不同產(chǎn)地蒙古黃芪的非靶向代謝組學(xué)分析

宋詩娟　雷振宏　郭旭　王圓圓　燕翔　牛景萍　趙成萍　梁建萍

摘要：黃芪（Astragalus membranaceus）是一種傳統(tǒng)的道地藥材，藥用歷史悠久，分布范圍廣，不同產(chǎn)地黃芪的藥材品質(zhì)和療效相差甚遠(yuǎn)，次生代謝物的類型和含量是決定藥材品質(zhì)的物質(zhì)基礎(chǔ)。為了研究不同產(chǎn)地黃芪次級(jí)代謝物的差異，為解析黃芪品質(zhì)形成提供重要依據(jù)，同時(shí)為優(yōu)質(zhì)黃芪的選育奠定基礎(chǔ)，試驗(yàn)對來自山西渾源（S2-7）、山西五臺(tái)（S2-9）、甘肅和政藥園（S2-10）的3 種蒙古黃芪根進(jìn)行基于LC-MS/MS 的非靶向代謝組學(xué)測定，利用主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘法判別分析（OPLS-DA）方法進(jìn)行差異代謝物篩選，并通過KEGG 數(shù)據(jù)庫進(jìn)行通路富集分析。結(jié)果顯示，共鑒定出674 種代謝產(chǎn)物，分為29 類，主要包括萜類物質(zhì)、黃酮類物質(zhì)、苯丙素類物質(zhì)和生物堿類物質(zhì)。依據(jù)P<0.05、變量投影重要度（VIP）>1 篩選差異代謝物，甘肅黃芪（S2-10）與山西黃芪組（S2-7、S2-9）間篩選出81 種差異代謝物；山西五臺(tái)（S2-9）和渾源（S2-7）2 個(gè)產(chǎn)地黃芪間篩選出67 種差異代謝物；這些代謝物在含量上存在顯著差異。對通路進(jìn)行富集分析可知，甘肅黃芪與山西黃芪組富集到3 條差異顯著的代謝通路：異喹啉生物堿生物合成、吲哚生物堿生物合成以及煙酸鹽和煙酰胺代謝通路。綜上可見，不同產(chǎn)地黃芪次級(jí)代謝物的類型和含量存在一定差異。

關(guān)鍵詞：蒙古黃芪；不同產(chǎn)地；LC-MS/MS；PCA；OPLS-DA；非靶向代謝組學(xué)；差異代謝物

中圖分類號(hào)：R284文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1002?2481（2024）01?0043?12

黃芪是傳統(tǒng)的大宗中藥材，為豆科植物蒙古黃芪（Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge. var. mon?gholicus（Bge.）Hsiao）或膜莢黃芪（A. membranaceus（Fisch.）Bge.）的干燥根，最早記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》[1]。黃芪為多年生草本植物[2]，從幼苗到收獲周期為2～5 a，分布范圍廣，主要生長在我國山西、內(nèi)蒙古、甘肅、陜西、寧夏等省份，具有豐富的遺傳多樣性[3-4]。迄今為止，已從黃芪中鑒定出多種代謝物，包括皂苷、類黃酮、多糖和氨基酸等，其主要生物活性成分為黃酮、皂苷和多糖[2]。更重要的是，黃芪具有止汗、抗利尿、抗腫瘤、抗氧化和抗炎等作用[5-9]，黃芪在中成藥、保健品、化妝品等領(lǐng)域倍受青睞，而其代謝成分是黃芪藥材品質(zhì)形成的重要物質(zhì)基礎(chǔ)，因此，開展黃芪代謝組學(xué)研究，對于黃芪種質(zhì)資源鑒定、品質(zhì)評(píng)價(jià)、新品種選育、代謝成分體外合成機(jī)制極為重要[10]。

