驅(qū)動(dòng)蛋白家族成員26B在膀胱癌中的表達(dá)及與臨床病理特征、預(yù)后的關(guān)系

盧保德 龍賢 黃勇平

基金項(xiàng)目：1.百色市科學(xué)研究與技術(shù)開(kāi)發(fā)計(jì)劃（編號(hào)：百科20213719）；2.右江民族醫(yī)學(xué)院高層次人才科研項(xiàng)目（編號(hào)：R20196337）；3.右江民族醫(yī)學(xué)院校級(jí)課題（編號(hào)：yy2019ky010）

作者簡(jiǎn)介：盧保德（1987.8-），男，廣西隆安縣人，碩士，主治醫(yī)師，主要從事泌尿系腫瘤基礎(chǔ)與臨床研究

通訊作者：黃勇平（1968.5-），男，廣西上林縣人，本科，主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師，主要從事膀胱癌的研究

摘要：目的? 探討驅(qū)動(dòng)蛋白家族成員26B（KIF26B）在膀胱癌中的表達(dá)與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。方法? 從TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)下載膀胱癌RNA表達(dá)譜及臨床數(shù)據(jù)，用R語(yǔ)言相關(guān)數(shù)據(jù)包分析KIF26B在膀胱癌中的表達(dá)水平及與臨床病理、預(yù)后的關(guān)系。收集2019年5月-2021年6月在右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院接受手術(shù)治療的60例膀胱癌及癌旁組織樣本，采用qRT-PCR檢測(cè)KIF26B在膀胱癌組織中的表達(dá)水平，分析KIF26B表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果? TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中，膀胱癌組織KIF26B表達(dá)高于癌旁正常組織（P＜0.05），且KIF26B表達(dá)與膀胱癌的病理類型、腫瘤分級(jí)、T分期、AJCC分期有關(guān)（P＜0.05），與性別、年齡、腫瘤N分期、M分期無(wú)關(guān)（P＞0.05）；KIF26B高表達(dá)患者腫瘤特異性生存期和總生存期均低于KIF26B低表達(dá)者（P＜0.05）。60例膀胱癌組織中，膀胱癌組織KIF26B表達(dá)高于癌旁正常組織（P＜0.05），且KIF26B表達(dá)與膀胱癌腫瘤分級(jí)、T分期、N分期、和吸煙有關(guān)（P＜0.05），與性別、年齡、M分期無(wú)關(guān)（P＞0.05）。結(jié)論? KIF26B在膀胱癌中高表達(dá)，與膀胱癌的臨床病理特征及預(yù)后相關(guān)。

關(guān)鍵詞：膀胱癌；驅(qū)動(dòng)蛋白家族成員26B；臨床病理特征

中圖分類號(hào)：R737.14? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2024.09.020

文章編號(hào)：1006-1959（2024）09-0107-05

Expression of Kinesin Family Member 26B in Bladder Cancer and its Relationship

with Clinicopathological Features and Prognosis

LU Bao-de，LONG Xian，HUANG Yong-ping

（Department of Urology，Affiliated Hospital of Youjiang University for Nationalities，Baise 533000，Guangxi，China）

Abstract：Objective? To investigate the expression of kinesin family member 26B （KIF26B） in bladder cancer and its relationship with clinicopathological features and prognosis.Methods? The RNA expression profile and clinical data of bladder cancer were downloaded from the TCGA database. The expression level of KIF26 B in bladder cancer and its relationship with clinicopathology and prognosis were analyzed by R language related data package. From May 2019 to June 2021， 60 cases of bladder cancer and adjacent tissue samples were collected from the Affiliated Hospital of Youjiang University for Nationalities. The expression level of KIF26B in bladder cancer tissues was detected by qRT-PCR， and the relationship between KIF26B expression and clinicopathological features was analyzed.Results? In TCGA database， the expression of KIF26B in bladder cancer tissues was higher than that in adjacent normal tissues（P<0.05）， and the expression of KIF26B was related to the pathological type， tumor grade， T stage and AJCC stage of bladder cancer （P<0.05）， but not to gender， age， tumor N stage and M stage（P>0.05）; the tumor-specific survival and overall survival of patients with high KIF26B expression were lower than those with low KIF26B expression （P<0.05）. In 60 cases of bladder cancer tissues， the expression of KIF26B in bladder cancer tissues was higher than that in adjacent normal tissues（P<0.05）， and the expression of KIF26B was related to tumor grade， T stage， N stage and smoking? （P<0.05）， but not to gender， age and M stage（P>0.05）.Conclusion? KIF26B is highly expressed in bladder cancer and is related to the clinicopathological features and prognosis of bladder cancer.

