中草藥防治雞球蟲病的研究概況

梁友萍,房春林,古小彬*

(1.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,四川成都 611130;2.成都農(nóng)業(yè)科技職業(yè)學(xué)院,四川成都 611130)

雞球蟲病(chicken coccidiosis)最主要由7種艾美耳屬(Eimeriaspp.)球蟲寄生于腸道特定部位的上皮細(xì)胞而引起的一種專性細(xì)胞內(nèi)寄生蟲病,包括柔嫩艾美耳球蟲、毒害艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲、堆型艾美耳球蟲、早熟艾美耳球蟲、緩艾美耳球蟲和布氏艾美耳球蟲,多危害15～50日齡的雛雞[1]?；疾‰u體重下降、腸道出血、下痢,甚至衰竭死亡。常用化藥防控雞球蟲病,但是化藥可殘留于雞肉和雞蛋以及通過(guò)雞糞排出污染環(huán)境。中草藥抗雞球蟲以驅(qū)蟲殺蟲、清熱燥濕為主,同時(shí)具有增強(qiáng)機(jī)體抵抗力、促進(jìn)機(jī)體生長(zhǎng)等作用。從2020年起,我國(guó)動(dòng)物飼料全面禁止加入抗生素,中草藥以其藥物殘留低、毒副作用小、不易產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點(diǎn),成為防治雞球蟲病的研究熱點(diǎn),具有廣闊的前景。論文對(duì)近10年(2013-2023年)中草藥抗雞球蟲病的相關(guān)研究報(bào)道進(jìn)行綜述。

1 單味中藥防治雞球蟲病

近10年內(nèi)報(bào)道的抗雞球蟲病的單味中藥有驅(qū)蟲殺蟲類、清熱燥濕類、清熱解毒類、補(bǔ)氣益血類、活血止痛類和增強(qiáng)免疫力類的中草藥。

1.1 驅(qū)蟲殺蟲類的單味中藥防治雞球蟲病

該類中草藥能夠直接殺死球蟲或抑制球蟲的生長(zhǎng)發(fā)育,其是防治畜禽球蟲病的常用中草藥。近10年已報(bào)道抗雞球蟲病的驅(qū)蟲殺蟲類單方藥物有常山、大蒜、石榴皮、川楝子、青蒿,上述藥物具有中效或低效的抗球蟲作用。

研究發(fā)現(xiàn),常山、大蒜、石榴皮和川楝子的抗球蟲指數(shù)(ACI)值均在160～180之間。常山抗柔嫩、巨型和堆型3種混合艾美耳球蟲的ACI值為172.3,該中藥的主要活性成分為喹唑酮類生物堿,包括常山堿、異常山堿,占常山總生物堿的90%以上,這些生物堿可以抑制雞球蟲的發(fā)育,從而減輕盲腸和十二指腸腫脹,減少血液性內(nèi)容物,降低卵囊排出量和病變?cè)u(píng)分,以及可增加肉雞體重和存活率[2]?，F(xiàn)已研發(fā)出常山散、常山口服液等多種劑型,其中常山口服液較托曲珠利具有更好的抗球蟲療效和促生長(zhǎng)作用。大蒜精油的ACI值為167.57,其可增強(qiáng)感染球蟲雞的存活率,且可緩解柔嫩艾美耳球蟲感染雞的血性腹瀉癥狀,降低盲腸病變?cè)u(píng)分,減少糞便中排除的卵囊數(shù),同時(shí)可增加采食量、體重和飼料轉(zhuǎn)化率,改善小腸組織病變情況[3],其抗球蟲作用主要與大蒜含有的大蒜素和酚類化合物可改變細(xì)胞質(zhì)滲透性從而損害艾美耳球蟲細(xì)胞有關(guān)。石榴皮的抗球蟲ACI值為163.38,其提取物可增加雞感染球蟲后的體重增重,促進(jìn)雞生長(zhǎng),并減少卵囊排出量[4],且其甲醇提取物比水提物更有效,并呈現(xiàn)劑量依賴性的抗球蟲作用,這種抗球蟲作用與石榴皮所含的生物堿、糖甙的驅(qū)殺球蟲有關(guān),還與石榴皮可刺激機(jī)體產(chǎn)生某些免疫因子,提高機(jī)體細(xì)胞免疫功能有關(guān)。另外,石榴皮還能顯著可緩解因球蟲感染而引起的空腸過(guò)氧化氫、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、脂質(zhì)過(guò)氧化、一氧化氮(nitric oxide,NO)的產(chǎn)生。川楝子的抗球蟲ACI值為162.56,其能減輕球蟲感染而引起的雞血性腹瀉程度和卵囊的排出量,提高相對(duì)增重率,且川楝子進(jìn)行預(yù)防給藥可有效降低球蟲感染引起的肝細(xì)胞和腎小管上皮細(xì)胞的顆粒狀和空泡狀變性,減輕間質(zhì)浸潤(rùn)的炎性細(xì)胞數(shù)量,提高腸道的高益生菌比例,有效恢復(fù)菌種和微生物多樣性,減少腸道內(nèi)致病菌或球蟲卵囊的定植[5]。