代謝組學(xué)分析是一種基于高通量技術(shù)對整個(gè)生物體內(nèi)小分子代謝物進(jìn)行研究的方法，能夠檢測生物體代謝物并篩選出顯著差異代謝物，在此基礎(chǔ)上研究相應(yīng)的代謝通路及其變化機(jī)制[11]。近年來代謝組學(xué)技術(shù)被廣泛應(yīng)用于中藥材質(zhì)量控制與品質(zhì)評(píng)價(jià)、植物分類、資源鑒定、親緣關(guān)系評(píng)估以及代謝調(diào)控網(wǎng)絡(luò)等領(lǐng)域[10]。其中非靶向代謝組學(xué)主要通過尋找試驗(yàn)組和對照組之間的差異代謝產(chǎn)物以及分析代謝途徑與表型之間的關(guān)系，從整體反映代謝物的變化，提供更廣泛的代謝物覆蓋，實(shí)現(xiàn)不同樣品間代謝特征的比較，有利于發(fā)現(xiàn)新的代謝通路[12-14]。WU 等[2]基于UPLC-Q-Orbitrap 方法對蒙古黃芪進(jìn)行綜合轉(zhuǎn)錄組和代謝組學(xué)分析，共檢測到5 435 種代謝物，闡明苯丙素生物合成、類黃酮生物合成和異黃酮生物合成的完整途徑，發(fā)現(xiàn)了新的類黃酮衍生物，并推斷出它們在黃芪中可能的合成途徑。WANG 等[15]利用UHPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS 方法，對蒙古黃芪和膜莢黃芪進(jìn)行了化學(xué)鑒別，共檢測到53 種差異代謝物，初步推斷膜莢黃芪比蒙古黃芪有更強(qiáng)的藥理活性。牛媛婧等[16]通過非靶向代謝組學(xué)方法分析不同產(chǎn)地黨參之間的差異，篩選得到72 種差異代謝物，主要代謝通路為苯丙素生物合成。孟益德等[10]利用UPLC-QTOF/MS方法對不同產(chǎn)地杜仲雄花進(jìn)行了非靶向代謝組學(xué)分析，共篩選出45 個(gè)顯著差異代謝物，主要參與氨?；鵷RNA 生物合成、類黃酮生物合成、黃酮和黃酮醇生物合成以及ABC 轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白等代謝途徑。但是運(yùn)用非靶向代謝組學(xué)方法分析不同產(chǎn)地黃芪中代謝物的差異尚未見報(bào)道。

本研究基于實(shí)驗(yàn)室前期對來源于8 個(gè)省份的80 份不同蒙古黃芪種質(zhì)資源的聚類分析[17]，選擇分屬2 個(gè)亞群遺傳背景差異較大的3 個(gè)種質(zhì)為試驗(yàn)材料，分別為來自甘肅政藥園的S2-10、來自山西五臺(tái)的S2-9 與來自山西渾源的S2-7，采用LC-MS/MS 系統(tǒng)組合型四極桿Orbitrap 質(zhì)譜技術(shù)，結(jié)合多元變量模式識(shí)別分析，檢索常規(guī)數(shù)據(jù)庫及測定公司自建的中藥材數(shù)據(jù)庫，從代謝組學(xué)的角度探討不同產(chǎn)地蒙古黃芪有效成分積累的差異，旨在為挖掘和選育高品質(zhì)黃芪資源奠定基礎(chǔ)。

1材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料與儀器

供試材料為3 種位于2 個(gè)亞群[17]的不同產(chǎn)地蒙古黃芪，于2018 年采自山西和甘肅，分別記為S2-7（山西省渾源縣）、S2-9（山西省五臺(tái)縣）、S2-10（甘肅省和政藥用植物園）。2019 年5 月采用種子直播種植于汾陽市山西農(nóng)業(yè)大學(xué)經(jīng)濟(jì)作物研究所黃芪種質(zhì)資源圃（111°47 ′42.13 ″E，37°14 ′55.90 ″N）內(nèi)，2020 年11 月選取長勢一致的健康黃芪植株，每個(gè)產(chǎn)地3 次重復(fù)，剪掉地上莖葉，清理根部表面泥土后帶回實(shí)驗(yàn)室，測量基本生物量后烘干備用。

試驗(yàn)儀器包括：1290 UPHLC超高效液相（Ameri?can Agilent），Q Exactive Focus 高分辨質(zhì)譜（Ameri?can Thermo Fisher Scientific），Heraeus Fresco17 離心機(jī)（American Thermo Fisher Scientific），BSA124S-CW 電子天平（Germany Sartoriu），JXFSTPRP-24 研磨儀（上海凈信科技有限公司），色譜柱：ACQUITY UPLC BEH C18（American Waters），明澈D24 UV 純水儀（Merck Millipore），YM-080S超聲儀（深圳方奧微電子有限公司），乙腈、甲酸、甲醇（色譜純，CNW Technologies，Germany），L-2-氯苯丙氨酸（分析純，上海恒柏生物科技有限公司）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 代謝物提取

