6-姜烯酚玉米醇溶蛋白納米顆粒的構建及其生物利用度分析

高 就，吳俊杰，焦文雅，陳宇洋，祝文軒，桑亞新，王向紅

（河北農業(yè)大學食品科技學院，河北 保定 071000）

姜是多年生草本植物，作為香料和藥物被世界各地廣泛消費。姜的藥用價值主要來源于其具有的生物活性物質，特別是姜酚及其脫水產(chǎn)物姜烯酚。6-姜烯酚（6-shogaol，6S）是姜中的主要活性成分，具有抗炎[1]、抗癌[2]、抗氧化[3]、改善阿爾茨海默癥[4]、改善肥胖[5]等藥理作用。但是6S溶解性差、生物利用度低，在體內會被快速吸收和消除，限制其在功能食品領域的應用[6]。

目前已有納米乳液[7]、脂質體[8]、納米顆粒[9]等多種輸送載體，用于提高難溶性多酚物質的生物利用度。其中，利用食品級基材構建的納米顆粒作為活性物質的輸送載體具有諸多優(yōu)勢而被廣泛關注。蛋白質因其獨特的結構和功能特性可以用作制備納米顆粒。多酚與蛋白基納米載體結合后形成納米復合物，可提高其溶解度和在胃腸液中的穩(wěn)定性，并促進小腸上皮細胞對多酚物質的吸收[10]。

玉米醇溶蛋白是玉米中的主要儲存蛋白，具有獨特的溶解性，不溶于水但可溶于乙醇、丙酮和pH≥11.5的堿性水溶液，易于通過反溶劑法制備納米顆粒[11]。近年來，玉米醇溶蛋白成為一種流行的植物蛋白，常被用來開發(fā)封裝和控制疏水活性物質釋放的遞送載體，如槲皮素[12]、白藜蘆醇[13]、姜黃素[14]等。由于玉米醇溶蛋白納米顆粒穩(wěn)定性、再分散性差，通常加入穩(wěn)定劑附著在顆粒表面以改善這些問題，常用的穩(wěn)定劑有酪蛋白酸鈉（sodium caseinate，SC）[15]、殼聚糖[16]、果膠[17]等。其中SC因具有諸多優(yōu)勢而吸引了研究者的注意。除了良好的再分散性，SC能夠提高玉米醇溶蛋白納米粒子在高離子強度下的穩(wěn)定性，改變玉米醇溶蛋白納米粒子的等電點，進而通過增強靜電排斥阻止納米粒子在小腸中的聚集[18]。有研究表明，在Caco-2細胞單層模型中，SC能夠促進細胞攝取玉米醇溶蛋白納米顆粒[19]。與殼聚糖相比，以SC為外殼的玉米醇溶蛋白納米顆粒具有更好的穩(wěn)定性、再分散性和口服生物利用度[20]。

生物利用度是設計酚類物質遞送體系的重要參考因素。評價生物利用度最有效的方法是人體實驗，但是存在操作難度大、對樣品要求較高、涉及倫理和可及性問題而難以實施。因此常選擇其他方法代替，主要有體外模擬胃腸道消化、Caco-2細胞單層模型轉運和藥代動力學研究。營養(yǎng)物質攝入后需經(jīng)過口腔、胃、腸消化后被機體吸收利用。建立模擬消化模型，研究營養(yǎng)物質的消化和釋放特性，可初步探究其生物可及性。小腸是營養(yǎng)物質的主要吸收場所，Caco-2細胞來源于人體結腸腺癌細胞，在半透濾膜上分化形成的單層膜與人類的小腸上皮細胞相似，可以作為體外模型模擬小腸上皮細胞對營養(yǎng)物質的吸收轉運[21]。藥代動力學是研究物質及其代謝產(chǎn)物濃度隨時間動態(tài)變化的方法，運用數(shù)學方法計算藥代動力學參數(shù)，通過最大血藥濃度、藥時曲線下面積（area under curve，AUC）、半衰期等判斷物質在體內的生物利用度。在體外模擬胃腸消化模型和小腸吸收模型的基礎上進一步研究營養(yǎng)物質的藥代動力學，可以更加準確全面地了解營養(yǎng)物質的生物利用度。

