胸水細(xì)胞蠟塊與免疫組化對(duì)肺癌的診斷敏感性分析

郭娟，徐顯輝

廈門(mén)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院，廈門(mén) 361000

肺癌的發(fā)生與多種因素密切相關(guān)，其中已經(jīng)被臨床研究證實(shí)的危險(xiǎn)因素主要包括以下幾種：一是吸煙，臨床研究指出長(zhǎng)期吸煙會(huì)使肺癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)提高數(shù)十倍，同時(shí)還會(huì)明顯增加發(fā)病后患者死亡風(fēng)險(xiǎn)；二是空氣污染，燃燒、工業(yè)生產(chǎn)等產(chǎn)生的氣體均可能誘發(fā)肺癌；三是職業(yè)接觸，一些特殊崗位在工作中經(jīng)常接觸氡氣、煤焦油等物質(zhì)可能誘發(fā)肺癌；四是電離輻射，其造成的肺損傷可能誘發(fā)癌變；五是遺傳基因，該因素也與肺癌的發(fā)生存在聯(lián)系。50%左右的肺癌患者就診時(shí)已經(jīng)出現(xiàn)不同程度的胸腔積液癥狀[1]，此時(shí)采用手術(shù)治療已經(jīng)難以將癌灶完全切除，患者預(yù)后普遍較差，因此及時(shí)而準(zhǔn)確的診斷肺癌至關(guān)重要[2]。細(xì)胞學(xué)標(biāo)本是臨床診斷肺癌的關(guān)鍵，目前臨床上常用的細(xì)胞學(xué)標(biāo)本包括胸水、痰液等，但該技術(shù)尚未完全成熟，在實(shí)際應(yīng)用中其診斷準(zhǔn)確性并不穩(wěn)定[3]?；诖?，本研究分析聯(lián)用胸水細(xì)胞蠟塊與免疫組化技術(shù)對(duì)肺癌的診斷效能。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 納入2020 年1 月至2023 年1 月廈門(mén)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院收治的126 例疑似肺癌患者，經(jīng)病理檢查105 例確診肺癌，21 例確診肺良性病變。患者年齡29～84 歲，平均（58.02±9.73）歲；男、女例數(shù)分別為85、41 例；BMI 19～29 kg/m2，平均（22.78±2.21）kg/m2。納入標(biāo)準(zhǔn)：①已簽署知情同意書(shū)；②能夠配合臨床檢查。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤者；②合并其他嚴(yán)重呼吸系統(tǒng)疾病者；③臨床資料缺失者。本研究符合醫(yī)學(xué)倫理規(guī)范。

1.2 方法 薄層液基細(xì)胞學(xué)檢查：采集100 ml 胸水標(biāo)本與保存液混合均勻，將其中50 ml 進(jìn)行離心處理（1500 r/min，5 min），完成后將上清液去除，并取5 ml 細(xì)胞固定液加入其中混合均勻，再次進(jìn)行離心處理（1500 r/min，5 min），完成后將上清液去除，并取1 ml 緩沖液加入其中混合均勻，在沉降倉(cāng)內(nèi)放置800 μL 靜置，時(shí)間設(shè)定為20 min。之后將沉降液去除，取沖洗液、緩沖液各1 ml先后加入其中進(jìn)行沖洗處理，蘇木素染色后靜置，時(shí)間設(shè)定為90 s，再次取沖洗液、緩沖液各1 ml 先后加入其中進(jìn)行沖洗處理，隨后行伊紅染色處理，時(shí)間設(shè)定為10 s，隨后連續(xù)進(jìn)行2 次沖洗，將玻片取出，分別用乙醇、二甲苯進(jìn)行脫水與透明處理后封片。

