• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    巖藻多糖降解酶的研究進展

    2024-05-20 07:17:40陳金玲
    食品科學 2024年9期
    關(guān)鍵詞:糖酶糖苷鍵巖藻

    魏 真,陳金玲,楊 杰

    (1.江蘇海洋大學 江蘇省海洋生物資源與環(huán)境重點實驗室,江蘇 連云港 222005;2.江蘇省海洋生物產(chǎn)業(yè)技術(shù)協(xié)同創(chuàng)新中心,江蘇 連云港 222005;3.江蘇省海洋資源開發(fā)研究院,江蘇 連云港 222005)

    巖藻多糖降解酶是一類特異性作用于巖藻多糖中糖苷鍵的水解酶,能夠?qū)⒋蠓肿訋r藻多糖水解為中、低分子質(zhì)量的巖藻聚糖[1]。多種巖藻低聚糖具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗氧化、美白等特殊的生物學功效[2-5],因而巖藻多糖降解酶成為生產(chǎn)巖藻低聚糖不可或缺的工具酶。除了制備巖藻低聚糖之外,巖藻多糖降解酶還可用于功能性食品研發(fā)、疾病診斷以及推斷復雜巖藻多糖的化學結(jié)構(gòu)等,因此巖藻多糖降解酶在食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域有著較高的應(yīng)用價值。近年來,隨著功能性食品與保健品市場需求的擴大,巖藻多糖降解酶的特殊作用與水解產(chǎn)物的功效也逐漸被重視和研究。由于巖藻多糖的分子結(jié)構(gòu)極為復雜,且不同功效的巖藻低聚糖與其分子質(zhì)量、硫酸基的含量和分子組成密切相關(guān)[6-8],因此深入探討不同來源和功能的巖藻多糖降解酶對于開發(fā)和研究多種生理活性的巖藻低聚糖具有十分重要的意義。本文總結(jié)近年來不同生物來源的巖藻多糖降解酶的研究進展,從巖藻多糖降解酶的分類、酶學性質(zhì)、作用方式、結(jié)構(gòu)功能及應(yīng)用領(lǐng)域等方面展開論述,以期為后續(xù)巖藻多糖降解酶的理論研究及應(yīng)用提供參考。

    1 巖藻多糖降解酶的分類和來源

    巖藻多糖降解酶歸屬于糖苷水解酶(glucoside hydrolase,GH)類,能夠特異性作用于巖藻多糖中的糖苷鍵[1]。巖藻多糖是一種來源于海洋褐藻及海洋無脊椎動物的硫酸化多糖,其主鏈主要由L-巖藻糖組成,側(cè)鏈分布著少量不同含量的甘露糖、木糖、半乳糖和葡萄糖醛酸等組分[9-10]。研究表明,巖藻多糖的分子結(jié)構(gòu)極為復雜多樣,從不同來源、不同生長季節(jié)褐藻中提取的巖藻多糖化學成分和結(jié)構(gòu)均不相同[8],甘露糖、木糖等單糖組分被替換在L-巖藻糖基的隨機位置,巖藻多糖的硫酸化位點可發(fā)生在L-巖藻糖基的C2、C3或C4等位置[11]。作為能夠水解復雜巖藻多糖的重要酶,巖藻多糖降解酶具有多樣性,不同分類和來源的巖藻多糖降解酶正被不斷地挖掘和認識。

    “巖藻多糖降解酶”一詞最早出現(xiàn)在1959年發(fā)表于Nature上的一篇從海洋細菌Pseudomonasatlantica和Pseudomonascarrageenovora中分離的酶能夠降解巖藻多糖的研究中,該酶被命名為“fucoidinase”[12]。直到1967年,有研究報道從鮑魚肝胰腺分離的酶能夠催化巖藻多糖降解[13],同時這種降解巖藻多糖的生物酶被更名為“fucoidanase”并沿用至今。隨著研究者對巖藻多糖降解酶重要性的認識,該酶也在其他某些無脊椎動物的內(nèi)臟和海洋微生物中被發(fā)現(xiàn)。目前巖藻多糖降解酶主要包含3 種酶:巖藻多糖酶(fucoidanase)、α-L-巖藻糖苷酶(fucosidase)和硫酸酯酶(sulfatase)。

    1.1 巖藻多糖酶

    巖藻多糖酶(EC 3.2.1.211,EC 3.2.1.212)是目前關(guān)于降解巖藻多糖研究最多的一種酶,它能夠催化巖藻多糖中α-糖苷鍵的水解[14]。還有β-D-巖藻糖苷酶(EC 3.2.1.38),由于在巖藻多糖中并未發(fā)現(xiàn)D型巖藻糖,因而其不能作用于巖藻多糖。根據(jù)水解位置不同,巖藻多糖酶分為內(nèi)切型和外切型。內(nèi)切巖藻多糖酶可以切割巖藻多糖分子內(nèi)的糖苷鍵,產(chǎn)生不同分子質(zhì)量的巖藻低聚糖,而外切巖藻多糖酶能夠?qū)r藻多糖的非還原端水解為非硫酸化或者硫酸化的巖藻糖分子[1]。巖藻多糖酶分布十分廣泛,在一些海洋微生物及無脊椎動物中均可分離和鑒定到該酶的存在。目前已報道產(chǎn)巖藻多糖降解酶的細菌主要有依氏假交替單胞菌(Pseudoalteromonasissachenkoniisp.nov.)[15]、交替單胞菌屬(Alteromonassp.)[16]、昆布海藻鼠尾菌(Muricaudaeckloniae)[17]、少動鞘氨醇單胞菌(SphingomonaspaucimobilisPF-1)[18]、鮑魚美麗菌(Formosahaliotis)[19]、解巖藻聚糖莊文穎菌(Wenyingzhuangiafucanilytica)[20]、黃桿菌屬(Flavobacteriumsp.)[21]和海綿科貝特氏菌(Cobetia amphilecti)[22]等。此外,從真菌和無脊椎動物的內(nèi)臟也能夠分離出巖藻多糖降解酶,例如真菌來源的鐮刀菌屬(Fusariumsp.LD8)[23]、砂生小樹狀霉(Dendryphiella arenariaTM94)[24]、謝瓦氏曲霉(Aspergilluschevalier)[25]等,以及無脊椎動物來源的鮑屬[13]、蝦夷盤扇貝[26]、光棘球海膽[27]和濱螺[28]等。

