前列腺癌病人血清人類泛素偶聯(lián)酶E2C的表達(dá)及其對(duì)DU145細(xì)胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移的影響

劉鳳珍，王榮，崔發(fā)財(cái)，趙偉鋒

作者單位：河南省人民醫(yī)院，a檢驗(yàn)科，b腫瘤內(nèi)科，河南 鄭州450003

前列腺癌（PCa）是一種常見的泌尿生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，2020年全球新發(fā)確診病例140萬人，新發(fā)死亡病例37萬人，其發(fā)病率和病死率已分列世界男性惡性腫瘤的第2 位和第5 位［1-2］。近年來，隨著飲食及生活方式的改變、人口老齡化水平的不斷增加，我國(guó)前列腺癌發(fā)病率也呈逐步增長(zhǎng)趨勢(shì)［3］。流行病學(xué)調(diào)查研究顯示［4］，我國(guó)初診為局限性前列腺癌病人的比例僅為30%左右，大部分病人首次確診時(shí)癌細(xì)胞已發(fā)生深層組織浸潤(rùn)和遠(yuǎn)處器官轉(zhuǎn)移，貽誤臨床治療造成病死率高，這是我國(guó)PCa 病人5 年生存率低于歐美發(fā)達(dá)國(guó)家的主要原因，因此深入研究PCa 進(jìn)展分子機(jī)制，篩選腫瘤發(fā)生發(fā)展相關(guān)生物標(biāo)志物對(duì)PCa 的診斷、治療和改善病人預(yù)后是至關(guān)重要的。泛素結(jié)合酶E2C（UBE2C）是泛素結(jié)合酶E2的家族成員，也是泛素-蛋白酶體系統(tǒng)中的重要參與者，可通過靶向細(xì)胞周期調(diào)控因子來調(diào)控細(xì)胞周期中的關(guān)鍵檢查點(diǎn)，發(fā)揮其促進(jìn)細(xì)胞有絲分裂進(jìn)程的作用［5］。研究［6］報(bào)道，UBE2C 異常表達(dá)可導(dǎo)致有絲分裂周期蛋白破壞和細(xì)胞染色體組的不穩(wěn)定性增加，誘導(dǎo)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。目前在前列腺癌的研究中，鄧蘭等［7］通過免疫組化技術(shù)分析發(fā)現(xiàn)UBE2C高表達(dá)病人比UBE2C 低表達(dá)病人有著更為惡性的臨床病理特征和更差的預(yù)后生存期，但UBE2C 在相關(guān)病人血清中的表達(dá)情況、臨床意義以及參與癌癥進(jìn)展的機(jī)制目前尚未可知。本研究中首先采用基因表達(dá)交互分析數(shù)據(jù)庫(kù)分析UBE2C 在前列腺癌組織中的表達(dá)情況，并進(jìn)一步檢測(cè)UBE2C 在前列腺癌病人血清中的表達(dá)情況，分析其臨床診斷價(jià)值，并通過一系列體外實(shí)驗(yàn)探討UBE2C 對(duì)前列腺癌細(xì)胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移的影響，為研究前列腺癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料利用GEPIA 數(shù)據(jù)庫(kù)（http：//gepia.cancer-pku.cn/）分析UBE2C 在前列腺癌病人癌組織及癌旁組織中的表達(dá)情況。前列腺癌病人納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有病人均為首次診斷前列腺癌且臨床資料完整；②所有病人留取血液樣本前未接受化療、去勢(shì)治療等任何治療手段；③既往無惡性腫瘤史，確診時(shí)未發(fā)生其他類型惡性腫瘤。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并重要臟器器質(zhì)性疾??；②合并嚴(yán)重自身免疫性疾病。前列腺增生（BPH）病人納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有病人均為首次診斷良性前列腺增生且臨床資料完整；②所有病人留取血液樣本前未執(zhí)行前列腺電切除手術(shù)；③超聲測(cè)量前列腺體積大于25 mL。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并膀胱結(jié)石或腫瘤；②病人患有尿路感染或前列腺炎。研究對(duì)象樣本量參考公式：N=Z2×［P×（1-P）］/E2，設(shè)定Z=1.96，P=90%，E=10%。根據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)篩選2021 年1 月至2022 年6 月在河南省人民醫(yī)院接受住院治療的PCa病人和BPH 病人各50例，以同時(shí)期健康管理中心50例體檢者做對(duì)照，凍存所有研究對(duì)象空腹靜脈血離心后的血清于-80 ℃超低溫冰箱。所有研究對(duì)象對(duì)研究方案均知情同意。本研究符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)赫爾辛基宣言》相關(guān)要求。

