì)容易。而娜塔櫟莖內(nèi)不存在潛伏根原基，且韌皮部存在數(shù)層排列緊密且連續(xù)的環(huán)狀厚壁組織，這是其扦插生根困難的原因之一。這與張猛等對(duì)費(fèi)約果（Feijoa sellowiana）、魯?shù)さ葘?duì)紅榿木（Alnus rubra）的研究結(jié)果一致。不同植物誘導(dǎo)根原基發(fā)生的位點(diǎn)和數(shù)量也不同：柚木（Tectona grandis）、合歡（Albizia julibrissin）的不定根原基只發(fā)生于維管形成層及其附近的薄壁細(xì)胞，屬單一位點(diǎn)發(fā)生，而娜塔櫟的根原基起源于維管形成層及其附近的韌皮薄壁細(xì)胞和愈傷組織2個(gè)部位，屬于多位點(diǎn)發(fā)生，這與葉小萍等對(duì)油茶（Camellia oleifera）的研究結(jié)果一致。

李煥勇等研究指出，插穗皮部生根較愈傷組織生根容易，且成活率高。而娜塔櫟插穗多為愈傷組織生根類(lèi)型。同樣是愈傷組織，其在生根過(guò)程中的作用也不盡相同。徐笑玥發(fā)現(xiàn)中華金葉榆（Ulmus pumila ‘Jinye’）插穗產(chǎn)生的愈傷組織內(nèi)無(wú)根原基，其主要作用是防止病原菌侵入和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)流失，而娜塔櫟插穗的愈傷組織內(nèi)部可以產(chǎn)生不定根原基，對(duì)不定根的形成和物質(zhì)間的運(yùn)輸具有重要作用，與朱聃等對(duì)矮叢越橘（Vaccinium chamaebuxus）的研究結(jié)果一致，這可能也是娜塔櫟扦插生根類(lèi)型主要為愈傷組織生根的重要原因。

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