Key words：Bladder cancer;Kinesin family member 26B;Clinicopathological features

膀胱癌（bladder cancer）是泌尿外科常見(jiàn)的惡性腫瘤，具有發(fā)病率高、易復(fù)發(fā)的特點(diǎn)。世界范圍內(nèi)，膀胱癌的發(fā)病率在男性惡性腫瘤中排第4位，而死亡率排第8位[1]。在我國(guó)，膀胱癌發(fā)病率在全身惡性腫瘤中排第8位[2]。膀胱癌的治療以手術(shù)為主，但復(fù)發(fā)率和進(jìn)展率高，5年內(nèi)復(fù)發(fā)患者比例占70%，而有10%～30%的患者進(jìn)一步發(fā)展成為肌層浸潤(rùn)性尿路上皮癌，嚴(yán)重威脅人們的健康[3]。驅(qū)動(dòng)蛋白家族成員26B（kinesin family member 26B， KIF26B）是驅(qū)動(dòng)蛋白家族中的一名成員，具有ATP酶活性，在細(xì)胞生長(zhǎng)、有絲分裂過(guò)程中發(fā)揮重要功能[4]。研究發(fā)現(xiàn)，KIF26B基因參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展，被認(rèn)為是乳腺癌[5]、胃癌[6]和肝細(xì)胞癌[7]的致癌基因，但KIF26B在膀胱癌中的作用報(bào)道較少?；诖?，本研究通過(guò)生物信息學(xué)分析結(jié)合臨床組織樣本實(shí)驗(yàn)探討KIF26B在膀胱癌中的表達(dá)水平，進(jìn)一步分析其與膀胱癌臨床病理特征及預(yù)后關(guān)系，以期為膀胱癌的診治提供依據(jù)。

1資料與方法

1.1一般資料? 從TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中下載膀胱癌mRNA表達(dá)譜及臨床數(shù)據(jù)，其中包含414例膀胱癌組織樣本和19例正常組織樣本，臨床數(shù)據(jù)包括患者性別、年齡、病理、分期、分級(jí)、隨訪資料等。收集2019年5月-2021年6月在右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院接受手術(shù)治療的60例新鮮膀胱癌組織樣本，包括膀胱癌及癌旁組織，所有患者均經(jīng)病理學(xué)確診，術(shù)前均未進(jìn)行過(guò)放療或化療。本研究獲右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)并獲得患者知情同意，且簽署知情同意書(shū)。

1.2方法

1.2.1主要試劑與儀器? ?Trizol（天根生化科技有限公司）；Green qPCR SuperMix 試劑盒（北京全式金生物有限公司）；引物設(shè)計(jì)合成（上海生工公司）；RNase inhibitor、dNTPs、氯仿、異丙醇、實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀及冷凍離心機(jī)等。

1.2.2標(biāo)本收集和RNA提取? 新鮮腫瘤組織取材后立即放入液氮中，-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩５蜏乇４娴慕M織標(biāo)本解凍后研磨成粉末，加入Trizol裂解組織，再加入氯仿后震蕩12 000g離心15 min，將無(wú)色上清液轉(zhuǎn)移至另一EP管，加入同體積異丙醇，混勻放置10 min后12 000 g離心15 min，去掉上清液，保留EP管底部白色沉淀，干燥4 min后加入DEPC H2O溶解沉淀，檢測(cè)RNA濃度合格后，保留在-80 ℃冰箱備用。

