外泌體在眼科應(yīng)用的研究進(jìn)展

王麗娜,孫豐源

0引言

1967年,Wolf[1]在血漿中發(fā)現(xiàn)了細(xì)胞外囊泡,當(dāng)時(shí)認(rèn)為這是血小板廢物。1984年,Johnstone等[2]在培養(yǎng)的綿羊紅細(xì)胞上清液中發(fā)現(xiàn)了外泌體,認(rèn)為它們是轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的排泄通道。自此,外泌體的概念被首次正式提出。1996年,Raposo等[3]發(fā)現(xiàn)外泌體可以改變細(xì)胞外微環(huán)境,提供抗原,刺激T細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)免疫應(yīng)答,影響健康,因此被認(rèn)為是免疫疫苗。2007年,Valadi等[4]首次證實(shí)外泌體中mRNA和miRNA具有生物活性。外泌體由不同的細(xì)胞產(chǎn)生和釋放,在各種生物學(xué)過程中發(fā)揮作用,如免疫調(diào)節(jié)、凝血、細(xì)胞增殖、分化和遷移以及信息傳遞。2013年,諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)授予J. E. Rothman,R. W. Schekman和T. C. Sudhof,以獎(jiǎng)勵(lì)這三位科學(xué)家闡明了細(xì)胞囊泡運(yùn)輸和傳輸?shù)姆肿訖C(jī)制。2015年,Huan等[5]發(fā)現(xiàn),急性骨髓性白血病的外泌體抑制白血病骨髓微環(huán)境中的造血干細(xì)胞,從而引發(fā)了對外泌體在干細(xì)胞和癌細(xì)胞功能的廣泛研究。眼睛是一個(gè)獨(dú)特的視覺感覺器官,有一個(gè)透明的屈光系統(tǒng),其中充滿了眼內(nèi)液體,包括房水和玻璃體液。除了支撐眼球壁,它們還為眼組織提供營養(yǎng)。許多疾病可以改變房水和玻璃體的含量。近年來,越來越多的研究表明,外泌體也在眼科疾病的發(fā)生與發(fā)展中扮演了重要角色,具有重要意義和潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值。現(xiàn)就外泌體的基本生物學(xué)概況和在眼科的相關(guān)研究進(jìn)行綜述。

1外泌體的生物學(xué)特征

外泌體的生物學(xué)特性起源于細(xì)胞膜的內(nèi)陷,形成細(xì)胞內(nèi)囊泡;被內(nèi)吞作用包裹形成早期的內(nèi)吞體,并選擇性地吸收細(xì)胞質(zhì)中的蛋白質(zhì),脂質(zhì)和RNA最終形成晚期的內(nèi)吞體——多泡體(multivesicular body, MVB)。一些微生物可被溶酶體吞噬和降解,而其他的則與細(xì)胞膜融合并釋放到細(xì)胞外液中。這些囊泡具有不同的類型,根據(jù)其直徑分類：外泌體(30-150 nm),凋亡小體(800-5 000 nm)和微泡(100-1 000 nm)。外泌體是微米級(jí)的雙層磷脂膜囊泡,其形狀(杯狀或扁球形),大小均勻,存在于體液中。外泌體是從多種細(xì)胞釋放出來的,如上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、神經(jīng)元、樹突狀細(xì)胞、肥大細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和血小板。此外,還可以從細(xì)胞培養(yǎng)基中提取外泌體。外泌體與其他類型的囊泡本質(zhì)上是不同的,因?yàn)樗鼈兊慕M成更加復(fù)雜,而且來自不同細(xì)胞的外泌體內(nèi)容物也不同。外泌體三個(gè)主要內(nèi)容物是蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和核酸[6]。外泌體將這些內(nèi)容物運(yùn)輸?shù)桨屑?xì)胞,促進(jìn)細(xì)胞間的通訊。在外泌體中發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì)包括非特異性和特異性蛋白質(zhì),大部分為非特異性蛋白質(zhì),這些非特異性蛋白質(zhì)參與外泌體的形成,決定其結(jié)構(gòu),并維持基本的細(xì)胞功能。外泌體還富含多種脂質(zhì),包括膽固醇、鞘磷脂、磷酸甘油酸、神經(jīng)酰胺和飽和脂肪酸。飽和磷脂的內(nèi)在剛性在維持外泌體的形態(tài)和穩(wěn)定性方面起著重要作用。此外,在外泌體中存在各種mRNA,miRNA,lncRNA,環(huán)狀RNA和其他非編碼RNA (ncRNA)[7]。外泌體作為有效的載體,將RNA轉(zhuǎn)運(yùn)到靶細(xì)胞,調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)合成和細(xì)胞功能。

