基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討當歸芍藥散治療女性青春期后痤瘡的作用機制

關(guān)鍵詞：網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)；當歸芍藥散；女性青春期后痤瘡

中圖分類號：R758.73+3文獻標志碼：A文章編號：1007-2349（2024）03-0064-06

痤瘡是一種慢性炎癥性毛囊皮脂腺疾病，影響全球約9%的人［1］，具有發(fā)病率高、好反復(fù)、易留瘢痕等特點。近年來，現(xiàn)代女性受生活節(jié)奏、工作壓力、飲食習(xí)慣、情緒、睡眠等多因素的影響，其患病率逐年上升，且往往兼見月經(jīng)失調(diào)之癥。

女子以肝為先天，一方面，肝主血，肝血不足，血行不暢，則氣瘀滯，故發(fā)為月經(jīng)不調(diào)［2］；另一方面，肝主情志，情志不暢，肝失疏泄，氣機逆亂，氣血失合，臟腑失用，內(nèi)生瘀血、痰濕，郁滯皮膚發(fā)為痤瘡［3］，故治療女性青春期后痤瘡應(yīng)以肝為本，兼顧祛濕、活血。

當歸芍藥散既能養(yǎng)血疏肝，又能健脾滲濕，高金娟等［3-4］等均通過臨床觀察發(fā)現(xiàn)當歸芍藥散治療痤瘡療效確切。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是涉及多個學(xué)科的一種綜合計算機方法，通過建立“靶點蛋白-疾病-藥物”網(wǎng)絡(luò)，能系統(tǒng)、整體地揭示藥物對疾病的影響［5］，故本研究運用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法，探討當歸芍藥散治療女性青春期后痤瘡的相關(guān)機制。

1資料與方法

1.1篩選活性成分與靶點登錄TCMSP數(shù)據(jù)庫（https：//old.tcmsp-e.com/tcmsp.php），以口服利用度（OB）≥30%和類藥性（DL）≥0.18為標準，查找白芍、川芎、當歸、白術(shù)、澤瀉、茯苓6味中藥的化學(xué)成分及相關(guān)靶點，再利用UniProt（https：//www.uniprot.org）數(shù)據(jù)庫，將篩選后的靶點統(tǒng)一進行規(guī)范。

1.2篩選痤瘡相關(guān)靶點登錄GeneCard數(shù)據(jù)庫（https：//www.genecards.org），因青春期后痤瘡屬于痤瘡范疇，故不更改關(guān)鍵詞，仍為“acne”，挖掘數(shù)據(jù)庫里治療痤瘡的潛在靶點。在Genecards數(shù)據(jù)庫中，靶點與疾病的聯(lián)系越緊密，Score值越高。據(jù)經(jīng)驗，選擇大于中位數(shù)的Score值對應(yīng)的目標靶點為痤瘡的潛在靶點。

1.3獲取當歸芍藥散-痤瘡交集靶點對復(fù)方的相關(guān)靶點與痤瘡靶點取交集，結(jié)果用韋恩圖（http：//jvenn.toulouse.inra.fr）呈現(xiàn)，并將圖中結(jié)果提取記錄，獲得當歸芍藥散治療痤瘡的主要作用靶點。

1.4構(gòu)建蛋白質(zhì)相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)將上述潛在靶點提交至STRING11.0數(shù)據(jù)庫（https：//string-db.org）構(gòu)建蛋白互作（PPI）網(wǎng)絡(luò)模型，物種為“人類物種”，選擇 “最高可信度（0.900）”，其余設(shè)置均不變，得到PPI網(wǎng)絡(luò)，并運用Cytoscape3.7.2軟件對網(wǎng)絡(luò)進行可視化。

1.5構(gòu)建活性成分-靶點網(wǎng)絡(luò)圖準備“中藥-成分”、“成分-靶點”屬性文檔，將其導(dǎo)入Cytoscape 3.7.2軟件，構(gòu)建“當歸芍藥散治療痤瘡的活性成分-靶點”網(wǎng)絡(luò)圖。

