基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對接法研究參七解郁方治療雙心疾病的分子機(jī)制

劉莉，王鳳榮

作者單位：1遼寧中醫(yī)藥大學(xué)研究生學(xué)院，遼寧 沈陽 110847；

2大連大學(xué)附屬中山醫(yī)院老年病科，遼寧 大連 116001；

3遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院心內(nèi)科，遼寧 沈陽110032

雙心疾病是心血管系統(tǒng)疾病與精神情緒障礙并存的一類疾病，目前常指冠心病合并焦慮抑郁狀態(tài)，越來越多的臨床資料顯示冠心病病人常同時(shí)合并焦慮抑郁狀態(tài)。冠心病與焦慮抑郁相互作用、相互影響，互為因果，會導(dǎo)致疾病進(jìn)一步惡化。冠心病人群患有焦慮抑郁的發(fā)生率明顯高于普通人群［1-2］，這既增加了病人的病痛與經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，也占用了社會醫(yī)療資源，因此對于雙心疾病的防治已經(jīng)成為我國心血管疾病領(lǐng)域亟需解決的重要公共衛(wèi)生問題［3］。

中醫(yī)經(jīng)典理論認(rèn)為心在人體中處于最高主導(dǎo)地位，心主血脈，心藏神，指心既是血液循環(huán)的原動(dòng)力，又是精神、意識和思維活動(dòng)的中心。《素問·五臟生成論》：“諸血者皆屬于心?！薄端貑枴ち?jié)藏象論》：“心者，生之本，神之變也?！薄端貑枴れ`蘭秘典論》：“心者，君主之官，神明出焉?！庇纱耍梢钥闯鲂闹魃衩鞯闹匾砉δ?。相反，心主神明功能一旦失司，就會導(dǎo)致情志異常，發(fā)展為郁病。因此，雙心理論也是中醫(yī)心系疾病理論的重要反應(yīng)，既體現(xiàn)在生理方面相互依存，又體現(xiàn)在病理方面互為因果。目前，雙心疾病的治療通常是在冠心病治療的基礎(chǔ)上再加用抗焦慮抑郁藥，而長期應(yīng)用這類藥物會使病人產(chǎn)生很強(qiáng)的依賴性，而且還加重了病人的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)［4］，而中醫(yī)藥對于雙心疾病的治療效果確切，安全性也能得到很好保證，在近十年的發(fā)展過程中逐漸受到關(guān)注與認(rèn)可［5］。

王鳳榮教授在古文“開心散”“定志小丸”的基礎(chǔ)上創(chuàng)立了參七解郁方，由遠(yuǎn)志、石菖蒲、人參、丹參、三七、郁金、合歡、柴胡、香附、百合、珍珠母、炙甘草組成；其功效為益氣化痰、安神定志，參七解郁方在臨床治療雙心疾病中獲得較好的療效，尤其對PCI術(shù)后雙心疾病的干預(yù)方面療效可靠。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是多學(xué)科融合形成的新興技術(shù)，基于“疾病-基因-靶點(diǎn)-藥物”相互作用網(wǎng)絡(luò)，系統(tǒng)綜合地觀察藥物對疾病網(wǎng)絡(luò)的干預(yù)與影響，主要通過各種組學(xué)數(shù)據(jù)分析和計(jì)算機(jī)模擬手段構(gòu)建多層次網(wǎng)絡(luò)來實(shí)現(xiàn)。分子對接是一種研究小分子配體與蛋白質(zhì)受體之間相互作用和識別的理論方法。本研究將網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對接技術(shù)相結(jié)合共同研究中藥參七解郁方治療雙心疾病，為活性成分篩選和機(jī)制探索提供新的方法［6］。