    1.2 α-L-巖藻糖苷酶

    α-L-巖藻糖苷酶(EC 3.2.1.51,EC 3.2.1.63,EC 3.2.1.111,EC 3.2.1.127)專一作用于巖藻多糖及巖藻低聚糖末端的α-L-巖藻糖基,由α-1,2、α-1,3、α-1,4或α-1,6連接的α-巖藻糖苷鍵[29]。α-L-巖藻糖苷酶絕大多數(shù)分離于海洋細菌,例如硫磺礦硫化葉菌(Sulfolobussolfataricus)[30]、解巖藻聚糖莊文穎菌(W.fucanilytica)[31]、類芽孢桿菌屬(Paenibacillussp.)[32]、蠟樣芽胞桿菌(Bacilluscereus)[33]和鼠李糖乳酪桿菌(LacticaseibacillusrhamnosusINIA P603)[34]等。少數(shù)巖藻糖苷酶來源于海洋無脊椎動物,例如海燕海星[35]等。

    1.3 硫酸酯酶

    硫酸酯酶(EC 3.1.6)以催化巖藻多糖中的氨基磺酸鹽和硫酸酯的水解為主[36],對于巖藻多糖硫酸酯酶的研究還不多。目前發(fā)現(xiàn)能夠催化巖藻多糖降解的硫酸酯酶主要來源于海洋細菌,例如解巖藻聚糖莊文穎菌(W.fucanilyticaCZ1127T)[37]、基里蒂瑪?shù)倬鷮伲↘iritimatiellalessp.)[38]、假交替單胞菌屬(Pseudoalteromonassp.)[39]等。

    2 巖藻多糖降解酶的酶學性質(zhì)

    由于巖藻多糖降解酶的種類及來源十分廣泛,其理化性質(zhì)也存在著多樣性,物種來源、酶的分子質(zhì)量、環(huán)境溫度、pH值及一些金屬離子等均為影響該酶性質(zhì)差異的重要因素。表1為部分物種來源巖藻多糖酶的基本酶學性質(zhì),其中研究者對分離于海洋細菌的巖藻多糖酶報道最多,且不同細菌來源巖藻多糖酶的分子質(zhì)量差異巨大。例如來源于C.amphilecti的巖藻多糖酶分子質(zhì)量為35 kDa[22],而從LuteolibacteralgaeH18分離得到的巖藻多糖酶分子質(zhì)量可達112 kDa[40]。細菌巖藻多糖酶一般為常溫酶,其最適作用溫度大多分布在24~35 ℃之間,但來自Flavobacteriumsp.SW的巖藻多糖酶最適溫度為45~50 ℃[21]。絕大多數(shù)細菌來源的巖藻多糖酶在pH值中性或弱堿性范圍內(nèi)均有較高的酶活性,其中分離于Flavobacteriumalgicola的巖藻多糖酶最適pH值為9.0,是目前發(fā)現(xiàn)耐受性最強的巖藻多糖酶[41]。與細菌來源的巖藻多糖酶相比,分離于無脊椎動物或海洋真菌的巖藻多糖酶在最適溫度和最適pH值等方面存在較大差異。目前發(fā)現(xiàn)的來源于海洋真菌的巖藻多糖酶最適溫度普遍高于無脊椎動物和海洋細菌,如分離于Fusariumsp.LD8的巖藻多糖酶具有耐熱性,其最適溫度達到了60 ℃[23]。不僅如此,分離于無脊椎動物和海洋真菌的巖藻多糖酶最適pH值均為酸性,其中來源于無脊椎動物光棘球海膽的巖藻多糖酶最適pH值僅為3.0,是典型的嗜酸酶[27]。此外,一些巖藻多糖酶的活性還受到金屬離子和無機鹽離子的影響,例如鈣離子能夠顯著增加巖藻多糖酶Mef2的活力,而抑制巖藻多糖酶Fda1活力[16-17];巖藻多糖酶Fhf1對氯化鈉溶液的最高耐受濃度為0.5 mol/L,巖藻多糖酶Fda1能夠在1 mol/L氯化鈉溶液中保持最佳酶活性[16]。

    表1 不同來源巖藻多糖酶的酶學性質(zhì)Table 1 Enzymatic properties of fucoidanases from different sources

    巖藻糖苷酶一般分離于海洋細菌,且多數(shù)使用大腸桿菌等對其進行異源重組表達和后續(xù)性質(zhì)研究。已有文獻報道的重組巖藻糖苷酶分子質(zhì)量差異較大,約在40~90 kDa之間。不同細菌來源的重組巖藻糖苷酶的最適溫度也不盡相同:幾種巖藻糖苷酶的最佳作用溫度約為50 ℃,例如分離于Paenibacillussp.3179、B.cereus2-8和L.rhamnosusINIA P603的巖藻糖苷酶[32-34],而來自W.fucanilytica的巖藻糖苷酶最適溫度僅為25~30 ℃[31]。絕大多數(shù)巖藻糖苷酶的最適pH值約在4.0~7.0之間,其能夠很好地適應(yīng)酸性環(huán)境。少數(shù)分離于無脊椎動物的巖藻糖苷酶某些酶學性質(zhì)與細菌相比有較大區(qū)別,例如來源于海燕海星的巖藻糖苷酶最適溫度高達70 ℃,這在細菌巖藻糖苷酶中鮮有報道[35]。

    有關(guān)巖藻多糖硫酸酯酶的研究相對較少,目前已報道的幾種硫酸酯酶在不同的溫度、金屬離子等環(huán)境中也表現(xiàn)出較大差異。例如Silchenko等[37]發(fā)現(xiàn)來源于菌株W.fucanilytica中的重組巖藻多糖硫酸酯酶SWF1和SWF4最適pH值均為7.8~8.4,最適溫度分別為40~45 ℃和30~35 ℃,且硫酸酯酶SWF1是一種鈣離子依賴性酶,而SWF4的活性不受鈣離子的影響。分離于海參腸道細菌的硫酸酯酶PsFucS1也具有鈣離子依賴性,其最適pH值為6.5,且具有高達68 ℃的最佳催化溫度和較高的熱穩(wěn)定性[39]。