目前，利用蛋白基納米顆粒作為遞送載體提高6S生物利用度的研究鮮見報道。因此，本研究用反溶劑法制備負載6S的玉米醇溶蛋白-酪蛋白酸鈉納米顆粒（6-shogaol-loaded zein-sodium caseinate nanoparticles，ZCP-6S），對顆粒進行表征，利用體外模擬消化、Caco-2細胞模型和大鼠藥代動力學研究顆粒的生物可及性、細胞吸收和口服生物利用度，以期為疏水活性物質的輸送及拓寬納米顆粒的應用提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動物、材料與試劑

Caco-2細胞購于國家實驗細胞資源共享服務平臺；SD大鼠體質量為（200±10）g，購自北京華阜康生物科技股份有限公司，生產(chǎn)許可證號：SCXK（京）2019-0008。

玉米醇溶蛋白、6S、辣椒素 上海源葉生物科技有限公司；SC 上海麥克林生化科技有限公司；胃蛋白酶（250 U/mg）、胰蛋白酶（250 U/mg）、DMEM培養(yǎng)基、HBSS緩沖液、四甲基偶氮唑鹽（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）北京索萊寶科技有限公司；胎牛血清 維森特生物技術（南京）有限公司；BCA蛋白試劑盒 賽文創(chuàng)新（北京）生物科技有限公司；6 孔Transwell板 廣州潔特生物過濾股份有限公司；甲醇（色譜級）賽默飛世爾科技（中國）有限公司。

1.2 儀器與設備

磁力攪拌器 德國IKA公司；RE-52A旋轉蒸發(fā)儀上海亞榮生化儀器廠；FD5-2.5型真空冷凍干燥機 SIM儀器有限公司；1260高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）儀 美國Agilent公司；Zetasizer Nano ZS90納米粒度儀 英國Malvern公司；HT7800透射電子顯微鏡（transmission electron microscopy，TEM）日本日立公司；IRAffinity-1S型傅里葉變換紅外光譜儀（Fourier transform-infrared spectroscopy，F(xiàn)T-IR）日本島津公司；LYZ-200 B 恒溫搖床上海龍躍儀器設備有限公司；MX-F 渦旋混合器美國Scilogex公司；Millicell ERS-2跨膜電阻儀 美國Millipore公司。

1.3 方法

1.3.1 納米顆粒的制備

采用反溶劑法制備ZCP-6S[22]。將100 mg的玉米醇溶蛋白分別與50、40、20、10 mg 6S共溶于10 mL體積分數(shù)70%乙醇溶液，磁力攪拌1 h，配制不同比例的玉米醇溶蛋白-6S混合溶液。在磁力攪拌下，將該混合溶液緩慢滴入30 mL含有200 mg SC的水溶液中。持續(xù)攪拌1 h，用旋轉蒸發(fā)儀去除溶液中的乙醇，5 000 r/min離心10 min以去除雜質和未封裝的6S，得到納米顆粒溶液，冷凍干燥后的ZCP-6S顆粒粉末于-20 ℃保存。

1.3.2 粒徑、多分散性指數(shù)（polydisperse index，PDI）和Zeta電位的測定

使用馬爾文納米粒度電位儀測量樣品的粒徑、Zeta電位和PDI。將樣品稀釋適當倍數(shù)后在25 ℃條件下測定，每個樣品重復測定3 次取平均值。

1.3.3 包埋率和固載率的測定

參考Zheng Dan等[22]的方法，用色譜級甲醇將納米顆粒適當稀釋后使用HPLC檢測納米顆粒中包埋的6S含量，計算。液相色譜條件：Diamonsil C18型色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為甲醇-水溶液（70∶30，V/V），等度洗脫；流速為1 mL/min，柱溫為37 ℃，檢測波長230 nm，進樣量為20 μL。包埋率和固載率分別按式（1）、（2）計算：

1.3.4 TEM觀察

使用TEM對納米顆粒進行微觀形貌的表征。將樣品稀釋后用水滴在銅網(wǎng)上，晾干后用TEM觀察形貌。

1.3.5 FT-IR分析

采用FT-IR對6S、ZCP-6S、玉米醇溶蛋白與SC質量比為1∶2的混合物（記為Z-SC1∶2）進行紅外光譜分析。將樣品和溴化鉀粉末按照質量比1∶99研磨混合后壓片測定，掃描范圍為4 000～500 cm-1，分辨率為4 cm-1。