研究發(fā)現(xiàn),青蒿的ACI值為137.03,可減輕感染球蟲雛雞的臨床癥狀,降低死亡率,緩解出血,減輕盲腸黏膜結(jié)構(gòu)破壞和黏膜組織碎片脫落,同時(shí)青蒿的石油醚提取物可減少雞感染球蟲后的卵囊脫落,導(dǎo)致每克糞便中的卵囊個(gè)數(shù)(oocysts per gramme,OPG)降低,這可能與其主要有效成分為青蒿素有關(guān),還與其下調(diào)球蟲的多種微線蛋白mRNA表達(dá)從而降低球蟲第2代裂殖子數(shù)量,最終阻止球蟲黏附宿主細(xì)胞有關(guān),以及其可顯著抑制宿主NF-κB mRNA表達(dá)來(lái)抑制炎癥反應(yīng),最終減少炎癥對(duì)宿主損害有關(guān)。此外,青蒿與抗球蟲化藥(二甲氧芐啶、復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶、柳氮磺吡啶、癸氧喹酯)聯(lián)合使用的抗球蟲效果存在較大差異[6],僅青蒿聯(lián)合癸氧喹酯呈現(xiàn)較好的抗球蟲作用(ACI值為205.54)。

1.2 清熱燥濕類單味中藥防治雞球蟲病

球蟲病在臨床上按中獸醫(yī)學(xué)辨證原則為濕證,故清熱燥濕類藥物被應(yīng)用于抗雞球蟲病的研究。近10年已報(bào)道抗雞球蟲的清熱燥濕類藥類單方藥物有鴉膽子和黃連、黃柏,上述藥物具有中效或低效的抗球蟲作用。

研究報(bào)道,鴉膽子的ACI值達(dá)161,其提取物可顯著緩解血性腹瀉,減少出血,從而保護(hù)受感染的雞免受繼發(fā)性細(xì)菌感染、炎癥反應(yīng)和有毒物質(zhì)的吸收,其還能降低球蟲對(duì)盲腸的損傷。鴉膽子抗球蟲效應(yīng)可能是該藥物可減少腸蠕動(dòng)或直接抗球蟲活性發(fā)揮抗腹瀉作用,還可能通過(guò)保護(hù)器官來(lái)改善雞球蟲病帶來(lái)的損傷。

