右美托咪定對大鼠坐骨神經(jīng)阻滯及LRRC4/SDF-1/CXCR4信號通路的影響

鐘占鵬 吳艷 高彪華

摘要? 目的：研究右美托咪定對大鼠坐骨神經(jīng)阻滯及富含亮氨酸重復(fù)序列C4蛋白（LRRC4）/基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1（SDF-1）/CXC趨化因子受體4（CXCR4）信號通路的影響。方法：取60只Wistar大鼠構(gòu)建坐骨神經(jīng)慢性結(jié)扎損傷（CCI）模型，以隨機(jī)數(shù)字表法分為5組：模型組、右美托咪定（3 μg/kg）組、LRRC4 siRNA質(zhì)粒組、空載質(zhì)粒組、右美托咪定（3 μg/kg）＋LRRC4 siRNA質(zhì)粒組；另選12只大鼠只暴露坐骨神經(jīng)，不結(jié)扎，作為假手術(shù)組。大鼠以3 μg/kg的右美托咪定和LRRC4 siRNA質(zhì)粒分組經(jīng)留置管鞘內(nèi)給藥干預(yù)后，檢測大鼠疼痛癥狀，比較機(jī)械縮足閾值和熱縮足潛伏期；檢測大鼠坐骨神經(jīng)阻滯持續(xù)時(shí)間，比較其運(yùn)動和感覺阻滯持續(xù)時(shí)間；以試劑盒測定大鼠血清炎性因子前列腺素E2（PGE2）、白細(xì)胞介素-18（IL-18）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）水平和脊髓組織氧化應(yīng)激因子超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）水平；以實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qRT-PCR）實(shí)驗(yàn)檢測大鼠脊髓組織LRRC4、SDF-1及CXCR4 mRNA表達(dá)水平；以免疫印跡法檢測大鼠脊髓組織LRRC4/SDF-1/CXCR4信號通路蛋白表達(dá)水平。結(jié)果：與假手術(shù)組比較，模型組大鼠機(jī)械縮足閾值、熱縮足潛伏期、脊髓組織SOD、GSH-Px、LRRC4 mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯降低（P＜0.05），血清PGE2、IL-18和IL-6水平、脊髓組織MDA水平、SDF-1、CXCR4 mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯升高（P＜0.05）。與模型組、右美托咪定＋LRRC4 siRNA質(zhì)粒組分別比較，右美托咪定組大鼠機(jī)械縮足閾值、熱縮足潛伏期、坐骨神經(jīng)運(yùn)動和感覺阻滯持續(xù)時(shí)間、脊髓組織SOD、GSH-Px、LRRC4 mRNA和蛋白表達(dá)水平均升高（P＜0.05），血清PGE2、IL-18和IL-6水平、脊髓組織MDA水平、SDF-1、CXCR4 mRNA和蛋白表達(dá)水平均降低（P＜0.05）；LRRC4 siRNA質(zhì)粒組大鼠機(jī)械縮足閾值、熱縮足潛伏期、脊髓組織SOD、GSH-Px、LRRC4 mRNA和蛋白表達(dá)水平均降低（P＜0.05），血清PGE2、IL-18和IL-6水平、脊髓組織MDA水平、SDF-1、CXCR4 mRNA和蛋白表達(dá)水平均升高（P＜0.05）；空載質(zhì)粒組大鼠各指標(biāo)水平差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論：右美托咪定可通過上調(diào)LRRC4表達(dá)，抑制SDF-1/CXCR4信號激活，從而增強(qiáng)坐骨神經(jīng)阻滯，抵抗炎癥和氧化應(yīng)激反應(yīng)，明顯減輕CCI大鼠疼痛癥狀。

關(guān)鍵詞? 坐骨神經(jīng)阻滯；慢性壓迫性神經(jīng)損傷；富含亮氨酸重復(fù)序列C4蛋白；基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1；CXC趨化因子受體4；右美托咪定；實(shí)驗(yàn)研究

doi：10.12102/j.issn.1672-1349.2024.02.014

作者單位? 慶陽市第二人民醫(yī)院（甘肅慶陽 745000）

通訊作者? 高彪華，E-mail：495964167@qq.com

引用信息? 鐘占鵬，吳艷，高彪華.右美托咪定對大鼠坐骨神經(jīng)阻滯及LRRC4/SDF-1/CXCR4信號通路的影響［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2024，22（2）：286-291.