    3 巖藻多糖降解酶的作用方式和水解產(chǎn)物

    酶最重要的特性是其多樣的作用位點、底物特異性與水解產(chǎn)物。巖藻多糖降解酶的作用底物主要為由L-巖藻糖組成的硫酸化多糖[9-10],L-巖藻糖的連接方式以α-1,3連接(圖1a)或α-1,3、α-1,4交替連接(圖1b)為主,此外還有少數(shù)α-1,2或α-1,6連接[9,45]。側(cè)鏈基團復雜多樣,主要由甘露糖、木糖、半乳糖和葡萄糖醛酸等組成[9]。圖1顯示了3 種巖藻多糖降解酶在部分巖藻多糖中的主要作用位點。由于巖藻多糖底物的復雜性與多樣性,不同種類的巖藻多糖降解酶具有不同的作用位點與水解方式,其水解產(chǎn)物也存在著較大差異。

    圖1 巖藻多糖的結(jié)構(gòu)模型及巖藻多糖降解酶的一般作用位點[45]Fig.1 Structural models of fucoidans and general action sites of fucoidan-degrading enzymes[45]

    巖藻多糖酶分為內(nèi)切型和外切型,兩種作用方式的酶能夠切割巖藻多糖中以α-1,3或α-1,4連接的巖藻糖苷鍵。大部分已發(fā)現(xiàn)的巖藻多糖酶為內(nèi)切型,其水解產(chǎn)物多為不同分子質(zhì)量的巖藻低聚糖,例如Zhu Chenlu等[16]使用高效液相色譜電噴霧離子化串聯(lián)質(zhì)譜對來自Alteromonassp.SN-1009的巖藻多糖酶tFda1B水解產(chǎn)物進行分析,結(jié)果表明該酶屬于內(nèi)切型α-1,3巖藻多糖酶,水解產(chǎn)物為多樣的巖藻低聚糖,且證實部分來自厚葉解曼藻的巖藻多糖是由α-1,3糖苷鍵連接。Tran等[17]通過核磁共振、底物特異性和系統(tǒng)聚類分析等對來源于糖海帶的巖藻多糖酶Mef2的水解產(chǎn)物進行研究,結(jié)果表明Mef2能夠特異性內(nèi)切α-1,3連接的糖苷鍵并釋放出具有新分支連接的巖藻低聚糖,成為第一個來自糖海帶能夠降解極其復雜巖藻多糖的水解酶。然而,來源于Flavobacterium algicola的巖藻多糖酶OUC-FaFcn1僅具備內(nèi)切α-1,4糖苷鍵的特異性,通過隨機切割方式降解巖藻多糖中的α-1,4糖苷鍵,生成以雙糖為主的產(chǎn)物[41]。同樣地,來自F.haliotis的巖藻多糖酶Fhf2Δ484也有α-1,4位點的切割活性,能夠釋放出含有大量硫酸化2,4-巖藻糖殘基的低聚糖,但其底物特異性較低,對來源于3 種海藻(墨角藻、莫氏馬尾藻、匍枝馬尾藻)的巖藻多糖具有不同程度的水解活性[14]。目前關(guān)于外切型巖藻多糖酶的研究比較少,例如Furukawa等[46]從Vibriosp.N-5中分離得到外切型的巖藻多糖酶,其水解產(chǎn)物主要為硫酸化的巖藻糖和巖藻二糖。

    巖藻糖苷酶具有較為廣泛的底物特異性,絕大多數(shù)巖藻糖苷酶為外切型,能夠水解以α-1,2、α-1,3、α-1,4或α-1,6連接的巖藻糖苷鍵并生成多樣的巖藻糖或巖藻聚糖等產(chǎn)物,其作用方式與巖藻糖苷酶的來源及GH家族分類密切相關(guān)。例如來源于W.fucanilytica的GH29家族巖藻糖苷酶Alf1_Wf能夠水解α-1,4巖藻糖基連接的多糖,與合成底物4-硝基苯基-α-L-巖藻吡喃糖苷生成游離的巖藻糖和巖藻低聚糖[47],而來自Paenibacillusthiaminolyticus的GH151家族巖藻糖苷酶可以水解芳香基巖藻糖和以α-1,2、α-1,3、α-1,4、α-1,6糖苷鍵與乙酰葡糖胺相連接的雙糖[48]。

    巖藻多糖硫酸酯酶也具有內(nèi)切或外切酶活性。Silchenko等[37]的研究發(fā)現(xiàn),來源于菌株W.fucanilyticaCZ1127T的硫酸酯酶SWF5為內(nèi)切型酶,可以去除由α-1,3和α-1,4糖苷鍵交替相連的L-巖藻多糖中的4O-硫酸化作用,但不能水解由α-1,3糖苷鍵連接成骨架的巖藻多糖[49]。此外,不同的硫酸酯酶對底物中硫酸基的存在位置和分支存在與否也具有特異性。硫酸酯酶SWF1和SWF4均為外切型酶,硫酸酯酶SWF1不能催化低聚糖4F2,3S(6S)、4F2,3,4S(7S)和6F2,3S(6S)脫硫,但能催化2O-硫酸化四糖4F2S(4S)脫硫,與此相反,硫酸酯酶SWF4可以催化低聚糖4F2,3S(6S)、4F2,3,4S(7S)和6F2,3S(6S)脫硫,但不能催化四糖4F2S(4S)脫硫[37]。

    4 巖藻多糖降解酶的結(jié)構(gòu)和催化機制

    依據(jù)酶的分子結(jié)構(gòu)和催化特征,不同類型的巖藻多糖降解酶被劃分到GH29、GH95、GH107、GH139、GH141、GH151和GH168等多個GH家族中。除了GH139和GH168家族的巖藻多糖降解酶結(jié)構(gòu)仍未被解析之外,其他家族巖藻多糖降解酶的三維結(jié)構(gòu)已被報道。