將3 個(gè)產(chǎn)地的黃芪根樣品進(jìn)行研磨（60 Hz，1 min）；稱取100 mg 樣本，加2 個(gè)小鋼珠，加入500 μL 提取液（甲醇∶水=4∶1）；渦旋30 s 后45 Hz/240 s 研磨，冰水浴超聲1 h；-40 ℃靜置1 h 后將樣本4 ℃，12 000 r/min（離心力13 800×g，半徑8.6 cm）離心15 min；取出上清過0.22 μm 濾膜至進(jìn)樣瓶中上機(jī)檢測；所有樣本取30 μL 上清混合成QC 樣本上機(jī)。

1.2.2 色譜條件

采用Waters 的UPLC BEH C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm），柱溫45 ℃，流速0.4 mL/min，進(jìn)樣體積為5 μL。流動(dòng)相A 是水（含0.1% 甲酸），B 是乙腈（含0.1% 甲酸），梯度洗脫條件為0～3.5 min，95%～85%A；3.5～6.0 min，85%～70%A；6.0～6.5 min，70%～70%A；6.5～12.0 min，70%～30%A；12.0～12.5 min，30%～30%A；12.5～18.0 min，30%～0%A；18.0～25.0 min，0%～0%A ；25.0～26.0 min ，0%～95%A ；26.0～30.0 min，95%～95%A。

1.2.3 質(zhì)譜條件

利用Q Exactive Focus 質(zhì)譜儀，在控制軟件（Xcalibur，Thermo Fisher Scientific）控制下，采用FullScan-ddMS2 功能進(jìn)行一級(jí)和二級(jí)質(zhì)譜數(shù)據(jù)的采集。詳細(xì)參數(shù)如下：鞘氣流量為45 L/min；輔助氣體流量為15 L/min；毛細(xì)管溫度為400 ℃；總質(zhì)譜分辨率為70 000；二級(jí)質(zhì)譜分辨率為17 500；碰撞能量為15 eV/30 eV/45 eV（負(fù)離子模式），噴淋電壓為4.0 kV（正離子）或-3.6 kV（負(fù)離子）。

1.3 數(shù)據(jù)處理

將質(zhì)譜原始數(shù)據(jù)導(dǎo)入XCMS 軟件，進(jìn)行保留時(shí)間校正、峰鑒定、峰提取、峰積分、峰對齊等，采用派森諾公司自建中藥數(shù)據(jù)庫及相應(yīng)匹配方法對含有二級(jí)質(zhì)譜數(shù)據(jù)的峰進(jìn)行鑒定。采用主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘判別分析（OPLS-DA）等多元統(tǒng)計(jì)分析來區(qū)分組間代謝的總體差異，篩選差異代謝物。利用MetaboAnalyst 軟件依據(jù)KEGG數(shù)據(jù)庫對差異代謝物進(jìn)行途徑富集分析，以獲得代謝途徑富集結(jié)果，利用Matlab 繪制火柴桿圖。

2結(jié)果與分析

2.1 不同產(chǎn)地黃芪的非靶向代謝組學(xué)分析

依據(jù)來源，將S2-7 和S2-9 分為山西省黃芪資源（SXZY）組，S2-10 為甘肅省黃芪資源組。為深入了解不同產(chǎn)地黃芪之間藥用品質(zhì)的差異，對3 種不同產(chǎn)地黃芪進(jìn)行了LC-MS/MS 非靶向代謝組學(xué)測定，得到總離子流圖（圖1）。如圖1 所示，正負(fù)離子模式下的TIC 重疊度均較高，所檢測到物質(zhì)峰都比較豐富，且3 種不同種質(zhì)黃芪總離子流圖變化趨勢存在差異，如保留時(shí)間在4～12 min，不同種質(zhì)出現(xiàn)的峰對應(yīng)的物質(zhì)種類和相對含量明顯不同，此研究結(jié)果為后續(xù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異性代謝物奠定基礎(chǔ)。LC-MS/MS 原始數(shù)據(jù)預(yù)處理后，采用測定公司自建中藥數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索匹配，共檢測出674 種代謝物，分為29 類，其中，萜類物質(zhì)最多，為199 種；黃酮類物質(zhì)位居第2，有119 種；苯丙素類物質(zhì)位居第3，有61 種（表1）。