神經(jīng)性疼痛（neuropathic pain，NP）是一種持續(xù)性、自發(fā)性痛覺超敏疾病，多是由神經(jīng)系統(tǒng)受損引發(fā)，可造成病人長期的劇烈疼痛，極大地威脅其正常工作、生活和身心健康［1-2］。通過注射麻醉藥至坐骨神經(jīng)旁來阻滯其神經(jīng)傳導(dǎo)功能，暫時(shí)可達(dá)到手術(shù)無痛的目的，也可用于治療神經(jīng)性疼痛［3］。右美托咪定是進(jìn)行外周神經(jīng)阻滯常用的局部麻醉輔佐劑，還具有抗炎鎮(zhèn)痛、抗焦慮及鎮(zhèn)靜的功效［4］，可顯著減輕大鼠神經(jīng)病理性痛覺超敏癥狀［5］。神經(jīng)性疼痛的發(fā)病過程與小膠質(zhì)細(xì)胞激活、氧化應(yīng)激、神經(jīng)炎癥密切相關(guān)，抑制氧化應(yīng)激、炎癥可明顯減輕痛覺超敏，是神經(jīng)性疼痛的有效治療手法［6-7］。基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1（stromal cell-derived factor-1，SDF-1），又叫重組人趨化因子12（recombinant human C-X-C motif chemokine 12，CXCL12），可結(jié)合CXC趨化因子受體4（CXC chemokine receptor-4，CXCR4）調(diào)控神經(jīng)炎癥，進(jìn)而參與介導(dǎo)神經(jīng)性疼痛的發(fā)生及病情進(jìn)展過程，下調(diào)SDF-1、CXCR4表達(dá)可抑制神經(jīng)損傷引發(fā)的炎癥，降低神經(jīng)病變導(dǎo)致的痛覺超敏［8-9］。富含亮氨酸重復(fù)序列C4蛋白（leucine-rich repeat containing 4，LRRC4）可直接介導(dǎo)SDF-1/CXCR4信號傳導(dǎo)過程，降低LRRC4的表達(dá)可激活SDF-1/CXCR4通路［10］。由此可知，LRRC4/SDF-1/CXCR4信號是具有很好應(yīng)用前景的神經(jīng)性疼痛潛在治療靶點(diǎn)。本研究通過構(gòu)建坐骨神經(jīng)慢性結(jié)扎損傷（CCI）大鼠模型，研究右美托咪定對大鼠坐骨神經(jīng)阻滯及LRRC4/SDF-1/CXCR4信號通路的影響。

1? 材料與方法

1.1? 材料

1.1.1? 實(shí)驗(yàn)動物

Wistar大鼠，雄性，體質(zhì)量（210±15）g，無特定病原體（SPF）級，購自長沙市天勤生物技術(shù)有限公司［SCXK（湘）2019-0013］。所有大鼠分籠適應(yīng)飼養(yǎng)在本院屏障環(huán)境動物房中，每籠4～6只，各種條件及操作嚴(yán)格遵照《中華人民共和國實(shí)驗(yàn)動物管理?xiàng)l例》進(jìn)行。

1.1.2? 試劑與儀器

鹽酸右美托咪定注射液［國藥準(zhǔn)字H20133331，規(guī)格1 mL（0.1 mg）］，由江蘇恩華藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)；總RNA提取試劑盒（R1200）、電化學(xué)發(fā)光（ECL）試劑盒（PE0010），由北京索萊寶科技有限公司生產(chǎn)；LRRC4 siRNA質(zhì)粒、空載質(zhì)粒、SDF-1、甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）、CXCR4及LRRC4引物、大鼠白細(xì)胞介素-6（interleukin-6，IL-6）酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）試劑盒（D731010）、一步法反轉(zhuǎn)錄熒光定量試劑盒（B639277-0100）、RIPA裂解液（C500005-0050），由生工生物工程（上海）股份有限公司生產(chǎn)；白細(xì)胞介素-18（interleukin-18，IL-18）測試盒（H015）、前列腺素E2（prostaglandin E2，PGE2）ELISA試劑盒（D751014），由南京建成生物工程研究所有限公司生產(chǎn)；二喹啉甲酸（bicinchoninic acid，BCA）蛋白定量試劑盒（P0012S）、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）試劑盒（S0056）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）試劑盒（S0109）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）試劑盒（S0131S），由上海碧云天生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)；兔源抗anti-CXCL12/SDF-1一抗（NBP2-29480），由上海優(yōu)寧維生物科技股份有限公司生產(chǎn)；兔源重組anti-CXCR4（ab124824）、兔源anti-β-Tubulin抗體（ab21058）、兔源anti-LRRC4抗體（ab111572）、羊抗兔二抗（ab150077），由美國Abcam公司等生產(chǎn)。

