RS402007 基因多態(tài)性與腦梗死患者頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊易損性及降脂療效的關(guān)系

馬媛媛，張彩霞，張麗麗，楊麗華，侯志剛，丁建

滄州市人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科一區(qū)，河北滄州 061000

頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成與脂質(zhì)代謝失調(diào)、血管炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定可導(dǎo)致動(dòng)脈栓塞，從而引起腦組織缺血，增加了腦梗死的風(fēng)險(xiǎn)［1-2］。因此，探討頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成和穩(wěn)定性影響因素對(duì)預(yù)測(cè)早期腦梗死的發(fā)生以及病情嚴(yán)重程度評(píng)估有重要意義。研究顯示，解聚蛋白樣金屬蛋白酶（ADAMTS-1）在細(xì)胞黏附、細(xì)胞遷移、基質(zhì)降解和血栓形成等多種生物學(xué)過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。與其他蛋白酶一樣，ADAMTS-1基因也具有多態(tài)性，可導(dǎo)致蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)或功能變化，從而對(duì)個(gè)體生理狀況產(chǎn)生影響。研究表明，ADAMTS-1參與基質(zhì)的降解和細(xì)胞遷移，與動(dòng)脈硬化和斑塊形成有關(guān)［3-4］。RS402007（G/C）是ADAMTS-1的一個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)，該位點(diǎn)的多態(tài)性可改變ADAMTS-1的功能，從而影響動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成及穩(wěn)定性，導(dǎo)致相關(guān)心血管事件的發(fā)生。近年來(lái)，我們對(duì)RS402007基因多態(tài)性與腦梗死患者頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊易損性及降脂療效的影響進(jìn)行了探討?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2019 年7 月—2023 年7 月滄州市人民醫(yī)院收治腦梗死患者114 例，根據(jù)頸動(dòng)脈粥樣硬化性情況分為穩(wěn)定斑塊組56 例和易損斑塊組58 例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《中國(guó)腦梗死中西醫(yī)結(jié)合診治指南》［5］中的腦梗死診斷；②實(shí)驗(yàn)室或影像學(xué)檢查提示存在頸動(dòng)脈粥樣硬化；③臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他嚴(yán)重神經(jīng)系統(tǒng)疾病；②合并心腎疾病或血液系統(tǒng)疾病；③有頸動(dòng)脈手術(shù)史；④無(wú)法進(jìn)行影像學(xué)檢查?；颊呔椴⒑炇鹜鈺?shū)，本研究通過(guò)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 降脂治療及療效判定 患者入院后完善各項(xiàng)檢查并給予降脂治療，阿托伐他汀口服每次20 mg，每日1 次，治療4 周評(píng)定療效。有效：治療后患者頭暈、記憶力下降、思維模糊等癥狀和體征有所改善，血液LDL-C、HDL-C、TG 和TC 水平恢復(fù)正常；無(wú)效：治療后患者癥狀、體征無(wú)明顯變化，LDL-C、HDL-C、TG 和TC 水平較治療前無(wú)明顯變化。有效率=有效例數(shù)/總例數(shù)×100%。

1.3 血脂水平檢測(cè) 治療前、治療4周清晨取患者靜脈血5 mL，靜置后3 000 r/min離心10 min（半徑15 cm）。采用Elisa試劑盒檢測(cè)LDL-C、HDL-C、TG和TC。

1.4 基因多態(tài)性檢測(cè) 抽取患者空腹靜脈血2 mL，測(cè)定DNA 濃度后選擇目標(biāo)DNA 樣本。隨后在PCR 儀中設(shè)置以下反應(yīng)條件：預(yù)變性95 ℃ 2 min、95 ℃ 45 s、56 ℃ 45 s、72 ℃ 1 min，循環(huán)35次，72 ℃延伸10 min，對(duì)目標(biāo)DNA進(jìn)行擴(kuò)增。引物序列：正向引物：5'-GGCGTCTTTGGGATGGAA-3'，反向引物：5'-CAGGAGACACCGCTCGTAG-3'。通過(guò)凝膠電泳分析PCR 產(chǎn)物特性，確認(rèn)擴(kuò)增是否成功?；厥漳康腄NA 片段，并進(jìn)行DNA 測(cè)序，以獲取基因信息。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0 統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以±s表示，多組間比較采用方差分析；兩組間或治療前后比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組治療前臨床及血液生化指標(biāo)比較 兩組治療前性別、年齡、合并癥、血液及血清HDL-C、TG水平差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均>0.05），血清LDL-C、TC水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 兩組治療前臨床及血液生化指標(biāo)比較