    GH29家族巖藻多糖降解酶為α-L-巖藻糖苷酶。根據(jù)序列同源性和底物特異性,該家族又被分為GH29-A和GH29-B兩個亞家族:GH29-B僅作用于α-1,3和α-1,4連接的巖藻糖苷鍵,而GH29-A的底物特異性更為廣泛[50-51]。此外,GH29-A對底物4-硝基苯基-α-L-巖藻吡喃糖苷或2-氯-4-硝基苯基-α-L-巖藻吡喃糖苷表現(xiàn)出一定的降解活性,但GH29-B不具有此特性[50]。Summers等[52]對GH29家族的巖藻糖苷酶GH29_0940進行結(jié)構(gòu)解析,發(fā)現(xiàn)該酶由N端的一個催化結(jié)構(gòu)域和C端的兩個碳水化合物結(jié)構(gòu)域(carbohydrate-binding domain,CBM)組成,其整體結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)出一個N端TIM桶狀結(jié)構(gòu)域、中心β-三明治結(jié)構(gòu)域和C端β-三明治結(jié)構(gòu)域。TIM桶狀催化結(jié)構(gòu)域為(β/α)8/7的排列,缺失的一個α-螺旋被一個長而曲折的loop所取代,其中Asp162和Glu220分別作為催化親核試劑和質(zhì)子供體[52]。

    與GH29家族的酶不同,GH95家族的巖藻糖苷酶具有更加嚴格的底物特異性和更為簡單的結(jié)構(gòu)。例如巖藻糖苷酶AfcA是僅具有α-1,2位點切割活性的GH95家族水解酶,該酶的結(jié)構(gòu)包括4 個區(qū)域:一個N端的β區(qū)域、一個螺旋連接區(qū)域、一個(α/α)6螺旋桶狀區(qū)域和一個C端的β區(qū)域。在其催化結(jié)構(gòu)域中,Glu566和Asn423分別作為催化酸和催化親核試劑[53]。

    GH107家族為內(nèi)切α-1,4巖藻多糖水解酶。來源于Flavobacteriaceae的FcnA是GH107家族中第一個被發(fā)現(xiàn)的巖藻多糖酶,該酶由1 個N端結(jié)構(gòu)域(400 個氨基酸組成)、3 個重復的類免疫球蛋白折疊結(jié)構(gòu)域和1 個C端結(jié)構(gòu)域(80 個氨基酸組成)組成[54]。Vickers等[55]對來源于Psychromonassp.SW5A的GH107家族巖藻糖苷酶P5AFcnA進行解析,發(fā)現(xiàn)P5AFcnA的N端存在一個包含(β/α)8的桶狀結(jié)構(gòu)域,但其中的1 個α-螺旋和1 個β-折疊并未形成規(guī)則的二級結(jié)構(gòu),而是分別形成無規(guī)卷曲。結(jié)合X射線晶體學和核磁共振的進一步分析表明,GH107家族酶與GH29家族的巖藻糖苷酶具有相同的結(jié)構(gòu)和催化機制,但GH107家族巖藻糖苷酶的催化殘基高度不保守,可能反映出GH107家族的酶對不同結(jié)構(gòu)的巖藻多糖降解具有特殊性[55]。

    來自BacteroidesthetaiotaomicronVPI-5482的α-2-O-甲基-L-巖藻糖苷酶是目前唯一被發(fā)現(xiàn)的GH139家族酶,但其分子結(jié)構(gòu)和催化機制仍未被解析[56]。在GH141家族中,唯一被解析結(jié)構(gòu)的是內(nèi)切巖藻糖苷酶BT_1002,該酶也來源于BacteroidesthetaiotaomicronVPI-5482,其催化結(jié)構(gòu)域折疊成1 個右旋平行β-螺旋,催化中心表面形成1 個延伸的催化口袋,或許有助于容納木糖和巖藻糖組成的雙糖,并且活性口袋中的D523和D564對該酶的催化起到重要作用[56]。對GH151家族酶的研究也比較少,來源于Paenibacillusthiaminolyticus的α-L-巖藻糖苷酶同工酶2也是唯一被解析結(jié)構(gòu)的巖藻多糖降解酶。該酶包括3 個結(jié)構(gòu)域:1 個由(β/α)8的TIM桶狀結(jié)構(gòu)構(gòu)成的N端結(jié)構(gòu)域、2 個較短的α-螺旋和3 個310螺旋,其中活性結(jié)構(gòu)域位于TIM桶狀結(jié)構(gòu)的中心;中心結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)類似于Rossmann折疊,由4 個α-螺旋和11 個β-折疊組成β桶狀結(jié)構(gòu);C端結(jié)構(gòu)域是β-三明治折疊類型,由1 個長loop和1 個包含2 個β-折疊的C端loop組成[48]。GH151家族的巖藻糖苷酶已被證實對芳基巖藻糖、由α-1,2鍵與半乳糖相連的巖藻糖、α-1,2(或α-1,3、α-1,4、α-1,6)鍵與乙酰葡糖胺相連的巖藻糖有活性,但對巖藻三糖或具有L-巖藻糖-α-1,2-D-Galp表位的六糖無活性[29]。此外,碳水化合物活性酶數(shù)據(jù)庫(http://www.cazy.org/)中還注釋了一種新型的GH168家族巖藻多糖降解酶,該家族酶首次報道于2020年,是一種來源于細菌W.fucanilytica的內(nèi)切型α-1,3巖藻糖苷酶FunA[57]。超高性能排阻層析-質(zhì)譜和核磁共振分析表明,F(xiàn)unA能夠特異性切割2-O-硫酸化和非硫酸化巖藻糖殘基相連的α-1,3糖苷鏈,定向突變結(jié)果表明D206和E264是發(fā)揮FunA功能的關(guān)鍵位點[57]。

    部分巖藻多糖降解酶晶體結(jié)構(gòu)信息匯總?cè)绫?所示。

    表2 部分巖藻多糖降解酶的晶體結(jié)構(gòu)信息Table 2 Crystal structural information of some fucoidan-degrading enzymes