1.2.3 qRT-PCR? 先按照試劑盒說(shuō)明書(shū)逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，-80 ℃保存。qPCR反應(yīng)體系：SYBR Green I mix 5 μl，Primer-F 0.3 μl，Primer-R 0.3 μl，cDNA 0.2 μl，滅菌蒸餾水5 μl。KIF26B上游引物：5-GCTTCTCAGGCTGAAGTGTG-3，下游引物：5-GTAGGATTTTCCCAGTTTGGCGTGG-3；GAPDH上游引物：5-CCAGGTGGTCTCCTCTGA-3，下游引物：5-GCTGTAGCCAAATTCGTTGT-3。反應(yīng)條件：94 ℃起始模板變性10 min，95 ℃變性5 s，60 ℃退火15 s，72 ℃延伸10 s，40個(gè)循環(huán)。用ImageJ軟件進(jìn)行亮度分析，GAPDH為內(nèi)參照基因觀察結(jié)果。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法? 采用R3.6.3和SPSS 23.0進(jìn)行分析，計(jì)量資料以（x±s）或[M（P25，P75）]表示，采用t檢驗(yàn)或Mann-Whitney U檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，采用？字2檢驗(yàn)。Kaplan-Meier法分析KIF26B表達(dá)與膀胱癌生存預(yù)后的關(guān)系，基于KIF26B表達(dá)的中位數(shù)為臨界值，低于中位數(shù)為低表達(dá)組，高于中位數(shù)為高表達(dá)組，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1生物信息學(xué)分析KIF26B在膀胱癌中的表達(dá)與臨床病理關(guān)系? 在TCGA數(shù)據(jù)中，KIF26BmRNA在膀胱癌原發(fā)組織中的相對(duì)表達(dá)量為2.193（1.279，2.953），高于癌旁正常組織的0.591（0.397，1.168），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)圖1。KIF26B高表達(dá)組和低表達(dá)組病理類型、腫瘤分級(jí)、T分期、AJCC分期比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而兩組性別、年齡、腫瘤N分期、M分期比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表1。

2.2臨床組織樣本驗(yàn)證KIF26B在膀胱癌中的表達(dá)與臨床病理關(guān)系? 膀胱癌組織中，KIF26B相對(duì)表達(dá)量為2.23（1.47，2.99），高于癌旁組織的1.56（1.35，1.77），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)圖2。進(jìn)一步分析KIF26B與膀胱癌病理特征的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，KIF26B高表達(dá)組和低表達(dá)組腫瘤分級(jí)、T分期、N分期、吸煙史比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而兩組性別、年齡、BMI、M分期比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表2。

2.3 KIF26B在膀胱癌臨床預(yù)后中的價(jià)值? 基于TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)，Kaplan-Meier生存分析發(fā)現(xiàn)KIF26B高表達(dá)組腫瘤特異性生存期差于低表達(dá)組（HR=2.10，95%CI：1.30～3.40，P＝0.003），而KIF26B高表達(dá)組總生存期亦低于低表達(dá)組（HR=1.56，95%CI：1.08～2.25，P＝0.017），見(jiàn)圖3。

3討論

膀胱癌是我國(guó)泌尿外科最常見(jiàn)的惡性腫瘤，篩選膀胱癌早期診斷和預(yù)后的標(biāo)志物對(duì)降低膀胱癌患者死亡率、改善預(yù)后具有重要意義。驅(qū)動(dòng)蛋白家族是一類可與微管結(jié)合的分子馬達(dá)蛋白，主要功能是參與細(xì)胞有絲分裂過(guò)程中紡錘體形成和細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)運(yùn)輸，驅(qū)動(dòng)蛋白家族許多成員與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，參與惡性腫瘤的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移[8-11]。