1 方法

1.1 數(shù)據(jù)庫與軟件本研究主要應(yīng)用的生物信息學(xué)工具包括：中藥系統(tǒng)藥理分析平臺（TCMSP，https：//old.tcmsp-e.com/）、TCMID 數(shù) 據(jù) 庫（http：//www.megabionet.org/ tcmid/）、Gene Cards 數(shù)據(jù)庫（https：//www.Genecards.org/）、在線韋恩分析工具（http：//bioinformatics.psb.ugent. be/webtools/Venn/）、Uniprot 網(wǎng)站（https：//www.uniprot.org）、Pubchem 數(shù)據(jù)庫（https：// pubchem. ncbi. nlm.nih.gov/）、Gene Cards 數(shù)據(jù)庫（https：//www.genecards.org/）、String 數(shù)據(jù)庫（https：//cn.string-db.org/）、DAVID 網(wǎng)站（https：//david.ncifcrf.gov/）、Auto Dock Tools 1.5.7軟件。

1.2 參七解郁方中化學(xué)成分以及其可能靶點(diǎn)預(yù)測利用TCMSP 平臺為主查找參七解郁方的藥物化學(xué)成分，篩選條件設(shè)定為：（1）類藥性（drug-likeness，DL）≥0.18，（2）口服生物利用度（oral bioavailability，OB）≥30%， TCMSP 平臺檢索不到的成分通過TCMID 平臺為補(bǔ)充進(jìn)行查找。Uniprot 網(wǎng)站確定各靶點(diǎn)的Uniprot ID。每個(gè)化合物利用 Pubchem 獲取 SMILES 和3D 文件，以便進(jìn)行化合物的靶點(diǎn)預(yù)測和分子對接的應(yīng)用操作。

1.3 雙心疾病靶點(diǎn)收集利用Gene Cards 數(shù)據(jù)庫，以“ coronary heart disease”“ anxiety- depression”為關(guān)鍵詞檢索得到雙心疾病的相關(guān)靶點(diǎn)及基因。

1.4 參七解郁方治療雙心疾病靶點(diǎn)篩選在韋恩分析工具在線網(wǎng)站輸入?yún)⑵呓庥舴降乃幬锝M成化合物以及雙心疾病可能的有關(guān)基因，獲取其交集以得到共同作用靶點(diǎn)。

1.5 蛋白質(zhì)相互作用（protein-protein interaction，PPI）網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建以及核心靶點(diǎn)篩選將藥物成分化合物與疾病的交靶點(diǎn)輸入到String 數(shù)據(jù)庫，構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)。將PPI網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)導(dǎo)入EXCEL 表格，通過Cytoscape 3.9.0 軟件對構(gòu)建的PPI網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行可視化處理。

1.6 基因富集分析基因本體（gene ontology，GO）功能主要分為三大類，即細(xì)胞組成（cellular component，CC）、生物學(xué)過程（biological process，BP），以及分子功能（molecular function，MF）。京都基因和基因組百科全書（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）數(shù)據(jù)庫是系統(tǒng)分析基因產(chǎn)物在細(xì)胞中的代謝途徑以及這些基因產(chǎn)物功能的數(shù)據(jù)庫。KEGG 通路富集分析常常應(yīng)用于差異表達(dá)基因的功能注釋，了解差異表達(dá)基因的相關(guān)功能與作用通路［7］。

在DAVID 網(wǎng)站輸入?yún)⑵呓庥舴街谢钚猿煞峙c雙心疾病的共同潛在靶點(diǎn)，在KEGG富集信號通路，并且將基因本體GO 功能進(jìn)行富集分析。GO 富集分析時(shí)設(shè)定篩選閾值P＜0.05，分析細(xì)胞組成、生物學(xué)過程，以及分子功能，將每組的前10 位排名繪制成柱狀圖，進(jìn)行可視化操作。通過制作氣泡圖對排名位于前30的信號通路進(jìn)行可視化分析。

1.7 運(yùn)用分子對接技術(shù)驗(yàn)證參七解郁方活性成分與雙心疾病的潛在靶點(diǎn)選擇PPI網(wǎng)絡(luò)圖中的主要活性化合物與作用靶點(diǎn)進(jìn)行分子對接驗(yàn)證。從Pub Chem 分別獲得靶點(diǎn)蛋白以及化合物的三維立體結(jié)構(gòu)，采用Auto Dock工具對蛋白受體和配體進(jìn)行常規(guī)處理后，進(jìn)行分子對接，得到結(jié)合能， 即成分與靶點(diǎn)的結(jié)合能是評價(jià)分子對接結(jié)果的重要依據(jù)，結(jié)合能越低結(jié)合就越穩(wěn)定，靶點(diǎn)與分子作用的可能性就越大。