    5 巖藻多糖降解酶的應(yīng)用

    5.1 酶促合成具有特殊活性的巖藻低聚糖

    巖藻多糖及巖藻低聚糖逐漸成為生物活性分子的重要來源,例如第一個阿爾茨海默病藥物和兩種能夠抑制SARS-CoV-2的抗病毒候選藥物原料均含有巖藻多糖[62]。由于巖藻多糖降解酶對巖藻多糖底物的水解功能,使其具備了酶促合成高附加值巖藻低聚糖的巨大潛力。生物來源的酶促反應(yīng)具有條件溫和、不污染環(huán)境和反應(yīng)效率高等優(yōu)點,水解法生產(chǎn)的低分子質(zhì)量巖藻聚糖不僅保留了天然多糖的生物活性,而且作為功能性藥品或食品成分更容易被人體消化吸收,因此酶法制備巖藻低聚糖具有非常好的應(yīng)用前景。近年來,研究者對巖藻多糖降解酶及其在制備巖藻低聚糖中的應(yīng)用進行了較多研究,發(fā)現(xiàn)利用巖藻多糖降解酶能夠?qū)崿F(xiàn)巖藻低聚糖的制備,并且產(chǎn)生了一些具有抗癌、抗血栓或功能性益生元等特殊生理活性的巖藻低聚糖。在功能性藥物研發(fā)方面,Silchenko等[63]利用重組表達的巖藻多糖酶FFA1制備了巖藻低聚糖,并且證明該巖藻低聚糖具有一定的抗癌活性。此外,Silchenko等[64]利用來源于海洋細菌F.algae的重組巖藻多糖酶對天然巖藻多糖進行改性,獲得分子質(zhì)量為50.8 kDa的聚合物,并證實聚合物對結(jié)腸癌細胞具有抑制作用。Xu Zhigang等[65]使用巖藻多糖酶對海帶多糖進行水解,制備了分子質(zhì)量為25.8 kDa的海帶低聚糖,動物實驗表明海帶低聚糖能夠顯著抑制血栓的形成。在功能性食品研發(fā)方面,使用巖藻糖苷酶能夠生產(chǎn)巖藻糖基化的人乳寡糖,這種人乳寡糖具有益生元、免疫調(diào)節(jié)等生理活性,在嬰兒大腦發(fā)育過程產(chǎn)生諸多有益影響[66]。因此,巖藻多糖降解酶在制備具有特殊生理活性巖藻低聚糖的過程中發(fā)揮了關(guān)鍵作用,這些低聚糖具有極高的應(yīng)用價值,為未來功能性藥物或食品的研發(fā)提供重要基礎(chǔ)。

    5.2 疾病診斷與治療

    人的血清N-聚糖能夠作為一些癌癥、幽門螺桿菌感染等疾病的免疫反應(yīng)指標,而具有不同底物特異性的巖藻糖苷酶已被用作驗證和監(jiān)測這些聚糖生物標志物[29,67-68]。此外,巖藻多糖降解酶也可應(yīng)用到某些疾病的治療中,例如Manivasagan等[69]通過鏈霉菌生產(chǎn)新型巖藻多糖酶以綠色合成金納米顆粒,生物合成的金納米顆粒對HeLa細胞毒性呈劑量依賴性,這表明新型的巖藻糖苷酶能夠應(yīng)用于抗癌治療。也有研究表明用巖藻多糖內(nèi)切酶Fhf1水解巖藻多糖,其中獲得的低分子質(zhì)量巖藻聚糖會影響骨再生過程[70]。

    5.3 推斷巖藻多糖的分子結(jié)構(gòu)

    巖藻多糖是一種分子結(jié)構(gòu)極為復雜的硫酸生物多糖。根據(jù)作用方式和底物特異性的不同,巖藻多糖降解酶對巖藻多糖的作用位點和水解產(chǎn)物存在一定的差異性,不同結(jié)構(gòu)的巖藻低聚糖產(chǎn)物的生物活性也存在多樣化。某些特定的巖藻多糖降解酶能夠?qū)R恍缘厮馓厥忸愋偷奶擒真I,結(jié)合不同光譜分析、氣相色譜-質(zhì)譜分析及核磁共振等研究方法,能夠有效地推斷復雜巖藻多糖的分子結(jié)構(gòu)。例如一些光譜分析方法可以用于闡明巖藻多糖硫酸基和糖苷鍵的位置或分子質(zhì)量大小,而編碼酶基因的宏基因組學分析可以揭示酶的作用位點和機制,該技術(shù)與光譜技術(shù)的結(jié)合能夠針對性地研究巖藻多糖潛在的水解位點[9]。探究巖藻多糖酶的作用位點以及了解巖藻多糖的結(jié)構(gòu)能夠更好地改進生產(chǎn)巖藻低聚糖的技術(shù),更加有效地制備具有特殊生物學活性和功效的低聚巖藻多糖。

    6 結(jié)語

    巖藻多糖為海洋特異性多糖,每種巖藻多糖的分子組成、結(jié)構(gòu)及硫酸化程度均存在一定的差異。組成巖藻多糖的單糖包含木糖、甘露糖、半乳糖和其他一些稀有的單糖,并且單糖取代基的糖苷鍵類型也不盡相同。除此之外巖藻多糖中還存在大量的非碳水化合物取代基,因此巖藻多糖結(jié)構(gòu)具有十分復雜的多樣性,對巖藻多糖的結(jié)構(gòu)研究也相當困難。盡管如此,不同分子質(zhì)量的巖藻多糖因其具有抗癌、免疫刺激、抗氧化、抗感染等生物學活性和毒性低等特點而備受關(guān)注。

    巖藻多糖降解酶是進一步挖掘巖藻聚糖資源的重要研究工具,同時巖藻多糖的多樣性也為發(fā)現(xiàn)具有不同特異性的巖藻多糖降解酶提供了機會。目前,國內(nèi)外關(guān)于巖藻多糖酶制劑制備的研究還較為缺乏,同時由于不同巖藻多糖降解酶的酶學性質(zhì)、水解方式、家族分布和分子結(jié)構(gòu)等差異較大,對該酶的認識也有待不斷地增加和完善。不同特異性的巖藻多糖降解酶能夠?qū)r藻多糖水解為特定分子質(zhì)量的巖藻聚糖,并且有助于研究不同巖藻聚糖的特殊生物學活性,同時也為進一步闡明巖藻多糖的結(jié)構(gòu)提供新的思路。因此,充分分析不同性質(zhì)、結(jié)構(gòu)和作用方式的巖藻多糖降解酶不僅對酶的功能多樣性研究提供重要的理論支持,而且對于通過基因編輯和蛋白質(zhì)工程實現(xiàn)酶的定向改造,研發(fā)催化性能更好的酶制劑,獲得特殊功效的低分子質(zhì)量巖藻多糖具有重要的應(yīng)用意義。