1.6富集分析登入Metascape平臺（http：//metascape.org/gp/index.html），將當歸芍藥散治療沖任失調(diào)型痤瘡的潛在靶點上傳，進行GO功能和KEGG通路富集分析，物種選擇“sapiens”，設(shè)置Plt;0.01，借助微生信在線工具（http：//www.bioinformatics.com.cn/）將數(shù)據(jù)視圖化。

2結(jié)果

2.1當歸芍藥散有效成分與靶點在TCMSP檢索到當歸芍藥散包含山奈酚、肉豆蔻酮、β-谷甾醇等共54個有效活性成分，見表1。將符合篩選條件的靶點去重后，共得到相關(guān)靶點112個。

2.2“當歸芍藥散-痤瘡”共同靶點利用GeneCards數(shù)據(jù)庫得到痤瘡靶點Score最大值為56.37，最小值為0.14，中位數(shù)為0.64，最終得到781個Scoregt;0.64的潛在靶點。將篩選的當歸芍藥散活性成分靶點與痤瘡靶點取交集后繪制韋恩圖，得到當歸芍藥散成分-痤瘡共同靶點33個，見圖1。

2.5GO功能和KEGG通路富集分析登錄Metascape平臺，對共有靶點進行GO功能與KEGG通路富集分析，根據(jù)P值，將各部分的前10個條目借助微生信在線工具可視化（見圖4）。結(jié)果顯示，生物過程富集化比例較大表現(xiàn)在對激素的反應(yīng)（response to hormone）、對脂多糖的反應(yīng)（response to lipopolysaccharide）等，分子功能主要是核受體活性（nuclear receptor activity），細胞組分為膜筏（membrane raft）。KEGG通路涉及脂質(zhì)與動脈粥樣硬化、癌癥通路等，見圖5。

3討論

痤瘡是皮膚科常見病之一，其炎癥消退后的色素沉著及紅斑會對患者造成較大影響。近年來，女性需扮演的社會角色漸增，其患病率呈升高趨勢。大部分患者發(fā)病與月經(jīng)周期相關(guān)，經(jīng)前或來潮時皮疹增多，經(jīng)后減輕。中醫(yī)認為受特殊生理周期、不規(guī)律作息、工作壓力大等的影響，現(xiàn)代女性易造成肝郁血虛；肝氣乘脾，脾失健運，內(nèi)生水濕，郁滯皮膚而發(fā)病。當歸芍藥散源于《金匱要略》，方由白芍、川芎、當歸、白術(shù)、澤瀉、茯苓組成。方以白芍為君，其有健脾柔肝、養(yǎng)血調(diào)經(jīng)的作用［4］，肝主藏血，故肝體為陰，白芍柔肝養(yǎng)陰，使肝體得養(yǎng)，肝氣得疏。川芎、當歸共為臣藥，川芎辛溫，為“血中氣藥”，善走血海而活血祛瘀，且還有下調(diào)經(jīng)水，中開郁結(jié)之功；當歸養(yǎng)血活血，既助川芎行氣化瘀，又合白芍養(yǎng)血柔肝以治肝血不足［7］，白芍性靜而守，當歸性動而走，二藥相伍，養(yǎng)血斂陰不易血滯，活血不致動血傷陰［3］；白術(shù)、茯苓、澤瀉同為佐藥，此三者調(diào)津以益脾，促進氣血生化，使滋養(yǎng)肝體的陰血來源充足?？v觀全方，方中當歸、白芍、川芎三者疏土之壅塞；茯苓、白術(shù)、澤瀉三者滲木中濕滯［2］，共奏養(yǎng)血調(diào)肝、健脾利濕之功。