黃連、黃柏中提取的生物堿黃連素的ACI值達(dá)153.1,其可減輕盲腸病變,炎癥反應(yīng)、血便程度,提高生存率,減少卵囊排出量,這種抗球蟲效應(yīng)與黃連素濃度有關(guān),其中以300 μg/g劑量的黃連素防治雞球蟲效果更佳,過(guò)高濃度會(huì)導(dǎo)致雞體減重。黃連素的抗球蟲效應(yīng)與其能明顯抑制感染球蟲雞體異常升高的丙二醛(MDA),以及提高超氧化歧化酶(superoxide dismutase,SOD)等抗氧化酶活性降低氧化應(yīng)激和其可上調(diào)金屬轉(zhuǎn)運(yùn)基因(ZNT1、CTR1和DMT1)的mRNA轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)而恢復(fù)雞體Cu和Zn失衡有關(guān)[7]。

1.3 清熱解毒類單味中藥防治雞球蟲病

該類中草藥用以對(duì)癥治療球蟲病引起的溫?zé)帷⒅卸?。?0年已報(bào)道抗雞球蟲病的清熱解毒類單方藥物有鬼針草、酸模、余甘子、車前草、黃花蒿,上述藥物具有高效或低效的抗球蟲作用。

研究表明,鬼針草的ACI值高達(dá)197.7,其添加的飼料能顯著增加雞體重,降低球蟲感染量、發(fā)病率、病死率和血便值,減少OPG和腸道病理?yè)p傷。鬼針草的抗球蟲效應(yīng)與其抑制球蟲生命周期中的卵囊孢子形成、子孢子和裂殖體侵入,以及增強(qiáng)雞體T 細(xì)胞介導(dǎo)的免疫力有關(guān)。研究者發(fā)現(xiàn)鬼針草中存在一種有效多炔化合物1(cytopiloyne),有抗雞球蟲病作用,該中藥所含的聚乙炔和黃酮類化合物被證實(shí)具有抗瘧活性,而它們是否也有助于鬼針草的抗球蟲作用,有待進(jìn)一步驗(yàn)證。酸模的ACI值為143.0,可提高飼料轉(zhuǎn)化率,促進(jìn)雞生長(zhǎng)以及顯著降低病變?cè)u(píng)分、OPG值[8]。

此外,研究發(fā)現(xiàn),余甘子和車前草均可減少雞體排出的OPG,減輕雞的盲腸和腸道損傷評(píng)分[9],但上述研究報(bào)道均未計(jì)算抗球蟲指數(shù)。

1.4 補(bǔ)氣益血類單味中藥防治雞球蟲病

該類中草藥用以對(duì)癥治療球蟲病導(dǎo)致的機(jī)體氣血陰陽(yáng)的不足,具有增強(qiáng)機(jī)體抵抗力,達(dá)到祛邪扶正的目的。近10年已報(bào)道抗雞球蟲病的補(bǔ)氣益血類單方藥物有錫蘭肉桂、枳殼葉,它們對(duì)球蟲感染均有一定的保護(hù)作用。

錫蘭肉桂的ACI值為146.0,其可減輕球蟲對(duì)盲腸的損傷、降低盲腸評(píng)分和減少卵囊排出,這種抗球蟲作用可能與其含有不同類型的皂甙、生物堿、單寧和類黃酮有關(guān),它們具有抗寄生蟲、抗炎和抗氧化的特性,這些成分會(huì)抑制或延緩球蟲在雞體內(nèi)的生長(zhǎng)發(fā)育[10]。枳殼葉能減少球蟲感染雞的卵囊脫落,改善血液參數(shù),但未見其報(bào)道ACI值。

1.5 活血止痛類單味中藥防治雞球蟲病

該類中草藥用以對(duì)癥治療球蟲病的出血和止痛。近10年已報(bào)道抗雞球蟲病的活血止痛類單方藥物有生姜、姜黃,姜辣素和姜黃素分別是兩者的生物活性成分,前者可引起蛋白質(zhì)變性導(dǎo)致細(xì)胞膜發(fā)生裂解,從而抑制球蟲生長(zhǎng),后者通過(guò)抗氧化、抗炎和免疫調(diào)節(jié)活性發(fā)揮抗球蟲作用,姜黃較生姜具有更好的緩解球蟲感染引起的病變作用[11],但未見它們的ACI值報(bào)道。