1.2 試劑與材料前列腺癌細(xì)胞株DU145 購(gòu)自武漢尚恩生物科技有限公司；0.25% 胰酶、Ham's F-12K 培養(yǎng)基、胎牛血清（FBS）和青霉素-鏈霉素混合雙抗均購(gòu)自武漢普諾賽生物科技有限公司；UBE2C 酶聯(lián)免疫檢測(cè)（ELISA）試劑盒、兔抗人單克隆抗體（UBE2C、t-Akt、p-Akt、MMP-2、MMP-9 和GAPDH）、HPR 標(biāo)志羊抗兔二抗和Bradford 蛋白濃度測(cè)定試劑盒均購(gòu)自武漢菲恩生物科技公司；RNAeasy Isolation 試劑、通用反轉(zhuǎn)錄試劑盒（M-MLV）、高特異性染料法定量PCR 檢測(cè)試劑盒（AceQ?qPCR SYBR Green Master Mix）購(gòu)自諾唯贊生物科技公司；針對(duì)UBE2C 的小干擾RNA（si-UBE2C）及陰性對(duì)照（si-NC）由銳博生物公司設(shè)計(jì)合成。

1.3 ELISA 實(shí)驗(yàn)將試劑盒（雙抗體夾心法）自帶標(biāo)準(zhǔn)品根據(jù)說明書進(jìn)行倍比稀釋，不同濃度標(biāo)準(zhǔn)液各加50 μL 于96 孔板，待測(cè)樣本孔中40 μL 稀釋液和10 μL 血清樣本，空白孔滴加稀釋液作為對(duì)照。37 ℃孵育30 min，PBS 也洗滌3 次，每孔各加50 μL酶標(biāo)試劑繼續(xù)孵育30 min，洗凈瀝干水分后加入顯色劑顯色，在酶標(biāo)以上讀取450 nm 處的吸光度（OD）值。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本中UBE2C含量。

1.4 血清前列腺特異性抗原（PSA）檢測(cè)使用羅氏全自動(dòng)化電學(xué)發(fā)光免疫分析儀Cobas e601及其配套PSA 試劑盒檢測(cè)血清PSA 水平，檢測(cè)方法為電化學(xué)發(fā)光法，樣本檢測(cè)前需進(jìn)行常規(guī)腫瘤標(biāo)志物質(zhì)控品檢測(cè)，質(zhì)控結(jié)果在控后方可開展樣本檢測(cè)工作。

1.5 細(xì)胞轉(zhuǎn)染與分組將生長(zhǎng)狀態(tài)良好的DU145細(xì)胞用0.25%胰酶消化，并用含10%FBS 的Ham's F-12K 培養(yǎng)基調(diào)整濃度為1×109個(gè)/升，6 孔板鋪板，當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到70%時(shí)，根據(jù)轉(zhuǎn)染試劑盒說明書將si-UBE2C 和si-NC 轉(zhuǎn)染細(xì)胞，繼續(xù)培養(yǎng)48 h 后檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率。實(shí)驗(yàn)組分為：陽性干擾組（si-UBE2C），陰性對(duì)照組（si-NC）和空白對(duì)照組。