2外泌體在眼科疾病的應(yīng)用機(jī)制

2.1眼表Hu等[8]使用同位素標(biāo)記,結(jié)合液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法,分析患者的翼狀胬肉組織和結(jié)膜成纖維細(xì)胞。共鑒定出433種蛋白,其中外泌體蛋白135種,提示外泌體蛋白在翼狀胬肉的發(fā)病機(jī)制中起重要作用。角膜緣干細(xì)胞缺損是多種角膜病變的病理特征。傳統(tǒng)的治療方法包括角膜緣干細(xì)胞(limbal stem cell, LSC)移植、口腔黏膜上皮移植和多能干細(xì)胞移植。然而,除了在治療過程中獲得捐贈(zèng)來源的困難之外,還存在許多技術(shù)和倫理方面的限制。細(xì)胞微環(huán)境包括旁分泌因子,直接影響LSC的存活和再生。因此,評估外泌體在角膜再生中的作用,利用外泌體轉(zhuǎn)運(yùn)一些特殊的蛋白質(zhì)將有助于LSC缺損的治療。Han等[9]證實(shí)了人和小鼠角膜上皮細(xì)胞中存在外泌體,發(fā)現(xiàn)小鼠角膜上皮細(xì)胞分泌的外泌體與基質(zhì)細(xì)胞融合并誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化。角膜上皮的外泌體參與角膜修復(fù)和新生血管生成。因此,外泌體可用于治療角膜疾病?；|(zhì)金屬蛋白酶14(MMP14)促進(jìn)新生血管生成。角膜成纖維細(xì)胞分泌含有活化的MMP14的外泌體。這些外泌體被血管內(nèi)皮細(xì)胞吸收,MMP14通過外泌體從角膜成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)到血管內(nèi)皮細(xì)胞,角膜新生血管的治療提供了一個(gè)新的靶點(diǎn)。Jangamreddy等[10]發(fā)現(xiàn)一種肽類似物作為膠原蛋白的替代物通過刺激生長的角膜上皮細(xì)胞分泌細(xì)胞外囊泡(extracellular vesicles, EV)以產(chǎn)生基質(zhì)成分來促進(jìn)角膜組織的再生。此外,發(fā)現(xiàn)來自正常人角膜緣角化細(xì)胞的外泌體可能通過激活A(yù)kt信號(hào)傳導(dǎo)而大大增強(qiáng)原代角膜緣上皮細(xì)胞的增殖和傷口愈合速率[11]。最近的一項(xiàng)研究表明,人類角膜間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體(mesenchymal stem cell exosomes,MSCExos)能夠加速角膜上皮的傷口愈合[12]?，F(xiàn)有的結(jié)果表明,外泌體是重要的再生生物介質(zhì)[13],為角膜損傷和移植排斥反應(yīng)提供新的治療策略。人角膜上皮細(xì)胞(human corneal epithelial cells,HCECs)、體外巨噬細(xì)胞和體內(nèi)角膜上皮均成功地?cái)z取了染色的間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cell,MSC)的外泌體。人類間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體表達(dá)CD9,CD63和CD81并加速角膜上皮傷口愈合[14]。在角膜損傷的情況下,許多內(nèi)源性間充質(zhì)干細(xì)胞在血液中被動(dòng)員起來,并通過快速促進(jìn)再生和組織修復(fù)在受損角膜中發(fā)揮特定作用。MSC衍生的外泌體在大鼠角膜移植排斥反應(yīng)模型通過抑制Th1信號(hào)通路,有效延長移植物存活時(shí)間[15]。此外,由于外泌體的穩(wěn)定性、低免疫原性和毒性,長半衰期,能通過血腦屏障等優(yōu)點(diǎn),可在干眼的治療中發(fā)揮重要作用。