胸水細(xì)胞蠟塊與免疫組化檢查：將上述檢查完成后剩余的50 ml 胸水樣本與保存液充分混合均勻，在4℃環(huán)境下靜置一段時(shí)間，監(jiān)測(cè)細(xì)胞沉淀情況，待其完全沉淀即可，將上清液去除，進(jìn)行離心處理（2000 r/min，5 min），取5 ml 福爾馬林溶液與離心處理后的沉淀物混合均勻，再次進(jìn)行離心處理（2000 r/min，5 min），完成后將沉淀物取出，用95%乙醇進(jìn)行脫水處理，再次進(jìn)行離心處理（2000 r/min，5 min），用擦鏡紙妥善包裹后，進(jìn)行脫水處理，隨后包埋、切片。細(xì)胞蠟塊的免疫組化染色操作采用MaxVision 二步法，之后將蠟塊 切成蠟片，厚度為3 μm，裱片使用防脫玻片，隨后分別用二甲苯與常規(guī)梯度乙醇進(jìn)行脫蠟、水化處理，完成后進(jìn)行高壓修復(fù)，于3% H2O2室溫下靜置，時(shí)間為10 min，之后一抗、二抗在37℃環(huán)境下分別孵育60 min、15 min，行DAB 顯色，時(shí)間設(shè)定為10 min，通過(guò)流水持續(xù)沖洗使染色終止，隨后蘇木素染色、PBS 返藍(lán)，分別用乙醇、二甲苯進(jìn)行脫水與透明處理后封片。

1.3 觀察指標(biāo) 以病理檢查結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)估薄層液基細(xì)胞學(xué)檢查、胸水細(xì)胞蠟塊與免疫組化檢查診斷肺癌的檢出率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SPSS 27.0 軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料符合正態(tài)分布以表示行t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以n（%）表示行χ2檢驗(yàn)。P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 薄層液基細(xì)胞學(xué)檢查診斷肺癌的效能分析 薄層液基細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果顯示，93 例為惡性，占比73.81%；33 例為良性，占比26.19%。以病理檢查結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，則薄層液基細(xì)胞學(xué)檢查的靈敏度為80.95%（85/105），特異度為61.90%（13/21），準(zhǔn)確度為77.78%（98/126），陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為91.40%（85/93），陰性預(yù)測(cè)值為39.39%（13/33），見(jiàn)表1。

表1 薄層液基細(xì)胞學(xué)檢查診斷肺癌的結(jié)果（例）

2.2 胸水細(xì)胞蠟塊與免疫組化檢查診斷肺癌的效能分析 胸水細(xì)胞蠟塊與免疫組化檢查結(jié)果顯示，103 例為惡性，占比81.75%；23 例為良性，占比18.25%。以病理檢查結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，則胸水細(xì)胞蠟塊與免疫組化檢查的靈敏度為96.19%（101/105），特異度為90.48%（19/21），準(zhǔn)確度為95.24%（120/126），陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為98.06%（101/103），陰性預(yù)測(cè)值為82.61%（19/23），見(jiàn)表2。

表2 胸水細(xì)胞蠟塊與免疫組化檢查診斷肺癌的結(jié)果（例）

2.3 不同檢查方法診斷肺癌的效能比較 相較薄層液基細(xì)胞學(xué)檢查，胸水細(xì)胞蠟塊與免疫組化檢查靈敏度（P＜0.001）、特異度（P=0.030）、準(zhǔn)確度（P＜0.001）及陰性預(yù)測(cè)值（P＜0.001）均更高，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.073）。

2.4 胸水細(xì)胞蠟塊與免疫組化檢查對(duì)肺癌不同分型的檢出率分析 胸水細(xì)胞蠟塊與免疫組化檢查診斷腺癌的檢出率為96.00%（72/74），診斷鱗癌的檢出率為90.00%（18/20），診斷鱗腺癌的檢出率為75.00%（6/8），診斷未分化癌的檢出率為0，診斷肺癌不同分型的整體檢出率為91.43%（96/105），見(jiàn)表3。