2 結(jié)果

2.1 參七解郁方化合物、潛在靶點(diǎn)以及疾病靶點(diǎn)預(yù)測結(jié)果TCMSP 檢索到參七解郁方中289 個(gè)化合物，TCMID 檢索到參七解郁方中16 個(gè)化合物，總計(jì)305 個(gè)。其中沒有預(yù)測到靶點(diǎn)為合歡花中有3 個(gè)化學(xué)成分與珍珠母中有9 個(gè)化學(xué)成分。Gen Cards 數(shù)據(jù)庫中檢索到冠心病靶點(diǎn)1 924 個(gè)，焦慮抑郁靶點(diǎn)1 279個(gè)。通過韋恩在線工具分析參七解郁方、冠心病、焦慮抑郁的可能靶點(diǎn)，獲得共有交集92個(gè)靶點(diǎn)，得到參七解郁方治療雙心疾病的潛在共有靶點(diǎn)。韋恩圖見圖1。

圖1 參七解郁方與雙心疾病靶點(diǎn)的韋恩圖

2.2 參七解郁方治療雙心疾病共有靶點(diǎn)的PPI 網(wǎng)絡(luò)結(jié)果由圖2 可知，將參七解郁方治療雙心疾病的交集靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING 平臺，繪制PPI網(wǎng)絡(luò)圖。將置信度得分設(shè)置為0.7，除MT-ND6、DYRK1A、KCNMA1、CHRM2、CLDN4 等蛋白與其他蛋白之間沒有形成互作關(guān)系被排除，該網(wǎng)絡(luò)包含80 個(gè)節(jié)點(diǎn)及240條邊，平均度值（degree）為6，平均局部聚類系數(shù)為0.453，P＜1.0×10-16，提示與隨機(jī)相似靶點(diǎn)對比，此組相互作用靶點(diǎn)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。評價(jià)參數(shù)設(shè)定為節(jié)點(diǎn)度值，在PPI網(wǎng)絡(luò)內(nèi)，隨著其靶點(diǎn)度值的增加，發(fā)揮的生物學(xué)作用可能更大。該網(wǎng)絡(luò)節(jié)點(diǎn)的大小與度值成正比，而且度值由小到大亦決定網(wǎng)絡(luò)節(jié)點(diǎn)顏色由淺到深。

圖2 參七解郁方治療雙心疾病靶點(diǎn)的PPI網(wǎng)絡(luò)圖

如圖3 所示，靶點(diǎn)度值排名前10 位的依次為信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄活化因子（STAT3）、絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶1（AKT1）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子（TNF）、絲裂原活化蛋白激酶（MAPK1）、白細(xì)胞介素-10（IL-10）、腫瘤蛋白p53 基因（TP53）、c-fos 原癌基因蛋白（FOS）、雌激素受體α（ESR1）、白細(xì)胞介素-4（IL-4），提示這些靶點(diǎn)是參七解郁方發(fā)揮治療作用的潛在關(guān)鍵靶點(diǎn)。

圖3 參七解郁方治療雙心疾病關(guān)鍵靶點(diǎn)信息

2.3 GO 生物功能注釋及 KEGG 通路富集將80個(gè)靶點(diǎn)輸入DAVID 網(wǎng)站進(jìn)行富集，進(jìn)行GO 功能富集分析，每組篩選條件設(shè)定為P＜0.05，得到細(xì)胞組成相關(guān)條目34 條，生物過程相關(guān)條目335 條，分子功能相關(guān)條目48 條，每組選取排名前10 位的條目進(jìn)行可視化。

將參七解郁方干預(yù)雙心疾病的靶點(diǎn)導(dǎo)入David在線工具富集KEGG通路，獲得條目106條，其中P＜0.05 的條目100 條，去除與雙心疾病明顯無關(guān)通路，如瘧疾、肺結(jié)核、阿米巴病、弓形蟲病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、利什曼病、百日咳等，選取P＜0.05 且與雙心疾病相關(guān)的前30條繪制成氣泡圖，見圖4。