1.3.6 體外模擬胃腸消化

參考Li Duoduo等[23]的方法，模擬胃腸消化模型由模擬胃液（含2 mg/mL NaCl、1.6 mg/mL胃蛋白酶，pH 2.0）和模擬腸液（含10 mg/mL膽鹽、3.2 mg/mL胰酶、1.1 mg/mL氯化鈣，pH 7.5）組成。首先取一定量的ZCP-6S和含相同質量的游離6S作為對照，加入10 mL模擬胃液，然后在37 ℃恒溫搖床中以120 r/min的轉速消化2 h。調節(jié)pH值為7.5中止消化，將胃消化液與模擬腸液等體積混合后調節(jié)混合液的pH值為7.5，在搖床中繼續(xù)消化4 h。將經(jīng)過模擬胃腸消化后的消化液10 000 r/min離心，使用HPLC測量上清液（膠束相）中6S含量，按式（3）計算生物可及性[24]：

式中：ρ為膠束層6S的質量濃度/（μg/mL）；V為膠束層的體積/mL；m為樣品中6S的質量/μg。

1.3.7 細胞毒性實驗

Caco-2細胞于添加體積分數(shù)10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基中培養(yǎng)，細胞培養(yǎng)箱保持37 ℃和5%CO2（后同）。待細胞融合至80%～90%時，用胰酶消化細胞后，將細胞懸液以2×104個/孔的密度接種于96 孔板中過夜使細胞貼壁。棄去舊培養(yǎng)基，加入100 μL含相同6S質量濃度的游離6S（用二甲基亞砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）預溶，DMSO體積分數(shù)＜0.1%）或ZCP-6S DMEM溶液，用不含6S的空白納米顆粒（ZCP）表征載體材料的毒性。培養(yǎng)24 h后，每孔加入20 μL MTT溶液，再培養(yǎng)4 h，加入150 μL DMSO振搖1 min，用酶標儀測定490 nm波長處的吸光度，按式（4）計算細胞存活率：

式中：A1為加入樣品細胞孔的吸光度；A2為未加樣品細胞孔的吸光度。

1.3.8 細胞攝取實驗

將細胞以每孔1.0×105個接種于6 孔板，置于CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每隔1 d更換培養(yǎng)液，培養(yǎng)1 周后利用顯微鏡觀察到Caco-2細胞融合至80%～90%時，可用于細胞吸收實驗。利用HBSS緩沖液清洗細胞表面3 次，然后加入用HBSS緩沖液稀釋的ZCP-6S及游離6S溶液，置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1、2、4 h，然后加入預冷的HBSS緩沖液終止細胞吸收，用磷酸鹽緩沖液清洗3 遍，利用細胞裂解液在冰上將細胞裂解30 min，然后利用超聲處理，將細胞裂解液10 000 r/min離心2 min取上清液，利用液相色譜測定其中的6S含量。

1.3.9 細胞轉運實驗

將Caco-2細胞以每孔1.0×105個接種于6 孔Transwell板中，放于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，用電阻儀監(jiān)測細胞的跨膜電阻值，同時通過顯微鏡觀察細胞形態(tài)。第1周隔天更換培養(yǎng)液，1 周后每天更換培養(yǎng)液。培養(yǎng)至21 d后，將Caco-2細胞單層用HBSS液于37 ℃孵育30 min，再用HBSS液輕輕潤洗3 次。上室加入1.5 mL HBSS稀釋的ZCP-6S溶液和游離6S溶液作為供給液，下室加入2.5 mL空白HBSS作為接收液，在1、2、4 h 3 個時間點收集接收液，并補充等體積的HBSS，將收集液離心取上清液，利用液相色譜檢測，計算下室接受液中6S的濃度為轉運量。

1.3.10 大鼠口服生物利用度

本研究的動物實驗方案經(jīng)河北農業(yè)大學動物倫理委員會批準（審批號：2022010）。SD大鼠購買后在動物房適應性喂養(yǎng)1 周，可自由獲得食物和水。實驗前禁食12 h，不禁水。將12 只大鼠隨機分為兩組，灌胃6S混懸液或ZCP-6S溶液，6S劑量為100 mg/kgmb。分別在灌胃后0.083、0.25、0.5、0.75、1、2、4、6、8、10、12 h從大鼠眼眶靜脈采集血液約600 μL于抗凝離心管中，4 ℃、3 500 r/min離心10 min獲得上層血漿，置于-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆?。使用辣椒素作為內標物，使用?液萃取法對血漿進行前處理[25]。取大鼠血漿200 μL與內標辣椒素20 μL混合后加入800 μL乙酸乙酯，渦旋振蕩2 min后10 000 r/min離心10 min獲取上清液，將上清液轉移至干凈的離心管中，氮氣吹干后用100 μL甲醇復溶，將10 000 r/min離心10 min的上清液置于液相瓶的內襯管中進行檢測。使用DAS軟件對各個時間點的6S血藥質量濃度進行計算，擬合出6S原料藥組與納米顆粒組的各項藥代動力學參數(shù)。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