1.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）根據(jù)RNA 提取試劑盒說明書提取DU145 細(xì)胞總RNA，紫外吸收法測(cè)定其濃度和純度。M-MLV 逆轉(zhuǎn)錄酶將總RNA 生成cDNA，采用AceQ?qPCR SYBR Green Master 試劑盒進(jìn)行擴(kuò)增： 95 ℃預(yù)變性10 min 后繼續(xù)變性20 s，56 ℃退火25 s，71 ℃延伸20 s，擴(kuò)增循環(huán)46 次。UBE2C 啟動(dòng)子引物序列（正向：GACCTGAGGTATAAGCTCTCGC；反向：CAGGGCAGACCACTTTTCCTT），GAPDH啟動(dòng)子引物序列（正向：AAGGTGAAGGTCGGAGTCAA；反向：AATGAAGGGGTCATTGATGG）。采用2-ΔΔCt法分析UBE2C mRNA表達(dá)水平。

1.7 CCK-8 實(shí)驗(yàn)各實(shí)驗(yàn)組DU145 細(xì)胞用0.25%胰酶消化，用含10%FBS的Ham's F-12K培養(yǎng)基調(diào)整濃度為3×108個(gè)/升，96 孔板每孔加入100 μL 細(xì)胞懸液，細(xì)胞貼壁后加入CCK-8 試劑，分別繼續(xù)培養(yǎng)24、48和72 h后用酶標(biāo)儀測(cè)定450 nm處的吸光度值。

1.8 Transwell 侵襲和遷移實(shí)驗(yàn)遷移實(shí)驗(yàn)：各實(shí)驗(yàn)組DU145 細(xì)胞用0.25%胰酶消化，并用無FBS 的Ham's F-12K 培養(yǎng)基調(diào)整濃度為3×108個(gè)/升，transwell小室上室加入100 μL，套入含400 μL Ham's F-12K 培養(yǎng)基（含12% FBS）的下室內(nèi)，繼續(xù)培養(yǎng)48 h后取出上室，PBS 清洗下室2 次，多聚甲醛固定后用0.1%結(jié)晶紫染色，在顯微鏡下計(jì)數(shù)遷移細(xì)胞數(shù)。侵襲實(shí)驗(yàn)：需將預(yù)先稀釋的Matrigel 膠包被在transwell小室底部膜上室面，其余操作步驟同遷移實(shí)驗(yàn)。

1.9 蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)收集各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞用裂解液提取總蛋白，繪制BCA 標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定蛋白濃度。制備SDS-PAGE 電泳膠，進(jìn)行蛋白上樣、分離和轉(zhuǎn)膜， TBST 封閉后，將PVDF 膜與蛋白激酶B（t-Akt和p-Akt）一抗、侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白（MMP-2 和MMP-9）一抗、UBE2C 蛋白一抗和GAPDH 一抗放置冷藏冰箱孵育過夜，TBST 漂洗后，加入山羊抗兔二抗繼續(xù)孵育1.5 h，用ECL 試劑使PVDF 膜顯影，采用Image J進(jìn)行條帶分析。

1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS 25.0 和GraphPad Prism 9.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析和繪圖，定量資料先進(jìn)行K-S正態(tài)性檢驗(yàn)。偏態(tài)分布數(shù)據(jù)用中位數(shù)（第25、第75百分位數(shù)）［M（P25，P75）］表示，采用Kruskal-WallisH檢驗(yàn)比較多組間差異，組內(nèi)兩兩比較采用Bonferroni法，采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)比較兩獨(dú)立樣本間差異。正態(tài)分布數(shù)據(jù)用±s表示，采用單因素方差分析或重復(fù)測(cè)量方差分析比較多組間差異，組內(nèi)兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。繪制受試者操作特征（ROC）曲線計(jì)算血清UBE2C 診斷前列腺癌的曲線下面積（AUC）。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 UBE2C 在前列腺癌組織中和前列腺癌病人血清中高表達(dá)GEPIA 在線數(shù)據(jù)庫(kù)分析結(jié)果表明，UBE2C mRNA 在492例前列腺癌組織中的中位表達(dá)水平為顯著高于其在152例癌旁組織中的中位表達(dá)水平（4.08比1.21，P＜0.05）。K-S檢驗(yàn)結(jié)果顯示血清UBE2C 濃度在前列腺癌組、前列腺增生組和健康對(duì)照組中均為非正態(tài)分布（P＜0.001；P＜0.001；P=0.003）。其在前列腺癌病人中的濃度值為0.64（0.41，1.06）μg/L，顯著高于前列腺增生組和健康對(duì)照組［0.28（0.22，0.39）μg/L 和0.19（0.18，0.21）μg/L，H=30.52、78.65，均P＜0.05］，采用Bonferroni 法校正后的兩兩比較發(fā)現(xiàn)，前列腺增生組血清UBE2C 濃度水平也顯著高于健康對(duì)照組（H=45.82，P＜0.05）。