2.2青光眼外泌體在房水(aqueous humor,AH)發(fā)病機(jī)制中的作用。外泌體攜帶miR-486-5p,miR-204和miR-184,并且這些miRNA參與AH流動(dòng)[16]。肌球蛋白(Myocilin)是一種分泌蛋白,突變時(shí)會(huì)提高眼壓。大約3%-4%的原發(fā)性開角型青光眼病例與肌球蛋白有關(guān)[17]。Myocilin參與細(xì)胞外轉(zhuǎn)運(yùn)的機(jī)制尚不清楚。Lerner等[18]在原發(fā)性開角型青光眼患者的小梁網(wǎng)(trabecular meshwork, TM)組織中發(fā)現(xiàn)了483個(gè)差異表達(dá)基因。在483個(gè)基因中,發(fā)現(xiàn)了36個(gè)外泌體成分基因,提示外泌體轉(zhuǎn)運(yùn)異?？赡芘c原發(fā)性開角型青光眼的發(fā)病有關(guān)。非色素性睫狀上皮(non-pigmented ciliary epithelium,nPCE)衍生的外泌體也通過調(diào)節(jié)TM細(xì)胞中的經(jīng)典Wnt信號(hào)傳導(dǎo)途徑參與眼壓的調(diào)節(jié)。此外,Wnt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的負(fù)調(diào)節(jié)因子,如miR-29b在nPCE外泌體中含量豐富[19]。來自未成熟小膠質(zhì)細(xì)胞的外泌體促進(jìn)促炎細(xì)胞因子的合成,提高吞噬效率,并在眼內(nèi)壓增加時(shí)產(chǎn)生活性氧以改變視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(retinal ganglion cells, RGCs)的數(shù)量[20]。非TM細(xì)胞被認(rèn)為可以通過外泌體間接調(diào)節(jié)眼壓。因此,眼壓可以通過調(diào)節(jié)青光眼患者的TM和非TM來源的外泌體來控制。RGCs及其軸突的缺失導(dǎo)致了青光眼所致的失明。MSC分泌外泌體有助于將miRNA遞送到附近的細(xì)胞,隨后提高RGCs的存活率和軸突的再生,并部分阻止RGCs軸突的喪失和RGCs功能障礙[21]。基質(zhì)干細(xì)胞衍生的外泌體能顯著提高視網(wǎng)膜缺血小鼠的功能恢復(fù),減少神經(jīng)炎癥和細(xì)胞凋亡。由于它們的納米尺寸,外泌體可以迅速到達(dá)RGCs,為它們提供神經(jīng)營養(yǎng)蛋白[22]。此外,來自臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體也刺激視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞存活和膠質(zhì)細(xì)胞活化,或可用于異型治療[23]。與其他給藥途徑相比,外泌體療法具有高效、穩(wěn)定、持久的特點(diǎn),MSC分泌的外泌體可能成為青光眼的無細(xì)胞治療途徑之一。