圖4 參七解郁方治療雙心疾病靶點(diǎn)KEGG信號通路分析

80 個(gè)基因中有67 個(gè)基因參與了前30 條通路的富集，涉及的信號通路包括低氧誘導(dǎo)因子-1 信號通路（HIF-1 signaling pathway）、腫瘤壞死因子信號通路（TNF signaling pathway）、磷脂酰肌醇3 激酶/絲氨酸蘇氨酸蛋白激酶信號通路（PI3K-AKT signaling pathway）、T 細(xì)胞受體信號通路（T cell receptor signaling pathway、叉頭框轉(zhuǎn)錄因子O 亞族信號通路（FoxO signaling pathway）、絲裂原活化蛋白激酶信號通路（MAPK signaling pathway）等通路，提示參七解郁方對于雙心疾病的治療可能通過多條信號通路以及作用多個(gè)作用靶點(diǎn)起作用。

2.4 藥物化合物-潛在靶點(diǎn)-信號通路網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建選擇KEGG 富集中的與雙心疾病相關(guān)的前30 條通路所包含的靶點(diǎn)以及靶點(diǎn)所對應(yīng)的化合物構(gòu)建化合物-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)，見圖5。此網(wǎng)絡(luò)包含了節(jié)點(diǎn)175個(gè)，邊線535 條，以度值為標(biāo)準(zhǔn)，參七解郁方活性化合物節(jié)點(diǎn)度值的中位數(shù)為4，涉及的活性成分有89個(gè)，如表1 所示，主要在前30 條信號通路中發(fā)揮作用，可能通過作用于56個(gè)靶點(diǎn)。

圖5 參七解郁方治療雙心疾病的成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)

表1 參七解郁方的活性成分信息

參七解郁方中度值大于5 的化合物共12 個(gè)，分別為槲皮素、木樨草素、山柰酚、柑橘素、二氫丹參內(nèi)酯、丹參酮ⅡA、丹參新醌D、異丹參酮Ⅱ、異鼠李素、3'，5'-二甲氧基聯(lián)苯-4-醇、隱丹參酮、β 谷甾醇，表明參七解郁方可能通過多成分、多靶點(diǎn)、多通路治療雙心疾病。

2.5 分子對接結(jié)果將度值大于5的前7 個(gè)活性成分的分子配體與前5個(gè)靶點(diǎn)STAT3、AKT1、IL-6、TNF、MAPK1 進(jìn)行對接，表2為對接靶點(diǎn)與活性成分的結(jié)合能數(shù)據(jù)，活性成分與靶點(diǎn)的分子對接顯示對接能力均較好。參七解郁方活性成分與靶點(diǎn)的分子對接模式圖見圖6。

圖6 參七解郁方活性成分與靶點(diǎn)的分子對接模式圖:A為STAT3與木犀草素結(jié)合；B為AKT1與丹參酮ⅡA結(jié)合；C為IL6與異丹參酮Ⅱ結(jié)合；D為TNF與山柰酚結(jié)合；E為TNF與柑橘素結(jié)合；F為MAPK1與異丹參酮Ⅱ結(jié)合

