急性缺血性腦卒中早期腦損傷病人腦脊液ICAM-1、MLKL表達(dá)及臨床意義

朱洋洋 劉夢 楊道迪 方敬獻(xiàn)

摘要 目的：探討急性缺血性腦卒中早期腦損傷病人蛋白激酶樣結(jié)構(gòu)域（MLKL）與細(xì)胞間黏附分子1（ICAM-1）表達(dá)的關(guān)系。方法：選取2019年5月—2021年5月于我院就診的120例缺血性腦卒中病人作為研究對象，另選取同期進(jìn)行健康體檢的志愿者120名作為對照組，檢測兩組病人的ICAM-1、分別對兩組腎素、腎上腺素、血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）及去甲腎上腺素、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子（TNF-α）以及白細(xì)胞介素6（IL-6）水平，并分析其與MLKL的相關(guān)性。結(jié)果：觀察組病人的ICAM-1、MLKL、IL-1β、TNF-α、IL-6、腎素、腎上腺素、AngⅡ、去甲腎上腺素明顯高于對照組（P＜0.05）；相關(guān)性分析顯示，ICAM-1、腎素、腎上腺素、AngⅡ、去甲腎上腺素、IL-1β、TNF-α、IL-6與MLKL均呈正相關(guān)（P＜0.05）。結(jié)論：MLKL與急性缺血性腦卒中早期腦損傷中ICAM-1表達(dá)的呈現(xiàn)明顯的相關(guān)性，可作為早期急性缺血性腦卒中腦損傷的重要標(biāo)志物之一。

關(guān)鍵詞 急性缺血性腦卒中；蛋白激酶樣結(jié)構(gòu)域；細(xì)胞間黏附分子1；相關(guān)性

doi：10.12102/j.issn.1672-1349.2024.03.031

作者單位 南陽市第一人民醫(yī)院（河南南陽473000）

通訊作者 方敬獻(xiàn)，E-mail：nanyangshennei@163.com

引用信息 朱洋洋，劉夢，楊道迪，等.急性缺血性腦卒中早期腦損傷病人腦脊液ICAM-1、MLKL表達(dá)及臨床意義［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2024，22（3）：561-563.

在缺血性腦卒中的疾病進(jìn)展中，腦組織細(xì)胞凋亡、壞死及自噬^［1］。根據(jù)國際細(xì)胞死亡分類命名委員會的規(guī)定，漿細(xì)胞的死亡方式分為意外死亡及生理性死亡^［2］。意外死亡主要是由于細(xì)胞受到意外的刺激，細(xì)胞內(nèi)的主動程序性死亡控制失控造成的細(xì)胞死亡；調(diào)節(jié)性細(xì)胞死亡則主要是程序性細(xì)胞死亡過程，該種細(xì)胞死亡過程受過多重信號轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)控^［3］。機(jī)體腦細(xì)胞以及神經(jīng)元細(xì)胞的凋亡及自噬過程就是調(diào)節(jié)性死亡模式^［4］。在程序性細(xì)胞死亡過程中，腦組織及神經(jīng)元細(xì)胞膜上的死亡受體的激活，會進(jìn)一步促進(jìn)程序性壞死，激活受體相互作用蛋白及關(guān)鍵底物混合系列蛋白激酶樣結(jié)構(gòu)域（mixed lineage kinase domain-likeprotein，MLKL）的信號通路，造成細(xì)胞完整性、線粒體的功能及自由基功能的異常，細(xì)胞發(fā)生壞死的風(fēng)險(xiǎn)升高^［5］。細(xì)胞間黏附分子1（intercellular cell adhesion molecule-1，ICAM-1）是機(jī)體腦組織細(xì)胞及炎性細(xì)胞黏附的重要蛋白，在腦卒中疾病的進(jìn)展中發(fā)揮重要作用^［6］。本研究主要通過MLKL與急性缺血性腦卒中早期腦損傷中ICAM-1表達(dá)的關(guān)系研究，以期指導(dǎo)臨床診斷以及治療。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究為前瞻性研究，選取2019年5月—2021年5月于我院就診的早期缺血性腦卒中病人120例作為研究對象，其中，男69例，女51例，年齡45～68（60.38±3.18）歲，體質(zhì)指數(shù)（24.55±2.13）kg/m²；另選取同期于我院進(jìn)行健康體檢的志愿者120名作為對照組，其中，男65名，女55名，年齡45～67（60.45±3.11）歲，體質(zhì)指數(shù)（24.66±2.03）kg/m²，兩組一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。本研究經(jīng)我院倫理委員會批準(zhǔn)，所有研究對象均簽署知情同意書。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：符合缺血性腦卒中診斷標(biāo)準(zhǔn)^［7］；從發(fā)病至入院時(shí)間＜12 h。排除標(biāo)準(zhǔn)：出血性腦梗死者；大面積梗死者；存在顱內(nèi)感染或腫瘤者；失語、右側(cè)肢體癱瘓者；對本研究藥物過敏或不耐受者。