1.6 增強(qiáng)免疫力類單味中藥防治雞球蟲病

該類中草藥能顯著提高畜禽機(jī)體的免疫力、提高抗病力、促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)等多重功效,近10年僅報(bào)道了葡萄籽的抗雞球蟲病效應(yīng),其原提取物花青素可顯著降低球蟲感染后的死亡率和病變?cè)u(píng)分,這與其能緩解球蟲感染引起的雞體血漿NO和MDA異常增高,血漿SOD異常下降和氧化應(yīng)激異常增加有關(guān),從而能夠恢復(fù)雞體的抗氧化/氧化系統(tǒng)的平衡[12]。

2 多味復(fù)方中藥在體抗雞球蟲病

根據(jù)中獸醫(yī)辨證論治理論,抗雞球蟲的中草藥復(fù)方制劑主要以驅(qū)蟲殺蟲、清熱燥濕、清熱解毒為主,輔以補(bǔ)益氣血、活血止血、緩急止痛、止痢、健脾促消化功效的中草藥。有關(guān)復(fù)方中草藥制劑抗球蟲活性的研究近年來(lái)備受青睞,各味中草藥間相互協(xié)調(diào)以及對(duì)機(jī)體有利因子進(jìn)行整體調(diào)動(dòng),使得復(fù)方制劑抗球蟲效果一般優(yōu)于單方,同時(shí)部分方劑兼具抗菌消炎、助消化、促生長(zhǎng)和提高雞的免疫力的作用。

近10年,有20個(gè)中草藥復(fù)方用于防治雞球蟲病的研究報(bào)道,其中,“常山、檳榔、地榆、黃芩、青蒿”[13]、“常山、青蒿、地榆、白頭翁和黃芪粗多糖”和“常山、地榆、鴉膽子、地錦草”分別組成的3個(gè)復(fù)方的ACI值最高,分別為183.83、183.90和182.00。由“常山、白頭翁、地榆、黃連”[14]、“青蒿、常山”[15]、“檳榔、青蒿、白術(shù)、黃連、赤石脂”[16]、“苦參、青蒿”[17]、“蛇床子、蒲公英等”[18]、“青蒿、鉤藤、黃芩、黃柏、黃連、甘草、黃芪、酒大黃、黑丑、皂角、大棗、丹皮、丹參、陳皮”[19]、“常山、柴胡、地榆、絞股藍(lán)”“常山、青蒿等”“青蒿、白頭翁、仙鶴草、常山、肉桂”、“青蒿、仙鶴草、何首烏、白頭翁”分別組成的8個(gè)復(fù)方ACI值在160～180之間。此外,發(fā)現(xiàn)通常中西藥聯(lián)合治療球蟲病效果比單獨(dú)使用中草藥效果更佳。超微粉雞球蟲散(青蒿、仙鶴草、何首烏、白頭翁、肉桂)與地克珠利聯(lián)合用藥抗球蟲效果(ACI值188.04)明顯優(yōu)于單獨(dú)使用超微粉雞球蟲散的效果(ACI值160.82)[20];“常山、苦參、青蒿”組成的復(fù)方與馬杜霉素聯(lián)合使用的效果(ACI:170)明顯優(yōu)于該復(fù)方的單獨(dú)抗球蟲效果(ACI值150)。

3 中草藥體外抗雞球蟲卵囊

外環(huán)境中卵囊孢子化和雞體內(nèi)子孢子的入侵是完成一個(gè)世代的雞球蟲發(fā)育必不可少的2個(gè)階段,因此,用中草藥對(duì)上述2個(gè)階段進(jìn)行干預(yù)可能達(dá)到防控球蟲的效應(yīng)。研究者常通過(guò)卵囊孢子化抑制試驗(yàn)評(píng)價(jià)中草藥對(duì)體外卵囊的孢子化抑制率,以及通過(guò)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)中草藥對(duì)子孢子繁殖抑制率和子孢子入侵宿主腸道上皮細(xì)胞的抑制率。