2.2 血清UBE2C 檢測(cè)對(duì)前列腺癌診斷的效能評(píng)價(jià)對(duì)各50例前列腺癌、前列腺增生及健康對(duì)照的血清UBE2C結(jié)果進(jìn)行ROC曲線分析，結(jié)果顯示血清UBE2C診斷前列腺癌的AUC為0.86，將UBE2C診斷截取值選定為0.395 μg/L，約登指數(shù)最大，血清UBE2C 診斷前列腺癌的靈敏度和特異度分別為76.3%和88.9%，將血清PSA 和血清UBE2C 檢測(cè)聯(lián)合應(yīng)用于前列腺癌診斷，AUC值為0.90，顯著高于血清UBE2C 單獨(dú)診斷（Z=2.31，P=0.021），其診斷前列腺癌的靈敏度和特異度分別為82.4%和89.7%。

2.3 血清UBE2C 表達(dá)與前列腺癌病人臨床病理特征的關(guān)系Mann-WhitneyU檢驗(yàn)結(jié)果顯示，T3～T4期，gleason 評(píng)分＞7 分，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和骨轉(zhuǎn)移的前列腺癌病人中血清UBE2C 水平顯著高于T1-T2 期、低gleason 評(píng)分、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和無骨轉(zhuǎn)移的前列腺癌病人（均P＜0.05），見表1。

表1 人類泛素偶聯(lián)酶E2C （UBE2C）表達(dá)與前列腺癌病人臨床病理特征的關(guān)系

2.4 沉默UBE2C 表達(dá)抑制結(jié)前列腺癌細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移能力qPCR 和蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)結(jié)果顯示，陽性干擾組DU145細(xì)胞內(nèi)UBE2C表達(dá)水平較陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組顯著降低（均P＜0.05），表明轉(zhuǎn)染si-UBE2C 能顯著下調(diào)前列腺癌DU145 細(xì)胞中UBE2C 的表達(dá)；重復(fù)測(cè)量方差分析結(jié)果顯示，不同時(shí)間和不同組間細(xì)胞增殖吸光度均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=222.31、66.34，均P＜0.05），且時(shí)間與組間存在顯著的交互效應(yīng)（F=11.60，P＜0.05），陽性轉(zhuǎn)染組在48h 和72h 時(shí)的細(xì)胞增殖吸光度均顯著高于陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組（F=24.02、38.44，均P＜0.05）； transwell 侵襲遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，陽性轉(zhuǎn)染組的細(xì)胞侵襲數(shù)和細(xì)胞遷移數(shù)均顯著低于陰性對(duì)照組（P=0.003，P=0.006）和空白對(duì)照組（P=0.006，P=0.004），見表2，3；圖1，2。

圖1 transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)DU145細(xì)胞的侵襲和遷移能力

圖2 蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)DU145細(xì)胞內(nèi)UBE2C蛋白表達(dá)

表2 轉(zhuǎn)染si-UBE2C后各組前列腺癌細(xì)胞增殖吸光度的比較/± s

表2 轉(zhuǎn)染si-UBE2C后各組前列腺癌細(xì)胞增殖吸光度的比較/± s

注：①與空白對(duì)照組比較，P＜0.05。②與陰性對(duì)照組比較，P＜0.05。

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表3 轉(zhuǎn)染si-UBE2C后前列腺癌細(xì)胞UBE2C表達(dá)水平、細(xì)胞侵襲和遷移能力的變化/± s