表3 胸水細(xì)胞蠟塊與免疫組化檢查對(duì)肺癌不同分型的檢出率分析

3 討論

胸腔積液是晚期肺癌的典型癥狀之一，臨床上通過(guò)影像學(xué)技術(shù)對(duì)患者漿膜腔積液進(jìn)行觀察時(shí)會(huì)受到積液的嚴(yán)重干擾，在這種情況下很難對(duì)腫瘤病灶進(jìn)行準(zhǔn)確觀察，并且獲取腫瘤組織標(biāo)本的途徑有限，主要通過(guò)采集漿膜腔積液進(jìn)行病理學(xué)檢查，以此明確是否為惡性病變[4]。液基細(xì)胞學(xué)檢查在臨床上有較長(zhǎng)的應(yīng)用歷史，近年來(lái)在漿膜腔積液檢測(cè)中也開(kāi)始逐漸推廣[5]。薄層液基細(xì)胞學(xué)檢查相比普通涂片，其優(yōu)勢(shì)主要體現(xiàn)在涂片厚度較薄且均勻，能夠清晰觀察細(xì)胞各部分結(jié)構(gòu)，特別是背景比較干凈，能夠?qū)?xì)胞各部分情況進(jìn)行三維立體觀察，因此能夠較好的診斷肺癌[6]。但在實(shí)際應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)該檢查方式由于自身特點(diǎn)的限制，缺乏較高的敏感性與特異性，主要是因?yàn)椴捎迷摲绞街苽浼?xì)胞時(shí)會(huì)影響原來(lái)的細(xì)胞排列方式，并且會(huì)失去背景細(xì)胞，受此影響導(dǎo)致其難以準(zhǔn)確鑒別包括未分化癌在內(nèi)的一些惡性?。煌瑫r(shí)其缺乏較高的免疫組化染色率，并且標(biāo)本保存時(shí)間也較短[7]。

改良細(xì)胞蠟塊技術(shù)是通過(guò)去除經(jīng)離心處理后富集標(biāo)本中的血細(xì)胞，在此基礎(chǔ)上分別以不同的溶液固定，主要為福爾馬林、乙醇，完成以上步驟后進(jìn)行脫水處理，以石蠟包埋制片。與常規(guī)薄層液基細(xì)胞學(xué)檢查相比，細(xì)胞蠟塊與免疫組化檢查的優(yōu)勢(shì)主要在于，進(jìn)行固定處理時(shí)所使用的福爾馬林、乙醇與一般固定液相比，能夠獲得更好的細(xì)胞形態(tài)固定效果，對(duì)細(xì)胞不同部位的結(jié)構(gòu)進(jìn)行更加清晰地顯示，同時(shí)還能夠維持松散細(xì)胞避免其過(guò)度散開(kāi)，可有效固定細(xì)胞核結(jié)構(gòu)，并保留細(xì)胞中大部分抗原活性，其制片效果更加接近于組織學(xué)樣本[8]。在本研究中，胸水細(xì)胞蠟塊與免疫組化檢查靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度及陰性預(yù)測(cè)值較薄層液基細(xì)胞學(xué)檢查均更高（P＜0.05），且對(duì)不同分型的肺癌整體診斷準(zhǔn)確率達(dá)到91.43%，提示胸水細(xì)胞蠟塊與免疫組化檢查診斷肺癌的效能更高，且能夠有效辨別不同類(lèi)型的肺癌病變。在實(shí)際臨床檢查工作中聯(lián)用液基細(xì)胞學(xué)檢查與細(xì)胞蠟塊技術(shù)，可取長(zhǎng)補(bǔ)短解決單項(xiàng)檢查存在的缺陷和不足，能夠使診斷效能進(jìn)一步提高，同時(shí)還能夠指導(dǎo)腫瘤的組織學(xué)分型，并為患者的臨床治療提供依據(jù)[9]。常規(guī)細(xì)胞學(xué)檢查對(duì)于存在胸腔積液癥狀的晚期肺癌患者，一般只能夠明確其是否為惡性病變，而無(wú)法確定原發(fā)病灶。而細(xì)胞蠟塊切片能夠反復(fù)切片，可在其他檢查中發(fā)揮輔助診斷作用，且能夠利用其提供的信息幫助尋找原發(fā)病灶，同時(shí)可通過(guò)明確組織分型，為臨床分子靶向治療提供指導(dǎo)，對(duì)于難以獲取組織標(biāo)本的晚期肺癌患者采用該檢查方式具有多方面的優(yōu)勢(shì)[10]。

綜上所述，胸水細(xì)胞蠟塊與免疫組化診斷肺癌的敏感性與特異性較高，且對(duì)不同類(lèi)型肺癌能夠進(jìn)行有效診斷，具有較高的準(zhǔn)確率。但本研究也存在自身局限性，主要在于觀察時(shí)段和病例數(shù)有限，因而所得結(jié)論的代表性有待于進(jìn)一步的大樣本驗(yàn)證分析。