2.3年齡相關(guān)性黃斑變性早期年齡相關(guān)性黃斑變性(age-related macular degeneration,ARMD)的發(fā)病機(jī)制與脂質(zhì)和蛋白質(zhì)在視網(wǎng)膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)層下的積聚有關(guān),導(dǎo)致Bruch膜增厚和不連續(xù)的RPE沉積物(drusen)的形成。據(jù)報(bào)道,RPE細(xì)胞中膜補(bǔ)體調(diào)節(jié)劑的減少導(dǎo)致ARMD中RPE的損傷,并且其水平的降低可以通過其釋放的凋亡顆粒和外泌體來解釋[24]。來自RPE細(xì)胞的外泌體受到視網(wǎng)膜中侵入的白細(xì)胞的攻擊,這可能導(dǎo)致外泌體膜的不穩(wěn)定,細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的釋放,促成了drusen的形成[25]。這意味著RPE細(xì)胞衍生的外泌體部分負(fù)責(zé)補(bǔ)體驅(qū)動(dòng)的ARMD先天性免疫反應(yīng)。Kang等[26]從ARMD患者房水中分離出外泌體,提取其蛋白質(zhì),用定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法鑒定,并與對照組進(jìn)行比較。發(fā)現(xiàn)6種蛋白,包括主動(dòng)脈平滑肌蛋白、肌球蛋白-9、熱休克蛋白70、組織蛋白酶D、細(xì)胞角蛋白8和細(xì)胞角蛋白14?？梢宰鳛锳RMD的診斷生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)。去水晶蛋白D可以幫助抵抗視網(wǎng)膜色素上皮氧化應(yīng)激和ARMD。Kannan等[27]證實(shí),這種晶體蛋白可以通過外泌體轉(zhuǎn)運(yùn)到鄰近的RPE和感光細(xì)胞,起到保護(hù)作用。He等[28]發(fā)現(xiàn),在氧化應(yīng)激誘導(dǎo)后,更多的外泌體從RPE中釋放出來。當(dāng)提取外泌體蛋白質(zhì)時(shí),它們表現(xiàn)出血管內(nèi)皮生長因子受體的高表達(dá)。此外,當(dāng)分離的外泌體與內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí),它們顯著增強(qiáng)了內(nèi)皮細(xì)胞的血管化能力。ARMD的病理過程一度被認(rèn)為是純粹的退行性疾病,逐漸認(rèn)識(shí)到,外泌體的免疫調(diào)節(jié)參與了視網(wǎng)膜炎癥和纖維化的病理過程。Knickelbein等[29]發(fā)現(xiàn)源自炎癥因子刺激的RPE的外泌體可以殺死單核細(xì)胞,介導(dǎo)局部免疫應(yīng)答。外泌體可以將抗炎藥物轉(zhuǎn)運(yùn)到小膠質(zhì)細(xì)胞,抑制神經(jīng)炎癥反應(yīng),并在感光細(xì)胞中發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。外泌體在缺血性視網(wǎng)膜病變的發(fā)病機(jī)制中也起到保護(hù)作用。Moisseieev等[30]將間充質(zhì)干細(xì)胞衍生的外泌體注射到氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的小鼠的玻璃體腔中,發(fā)現(xiàn)新血管生成面積顯著減少,表明外泌體在缺血性視網(wǎng)膜病變中具有保護(hù)作用。在滲出性ARMD,特別是在脈絡(luò)膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)膜中,視網(wǎng)膜星形膠質(zhì)細(xì)胞來源的外泌體被證實(shí)可靶向巨噬細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞,并對激光誘導(dǎo)的小鼠模型的視網(wǎng)膜血管滲漏和CNV有顯著的抑制作用[31]。

2.4葡萄膜黑色素瘤Ragusa等[32]分離并鑒定了來自葡萄膜黑色素瘤(uveal melanoma,UM)患者玻璃體液和血清中分離出的147個(gè)miRNA。在這147種miRNA中,來自UM患者的玻璃體液、血清和組織的外泌體中的miR-146a上調(diào),表明外泌體中的miR-146a可能是UM的潛在診斷標(biāo)志物。這項(xiàng)研究還表明,源自體液或組織的外泌體提供了與源自眼內(nèi)組織液的外泌體相似的診斷信息,使得診斷更簡單和更方便。來自腫瘤細(xì)胞的外泌體促進(jìn)了類似葡萄膜的微環(huán)境的形成,并增強(qiáng)UM特異性的轉(zhuǎn)移。此外,它們可以在玻璃體內(nèi)流動(dòng),從而促進(jìn)細(xì)胞間的交流。此外,VH外泌體表明UM進(jìn)展的可能性。例如,miR-21和miR-146a在VH外泌體中被上調(diào)[33],在CM的外泌體中也發(fā)現(xiàn)了黑色素細(xì)胞[34]。因此,VH中的外泌體可以作為一種診斷標(biāo)志,并為進(jìn)一步了解UM的發(fā)病機(jī)制提供新的思路。