2 結果與分析

2.1 粒徑、電位和PDI

有研究表明，SC與玉米醇溶蛋白質量比為2∶1時納米顆粒具有較小的粒徑及較高的細胞攝取率[18]，因此本實驗選擇二者的比例為2∶1。顆粒大小是生物聚合物輸送載體的一個關鍵特性，粒徑越小其穩(wěn)定性越強。由表1 可知，所有配方的顆粒粒徑范圍為（147.23±3.09）～（167.67±1.72）nm，與玉米醇溶蛋白納米顆粒的典型粒徑（100～400 nm）一致。所有配方納米顆粒的PDI均小于0.15，表明粒徑分布均勻。Zeta電位代表納米顆粒的表面電荷，可以間接衡量顆粒溶液的穩(wěn)定性，電位的絕對值越大顆粒溶液則越穩(wěn)定。所有配方的納米顆粒電位均為負值，表明玉米醇溶蛋白和SC之間存在靜電吸引，帶負電荷的SC包裹在帶正電荷的玉米醇溶蛋白納米顆粒表面使ZCP-6S帶負電荷，Li Duoduo等[23]報道了類似的結果。本研究所有配方納米顆粒的Zeta電位均在（-42.13±0.21）～（-23.80±0.31）mV之間，表明其穩(wěn)定性較好。

表1 玉米醇溶蛋白與6S質量比對納米顆粒的粒徑、PDI和Zeta電位的影響Table 1 Effects of zein-to-6S ratio on particle size,PDI and zeta potential of nanoparticles

2.2 包埋率和固載率

包埋率和固載率是納米顆粒作為藥物或者營養(yǎng)物質運輸載體的重要指標。如圖1所示，納米顆粒包埋率隨6S比例增加呈先增后減的趨勢，在玉米醇溶蛋白和6S質量比為2.5∶1時包埋率最高，為（83.08±5.81）%，當6S含量繼續(xù)增大時包埋率有所降低，說明6S的添加量超出了納米顆粒的包埋能力。而玉米醇溶蛋白比例越小，固載率就會越大，當玉米醇溶蛋白和6S質量比為2.5∶1時的固載率為（28.90±2.02）%。在其他封裝不同活性物質的遞送體系中也觀察到類似結果[26]。根據(jù)以上結果，選擇玉米醇溶蛋白和6S質量比2.5∶1進行后續(xù)實驗，在該比例條件下，納米顆粒的粒徑較小、固載率較高、包埋率最高。

圖1 玉米醇溶蛋白與6S的質量比對納米顆粒包埋率和固載率的影響Fig.1 Effects of zein-to-6S ratio on encapsulation efficiency and loading efficiency of nanoparticles

2.3 TEM觀察結果

如圖2所示，納米顆粒呈球形，大部分粒子直徑在100～150 nm之間，也存在一些較小的顆粒。TEM觀察到的粒徑略小于納米粒度儀測得的粒徑（表1）。在一項關于果膠穩(wěn)定玉米醇溶蛋白納米顆粒的研究中也出現(xiàn)了類似的結果，這可能是由測試條件和原理差異引起，納米粒度儀測量的是水合粒徑，電鏡觀察的是干燥且去除水分后的顆粒粒徑[17]。

圖2 ZCP-6S的TEM圖像Fig.2 TEM images of ZCP-6S

2.4 FT-IR分析結果

如圖3所示，Z-SC1∶2的紅外光譜在3 309、1 667 cm-1和1 535 cm-1處顯示出典型的吸收峰，分別與O—H伸縮振動、酰胺I帶和酰胺II帶有關。酰胺I帶由肽鍵中羰基伸縮振動造成，因為玉米醇溶蛋白具有α-螺旋結構。在形成納米顆粒后，這些特征峰移動到了3 302、1 658 cm-1和1 532 cm-1處，說明玉米醇溶蛋白、SC、6S之間存在氫鍵和靜電相互作用。在6S圖譜中1 674 cm-1處產(chǎn)生的峰也是由羰基的伸縮振動產(chǎn)生。此外，6S、Z-SC1∶2、ZCP-6S分別在2 927、2 961 cm-1和2 958 cm-1處均存在C—H鍵的拉伸傾斜吸收峰。在800～1 600 cm-1之間有許多6S的連續(xù)特征吸收峰，對應6S結構中的苯環(huán)和—OH。然而，許多特征峰在形成納米顆粒后都消失，如1 516、1 455 cm-1和1 274 cm-1處的特征峰，表明6S與蛋白質之間形成氫鍵或發(fā)生疏水相互作用，限制了其化學鍵的伸縮振動。綜上可知，6S不是吸附在顆粒表面，而是通過非共價鍵相互作用力包封在納米顆粒中。