1.3 方法

采集所有研究對象入組后腦脊液4mL，15000 r/min離心，加入細(xì)胞裂解液（北京索萊寶生物有限公司）提取總蛋白，檢測濃度及純度，沸水變性5 min，配膠，加入蛋白樣品80 μg，電泳、轉(zhuǎn)膜，脫脂奶粉室溫封閉1 h，加入1∶1 000 MLKL（Abcam公司）及三磷酸甘油醛脫氫酶（Abcam公司）4 ℃孵育24 h，次日加入1∶5 000的辣根過氧化酶標(biāo)記的二抗（Abcam公司）室溫孵育1 h，曝光，Inage J軟件分析MLKL水平。采用酶聯(lián)免疫法檢測血清ICAM-1水平，檢測試劑購自上海羅氏。炎性反應(yīng)指標(biāo)采用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法進(jìn)行檢測，檢測試劑購自上海羅氏試劑有限公司，操作流程嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

1.4 觀察指標(biāo)

對比兩組MLKL、ICAM-1水平；白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子（TNF-α）及白細(xì)胞介素6（IL-6）水平；腎素、腎上腺素、血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）及去甲腎上腺素（NE）水平。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。符合正態(tài)分布的定量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x^-±s）表示，采用t檢驗(yàn)。定性資料以例數(shù)或百分比（%）表示，采用χ²檢驗(yàn)。采用Spearman相關(guān)分析進(jìn)行相關(guān)性分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組ICAM-1、MLKL水平比較

觀察組病人ICAM-1、MLKL水平明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。詳見表1。

2.2 兩組IL-1β、TNF-α、IL-6比較

觀察組IL-1β、TNF-α、IL-6水平高于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。詳見表2。

2.3 兩組腎素、腎上腺素、AngⅡ、去甲腎上腺素比較

觀察組病人的腎素、腎上腺素、AngⅡ、去甲腎上腺素水平高于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。詳見表3。

2.4 相關(guān)性分析

相關(guān)性分析顯示，缺血性腦卒中病人ICAM-1、腎素、腎上腺素、AngⅡ、去甲腎上腺素、IL-1β、TNF-α、IL-6水平與MLKL水平呈正相關(guān)（P＜0.001）。詳見表4。

3 討 論

缺血性腦卒中是臨床較為常見的心腦血管疾病之一^［8］。研究顯示，在疾病的進(jìn)展中，程序性細(xì)胞壞死在疾病進(jìn)展中發(fā)揮重要作用^［9］。研究發(fā)現(xiàn)，腦細(xì)胞出現(xiàn)凋亡有兩個(gè)重要的前提，首先細(xì)胞能夠高表達(dá)蛋白激酶，同時(shí)Caspase-8的活性受到抑制性，而在蛋白激酶的激活過程中，干擾素受體及Toll樣受體發(fā)揮重要作用^［10-11］。蛋白激酶激活后可導(dǎo)致局部炎性反應(yīng)及氧化應(yīng)激反應(yīng)水平明顯升高，反過來TNF-α與其受體的相互結(jié)合，進(jìn)一步促進(jìn)蛋白激酶的募集，細(xì)胞內(nèi)的凋亡抑制蛋白的合成受限，促進(jìn)腦細(xì)胞凋亡^［12-15］。同時(shí)，炎性反應(yīng)及氧化應(yīng)激反應(yīng)還會導(dǎo)致MLKL磷酸化水平升高，激活下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，促進(jìn)細(xì)胞凋亡^［16］。

本研究結(jié)果顯示，觀察組病人的各項(xiàng)指標(biāo)明顯高于對照組，分析認(rèn)為，在機(jī)體過高的氧化應(yīng)激反應(yīng)水平以及炎性反應(yīng)水平的持續(xù)干擾下，細(xì)胞的MLKL水平呈現(xiàn)明顯上升趨勢，而該種蛋白的明顯升高，進(jìn)一步與激活受體相互作用蛋白激酶相互結(jié)合形成壞死小體，當(dāng)過量的激活受體相互作用蛋白激酶以及MLKL在機(jī)體的腦組織細(xì)胞膜上聚集，線粒體的膜電位發(fā)生去極化，線粒體的功能明顯受損，加速腦細(xì)胞的程序化凋亡程序的啟動^［17-18］。而在程序性凋亡的啟動過程中，由于炎性刺激，血管內(nèi)皮細(xì)胞高表達(dá)ICAM-1，進(jìn)一步導(dǎo)致局部病灶部位的白細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的黏附。因此，在急性缺血性腦卒中早期，通過MLKL及MLKL水平的檢測，可以評估腦細(xì)胞凋亡及缺血缺氧狀態(tài)，對于早期腦損傷的判斷具有重要意義。本研究結(jié)果顯示，ICAM-1、腎素、腎上腺素、AngⅡ、去甲腎上腺素、IL-1β、TNF-α、IL-6與MLKL均呈正相關(guān)，提示機(jī)體腦組織細(xì)胞的程序化凋亡程序的啟動與局部病灶部位的氧化應(yīng)激反應(yīng)以及炎性反應(yīng)呈現(xiàn)明顯的相關(guān)性，可作為腦損傷早期的重要標(biāo)志。

綜上所述，MLKL與急性缺血性腦卒中早期腦損傷中ICAM-1表達(dá)的呈明顯相關(guān)，可作為早期急性缺血性腦卒中腦損傷的重要標(biāo)志物之一。

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（收稿日期：2022-07-26）

（本文編輯 鄒麗）