Von Frey纖毛機(jī)械刺激針、熱痛儀，由UGO公司（意大利）生產(chǎn)；Multiskan FC多功能酶標(biāo)儀、PICO17微量高速離心機(jī)、ND-2000C超微量核酸分析儀，由Thermo Fisher Science公司（美國）生產(chǎn)；ChemiDoc XRS＋化學(xué)發(fā)光成像分析系統(tǒng)、PowerPac Universal電泳儀、CFX96 Touch Deep Well熒光定量PCR儀、Trans-Blot SD轉(zhuǎn)膜儀等，由Bio-Rad公司（美國）等生產(chǎn)。

1.2? 方法

1.2.1? 制備CCI模型大鼠及分組給藥

取Wistar大鼠60只，參照文獻(xiàn)［11］制備坐骨神經(jīng)CCI模型：腹腔注射2.5%戊巴比妥鈉45 mg/kg，深度麻醉大鼠，于左側(cè)大腿處去毛、消毒、切開皮膚，分離股二頭肌后暴露坐骨神經(jīng)，以鉻制羊腸線對其結(jié)扎4圈，間距1 mm，結(jié)扎強(qiáng)度以導(dǎo)致大鼠小腿肌肉輕度顫動為宜，同時(shí)在結(jié)扎部位埋置1個(gè)聚乙烯導(dǎo)管，伸出背部皮膚固定在大鼠后頸部，縫合切口即完成造模，將模型隨機(jī)分為5組：模型組、右美托咪定（3 μg/kg）組、LRRC4 siRNA質(zhì)粒組、空載質(zhì)粒組、右美托咪定（3 μg/kg）＋LRRC4 siRNA質(zhì)粒組，另選12只大鼠只暴露坐骨神經(jīng)，不結(jié)扎，作為假手術(shù)組。

各組大鼠均經(jīng)留置管給藥，右美托咪定劑量為3 μg/kg［12］，LRRC4 siRNA質(zhì)粒、空載質(zhì)粒劑量參照說明書，均于手術(shù)第14天給藥1次，模型組和假手術(shù)組給予等劑量生理鹽水。

1.2.2? 檢測大鼠疼痛癥狀

給藥后30 min，隨機(jī)選取各組6只大鼠，安撫其安靜后，采用Von Frey纖毛機(jī)械刺激針刺激大鼠手術(shù)側(cè)足底6 s，力度以能使腳爪輕度彎曲為宜，探針克數(shù)由小至大分別刺激，當(dāng)大鼠舔爪或縮足時(shí)，表示大鼠出現(xiàn)疼痛反應(yīng)，此時(shí)探針克數(shù)即為機(jī)械縮足閾值，重復(fù)上述測量3次，取平均值。機(jī)械縮足閾值檢測結(jié)束后，安撫大鼠安靜，并將其放在熱痛儀的熱板上，溫度設(shè)定為43～45 ℃，當(dāng)大鼠撤回后肢或舔足時(shí)，表示大鼠出現(xiàn)疼痛反應(yīng)，記錄此時(shí)所用時(shí)間，即為熱縮足潛伏期，為避免受傷，大鼠在熱板上時(shí)間不超過60 s，若在60 s內(nèi)大鼠均未出現(xiàn)疼痛反應(yīng)，熱縮足潛伏期記為60 s，重復(fù)上述測量3次，取平均值。

1.2.3? 檢測大鼠坐骨神經(jīng)阻滯情況

給藥后30 min，各組剩余6只大鼠檢測坐骨神經(jīng)運(yùn)動和感覺功能恢復(fù)時(shí)間來評估大鼠坐骨神經(jīng)阻滯情況，運(yùn)動阻滯持續(xù)時(shí)間檢測：提起大鼠軀干，使后肢自由下垂，觀察其后足五趾展開情況，當(dāng)發(fā)現(xiàn)大鼠后足第五趾外展時(shí)，表明其坐骨神經(jīng)運(yùn)動功能恢復(fù)，記錄所用時(shí)間，即為坐骨神經(jīng)運(yùn)動阻滯持續(xù)時(shí)間（從給藥后30 min開始觀察計(jì)時(shí)）。感覺阻滯持續(xù)時(shí)間檢測：大鼠用藥前，以Von Frey纖毛機(jī)械刺激針測定大鼠機(jī)械縮足閾值，作為基礎(chǔ)值，待大鼠給藥并恢復(fù)運(yùn)動功能后，馬上再次測定大鼠機(jī)械縮足閾值，當(dāng)其與基礎(chǔ)值比較，無顯著差異時(shí)，表示其坐骨神經(jīng)感覺功能恢復(fù)，記錄所用時(shí)間，即為坐骨神經(jīng)感覺阻滯持續(xù)時(shí)間（從給藥后30 min開始觀察計(jì)時(shí)）。