圖3 6S、Z-SC1∶2、ZCP-6S的紅外光譜Fig.3 Infrared spectra of 6S,Z-SC1:2 and ZCP-6S

2.5 生物可及性

生物可及性是物質在消化過程中從食物基質中釋放出來可以被小腸吸收的部分占攝入總量的比值[27]。如圖4所示，6S封裝在納米顆粒中后，其生物可及性從（36.31±5.82）%提高至（75.34±9.82）%。6S在水中溶解性較差，在消化液中聚集沉淀，限制了膠束化的形成，導致生物可及性較低，而納米顆粒能很好地溶解在消化液中。并且玉米醇溶蛋白在消化后被分解為兩親性多肽，與6S自組裝形成膠束，有利于6S的溶解，進而提高了6S的生物可及性，此結果與Li Duoduo等[23]的研究結果一致。而利用pH值驅動法制備的玉米醇溶蛋白納米顆粒中姜黃素的釋放率在90%以上[28]。造成這些結果不同的原因，除了涂層材料的特性不同外，還與體外消化模型和納米顆粒制備方法的差異有關。

圖4 6S和ZCP-6S的生物可及性Fig.4 Bioaccessibilities of 6S and ZCP-6S

2.6 細胞毒性實驗結果

如圖5所示，ZCP在6S不同質量濃度下均沒有表現(xiàn)出細胞毒性，細胞存活率均大于80%，表明載體材料本身生物相容性良好。在2.5～10 μg/mL范圍內，游離6S和ZCP-6S的細胞存活率均高于80%，表明在這些濃度下兩者都表現(xiàn)出無細胞毒性。但是當6S的質量濃度增加到20 μg/mL時，ZCP-6S的細胞存活率降為（66.49±2.33）%。因此選擇6S質量濃度為10 μg/mL進行后續(xù)實驗。研究表明6S能夠顯著抑制結腸癌細胞Caco-2和HCT116的遷移和增殖，并促進細胞凋亡[29]。ZCP-6S的細胞毒性作用增加，可能是由于納米顆粒使6S能更好地被Caco-2細胞攝取。Xue Jinli等[30]的研究中也出現(xiàn)了類似現(xiàn)象，與游離姜黃素相比，姜黃素納米顆粒對Caco-2細胞具有更強的抑制增殖作用，被包埋的姜黃素通過內吞作用的細胞內化可能是納米顆粒細胞毒性增加的原因。

圖5 用6S、ZCP和ZCP-6S處理后的Caco-2細胞存活率Fig.5 Cell viability of Caco-2 cell safter treatment with 6S,ZCP or ZCP-6S

2.7 細胞攝取實驗結果

如圖6所示，6S的攝取量隨時間的延長而增加，并且ZCP-6S的攝取量在每一個時間點都顯著高于游離的6S。處理4 h后，ZCP-6S的攝取量為（0.89±0.09）μg/mg，6S的攝取量為（0.53±0.04）μg/mg，細胞攝取量增加了（0.36±0.06）μg/mg，這表明包封在納米顆粒中的6S能更有效地被Caco-2細胞吸收。納米顆粒的攝取量取決于顆粒的粒徑、電荷和界面特性等性質，粒徑在100～200 nm之間的納米顆粒具有最佳的Caco-2細胞攝取特性[31]。有研究表明，玉米醇溶蛋白中的某些肽可以通過激活腸上皮細胞的攝取機制提高Caco-2細胞對血紅素鐵的攝取[32]。而SC吸附在玉米醇溶蛋白納米顆粒的表面可以降低界面張力，從而改善玉米醇溶蛋白納米顆粒與細胞膜之間的相互作用。

圖6 Caco-2細胞在1、2、4 h分別對ZCP-6S和6S的攝取情況Fig.6 Uptake of ZCP-6S and 6S by Caco-2 cells at 1,2 and 4 h