3.1 中藥體外抑制球蟲卵囊孢子化

近十年已報(bào)道用于雞球蟲卵囊孢子化抑制實(shí)驗(yàn)的中藥有青蒿、艾葉、柑桔、苦艾、松針等25種單方中藥和4種復(fù)方中藥,不同中草藥抑制效果存在差異。

以青蒿、艾葉、柑桔、苦艾、松針與4種復(fù)方制劑的體外抗球蟲作用最好,卵囊孢子化抑制率均大于80%。青蒿對(duì)雞球蟲的體外抑制率差異較大,趙瑞平等其抑制率可高98.18%,而李蘊(yùn)玉和Fatemi A的報(bào)道的抑制率分別為72.49%和46%,這種差異較大的結(jié)果可能與中藥濃度、提取方式和球蟲種類和數(shù)量有關(guān)。其次,艾葉、柑桔[21]、苦艾和松針4種單味中藥的卵囊孢子化抑制率分別為97.03%、97%、96.60%和95.39%。有報(bào)道以“青蒿、常山、仙鶴草、白頭翁、肉桂”組成復(fù)方的卵囊孢子化抑制率最高(97.64%),其次為“白僵蟲、生大黃、桃仁、地鱉蟲、生白術(shù)、桂枝、白茯苓、澤瀉、豬苓”組成復(fù)方抑制率(96.42%),“使君子、貫眾、烏梅、檳榔、滑石、常山、黃芪、苦艾、艾葉、青蒿、松針”組成復(fù)方的抑制率次之(93.36%),而抗球散(常山、檳榔、穿心蓮、地榆、黃芪、大青葉等)的卵囊孢子化抑制率最低(83.46%)。此外,發(fā)現(xiàn)抗球散的卵囊孢子化抑制率具有濃度依賴性,這與Ishaq A N等人的結(jié)論相同,而趙瑞平等得到不同的結(jié)論,認(rèn)為在相同的作用時(shí)間下,藥物濃度與球蟲孢子化抑制率不一定正相關(guān),試驗(yàn)結(jié)果并非呈濃度依賴性,存在最適濃度。

蘆薈、白頭翁、鬼針草、川楝子、商陸、苦參、草果、使君子的體外抗球蟲作用處于中間水平,卵囊孢子化抑制率處于50%～80%之間。其中,蘆薈表現(xiàn)出最高的卵囊孢子化抑制率(79.35%)[22],其次為白頭翁對(duì)毒害艾美耳球蟲的孢子化抑制率(75.64%),但它的球蟲卵囊孢子化抑制率與供試球蟲品種有關(guān),其對(duì)堆型和柔嫩艾美耳球蟲的卵囊孢子化抑制率偏低(22.68%、7.80%),最后為鬼針草(71.43%)[23]、川楝子(70.07%)、商陸(70.07%)、苦參(60.07%)、草果(59.18%)、使君子(56.88%)。

南瓜子、柴胡、常山、馬鞭草、仙鶴草、貫眾、余甘子、苦楝皮、鶴虱、北烏梅、南烏梅、菊苣的體外抗球蟲作用處于相對(duì)低水平,卵囊孢子化抑制率均低于50%。其中,南瓜子表現(xiàn)出最高的卵囊孢子化抑制率(41.54%),其次為柴胡(41.21%)、常山(41.04%)、馬鞭草(40.11%)、仙鶴草(38.33%)、貫眾(37.19%)、余甘子(36.7%)、苦楝皮(35.25%)、鶴虱(35.19%)、北烏梅(35.02%)、南烏梅(34.12%)、菊苣(29.69%)。此外還發(fā)現(xiàn),同一種中草藥的不同部位提取物對(duì)同一種球蟲的卵囊的孢子化抑制率也會(huì)有差異,如余甘子的葉子和果實(shí)提取物對(duì)柔嫩艾美耳球蟲的體外卵囊孢子化抑制率分別為35.7%和36.7%。