1.2.4? 測定大鼠血清PGE2、IL-18、IL-6水平和脊髓組織SOD、GSH-Px、MDA水平

坐骨神經(jīng)阻滯情況與疼痛癥狀檢測結(jié)束后，以1.2.1中方法麻醉所有大鼠，自頸動脈采血、4 ℃離心（15 min，1 000×g），吸出各組上清，以試劑盒測出其中PGE2、IL-18、IL-6水平；處死各組大鼠，解剖分離出脊髓，剪下0.6 g脊髓組織，加生理鹽水勻漿、4 ℃離心（25 min，3 000×g），吸出各組上清，以試劑盒測出其中SOD、GSH-Px、MDA水平，具體操作均嚴(yán)格遵循各自試劑盒說明書指導(dǎo)進(jìn)行。

1.2.5? 測定大鼠脊髓組織LRRC4、SDF-1及CXCR4 mRNA表達(dá)水平

取1.2.4中剩余的脊髓組織，剪下0.5 g，加RIPA裂解液勻漿、4 ℃離心（25 min，3 000×g），吸出各組上清，以試劑盒測出其中蛋白總濃度后分組標(biāo)記，將其保存在－80 ℃?zhèn)溆?；再次剪下脊髓組織0.5 g，以試劑盒提取總RNA后，通過一步法進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）實(shí)驗(yàn)，具體操作及反應(yīng)條件設(shè)定均嚴(yán)格遵循各自試劑盒說明書指導(dǎo)進(jìn)行，選用GAPDH基因作為內(nèi)參，所得各組Ct值以2-ΔΔCt算法進(jìn)行分析計(jì)算，可得出各基因相對表達(dá)水平，引物序列見表1。

取出1.2.5中保存的脊髓組織蛋白樣品液，經(jīng)解凍、變性處理，取出20 μg總蛋白上樣，電泳分離、濕轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)移、脫脂奶粉封閉后，自所得硝酸纖維膜上將LRRC4、SDF-1、β-Tubulin及CXCR4蛋白截下，以相應(yīng)一抗孵育過夜，洗膜后二抗孵育1.5 h，再次洗膜、ECL顯色、拍照，以Image J軟件打開所得圖片，定量各蛋白灰度值，對其進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，最終可得到各組蛋白相對表達(dá)水平。

1.3? 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 24.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間差異比較行t檢驗(yàn)；多組間差異比較用單因素方差分析，組間進(jìn)一步兩兩差異比較采用最小顯著差異（LSD）-t檢驗(yàn)。以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2? 結(jié)? 果

2.1? 各組大鼠機(jī)械縮足閾值及熱縮足潛伏期比較

與假手術(shù)組比較，模型組大鼠機(jī)械縮足閾值和熱縮足潛伏期明顯降低（P＜0.05）；與模型組、右美托咪定＋LRRC4 siRNA質(zhì)粒組分別比較，右美托咪定組大鼠機(jī)械縮足閾值和熱縮足潛伏期均升高（P＜0.05），LRRC4 siRNA質(zhì)粒組大鼠機(jī)械縮足閾值和熱縮足潛伏期均降低（P＜0.05），空載質(zhì)粒組大鼠機(jī)械縮足閾值和熱縮足潛伏期差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。詳見表2。

2.2? 各組大鼠坐骨神經(jīng)運(yùn)動和感覺阻滯持續(xù)時(shí)間比較

與模型組比較，右美托咪定組大鼠坐骨神經(jīng)運(yùn)動和感覺阻滯持續(xù)時(shí)間均升高（P＜0.05）。與右美托咪定＋LRRC4 siRNA質(zhì)粒組比較，右美托咪定組大鼠坐骨神經(jīng)運(yùn)動和感覺阻滯持續(xù)時(shí)間均升高（P＜0.05）。詳見表3。