表2 活性成分與靶點(diǎn)的分子對接結(jié)果

3 討論

胡大一教授在我國最早提出“雙心醫(yī)學(xué)”理論，指心血管疾病可導(dǎo)致精神情緒障礙，相反精神情緒障礙又會加重原發(fā)疾病，疾病之間相互作用，導(dǎo)致疾病加重，病人痛苦不堪，有循證醫(yī)學(xué)研究表明也證實(shí)了這個(gè)結(jié)果［8］。冠心病中醫(yī)學(xué)歸為“胸痹”“心痛”“真心痛”等，“焦慮抑郁”歸為“郁證”，兩者雖然分屬不同疾病，但病位均為心，并與肝、脾、腎三臟均有密切聯(lián)系。如《靈樞》所云：“悲哀愁憂則心動(dòng)，心動(dòng)則五臟六腑皆搖”［9］。王鳳榮教授以《千金方》的“開心散”“定志小丸”化裁［10］，獨(dú)創(chuàng)參七解郁方，益氣化痰、安神定志。其中遠(yuǎn)志、石菖蒲具有開竅化痰之功，與補(bǔ)氣安神之人參共用，合為君藥。正如《本草經(jīng)》中所說此三藥共用有益氣養(yǎng)陰，定志解郁之功效。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究主要包括三個(gè)部分，一為篩選藥物活動(dòng)化學(xué)成分，二為獲取潛在的作用靶點(diǎn)，三為建構(gòu)作用網(wǎng)絡(luò)，比較適合于中藥復(fù)方多靶點(diǎn)、多途徑作用特點(diǎn)的機(jī)制研究。分子對接技術(shù)從剛性對接、半柔性對接到柔性對接，逐步闡明配體與受體的結(jié)合是一個(gè)動(dòng)態(tài)過程，即配體與受體誘導(dǎo)契合過程中發(fā)生構(gòu)象改變，最終形成形狀和能量最優(yōu)匹配的結(jié)合模式［11］。

本研究運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究方法得到參七解郁方核心藥物組合發(fā)揮作用的主要有效成分，可分為黃酮類化合物和丹參類化合物，其中黃酮類化合物包括黃酮（柑橘素和木樨草素）、黃酮醇（槲皮素、山柰酚）、類黃酮（異鼠李素），丹參類化合物包括丹參酮類（異丹參酮Ⅱ、丹參酮ⅡA、丹參新醌D、二氫丹參內(nèi)酯、隱丹參酮）和丹參酚類（β 谷甾醇）。黃酮對心腦血管有很好的保護(hù)作用，其可使體內(nèi)的膽固醇降低，使機(jī)體的血液循環(huán)得到改善，而且黃酮還有很強(qiáng)用抗氧化作用，通過清除氧自由基而起作用，從而阻止了細(xì)胞老化，可使心腦血管疾病的發(fā)病率有效降低［12］。有研究發(fā)現(xiàn)，一些具有抗焦慮抑郁的中藥中有很多含有黃酮類化合物成分［13］。槲皮素可通過多種途徑治療焦慮抑郁等神經(jīng)系統(tǒng)疾病，主要途徑包括降低炎癥因子、調(diào)節(jié)神經(jīng)突觸可塑性等［14］。有研究表明中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥因子水平升高是抑郁癥的重要表現(xiàn)之一，而槲皮素可以通過降低大腦內(nèi)的炎癥因子以預(yù)防小鼠的抑郁樣行為［15］。山柰酚亦有抗抑郁的治療效果，主要通過提升海馬神經(jīng)營養(yǎng)因子的水平、抑制神經(jīng)細(xì)胞過度自噬等途徑發(fā)揮作用［16］。木犀草素能夠使細(xì)胞凋亡水平降低并使細(xì)胞活力得到增強(qiáng)，其主要通過抑制MMP9及使PI3K/AKT 信號通路激活而實(shí)現(xiàn)的［17］，從而達(dá)到抑制凋亡、抗炎、改善動(dòng)脈粥樣硬化等作用。丹參作為經(jīng)典的傳統(tǒng)中草藥，具有祛瘀止痛、活血通經(jīng)的作用，而且還具有清心除煩的療效，在雙心疾病的治療方面效果可靠［18-19］。丹參類化合物包括多種有效成分，其中丹參酮類成分含量較高，其有擴(kuò)張血管、降脂、抗氧化等作用。學(xué)者研究表明動(dòng)脈硬化大鼠血清中水平較高的ox-LDL、MDA、ROS可以通過丹參酮類化合物干預(yù)降低，SOD 水平得到提高。臨床研究表明氧化應(yīng)激會導(dǎo)致機(jī)體的氧自由基水平升高，而這也是引發(fā)焦慮抑郁狀態(tài)的精神類疾病的重要病因之一。有研究表明應(yīng)用隱丹參酮干預(yù)抑郁模型小鼠，其可使小鼠前額葉皮質(zhì)與海馬的BDNF 的表達(dá)水平得到提升，提示隱丹參酮發(fā)揮抗抑郁作用可能通過改善BDNF得到體現(xiàn)［20］。