2.2 不同產(chǎn)地黃芪的代謝物判別分析

為理清S2-7、S2-9 和S2-10 之間化學(xué)成分的不同，采用多元統(tǒng)計(jì)法對其代謝物進(jìn)行分析。首先利用SIMCA 軟件將處理后的質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行PCA分析，觀察各樣本間的總體分布和整個(gè)分析過程的穩(wěn)定性，得到3 種不同產(chǎn)地黃芪的PCA 得分圖（圖2）。由圖2 可知，3 種不同產(chǎn)地黃芪的數(shù)據(jù)點(diǎn)在得分圖上可以明顯區(qū)分，S2-10 位于第1、4 象限，S2-7位于第3 象限，S2-9 位于第2 象限，表明3 種不同產(chǎn)地黃芪樣品中的代謝物存在明顯差異。

將3 種不同產(chǎn)地黃芪分為3 組S2-9 vs S2-7、S2-10 vs S2-7、S2-10 vs S2-9；同時(shí)，將甘肅省黃芪與山西省黃芪進(jìn)行比較，分為S2-10 vs SXZY組。采用OPLS-DA 進(jìn)一步對S2-9 vs S2-7、S2-10 vs S2-7、S2-10 vs S2-9 和S2-10 vs SXZY 4 組數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，由圖3-A-D 可知，4 組樣品分布在置信區(qū)間的左右兩側(cè)，判別效果明顯，顯示了4 組數(shù)據(jù)之間的顯著差異。對4 組模型進(jìn)行置換驗(yàn)證，由圖3-E-G 可知，置換檢驗(yàn)隨機(jī)模型的Q2 值均小于原模型的Q2 值，圖3-H 的置換檢驗(yàn)隨機(jī)模型的Q2值不小于原模型的Q2 值，但與縱軸負(fù)半軸相交，模型成立。綜上表明，這4 組原始模型具有良好的穩(wěn)定性，不存在過擬合現(xiàn)象，可用于進(jìn)一步篩選差異代謝物。

2.3 不同產(chǎn)地黃芪的差異代謝物篩選與鑒別

2.3.1 甘肅與山西黃芪的差異代謝物篩選與鑒別

采用多維分析和單維分析相結(jié)合的方法，依據(jù)Student?s t-test 的P<0.05，且OPLS-DA 的VIP>1 篩選組間差異代謝物。由圖4 可知，甘肅省黃芪（S2-10）與山西省黃芪（SXZY）共檢測到81 種差異代謝物，其中，43 種代謝物在S2-10 中豐度高，38 種代謝物在SXZY 組中豐度高。進(jìn)一步對差異代謝物的log2（FC）值進(jìn)行排序，篩選上調(diào)和下調(diào)前15 種代謝物（圖5），在甘肅黃芪中上調(diào)幅度前15 的差異代謝物包含：萜類4 種，生物堿、黃酮類、苯丙素類均為2 種，三萜類、有機(jī)酸及其衍生物、氨基酸衍生物、酚類和其他類物質(zhì)均為1 種；下調(diào)幅度前15 的差異代謝物有2 種萜類，2 種氨基酸衍生物，2 種黃酮類，苯丙素類、環(huán)烯醚萜類、糖類多酮類、糖類及其衍生物、有機(jī)氧化合物均為1 種，以及4 種其他類物質(zhì)。

綜上可見，S2-10 與SXZY 的主要差異代謝物為萜類、黃酮類和苯丙素類物質(zhì)，其中，差異倍數(shù)最大的代謝物為萜類物質(zhì)Oleanane-2H，+1O，1COOH，O-HexA-HexA，其差異倍數(shù)為115 倍，這些差異代謝物與甘肅和山西黃芪之間的藥材品質(zhì)差異有關(guān)。