    猜你喜歡
    糖酶糖苷鍵巖藻
    葡聚糖蔗糖酶及其家族在結(jié)構(gòu)與功能上的研究進展
    巖藻黃素藥理作用研究進展
    云南化工(2021年10期)2021-12-21 07:33:16
    發(fā)酵麩皮多糖酶輔助提取工藝優(yōu)化及其生物活性研究
    澤蘭多糖酶提工藝的優(yōu)化
    中成藥(2018年6期)2018-07-11 03:01:30
    加工過程中褐藻巖藻黃素的特征光譜變化
    巖藻黃素的生物學功能及應(yīng)用研究進展
    西部皮革(2018年11期)2018-02-15 01:09:13
    白鯛高豆粕飼料中添加糖酶可提高養(yǎng)分利用率
    飼料博覽(2016年10期)2016-04-05 16:17:50
    裸燕麥多糖酶解產(chǎn)物OP-1純化組分結(jié)構(gòu)分析
    人參多糖部分酸水解物的HPLC-ESI-QTOF-MS分析
    巖藻多糖制備及結(jié)構(gòu)研究進展
    嫩草影院入口| 最近手机中文字幕大全| 最近最新中文字幕免费大全7| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 国产日韩欧美亚洲二区| 如何舔出高潮| 秋霞在线观看毛片| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 亚洲欧洲日产国产| 一本色道久久久久久精品综合| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 性高湖久久久久久久久免费观看| 天天影视国产精品| 久久久久久人人人人人| 一本大道久久a久久精品| av在线播放精品| 免费av中文字幕在线| 五月玫瑰六月丁香| av免费观看日本| 日韩人妻精品一区2区三区| 女人久久www免费人成看片| 国产精品人妻久久久久久| 成年av动漫网址| 性色av一级| av卡一久久| 在线观看美女被高潮喷水网站| 多毛熟女@视频| 亚洲av男天堂| 91aial.com中文字幕在线观看| 熟女电影av网| 看免费成人av毛片| 人妻一区二区av| 女人精品久久久久毛片| 成人免费观看视频高清| 中国美白少妇内射xxxbb| 亚洲三级黄色毛片| 男女午夜视频在线观看 | 黄色视频在线播放观看不卡| 国产在视频线精品| 卡戴珊不雅视频在线播放| 在线观看美女被高潮喷水网站| 免费av中文字幕在线| 各种免费的搞黄视频| 中文字幕人妻熟女乱码| 亚洲av国产av综合av卡| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 国产深夜福利视频在线观看| 激情视频va一区二区三区| 人妻人人澡人人爽人人| 久久 成人 亚洲| 在线观看美女被高潮喷水网站| 伦理电影免费视频| 大片电影免费在线观看免费| 色婷婷av一区二区三区视频| 美女主播在线视频| 一区二区三区精品91| 22中文网久久字幕| 亚洲av日韩在线播放| 亚洲欧美精品自产自拍| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 巨乳人妻的诱惑在线观看| 黄色视频在线播放观看不卡| 男女边吃奶边做爰视频| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 免费观看a级毛片全部| 国产精品成人在线| 蜜臀久久99精品久久宅男| 亚洲一码二码三码区别大吗| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 亚洲经典国产精华液单| 人体艺术视频欧美日本| 欧美日韩综合久久久久久| 久久久久久久久久人人人人人人| 精品酒店卫生间| 成人免费观看视频高清| 捣出白浆h1v1| 免费大片黄手机在线观看| 国产伦理片在线播放av一区| 国产探花极品一区二区| 岛国毛片在线播放| 熟女av电影| 捣出白浆h1v1| 久久精品人人爽人人爽视色| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 欧美日韩综合久久久久久| 波野结衣二区三区在线| 九九在线视频观看精品| 男女免费视频国产| 成人毛片60女人毛片免费| 男女啪啪激烈高潮av片| 亚洲av中文av极速乱| 1024视频免费在线观看| 男的添女的下面高潮视频| 22中文网久久字幕| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 日韩人妻精品一区2区三区| 久久久久久久久久久久大奶| 欧美精品一区二区大全| 中文天堂在线官网| 18在线观看网站| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 亚洲av中文av极速乱| 中文欧美无线码| 看非洲黑人一级黄片| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 亚洲伊人久久精品综合| 亚洲av男天堂| 少妇的丰满在线观看| 啦啦啦在线观看免费高清www| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 一级a做视频免费观看| 男女国产视频网站| 一级a做视频免费观看| 国产激情久久老熟女| 精品一区在线观看国产| 两个人看的免费小视频| av国产精品久久久久影院| 国产成人免费无遮挡视频| 咕卡用的链子| 在线 av 中文字幕| 亚洲人与动物交配视频| 在线观看www视频免费| 欧美3d第一页| 香蕉精品网在线| 十八禁高潮呻吟视频| 一区在线观看完整版| 哪个播放器可以免费观看大片| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 天堂中文最新版在线下载| 超色免费av| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 久久99蜜桃精品久久| 亚洲熟女精品中文字幕| 少妇人妻 视频| 99热网站在线观看| 各种免费的搞黄视频| 精品一区在线观看国产| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 亚洲高清免费不卡视频| 午夜老司机福利剧场| av女优亚洲男人天堂| 啦啦啦啦在线视频资源| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 亚洲欧美色中文字幕在线| 久久久久久久亚洲中文字幕| 国产色爽女视频免费观看| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 赤兔流量卡办理| 精品酒店卫生间| 免费观看在线日韩| 2022亚洲国产成人精品| 久久99蜜桃精品久久| 久久精品国产自在天天线| 搡女人真爽免费视频火全软件| 少妇的逼好多水| 亚洲国产精品一区三区| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 久久国内精品自在自线图片| 国产 精品1| 三上悠亚av全集在线观看| 久久久久久久亚洲中文字幕| 色5月婷婷丁香| 大香蕉久久网| 日韩人妻精品一区2区三区| 91国产中文字幕| 一区二区av电影网| 亚洲综合色网址| 亚洲精品久久午夜乱码| 黄色毛片三级朝国网站| 女性被躁到高潮视频| 亚洲五月色婷婷综合| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 成年av动漫网址| 日韩电影二区| 欧美+日韩+精品| 国产精品.