3.2 中藥體外細(xì)胞抗球蟲孢子活性

近10年內(nèi),有學(xué)者以細(xì)胞為模型進(jìn)行體外抗雞球蟲活性的研究,報(bào)道所使用的細(xì)胞系包括牛腎細(xì)胞(madin darby bovine kidney cells,MDBK)和雞肺上皮細(xì)胞(chicken lung epithelial cell-213,CLEC-213),主要以子孢子入侵抑制率和子孢子的繁殖抑制率為指標(biāo)來(lái)評(píng)價(jià)藥物抗柔嫩艾美耳球蟲、堆形艾美耳球蟲和布氏艾美耳球蟲的效果。近10年已用于體外細(xì)胞抗雞球蟲活性研究的中藥有牛至、抗微生物混合藥物AG、洋蔥、大蒜、提琴形凹唇姜、羅勒葉、鬼針草、桑黃、香芹酚、皂苷、甘草、肉豆蔻、肉桂,不同中草藥制劑抗球蟲活性存在較大差異。

牛至精油抑制子孢子入侵的效果最好,其可抑制93%的柔嫩艾美耳球蟲子孢子入侵MDBK細(xì)胞[25],其次為抗微生物混合藥物AG(麥芽糊精、氯化鈉、檸檬酸、檸檬酸鈉、二氧化硅、蘋果酸、柑橘提取物和橄欖提取物),其可抑制柔嫩艾美耳球蟲子孢子入侵MDBK細(xì)胞和CLEC-213,抑制率最高達(dá)82%[26],洋蔥入侵抑制率次之,它的2種有機(jī)硫化合物(丙基硫代亞磺酸鹽和丙基硫代磺酸鹽)可抑制堆型艾美耳球蟲子孢子入侵MDBK細(xì)胞,2種藥物的入侵抑制率分別為75.2%和71.7%[27]。而大蒜精油[28]、提琴形凹唇姜、羅勒葉精油、鬼針草和桑黃素[29]可抑制柔嫩艾美耳球蟲子孢子入侵MDBK細(xì)胞,抑制率在55%～70%之間。香芹酚和皂苷協(xié)同作用能抑制約30%的混合球蟲(柔嫩艾美耳球蟲、堆型艾美耳球蟲、布氏艾美耳球蟲)入侵MDBK細(xì)胞。在子孢子繁殖抑制方面,甘草酸苷和肉豆蔻油能有效阻止MDBK細(xì)胞中柔嫩艾美耳球蟲子孢子的復(fù)制,兩者的抑制率分別為81.7%和49.5%,而肉桂油未檢測(cè)到抑制作用[30]。

4 展望

中藥具有藥源廣泛、廉價(jià)易得、毒副作用小、藥物殘留低、不易產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點(diǎn),兼?zhèn)渌幬镄耘c營(yíng)養(yǎng)性的雙重作用,它能有效緩解雞球蟲病病變,在今后對(duì)中藥防治雞球蟲病的工作中,為增強(qiáng)中藥的抗球蟲效果,要進(jìn)一步探討藥物有效成分,巧妙運(yùn)用中獸醫(yī)辨證論治原則,確定各種草藥之間的最佳比例,在劑型、給藥方式和聯(lián)合用藥方面做進(jìn)一步研究,經(jīng)過(guò)現(xiàn)代生物工程技術(shù)對(duì)中草藥進(jìn)行加工,開發(fā)出低毒、高效、價(jià)低的驅(qū)球蟲新藥。但由于中藥成分比較復(fù)雜,作用機(jī)理尚不明確,其在雞體內(nèi)的分布、代謝、藥代動(dòng)力學(xué)也缺少研究,因此需要在細(xì)胞和分子水平上對(duì)中藥成分、防治球蟲病機(jī)理進(jìn)行探究,以便研制出更為合適的抗球蟲中藥制劑。