2.3.2 五臺(tái)與渾源黃芪的差異代謝物篩選與鑒別

為闡明五臺(tái)黃芪（S2-9）和渾源黃芪（S2-7）之間的藥材品質(zhì)差異，同2.3.1 對S2-9 和S2-7 進(jìn)行組間分析，根據(jù)VIP 值和P 值（VIP>1，P<0.05）篩選到67 種差異代謝物，其中，32 種代謝物在S2-9 中豐度高，35 種代謝物在S2-7 中豐度高（圖6）。進(jìn)一步對差異代謝物的log2（FC）值排序，列出差異倍數(shù)前15（上調(diào)和下調(diào)）的代謝物（圖7），S2-9 與S2-7相比，上調(diào)的差異代謝物有4 種黃酮類，3 種苯丙素類，2 種生物堿，萜類、酚酸類、異戊烯醇脂類、蒽醌類均為1 種，其他類物質(zhì)2 種；下調(diào)的差異代謝物有11 種萜類，脂肪酸類、酯類、異戊烯醇脂類和其他類物質(zhì)均為1 種。

綜上可見，S2-9 的多數(shù)黃酮類、苯丙素類和生物堿類物質(zhì)高于S2-7（1≤log2FC≤3），S2-7 的多數(shù)萜類物質(zhì)高于S2-9（1≤-log2FC≤3），這些代謝物的差異可能是山西五臺(tái)與渾源黃芪藥材品質(zhì)差異的物質(zhì)基礎(chǔ)。

2.4 差異代謝物通路分析

分別將S2-10 vs SXZY 組的81 個(gè)差異代謝物及S2-9 vs S2-7 組的67 個(gè)差異代謝物在KEGG 數(shù)據(jù)庫映射后得到的通路進(jìn)行富集分析[18] （圖8），S2-10 vs SXZY 組共富集到8 條通路，有3 條差異顯著的通路（P<0.05），分別是異喹啉生物堿生物合成、吲哚生物堿生物合成和煙酸鹽和煙酰胺代謝，其差異代謝物為多巴胺、色胺和煙酸，且都作用于植物抗逆性與生長調(diào)節(jié)，推測與不同產(chǎn)地的氣候條件和土壤條件相關(guān)；S2-9 vs S2-7 組富集到8 條通路，無差異顯著通路，說明山西省內(nèi)兩組黃芪種質(zhì)在種源上差異不大，可能與早期各地引種導(dǎo)致種質(zhì)混雜有關(guān)[19]，綜上可見，來源于不同省份的黃芪親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。

3結(jié)論與討論

本研究基于液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)對3 種不同產(chǎn)地黃芪進(jìn)行了非靶向代謝組學(xué)分析，共檢測出674 種代謝物，分為29 類，3 個(gè)產(chǎn)地的黃芪均含有較多的萜類、黃酮類和苯丙素類化合物。隨后對質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行PCA 分析，發(fā)現(xiàn)3 個(gè)種質(zhì)可以明顯區(qū)分，由于PCA 是一種無監(jiān)督的分析方法，環(huán)境和系統(tǒng)誤差都會(huì)對結(jié)果造成影響。為排除因試驗(yàn)無關(guān)的某些因素引起的代謝變化，同時(shí)理清不同種質(zhì)兩兩之間的對比，將3 個(gè)種質(zhì)分為4 組，進(jìn)行可以過濾掉代謝物中與分類變量不相關(guān)的正交變量，并對非正交變量和正交變量分別分析的OPLS-DA 分析[21]，4 組數(shù)據(jù)皆區(qū)分明顯，且數(shù)據(jù)穩(wěn)定。綜合2 種分析方法表明，不同產(chǎn)地黃芪的代謝物在類型和含量上具有一定的差異。