久久久| 边亲边吃奶的免费视频| 91国产中文字幕| 桃花免费在线播放| 国产精品一区二区在线不卡| 亚洲,一卡二卡三卡| 一本大道久久a久久精品| 国产一级毛片在线| 国产xxxxx性猛交| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 黄色配什么色好看| 国产高清不卡午夜福利| 美女大奶头黄色视频| 欧美日韩精品成人综合77777| 美女国产视频在线观看| 搡老乐熟女国产| 国产亚洲精品久久久com| 国产 精品1| 欧美 日韩 精品 国产| 国产淫语在线视频| 高清视频免费观看一区二区| 亚洲av电影在线进入| 天天操日日干夜夜撸| 亚洲国产av影院在线观看| 丰满乱子伦码专区| 黄色毛片三级朝国网站| 午夜激情av网站| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 美女中出高潮动态图| 精品少妇黑人巨大在线播放| 色网站视频免费| 两性夫妻黄色片 | 各种免费的搞黄视频| 中文字幕最新亚洲高清| 嫩草影院入口| 一边摸一边做爽爽视频免费| 久久久久久人妻| 国产av一区二区精品久久| 看免费成人av毛片| 亚洲精品自拍成人| 中文字幕人妻熟女乱码| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 国产精品国产av在线观看| 国产精品国产av在线观看| 在线天堂中文资源库| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 国产极品天堂在线| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 亚洲综合色惰| 久久综合国产亚洲精品| 亚洲四区av| 婷婷色av中文字幕| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 黄色一级大片看看| 母亲3免费完整高清在线观看 | 一级黄片播放器| 午夜老司机福利剧场| 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲av在线观看美女高潮| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 一级,二级,三级黄色视频| 日韩精品有码人妻一区| www.色视频.com| www.熟女人妻精品国产 | 国产探花极品一区二区| 国产福利在线免费观看视频| 男人操女人黄网站| 亚洲精品乱久久久久久| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 国产精品国产三级国产专区5o| 男人添女人高潮全过程视频| 国产有黄有色有爽视频| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 亚洲欧美一区二区三区国产| 国产色婷婷99| 夫妻性生交免费视频一级片| av播播在线观看一区| 男女高潮啪啪啪动态图| 国产老妇伦熟女老妇高清| 新久久久久国产一级毛片| 在线天堂中文资源库| av在线观看视频网站免费| 啦啦啦在线观看免费高清www| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 国产成人欧美| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 老女人水多毛片| 国产在线免费精品| 街头女战士在线观看网站| 搡老乐熟女国产| 欧美丝袜亚洲另类| 两个人免费观看高清视频| 一级片免费观看大全| 午夜久久久在线观看| 2021少妇久久久久久久久久久| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 亚洲av电影在线进入| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 校园人妻丝袜中文字幕| 欧美3d第一页| 免费在线观看完整版高清| 超色免费av| 久久综合国产亚洲精品| 97精品久久久久久久久久精品| 精品国产一区二区三区四区第35| 欧美xxⅹ黑人| 在线观看三级黄色| 国产精品熟女久久久久浪| 新久久久久国产一级毛片| 亚洲av电影在线进入| 精品久久久久久电影网| 精品少妇内射三级| 亚洲伊人色综图| 欧美最新免费一区二区三区| 欧美bdsm另类| 美女内射精品一级片tv| 欧美成人午夜精品| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 国产精品久久久久成人av| 交换朋友夫妻互换小说| videos熟女内射| 亚洲内射少妇av| 成人手机av| 亚洲av男天堂| 好男人视频免费观看在线| 亚洲伊人色综图| 国产成人精品福利久久| av福利片在线| 男女高潮啪啪啪动态图| 国产精品久久久久成人av| 精品亚洲成a人片在线观看| 国产av精品麻豆| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 高清欧美精品videossex| av在线老鸭窝| 成人亚洲精品一区在线观看| 一区在线观看完整版| 久久青草综合色| 激情视频va一区二区三区| av视频免费观看在线观看| 亚洲av日韩在线播放| 国产成人精品婷婷| 日韩免费高清中文字幕av| 国产成人精品一,二区| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 日韩中字成人| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 99热6这里只有精品| 热99久久久久精品小说推荐| 久久免费观看电影| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 色婷婷久久久亚洲欧美| 亚洲国产看品久久| 寂寞人妻少妇视频99o| 精品午夜福利在线看| a级毛片黄视频| 亚洲三级黄色毛片| 亚洲精品aⅴ在线观看| 欧美精品国产亚洲| 高清欧美精品videossex| 午夜影院在线不卡| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 久久久久久伊人网av| 欧美人与性动交α欧美软件 | 国产国语露脸激情在线看| 一二三四中文在线观看免费高清| 中文字幕制服av| 99国产精品免费福利视频| 欧美bdsm另类| 久久午夜福利片| av在线老鸭窝| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 亚洲,欧美,日韩| 日本午夜av视频| 国产精品久久久久久av不卡| 高清毛片免费看| 亚洲人成77777在线视频| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 精品一区二区三区四区五区乱码 | 日韩中文字幕视频在线看片| 丰满少妇做爰视频| 久久久久久久国产电影| 国产高清不卡午夜福利| 亚洲国产欧美在线一区| 久久精品夜色国产| 伦精品一区二区三区| 少妇被粗大猛烈的视频| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 18禁观看日本| 少妇高潮的动态图| 草草在线视频免费看| www日本在线高清视频| 欧美老熟妇乱子伦牲交| av免费观看日本| 国产成人a∨麻豆精品| av在线app专区| 永久网站在线| 成人影院久久| 自线自在国产av| 在线看a的网站| 男女国产视频网站| 18禁动态无遮挡网站| 熟女电影av网| 有码 亚洲区| 国产69精品久久久久777片| 久久女婷五月综合色啪小说| 久久久久久伊人网av| 亚洲精品日本国产第一区| 