2.5視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤(retinoblastoma,RB)是最常見的原發(fā)性兒童眼內(nèi)惡性腫瘤,占所有兒童惡性腫瘤的4%。占所有小兒惡性腫瘤的4%[35]。一個(gè)正確的VH外泌體的正確檢測可以幫助診斷和早期檢測RB的進(jìn)展。在最近的研究中,觀察到RB腫瘤組織和玻璃體液(retinoblastoma of vitreous seeding,RBVS)[36]中的外泌體蛋白特性。在RBVS外泌體中,存在與侵襲和轉(zhuǎn)移有關(guān)的蛋白,如細(xì)胞膜重塑和相互作用蛋白以及葡萄糖和氨基酸的代謝/分解蛋白質(zhì)。因此,外泌體生物標(biāo)志物被認(rèn)為是診斷RB的選擇之一。

2.6眼外傷Yu等[37]建立了激光誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜損傷的小鼠模型。來源于間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體通過玻璃體內(nèi)注射被引入。這些外泌體能顯著下調(diào)單核細(xì)胞趨化蛋白1的表達(dá),有效抑制激光損傷引起的炎癥反應(yīng)。Mead等[38]建立了視神經(jīng)挫傷動(dòng)物模型,并將間充質(zhì)干細(xì)胞來源的外泌體注入玻璃體腔。視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞存活率顯著提高,細(xì)胞功能恢復(fù),神經(jīng)節(jié)細(xì)胞軸突丟失率顯著降低。這些結(jié)果表明,來源于間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體在創(chuàng)傷性神經(jīng)細(xì)胞損傷中起保護(hù)作用。

2.7免疫介導(dǎo)的眼部疾病自身免疫性葡萄膜炎是葡萄膜(虹膜,睫狀體和脈絡(luò)膜組織)甚至鄰近組織(玻璃體,視神經(jīng)和視網(wǎng)膜)的炎癥,可以單獨(dú)或繼發(fā)于全身綜合征。自身免疫的原因主要是由于致病性T細(xì)胞介導(dǎo)的不適當(dāng)?shù)拿庖邞?yīng)答[39]。致病性Th17細(xì)胞及其相關(guān)炎性細(xì)胞因子協(xié)同作為炎癥的有效誘導(dǎo)劑[40]。Knickelbein等[41]報(bào)道,靜息和細(xì)胞因子刺激的RPE細(xì)胞釋放的外泌體抑制從非感染性葡萄膜炎患者外周血分離的T淋巴細(xì)胞的增殖,并且這些囊泡也可以調(diào)節(jié)人單核細(xì)胞表型和活力。上述結(jié)果表明,外泌體可能是RPE細(xì)胞發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用的重要因素。進(jìn)一步了解來自RPE細(xì)胞的外泌體可能揭示葡萄膜炎治療的新前景。外泌體在葡萄膜炎的主要機(jī)制是調(diào)節(jié)性T細(xì)胞群的不平衡,人視網(wǎng)膜上皮[例如成人視網(wǎng)膜色素上皮(ARPE-19)細(xì)胞系]的外泌體抑制T細(xì)胞刺激和有害的炎癥反應(yīng)。Vogt-Koyanagi-Harada綜合征是一種常見的自身免疫性葡萄膜炎?；颊叩难獫{外泌體含有許多與炎癥程度相關(guān)的蛋白質(zhì),特別是碳水化合物酶2和RAS相關(guān)蛋白R(shí)AP-1B水平升高,可用作Vogt-Koyanagi-Harada病患者活動(dòng)性炎癥的生物標(biāo)志物[42]。來自間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體阻止EAU的發(fā)展并抑制小鼠模型中Th1和Th17細(xì)胞的表達(dá)[43]。間充質(zhì)干細(xì)胞分泌的外泌體通過減少炎癥細(xì)胞的遷移而有效地改善葡萄膜炎,這為葡萄膜炎的治療提供了新的視角。然而,沒有觀察到MSC外泌體對感光受體間視黃醇結(jié)合蛋白(photoreceptor Retinol binding protein,PRBP)特異性T細(xì)胞增殖的抑制作用。此外,外泌體可以通過存在于角膜緣的新型基質(zhì)細(xì)胞(telocytes,TC)遞送到虹膜基質(zhì)中的其他細(xì)胞[44]。在另一項(xiàng)研究中,調(diào)節(jié)性B細(xì)胞產(chǎn)生含有IL-35的外泌體。在EAU模型中,用這些含有IL-35的外泌體處理的小鼠具有較低的EAU評分和較少的視力障礙,并且疾病預(yù)防與分泌IL-10和IL-35的Treg細(xì)胞的擴(kuò)增有關(guān),同時(shí)抑制Th17細(xì)胞應(yīng)答[45]。IL-35-Bregs釋放的外泌體可能有助于治療自身免疫性葡萄膜炎。