甘肅黃芪（S2-10）與山西黃芪（S2-9、S2-7）組比較，共篩選出81 種差異代謝物；進(jìn)一步篩選差異前15 的代謝物，發(fā)現(xiàn)甘肅黃芪與山西黃芪的主要差異代謝物為萜類、黃酮類和苯丙素類物質(zhì)。戴瑜婷等[22]研究表明，不同產(chǎn)地黃芪的總皂苷、總黃酮、總多糖的含量也不同，可以作為黃芪質(zhì)量標(biāo)志物預(yù)測分析指標(biāo)。本研究中上調(diào)第一的萜類物質(zhì)Oleanane-2H， +1O， 1COOH， O-HexA-HexA 主要存在于S2-10 中，通過Mass Bank 檢索發(fā)現(xiàn)，Oleanane-2H， +1O， 1COOH， O-HexA-HexA 是一種三萜皂苷類物質(zhì)，可進(jìn)一步對該物質(zhì)進(jìn)行探索，以期找到可鑒別甘肅黃芪（S2-10）與山西黃芪（S2-7、S2-9）的潛在標(biāo)志性物質(zhì)，為甘肅黃芪的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。山西省內(nèi)兩產(chǎn)區(qū)五臺(tái)與渾源黃芪組，共篩選出67 種差異代謝物，進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)五臺(tái)黃芪（S2-9）中黃酮類、苯丙素類和生物堿類成分顯著高于渾源黃芪（S2-7），而渾源黃芪中的萜類成分顯著高于五臺(tái)黃芪。表明即使是山西產(chǎn)黃芪，因分布區(qū)地理位置、土壤、溫度等生態(tài)條件不同，也會(huì)影響黃芪體內(nèi)代謝物的合成。但本研究中根據(jù)差異倍數(shù)，沒有發(fā)現(xiàn)可作為區(qū)分渾源黃芪（S2-7）與五臺(tái)黃芪（S2-9）的特征代謝物，后續(xù)可重復(fù)試驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證，以期為區(qū)分不同道地產(chǎn)區(qū)黃芪提供思路。

對差異代謝物進(jìn)行富集通路分析，S2-10 vsSXZY 組富集到3 條差異顯著通路，其中，異喹啉生物堿生物合成為最主要的代謝途徑，該通路從2 種酪氨酸衍生物的縮合開始，經(jīng)一系列反應(yīng)形成反式心果堿，并伴隨產(chǎn)生多巴胺等物質(zhì)。研究發(fā)現(xiàn)，該通路富集分析中多巴胺含量上調(diào)，推測反式心果堿含量也相應(yīng)增加，而反式心果堿是大部分生物堿的前體物質(zhì)[23]，因而甘肅黃芪（S2-10）的生物堿類物質(zhì)合成隨之增多，這與通路富集分析結(jié)果一致。生物堿是一類應(yīng)對生境脅迫的次生代謝產(chǎn)物，具有防御作用[24]，與生境脅迫耐受性相關(guān)。另外，在煙酸鹽和煙酰胺代謝通路中，煙酸含量上調(diào)，推測煙酰胺含量也得到提高，而煙酰胺與植物抗逆相關(guān)，是真核生物對逆境反應(yīng)應(yīng)答而產(chǎn)生的一種信號(hào)物質(zhì)[25]。由上分析，來源于不同省份的黃芪親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。同時(shí)，甘肅黃芪（S2-10）生物堿類物質(zhì)含量較多，可能與其應(yīng)對生境變化而提高抗逆性密不可分，后續(xù)可將本研究結(jié)果進(jìn)一步應(yīng)用于黃芪抗逆性等研究。

綜上可見，甘肅與山西黃芪具有較遠(yuǎn)的親緣關(guān)系，與實(shí)驗(yàn)室前期對80 份不同黃芪種質(zhì)的遺傳多樣性研究結(jié)果一致[17]，說明利用非靶向代謝組學(xué)分析不同種質(zhì)黃芪方法可行；而山西五臺(tái)與渾源黃芪的親緣關(guān)系較近，但在代謝物上也存在差異，可進(jìn)一步研究應(yīng)用于臨床藥理藥效分析。但本研究中甘肅、山西五臺(tái)和渾源黃芪均引種到山西汾陽，不排除生境改變引起的差異，仍需收集大量樣品進(jìn)行試驗(yàn)。

本研究采用非靶向代謝組學(xué)技術(shù)，從PCA、OPLS-DA 等多元統(tǒng)計(jì)分析、差異代謝通路KEGG富集分析等方面進(jìn)行了系統(tǒng)研究，發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地黃芪次級(jí)代謝物存在差異。同時(shí)，富集通路分析發(fā)現(xiàn)，S2-10 vs SXZY 組富集到3 條差異顯著通路，而S2-9 vs S2-7 組沒有差異顯著通路，進(jìn)一步證明不同省份黃芪之間親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，該研究為評(píng)價(jià)不同產(chǎn)地黃芪品質(zhì)提供新思路，并且環(huán)境因素對植物代謝產(chǎn)物的影響值得進(jìn)一步深入研究。

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