表3 轉(zhuǎn)染si-UBE2C后前列腺癌細(xì)胞UBE2C表達(dá)水平、細(xì)胞侵襲和遷移能力的變化/± s

注：①與空白對(duì)照組比較，P＜0.05。②與陰性對(duì)照組比較，P＜0.05。

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2.5 沉默UBE2C表達(dá)后其前列腺癌細(xì)胞內(nèi)p-Akt、MMP-2 和MMP-9 蛋白表達(dá)降低蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)結(jié)果顯示，p-Akt、MMP-2 和MMP-9 蛋白在陽性干擾組、陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組間的表達(dá)量均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），p-Akt、MMP-2 和MMP-9 蛋白在陽性干擾組中的表達(dá)量均顯著低于陰性對(duì)照組（P=0.003；P＜0.001；P=0.001）和空白對(duì)照組（P=0.002；P＜0.001；P=0.002），而t-Akt 蛋白在陽性干擾組、陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組間的表達(dá)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表4；圖3。

圖3 蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)DU145細(xì)胞內(nèi)t-Akt、p-Akt、MMP-2和MMP-9蛋白表達(dá)

表4 轉(zhuǎn)染si-UBE2C后前列腺癌細(xì)胞DU145中t-Akt、p-Akt、MMP-2和MMP-9蛋白表達(dá)水平的變化/± s

表4 轉(zhuǎn)染si-UBE2C后前列腺癌細(xì)胞DU145中t-Akt、p-Akt、MMP-2和MMP-9蛋白表達(dá)水平的變化/± s

注：Akt為蛋白激酶B，MMP為基質(zhì)金屬蛋白酶。①與空白對(duì)照組比較，P＜0.05。②與陰性對(duì)照組比較，P＜0.05。

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3 討論

PCa 早期發(fā)病隱匿，臨床表現(xiàn)多與前列腺增生癥狀類似，易被臨床忽視。當(dāng)病人出現(xiàn)特征性臨床表現(xiàn)時(shí)，癌細(xì)胞已發(fā)生周圍組織浸潤(rùn)和遠(yuǎn)距離轉(zhuǎn)移，而侵襲和轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致PCa 病人死亡的主要原因［8-9］。我國(guó)國(guó)家癌癥中心的調(diào)查研究顯示，2015年P(guān)Ca 標(biāo)準(zhǔn)化生存率為69.2%，較10 年前提升了近13個(gè)百分點(diǎn)，這得益于PCa 診斷技術(shù)和治療方案的不斷完善和提升［10］，然而相比較西方發(fā)達(dá)國(guó)家平均80%以上的生存率［11］，我們還相差甚遠(yuǎn)。臨床常用于篩查和診斷PCa的檢測(cè)手段分別是前列腺癌特異性抗原（PSA）檢測(cè)和組織穿刺活檢［12-13］，但前者特異性不高，后者費(fèi)用昂貴且是有創(chuàng)操作，病人接受度不高，這都造成了潛在PCa初級(jí)病人的漏診，貽誤最佳治療時(shí)機(jī)。因此，闡明PCa 發(fā)生、發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制，篩選高特異性高靈敏度的生物標(biāo)志物和新的治療靶點(diǎn)，對(duì)早期診斷PCa 和提高病人生存率是至關(guān)重要的。