3外泌體作為藥物載體的研究

隨著外泌體特異性分離技術(shù)及其蛋白質(zhì)和核酸含量鑒定方法的發(fā)展,外泌體生物標(biāo)志物在眼病研究中具有廣闊的應(yīng)用前景。局部滴眼液具有局限性,例如需要頻繁給藥和低生物利用度。近年來,人們開發(fā)了各種合成藥物載體,用于現(xiàn)有藥物,以提高治療效果。然而,令人不安的問題,包括它們的免疫毒性和單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)(mononuclear phagocyte system,MPS)或網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(reticuloendothelial system,RES)的快速清除仍然存在。幸運(yùn)的是,被認(rèn)為是天然納米載體的外泌體具有許多藥物運(yùn)載工具應(yīng)該具有的非常理想的特性。這些小囊泡能夠穿透血腦屏障(BBB),在人工修飾后將其穿過細(xì)胞膜并靶向定位到特定的細(xì)胞類型[46]?？偟膩碚f,外泌體已被證明可以作為功能性RNAstrands(mRNA,miRNA,siRNA和lncRNA),DNA分子,肽或合成藥物的納米載體[47]。例如,來自產(chǎn)生腺相關(guān)病毒2型(AAV-2)的293T細(xì)胞的外泌體在玻璃體內(nèi)注射后顯示出比常規(guī)AAV-2更高的視網(wǎng)膜轉(zhuǎn)導(dǎo)效率,并被認(rèn)為是玻璃體內(nèi)基因轉(zhuǎn)移到視網(wǎng)膜的強(qiáng)大工具[48]。此外,據(jù)報(bào)道,裝載外源性miRNA-126的MSC-Exos通過抑制高遷移率族蛋白1(HMGB1)信號(hào)通路來減輕高血糖誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜炎癥[49]。此外,化療藥物負(fù)載的外泌體顯示出更高的療效和更好的生物利用度[50],這對眼部藥物治療有新的啟示。到目前為止,對外源性功能載體負(fù)載外泌體在眼科疾病中的潛在作用的研究還很少。因此,在眼科領(lǐng)域開發(fā)這樣的治療方法需要付出巨大的努力。

4小結(jié)

綜上所述,外泌體具有多種功能,參與細(xì)胞間通訊、免疫調(diào)節(jié)、病毒感染、組織再生以及腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移。由于眼科疾病患者血清和房水中外泌體特異性含量的相對穩(wěn)定性和特異性,這些分子有望成為新的生物標(biāo)志物。外泌體在眼科疾病中的作用尚不清楚,首先,由于眼內(nèi)液的體積有限,開發(fā)一種能夠分離出高純度、完整和高效的外泌體的方案是進(jìn)一步研究眼內(nèi)液的先決條件,目前還沒有關(guān)于外泌體在晶狀體相關(guān)疾病、眼眶炎癥或腫瘤病變中的作用和應(yīng)用的研究。外泌體可以轉(zhuǎn)運(yùn)其內(nèi)容物,在不同的病理生理?xiàng)l件下有差異表達(dá),并在多種體液中表現(xiàn)出同源性,然而,具有這些不同表面分子和含量的外泌體迫切需要一種系統(tǒng)、合理的分離和分類方法。目前,由于成本和技術(shù)問題,很難分離出大量純化的和特異性的外泌體。在某些情況下,少數(shù)功能性外泌體亞型被大量非功能性細(xì)胞外囊泡所覆蓋[51]。因此,如何區(qū)分高純度外泌體亞型,明確命名這些亞型,并研究其功能是今后研究的主要方向。盡管還存在許多問題,但外泌體已成為一個(gè)極具潛力的新的研究熱點(diǎn),外泌體可能成為眼科研究和臨床治療的有效工具,在眼科疾病的診斷和治療中發(fā)揮重要作用。