2.3? 各組大鼠血清炎性因子PGE2、IL-18、IL-6水平比較

與假手術(shù)組比較，模型組大鼠血清炎性因子PGE2、IL-18、IL-6水平明顯升高（P＜0.05）；與模型組、右美托咪定＋LRRC4 siRNA質(zhì)粒組分別比較，右美托咪定組大鼠血清炎性因子PGE2、IL-18、IL-6水平降低（P＜0.05），LRRC4 siRNA質(zhì)粒組大鼠血清炎性因子PGE2、IL-18、IL-6水平均升高（P＜0.05），空載質(zhì)粒組大鼠血清炎性因子PGE2、IL-18、IL-6水平差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。詳見表4。

2.4? 各組大鼠脊髓組織SOD、GSH-Px、MDA水平比較

與假手術(shù)組比較，模型組大鼠脊髓組織抗氧化因子SOD、GSH-Px水平明顯降低（P＜0.05），氧化因子MDA水平明顯升高（P＜0.05）。與模型組、右美托咪定＋LRRC4 siRNA質(zhì)粒組分別比較，右美托咪定組大鼠脊髓組織抗氧化因子SOD、GSH-Px水平均升高（P＜0.05），氧化因子MDA水平均降低（P＜0.05）；LRRC4 siRNA質(zhì)粒組大鼠脊髓組織抗氧化因子SOD、GSH-Px水平均降低（P＜0.05），氧化因子MDA水平均升高（P＜0.05）；空載質(zhì)粒組大鼠脊髓組織SOD、GSH-Px、MDA水平差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。詳見表5。

2.5? 各組大鼠脊髓組織LRRC4、SDF-1及CXCR4 mRNA水平比較

與假手術(shù)組比較，模型組大鼠脊髓組織LRRC4 mRNA水平明顯降低（P＜0.05），SDF-1及CXCR4 mRNA水平明顯升高（P＜0.05）。與模型組、右美托咪定＋LRRC4 siRNA質(zhì)粒組分別比較，右美托咪定組大鼠脊髓組織LRRC4 mRNA水平均升高（P＜0.05），SDF-1及CXCR4 mRNA水平降低（P＜0.05）；LRRC4 siRNA質(zhì)粒組大鼠脊髓組織LRRC4 mRNA水平降低（P＜0.05），SDF-1及CXCR4 mRNA水平均升高（P＜0.05）；空載質(zhì)粒組大鼠脊髓組織LRRC4、SDF-1及CXCR4 mRNA水平差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。詳見表6。

2.6? 各組大鼠脊髓組織LRRC4、SDF-1及CXCR4蛋白表達(dá)水平比較

與假手術(shù)組比較，模型組大鼠脊髓組織LRRC4蛋白表達(dá)水平明顯降低（P＜0.05），SDF-1及CXCR4蛋白表達(dá)水平明顯升高（P＜0.05）。與模型組、右美托咪定＋LRRC4 siRNA質(zhì)粒組分別比較，右美托咪定組大鼠脊髓組織LRRC4蛋白表達(dá)水平均升高（P＜0.05），SDF-1及CXCR4蛋白表達(dá)水平均降低（P＜0.05）；LRRC4 siRNA質(zhì)粒組大鼠脊髓組織LRRC4蛋白表達(dá)水平均降低（P＜0.05），SDF-1及CXCR4蛋白表達(dá)水平均升高（P＜0.05）；空載質(zhì)粒組大鼠脊髓組織LRRC4、SDF-1及CXCR4蛋白表達(dá)水平差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。詳見圖1、表7。

3 ??討? 論

目前神經(jīng)性疼痛的治療藥物包括阿片類鎮(zhèn)痛藥、抗癲癇及抗抑郁藥，但長期應(yīng)用存在藥物成癮風(fēng)險(xiǎn)，還會造成剝脫性皮炎、共濟(jì)失調(diào)等，而神經(jīng)性疼痛的患病人數(shù)眾多，且趨向年輕化，給病人家庭及社會帶來了沉重負(fù)擔(dān)，因此，探尋更有效、安全的治療策略是神經(jīng)醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)［1-2，13］。外周神經(jīng)阻滯技術(shù)是臨床手術(shù)時(shí)常用的局部麻醉方法，起到顯著鎮(zhèn)痛功效，在神經(jīng)性疼痛的治療中得到了廣泛應(yīng)用［3，14］。CCI模型是應(yīng)用最廣的神經(jīng)性疼痛動物模型［15］，本研究通過CCI誘發(fā)神經(jīng)性疼痛，結(jié)果顯示，造模大鼠血清炎性因子PGE2、IL-18和IL-6表達(dá)明顯增強(qiáng)，脊髓組織抗氧化酶SOD、GSH-Px水平明顯降低，引發(fā)嚴(yán)重炎癥與氧化應(yīng)激，導(dǎo)致坐骨神經(jīng)損傷，使大鼠機(jī)械縮足閾值、熱縮足潛伏期明顯降低，造成痛覺超敏，表示模擬神經(jīng)性疼痛病理過程的大鼠CCI模型建立成功。