2.8 細胞轉運實驗結果

用Caco-2細胞單層模型模擬人小腸上皮細胞的吸收情況。電阻是評價細胞轉運模型是否構建成功的重要指標。如圖7所示，本實驗建立的Caco-2細胞單層模型在培養(yǎng)21 d后電阻達到475 Ω·cm2，說明模型完整性較好，可以進行細胞轉運實驗。從圖8可以看出，ZCP-6S在4 h內的跨膜轉運能力顯著優(yōu)于6S，二者的跨膜轉運量均表現(xiàn)出時間依賴性。在4 h時，6S的跨膜轉運量為（1.20±0.09）μg/mL，ZCP-6S的跨膜轉運量達到（2.26±0.04）μg/mL，增加了（1.06±0.06）μg/mL。這一結果表明，使用納米顆粒作為載體可以提高6S在腸道的吸收。這是由于6S溶解度較低，限制了6S在Caco-2細胞中的吸收和轉運，而包封于納米顆粒中6S的溶解度有所提升。此外，納米顆粒較小的粒徑也有利于促進細胞的吸收和轉運[33]。ZCP-6S的細胞攝取量和跨膜轉運能力均高于6S，這也解釋了其對Caco-2細胞具有更強的抑制作用。

圖7 Caco-2細胞生長不同時間的跨膜電阻Fig.7 Transmembrane resistance of Caco-2 cells at different growth times

圖8 不同時間游離6S和ZCP-6S通過Caco-2細胞單層模型的6S質量濃度Fig.8 6S Concentrations of free 6S and ZCP-6S through Caco-2 cell monolayers at different times

2.9 藥代動力學分析

血藥質量濃度-時間曲線如圖9所示，主要的藥代動力學參數(shù)見表2。二者的血藥質量濃度均呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，最終趨近于0 μg/mL。與6S相比，ZCP-6S的主要藥代動力學參數(shù)得到顯著改善。ZCP-6S的藥峰質量濃度（ρmax）為（4.94±0.49）μg/mL，是6Sρmax的2 倍。與6S相比，ZCP-6S的AUC提高了2.28 倍，說明ZCP-6S的口服生物利用度顯著提高。ZCP-6S的半衰期（T1/2）和平均駐留時間（mean retention time，MRT）分別是6S的1.71 倍和1.55 倍，表明納米顆?？梢云鸬骄忈屪饔茫档土?S在體內的消除速度。研究表明，玉米醇溶蛋白納米顆?？梢愿纳贫錀蠲匪卦谖改c道中的黏附性，并使其在大鼠體內的口服生物利用度提高了1.95 倍[15]。玉米醇溶蛋白納米顆粒本身具有黏附性，其外層穩(wěn)定劑如SC、殼聚糖可進一步增強其黏附性，使其能夠更好地吸附在腸上皮細胞上[34]。這種吸附作用可以延長6S在體內的停留時間，從而增加其在體內的積累量。綜上，納米顆?？梢杂行У靥岣?S的口服生物利用度。

圖9 口服6S和ZCP-6S后血藥質量濃度-時間曲線Fig.9 Plasma concentration-time curves after oral administration of 6S and ZCP-6S

表2 口服6S和ZCP-6S后的主要藥代動力學參數(shù)Table 2 Major pharmacokinetic parameters after oral administration of 6S and ZCP-6S

3 結論

通過反溶劑法成功制備了ZCP-6S，顆粒為球形，分布均勻，在6S、玉米醇溶蛋白、SC質量比為1∶2.5∶5條件下其包埋率和固載率最高，為（83.08±5.81）%和（28.90±2.02）%。氫鍵、靜電和疏水相互作用是形成納米顆粒的主要驅動力。體外模擬消化結果表明，納米顆粒提高了6S在模擬胃腸液中的溶解度，使其生物可及性從（36.31±5.82）%提高至（75.34±9.82）%。納米顆粒包埋的6S與游離的6S相比，更容易被Caco-2細胞吸收，4 h內通過Caco-2細胞單層模型的質量濃度也由（1.20±0.09）μg/mL增加至（2.26±0.04）μg/mL?？诜o藥后，6S的AUC提高了2.28 倍，T1/2為原來的1.71 倍。綜上，玉米醇溶蛋白基納米顆?？梢宰鳛?S有效的輸送載體，提高其生物利用度，本實驗可為更好地發(fā)揮6S功能活性提供新思路。