PPI 網(wǎng)絡(luò)以及核心靶點(diǎn)顯示參七解郁方的有效成分靶點(diǎn)主要為 STAT3、AKT1、IL6、TNF、MAPK1等，且分子對接證實(shí)有效成分靶點(diǎn)與各主要成分之間具有良好的結(jié)合能力。STAT3作為調(diào)節(jié)細(xì)胞因子誘導(dǎo)的促炎和抗炎反應(yīng)的重要轉(zhuǎn)錄因子之一，可促進(jìn)與炎癥相關(guān)的基因表達(dá)，其激活可增加神經(jīng)炎癥相關(guān)的細(xì)胞因子分泌［21］。MAPK 信號傳導(dǎo)涉及多種生物過程，如組織發(fā)育、細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡等等。在動(dòng)脈粥樣硬化形成過程中，ox-LDL 和酶促修飾LDL 在巨噬細(xì)胞中誘導(dǎo)MAPK 活化，這反過來通過PPAR 介導(dǎo)的LDL 攝取受體如CD36 的上調(diào)來增強(qiáng)LDL 攝取［22-23］。此外，MAPK1 可通過調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄、翻譯、細(xì)胞骨架重排來介導(dǎo)多種生物學(xué)功能，可參與神經(jīng)發(fā)育、神經(jīng)可塑性和重度抑郁癥的基因。KEGG 通路富集結(jié)果發(fā)現(xiàn)，參七解郁方可能通過調(diào)節(jié)PI3K-AKT 信號通路、FoxO 信號通路、MAPK 信號通路、TNF 信號通路、HIF-1 信號通路等改善雙心疾病。PI3K/AKT 信號通路為重要的細(xì)胞信號通路之一，其廣泛存在于細(xì)胞中，是介導(dǎo)多種生長因子促存活的重要通路，在抑郁癥及抗抑郁藥物作用機(jī)制的研究中逐漸受到關(guān)注。AKT 是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，為 PI3K下游的一個(gè)重要靶標(biāo)。AKT有AKT1、AKT2、AKT3。AKT1 是3 種亞型中為最重要的亞型，也是唯一在心臟和大腦中都富集的AKT 亞型，在冠心病及焦慮抑郁中均發(fā)揮重要的作用［24］。Fox O 家族是Fox基因家族中的一個(gè)亞族，能與DNA上的反應(yīng)元件結(jié)合，激活靶基因，參與細(xì)胞增殖、分化、代謝、凋亡等過程。PI3K/AKT 信號通路在Fox O調(diào)節(jié)過程中發(fā)揮著重要的作用。

從網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析結(jié)果可見，參七解郁方治療雙心疾病為多成分、多靶點(diǎn)、多通路的模式。參七解郁方可能通過活性成分槲皮素、木樨草素、山柰酚、柑橘素、丹參酮ⅡA、丹參新醌D、異丹參酮Ⅱ、異鼠李素、3'，5'-二甲氧基聯(lián)苯-4-醇、隱丹參酮、二氫丹參內(nèi)酯、β 谷甾醇等與 STAT3、AKT1、IL-6、TNF、MAPK1 等蛋白結(jié)合，進(jìn)而調(diào)節(jié)TNF signaling pathway、PI3K-AKT signaling pathway、T cell receptor signaling pathway、MAPK signaling pathway 等信號通路，發(fā)揮降低炎癥反應(yīng)、凋亡，提高神經(jīng)營養(yǎng)、可塑性等的作用。

本研究通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法和分子對接技術(shù)對參七解郁方治療雙心疾病的作用靶點(diǎn)和途徑進(jìn)行預(yù)測和驗(yàn)證，研究的局限性也很明確，即未采用體內(nèi)、外實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證預(yù)測的結(jié)果，僅僅使用分子對接驗(yàn)證方式仍是不夠深入的，還需進(jìn)行具體實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步論證與探索，這為我們今后的研究提供了新思路和新方向。