KIF26B屬于驅(qū)動(dòng)蛋白家族成員之一，編碼的蛋白由2108個(gè)氨基酸組成[12]。在小鼠胚胎發(fā)生模型中，KIF26B基因在小鼠四肢、面部和腎臟的發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮著非常關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用[13]。此外，KIF26B對(duì)間充質(zhì)細(xì)胞的粘附和極化有重要作用，被認(rèn)為是Wnt5a/ROR信號(hào)通路的下游靶分子，其作用是調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架，影響細(xì)胞的遷移、極化和粘附[14，15]。既往研究表明[16]，高表達(dá)KIF26B是各種癌癥預(yù)后不良的一個(gè)指標(biāo)，其與細(xì)胞增殖、遷移、侵襲甚至耐藥密切相關(guān)。Liu Y等[17]研究發(fā)現(xiàn)，KIF26B在髓母細(xì)胞瘤中高表達(dá)于癌旁正常組織，其表達(dá)水平與髓母細(xì)胞瘤臨床分期及預(yù)后不良有關(guān)，沉默KIF26B基因后，癌細(xì)胞增殖、遷移能力明顯下降，其機(jī)制為通過(guò)激活PI3K/AKT通路促進(jìn)腫瘤的惡性進(jìn)展。Wang S等[18]研究發(fā)現(xiàn)，KIF26B在乳腺癌組織中表達(dá)上調(diào)，其高表達(dá)患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分級(jí)等臨床病理變量有關(guān)，KIF26B沉默降低了Wnt、β-連環(huán)蛋白和細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)水平，同時(shí)增加了p27的表達(dá)。Chen N等[19]通過(guò)沉默KIF26B使AKT/GSK-3β介導(dǎo)的Wnt/β-catenin通路失活，減弱了非小細(xì)胞肺癌的惡性表型。Zhang H等[6]在胃癌中研究發(fā)現(xiàn)，KIF26B表達(dá)在正常胃粘膜、無(wú)轉(zhuǎn)移的原發(fā)性胃癌組織、有轉(zhuǎn)移的原發(fā)性胃癌組織到繼發(fā)性淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病灶組織中呈逐步上調(diào)趨勢(shì)，KIF26B表達(dá)增加與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及預(yù)后不良有關(guān)，認(rèn)為KIF26B為一種新型癌基因，通過(guò)激活胃癌中的VEGF通路促進(jìn)細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移。而目前關(guān)于KIF26B在膀胱癌中的作用未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。

本研究通過(guò)生物信息學(xué)分析KIF26B表達(dá)與膀胱癌的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)KIF26B在膀胱癌中表達(dá)水平明顯高于癌旁正常組織；另通過(guò)單因素分析KIF26B表達(dá)與膀胱癌臨床病理的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)KIF26B表達(dá)水平與病理類型、分級(jí)、T分期，AJCC分期有關(guān)，與患者性別、年齡、腫瘤N分期、M分期無(wú)關(guān)。膀胱癌病理類型主要包括尿路上皮癌、鱗癌和腺癌，鱗癌和腺癌等非尿路上皮癌比較少見(jiàn)，但惡性程度高于尿路上皮癌。本研究發(fā)現(xiàn)，KIF26B在非尿路上皮癌中的表達(dá)高于尿路上皮細(xì)胞癌，說(shuō)明膀胱癌的病理類型惡性程度越高，KIF26B的表達(dá)越高，提示KIF26B高表達(dá)與預(yù)后不良有關(guān)。

為了對(duì)生物生物信息學(xué)結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證，本研究通過(guò)收集60例膀胱癌及癌旁組織進(jìn)行試驗(yàn)驗(yàn)證，結(jié)果發(fā)現(xiàn)KIF26B在膀胱癌組織中表達(dá)水平高于癌旁組織，與生物信息學(xué)結(jié)果一致。同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)，KIF26B表達(dá)與患者T分期、腫瘤分級(jí)相關(guān)，即KIF26B表達(dá)越高，預(yù)示著患者病理T分期和分級(jí)越高，患者預(yù)后更差，結(jié)果與TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)分析結(jié)果一致。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)KIF26B表達(dá)與膀胱癌N分期、吸煙史呈正相關(guān)，而TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)研究結(jié)果未發(fā)現(xiàn)KIF26B表達(dá)與膀胱癌N分期有關(guān)，原因可能是納入研究隊(duì)列的病例數(shù)、人種、組織類型與TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)不同有關(guān)。進(jìn)一步行生存分析發(fā)現(xiàn)，KIF26B高表達(dá)組腫瘤特異性生存期和總生存期差于低表達(dá)組，表明KIF26B高表達(dá)與較差的病理特征密切相關(guān)，容易導(dǎo)致預(yù)后不良。

綜上所述，KIF26B在膀胱癌中表達(dá)升高，與患者臨床病理T分期、分級(jí)密切相關(guān)，可作為膀胱癌預(yù)后不良的潛在標(biāo)志物。本研究不足之處在于樣本量偏小，可能存在結(jié)果偏倚，且僅進(jìn)行臨床樣本驗(yàn)證，因此KIF26B在膀胱癌中的具體作用及機(jī)制仍有待下一步研究。

參考文獻(xiàn)：

[1]Siegel RL，Miller KD，Jemal A.Cancer statistics，2020[J].CA Cancer J Clin，2020，70（1）：7-30.