国产毛片在线视频| 国产一区二区在线观看日韩| 一区二区三区乱码不卡18| 日韩电影二区| 欧美精品一区二区免费开放| 热re99久久国产66热| 国产色婷婷99| 国产精品偷伦视频观看了| 日日爽夜夜爽网站| 日本91视频免费播放| 91国产中文字幕| 精品卡一卡二卡四卡免费| 精品一品国产午夜福利视频| 一区在线观看完整版| 又黄又粗又硬又大视频| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 免费在线观看黄色视频的| 曰老女人黄片| 深夜精品福利| 各种免费的搞黄视频| 久热久热在线精品观看| 男女免费视频国产| 中文字幕最新亚洲高清| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 寂寞人妻少妇视频99o| 丰满乱子伦码专区| 久久精品国产亚洲av天美| a级毛片在线看网站| 国产成人免费无遮挡视频| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 国产精品偷伦视频观看了| 高清欧美精品videossex| 国产成人精品福利久久| 青春草亚洲视频在线观看| 丁香六月天网| 国产精品偷伦视频观看了| 性色avwww在线观看| 日韩欧美一区视频在线观看| 久久久久精品久久久久真实原创| 曰老女人黄片| 成年人免费黄色播放视频| 国产精品三级大全| 三上悠亚av全集在线观看| 国产成人精品无人区| 久久97久久精品| 国产一区有黄有色的免费视频| av在线观看视频网站免费| 成人无遮挡网站| 国产精品不卡视频一区二区| 日本vs欧美在线观看视频| 少妇 在线观看| 久久精品人人爽人人爽视色| 丰满乱子伦码专区| 97在线人人人人妻| 日本与韩国留学比较| 大香蕉97超碰在线| 不卡视频在线观看欧美| 久久久久视频综合| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 伊人亚洲综合成人网| 久久韩国三级中文字幕| 亚洲丝袜综合中文字幕| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 国产精品一区www在线观看| 亚洲人成77777在线视频| 久久综合国产亚洲精品| 精品国产一区二区三区四区第35| 中文字幕人妻熟女乱码| 九色亚洲精品在线播放| 熟女电影av网| 久久精品久久精品一区二区三区| 少妇的逼水好多| 中国三级夫妇交换| 热re99久久精品国产66热6| 国产福利在线免费观看视频| 国产综合精华液| 亚洲第一av免费看| 最黄视频免费看| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 成人亚洲精品一区在线观看| 搡老乐熟女国产| 精品人妻一区二区三区麻豆| 婷婷色麻豆天堂久久| 一级毛片我不卡| 欧美人与善性xxx| 高清av免费在线| 九九爱精品视频在线观看| 在线观看免费日韩欧美大片| av不卡在线播放| 亚洲国产日韩一区二区| 有码 亚洲区| 丁香六月天网| 免费观看a级毛片全部| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 国产黄色免费在线视频| 国产麻豆69| 久久精品久久久久久久性| 亚洲综合精品二区| 精品少妇黑人巨大在线播放| 有码 亚洲区| 国产乱人偷精品视频| 在线观看免费日韩欧美大片| 一级毛片我不卡| 成年人免费黄色播放视频| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 亚洲欧美日韩另类电影网站| 久久人妻熟女aⅴ| 午夜免费鲁丝| 国产又色又爽无遮挡免| 少妇的丰满在线观看| 九九爱精品视频在线观看| 丝袜人妻中文字幕| 亚洲国产精品成人久久小说| 90打野战视频偷拍视频| 久久热在线av| 久久婷婷青草| 在线观看三级黄色| 91成人精品电影| 亚洲美女视频黄频| 欧美3d第一页| 久久久久久久久久久久大奶| 国内精品宾馆在线| 伦理电影大哥的女人| 黄片播放在线免费| 久久毛片免费看一区二区三区| 午夜激情久久久久久久| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 香蕉国产在线看| 韩国av在线不卡| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 大片免费播放器 马上看| 91精品三级在线观看| 精品一区在线观看国产| 人妻 亚洲 视频| 一边亲一边摸免费视频| 精品亚洲成a人片在线观看| 五月伊人婷婷丁香| 久久精品久久久久久久性| 国产永久视频网站| 99久国产av精品国产电影| 亚洲精品美女久久av网站| 两个人看的免费小视频| 蜜桃在线观看..| 亚洲内射少妇av| 精品人妻一区二区三区麻豆| 高清黄色对白视频在线免费看| 色视频在线一区二区三区| 欧美97在线视频| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 2021少妇久久久久久久久久久| 成人亚洲欧美一区二区av| 国产成人免费无遮挡视频| 亚洲国产日韩一区二区| 视频中文字幕在线观看| 久久av网站| 在线观看国产h片| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 国产成人免费观看mmmm| 亚洲美女搞黄在线观看| 欧美日韩精品成人综合77777| 亚洲精品中文字幕在线视频| 1024视频免费在线观看| 97精品久久久久久久久久精品| 这个男人来自地球电影免费观看 | 国产极品天堂在线| 国产精品国产三级国产专区5o| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 久久人人爽人人片av| 精品人妻偷拍中文字幕| 午夜激情av网站| 精品人妻偷拍中文字幕| 男人爽女人下面视频在线观看| 亚洲av日韩在线播放| 免费日韩欧美在线观看| 寂寞人妻少妇视频99o| 欧美国产精品va在线观看不卡| 九九在线视频观看精品| 久久精品国产综合久久久 | 久久97久久精品| 少妇高潮的动态图| 国产免费一区二区三区四区乱码| 精品国产露脸久久av麻豆| 亚洲欧美清纯卡通| 天堂中文最新版在线下载| 国产精品熟女久久久久浪| 人成视频在线观看免费观看| 成年人午夜在线观看视频| 午夜福利网站1000一区二区三区| 国产老妇伦熟女老妇高清| 伊人亚洲综合成人网| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 欧美日韩成人在线一区二区| 热re99久久精品国产66热6| 一区在线观看完整版| 伊人久久国产一区二区| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 丁香六月天网| 国产男人的电影天堂91| 国产av一区二区精品久久| 9色porny在线观看| 在线天堂中文资源库| 成人无遮挡网站| 男女免费视频国产| a级毛片黄视频| 丝袜人妻中文字幕| 美女视频免费永久观看网站| 最新中文字幕久久久久| 十八禁高潮呻吟视频| 一级片'在线观看视频| 热99久久久久精品小说推荐| 色视频在线一区二区三区| 看免费成人av毛片| 亚洲高清免费不卡视频| av.在线天堂| 九色亚洲精品在线播放| 蜜臀久久99精品久久宅男| 婷婷成人精品国产| 日本wwww免费看| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 国产乱人偷精品视频| 亚洲精品乱久久久久久| 精品人妻在线不人妻| 午夜免费鲁丝| 老司机影院毛片| av女优亚洲男人天堂|