UBE2C，又被稱為泛素結(jié)合酶10（UBH10），在細(xì)胞周期過程中發(fā)揮重要作用。近來研究發(fā)現(xiàn)，UBE2C 異常表達(dá)導(dǎo)致細(xì)胞染色體不穩(wěn)定和有絲分裂紊亂，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展［14］。例如，Kariri等［15］報(bào)道UBE2C 在乳腺癌組織中高表達(dá)，其表達(dá)水平與p53、Ki67、EGFR、PI3K 等細(xì)胞周期相關(guān)標(biāo)志物呈正相關(guān)，UBE2C 高表達(dá)是乳腺癌病人預(yù)后的獨(dú)立標(biāo)志物。Zhang、Yang［16］報(bào)道UBE2C 在肝細(xì)胞癌組織中高表達(dá)，其表達(dá)水平與腫瘤分期和p53 基因突變率呈正相關(guān)，與病人預(yù)后和總生存期呈負(fù)相關(guān)。UBE2C 不但具有組織特異性，其在一些類型腫瘤的病人體液中也能檢測(cè)到異常表達(dá)，為腫瘤的診斷、惡性度評(píng)估及預(yù)后效果評(píng)估提供了無創(chuàng)性檢測(cè)可能。例如，血清UBE2C 水平與膠質(zhì)瘤病人的TNM分期和Karnofsky（KPS）評(píng)分相關(guān)，是評(píng)估病人預(yù)后的有效指標(biāo)［17］；尿液UBE2C 檢測(cè)可以評(píng)估膀胱癌的浸潤(rùn)程度，其診斷膀胱癌的AUC、靈敏度和特異度分別是0.78、0.71 和0.85［18］。本研究利用GEPIA 數(shù)據(jù)庫(kù)分析發(fā)現(xiàn)，UBE2C 基因在前列腺癌組織中表達(dá)水平顯著高于癌旁組織，這與相關(guān)研究報(bào)道一致，提示UBE2C 異常表達(dá)與PCa 的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。之后通過分析PCa 病人及對(duì)照組血清樣本發(fā)現(xiàn)，UBE2C 在PCa 病人血清中也處于高表達(dá)狀態(tài)，其表達(dá)與PCa 病人的T 分期、gleason 評(píng)分、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和骨轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，提示血清UBE2C 檢測(cè)可用于評(píng)估PCa 病人的疾病進(jìn)展?fàn)顟B(tài)。此外，血清UBE2C 診斷前列腺癌的AUC 為0.86，靈敏度和特異度分別為76.3%和88.9%，而將血清PSA 和UBE2C 聯(lián)合用于診斷前列腺癌的AUC 為0.90，靈敏度和特異度進(jìn)一步提高，表明UBE2C 可作為潛在的前列腺癌聯(lián)合診斷指標(biāo)之一發(fā)揮良好的診斷價(jià)值。在細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)中，通過轉(zhuǎn)染小干擾RNA（siRNA）的方式沉默UBE2C 的表達(dá)，前列腺癌DU145 細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移能力均得到有效抑制。PI3K/Akt信號(hào)通路中關(guān)鍵基因的活化或異常表達(dá)是引起腫瘤的增殖、侵襲或轉(zhuǎn)移的重要原因，研究報(bào)道UBE2C 通過影響Akt/mTOR 信號(hào)通路促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的增殖［19］；在胰腺癌［20］的研究中，UBE2C 可激活PI3K/Akt 信號(hào)通路促進(jìn)基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）表達(dá)，UBE2C 與表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）結(jié)合，使其穩(wěn)定表達(dá)并驅(qū)動(dòng)PI3K-Akt 通路激活，在胰腺癌的增殖和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用。此外，在宮頸癌［21］的研究中也報(bào)道UBE2C 調(diào)控mTOR/PI3K/Akt 通路的表達(dá)和活性。為研究UBE2C 影響前列腺癌發(fā)生發(fā)展的機(jī)制，本研究通過蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)PI3K/Akt 信號(hào)通路關(guān)鍵基因的表達(dá)，結(jié)果顯示UBE2C表達(dá)下調(diào)后，Akt磷酸化水平降低，PI3K/Akt 信號(hào)通路的異?；罨癄顟B(tài)得到抑制。MMP-2 和MMP-9 同屬基質(zhì)金屬蛋白酶成員，共同參與腫瘤細(xì)胞外基質(zhì)的降解，其高表達(dá)促進(jìn)了PCa 的侵襲和轉(zhuǎn)移過程［22］，另在一些腫瘤的機(jī)制研究［23］中還發(fā)現(xiàn)MMP-2 和MMP-9 作為下游靶基因受到PI3K/Akt 信號(hào)通路的調(diào)控。本研究中，在p-Akt 表達(dá)下調(diào)的同時(shí)，MMP-2 和MMP-9 表達(dá)水平也相應(yīng)下調(diào)，上述結(jié)果表明UBE2C 表達(dá)水平的改變與p-Akt、MMP-2 和MMP-9 表達(dá)水平的變化存在一定聯(lián)系，但UBE2C 是否通過調(diào)控PI3K/Akt/MMP-2/9 信號(hào)通路參與前列腺癌的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移過程需要我們后續(xù)更深入地研究和探討。