[2]韓蘇軍，張思維，陳萬(wàn)青，等.中國(guó)膀胱癌發(fā)病現(xiàn)狀及流行趨勢(shì)分析[J].癌癥進(jìn)展，2013，11（01）：89-95.

[3]von Landenberg N，Aziz A，von Rundstedt FC，et al.Conditional analyses of recurrence and progression in patients with TaG1 non-muscle-invasive bladder cancer[J].Urol Oncol，2018，36（5）：219-238.

[4]Miki H，Okada Y，Hirokawa N.Analysis of the kinesin superfamily： insights into structure and function[J].Trends Cell Biol，2005，15（9）：467-476.

[5]Gu S，Liang H，Qi D，et al.Knockdown of KIF26B inhibits breast cancer cell proliferation，migration，and invasion[J].Onco Targets Ther，2018，11：3195-3203.

[6]Zhang H，Ma RR，Wang XJ，et al.Correction to： KIF26B，a novel oncogene，promotes proliferation and metastasis by activating the VEGF pathway in gastric cancer[J].Oncogene，2022，41（17）：2528.

[7]Li H，Shen S，Chen X，et al.miR-450b-5p loss mediated KIF26B activation promoted hepatocellular carcinoma progression by activating PI3K/AKT pathway[J].Cancer Cell Int，2019，19：205.

[8]Yu BY，Shi LG，Jiang C，et al.Kinesin Family Member C1 Overexpression Exerts Tumor-Promoting Properties in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma via the Rac1/Wnt/β-catenin Pathway[J].Lab Invest，2023，103（7）：100134.

[9]Wang L，Zhang X，Liu J，et al.Kinesin family member 15 can promote the proliferation of glioblastoma[J].Math Biosci Eng，2022，19（8）：8259-8272.

[10]Li X，Liu M，Zhang Z，et al.High kinesin family member 18A expression correlates with poor prognosis in primary lung adenocarcinoma[J].Thorac Cancer，2019，10（5）：1103-1110.

[11]Lin WF，Lin XL，F(xiàn)u SW，et al.Pseudopod-associated protein KIF20B promotes Gli1-induced epithelial-mesenchymal? transition modulated by pseudopodial actin dynamic in human colorectal cancer[J].Mol Carcinog，2018，57（7）：911-925.

[12]Uchiyama Y，Sakaguchi M，Terabayashi T，et al.Kif26b，a kinesin family gene，regulates adhesion of the embryonic kidney mesenchyme[J].Proc Natl Acad Sci U S A，2010，107（20）：9240-9245.

[13]Wang J，Cui F，Wang X，et al.Elevated kinesin family member 26B is a prognostic biomarker and a potential therapeutic target for colorectal cancer[J].J Exp Clin Cancer Res，2015，34：13.

[14]Guillabert-Gourgues A，Jaspard-Vinassa B，Bats ML，et al.Kif26b controls endothelial cell polarity through the Dishevelled/Daam1-dependent planar cell polarity-signaling pathway[J].Mol Biol Cell，2016，27（6）：941-953.

[15]Susman MW，Karuna EP，Kunz RC，et al.Kinesin superfamily protein Kif26b links Wnt5a-Ror signaling to the control of cell and tissue behaviors in vertebrates[J].Elife，2017，6：e26509.

[16]Karuna EP，Choi SS，Scales MK，et al.Identification of a WNT5A-Responsive Degradation Domain in the Kinesin Superfamily Protein KIF26B[J].Genes （Basel），2018，9（4）：196.

[17]Liu Y，Zhang X，Pan R，et al.KIF26B Is Overexpressed in Medulloblastoma and Promotes Malignant Progression by? Activating the PI3K/AKT Pathway[J].Anal Cell Pathol （Amst），2022，2022：2552397.

[18]Wang S，Zhang H，Liu H，et al.ELK1-induced up-regulation of KIF26B promotes cell cycle progression in breast cancer[J].Med Oncol，2021，39（1）：15.

[19]Chen N，Wu Q，Zhang G，et al.Deactivation of AKT/GSK-3beta-mediated Wnt/beta-catenin pathway by silencing of KIF26B weakens the malignant behaviors of non-small cell lung cancer[J].Tissue Cell，2022，76：101750.

收稿日期：2023-07-31；修回日期：2023-08-22

編輯/杜帆