本研究初步篩選出當歸芍藥散治療女性青春期后痤瘡的主要活性成分為山柰酚、β-谷甾醇、肉豆蔻酮等。前列腺素可使皮脂腺細胞異常增生、皮脂過度分泌，故與表皮炎癥性疾病密切相關(guān)。山奈酚通過抑制前列腺素合成達到治療目的。亦有研究顯示，山柰酚可以使傳導(dǎo)信號和激活轉(zhuǎn)錄的信號因子（STAT3）、核轉(zhuǎn)錄因子kappaB（NF-kB）失活，通過降低NF-kB、IL-6和TNF-α水平發(fā)揮抗炎作用［8］。雌激素及孕激素的下降減弱了對雄激素的抑制，過高的雄激素會導(dǎo)致皮脂腺分泌過多皮脂或異常成分，促使炎癥產(chǎn)生、毛囊皮脂腺角化過度而發(fā)病［9］。有研究表明［10］，β-谷甾醇能與膽汁酸核受體FXRα結(jié)合，而FXRα與雌激素信號通路具有相關(guān)性，亦有實驗發(fā)現(xiàn)［11］β-谷甾醇能平衡激素水平，從而在調(diào)節(jié)激素水平的角度治療痤瘡。此外，β-谷甾醇還能通過抑制TNF-α釋放而減弱脂多糖誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。肉豆蔻酮屬于環(huán)狀二芳基庚烷類化合物，具有抗炎、抗氧化、抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫等作用［12］。此三者功效契合痤瘡的發(fā)病機制，成為痤瘡治療中的重要部分。

痤瘡發(fā)病始終伴隨炎癥反應(yīng)。腫瘤壞死因子是強大的前炎性因子，通過誘導(dǎo)炎性細胞釋放炎性介質(zhì)、激活中性粒細胞使局部炎癥增強［13］。白細胞介素-6同樣能趨化、激活多類炎癥細胞，研究表明［14］痤瘡患者血清中TNF、IL-6水平明顯高于健康對照組，提示二者均參與了痤瘡的炎癥反應(yīng)。視黃酸又稱維甲酸（retinoic acid，RA），RXRA是皮膚中RXR亞型含量最高的為一種RA受體，維甲酸類利用其調(diào)節(jié)皮脂腺活性、免疫和抗炎的特性達到治療痤瘡的效果［15］。激活的NR3C1（GR）復(fù)合物能上調(diào)細胞核中抗炎蛋白的表達，其被抑制后則驅(qū)動炎癥反應(yīng)。血管細胞黏附分子1主要介導(dǎo)炎癥細胞向炎癥部分募集，導(dǎo)致炎癥反應(yīng)的出現(xiàn)。

痤瘡發(fā)病機制包括激素水平紊亂，如雄激素、胰島素樣生長因子 1（IGF-1）、雌激素、糖皮質(zhì)激素等。炎癥因子水平與雄激素水平呈正相關(guān)，研究發(fā)現(xiàn)女性青春期后痤瘡患者血清睪酮水平顯著高于對照組正常女性。IGF-1誘導(dǎo)腎上腺和性腺分泌雄激素，進而影響皮脂腺生理功能，雷興等［16］研究顯示痤瘡組 IGF-1α表達程度高于正常對照組。脂多糖能激活巨噬細胞，促使其大量分泌炎癥因子（TNF-α、IL-1β和IL-6）引起炎癥反應(yīng)，這在張琳珮、劉栩渤等［17-18］實驗中均得到驗證。KEGG通路富集分析顯示，當歸芍藥散可能通過脂質(zhì)與動脈粥樣硬化、癌癥通路等途徑來干預(yù)女性青春期后痤瘡。痤瘡發(fā)病的固有免疫之一為Toll 樣受體（TLR）的參與，巨噬細胞是動脈粥樣硬化斑塊中炎癥和代謝信號的關(guān)鍵整合因子，其脂質(zhì)含量同樣通過增加Toll樣受體對其配體的敏感性和激活NLRP3炎癥小體來影響?zhàn)畀彽陌l(fā)病和嚴重程度。

本研究運用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法初步探討了當歸芍藥散治療女性青春期后痤瘡的主要機制。但鑒于此方法學(xué)本身的局限性，以及中藥成分在不同地域、不同時期、不同煎煮方法下存在差異，本研究未將方藥煎煮后的化學(xué)成分及其活性成分一并納入。本研究主要以綜合多個數(shù)據(jù)庫和算法的結(jié)果為基礎(chǔ)，后續(xù)應(yīng)在此基礎(chǔ)上利用細胞或動物實驗進一步驗證，從而明晰當歸芍藥散治療女性青春期后痤瘡的主要調(diào)控靶點。參考文獻：

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