免疫反應(yīng)異常激活，造成促炎因子和抗炎因子表達(dá)失衡，引發(fā)的強(qiáng)烈炎癥在神經(jīng)性疼痛發(fā)病機(jī)制中起著至關(guān)重要的作用，抗炎治療是減輕疼痛、改善神經(jīng)性疼痛癥狀的有效策略［15-16］。右美托咪定作為臨床常用的局部麻醉輔佐藥劑，可有效增強(qiáng)羅哌卡因坐骨神經(jīng)阻滯功效［17］，還可抑制疼痛相關(guān)的炎癥介質(zhì)表達(dá)釋放，減輕脊髓神經(jīng)炎癥［18］，通過抗氧化作用緩解神經(jīng)性疼痛大鼠痛覺超敏癥狀［12］。本研究通過留置管與坐骨神經(jīng)旁給予右美托咪定，可明顯降低血清炎性因子PGE2、IL-18和IL-6水平，減弱抗氧化酶SOD、GSH-Px活性，造成坐骨神經(jīng)運(yùn)動和感覺阻滯，升高大鼠機(jī)械縮足閾值，延長熱縮足潛伏期，明顯減輕大鼠疼痛癥狀，表明右美托咪定具有顯著的鎮(zhèn)痛作用，可廣泛用于神經(jīng)性疼痛的臨床治療。

SDF-1/CXCR4作為調(diào)控神經(jīng)炎癥的重要信號，在神經(jīng)性疼痛致病機(jī)制中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，鞘內(nèi)注射CXCL12（SDF-1）中和抗體可抑制CXCR4表達(dá)，阻礙神經(jīng)炎癥發(fā)生發(fā)展［8］，還可減輕脊神經(jīng)結(jié)扎誘發(fā)的痛覺超敏反應(yīng)，改善神經(jīng)性疼痛大鼠疼痛癥狀［19］。LRRC4作為SDF-1/CXCR4信號的負(fù)調(diào)節(jié)因子［20］，可作為治療神經(jīng)性疼痛的潛在作用靶點(diǎn)。本研究以LRRC4 siRNA質(zhì)粒下調(diào)CCI大鼠LRRC4的表達(dá)，可上調(diào)SDF-1/CXCR4信號通路，促進(jìn)炎性因子PGE2、IL-18和IL-6合成，進(jìn)一步減弱抗氧化酶SOD、GSH-Px活性，加重大鼠疼痛癥狀，與右美托咪定合用，可拮抗其對炎癥及氧化應(yīng)激的抑制作用，降低其對坐骨神經(jīng)阻滯持續(xù)時(shí)間，最終逆轉(zhuǎn)右美托咪定對CCI大鼠的鎮(zhèn)痛功能，表明右美托咪定緩解神經(jīng)性疼痛痛覺超敏癥狀是通過上調(diào)LRRC4表達(dá)，從而激活SDF-1/CXCR4通路實(shí)現(xiàn)的。

總之，本研究表明右美托咪定可促進(jìn)LRRC4表達(dá)，阻滯SDF-1/CXCR4信號途徑傳導(dǎo)，降低炎性因子表達(dá)水平，增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力，減輕脊髓神經(jīng)炎癥及氧化應(yīng)激損傷，緩解CCI大鼠疼痛超敏反應(yīng)，發(fā)揮明顯的坐骨神經(jīng)阻滯功效，調(diào)控LRRC4/SDF-1/CXCR4信號是右美托咪定起到上述鎮(zhèn)痛作用的藥理機(jī)制之一，本研究結(jié)果有利于神經(jīng)性疼痛發(fā)病機(jī)制的明確闡述，并提供了新的神經(jīng)性疼痛治療靶點(diǎn)，對右美托咪定的臨床推廣做出了一定貢獻(xiàn)。

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（收稿日期：2022-08-16）

（本文編輯王麗）