2.2 兩組基因型及等位基因頻率 兩組RS402007（G/C）位點(diǎn)基因型符合Hardy-Weinberg 平衡（P>0.05），表明研究對(duì)象具有群體代表性。RS402007（G/C）基因位點(diǎn)測(cè)序結(jié)果見(jiàn)圖1，兩組基因型比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。見(jiàn)圖1、表2。

圖1 RS402007（G/C）基因位點(diǎn)測(cè)序結(jié)果

表2 兩組基因型及等位基因頻率比較

2.3 不同基因型患者降脂治療前后血脂水平變化 與治療前比較，GG、GC、CC 基因型患者治療后血清LDL-C、TG、TC 水平降低，HDL-C 水平升高（P均＜0.05）；治療后比較，CC 基因型患者血脂水平與GG 基因型、CC 基因型患者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 不同基因型患者降脂治療前后血脂水平比較（mmol/L，± s）

表3 不同基因型患者降脂治療前后血脂水平比較（mmol/L，± s）

注：與本組治療前比較，*P＜0.05。

基因型GG GC CC n 31 41 42 F P LDL-C治療前2.72 ± 0.77 2.57 ± 0.75 2.71 ± 0.73 0.109>0.05 HDL-C治療前1.33 ± 0.30 1.30 ± 0.28 1.32 ± 0.32 0.271>0.05 TG治療前1.71 ± 0.83 1.65 ± 1.03 1.69 ± 0.95 0.191>0.05 TC治療前4.91 ± 0.87 4.75 ± 1.01 4.89 ± 0.96 0.185>0.05治療后3.76 ± 0.62*3.57 ± 0.84*3.25 ± 0.68*1.429＜0.05治療后2.02 ± 0.86*1.84 ± 0.81*1.77 ± 0.63*0.334＜0.05治療后1.71 ± 0.45*1.74 ± 0.44*1.88 ± 0.47*0.808＜0.05治療后0.98 ± 0.59*0.91 ± 0.62*0.85 ± 0.60*1.379＜0.05

2.4 不同基因型患者降脂療效比較 GG、GC、CC基因型患者降脂治療有效率分別分別為80.65%（25/31）、84.62%（33/41）、88.64%（39/42）。CC 基因型患者有效率高于GG 基因型、CC 基因型患者（P均＜0.05），GG基因型、GC基因型患者有效率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

3 討論

ADAMTS-1 是一種屬于ADAMTS 家族的蛋白酶，參與基質(zhì)降解、細(xì)胞遷移等生物學(xué)過(guò)程，近年來(lái)該蛋白酶與腦梗死、頸動(dòng)脈粥樣硬化的相關(guān)性已引起學(xué)者們的廣泛關(guān)注［6］。頸動(dòng)脈粥樣硬化是一種慢性炎癥性疾病，其發(fā)生過(guò)程中動(dòng)脈內(nèi)膜受損、脂質(zhì)聚積形成斑塊［7-8］。ADAMTS-1活性與動(dòng)脈內(nèi)膜基質(zhì)降解有關(guān)，可通過(guò)其活性變化發(fā)揮動(dòng)脈壁組織修復(fù)和重塑作用，影響斑塊穩(wěn)定性，增加血栓形成風(fēng)險(xiǎn)［9］。頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊導(dǎo)致的血栓形成，可阻塞腦動(dòng)脈，從而引發(fā)腦梗死，因此，動(dòng)脈粥樣硬化是腦梗死的一種潛在危險(xiǎn)因素［10］。

RS402007 是ADAMTS-1 基因的一個(gè)重要位點(diǎn)，其多態(tài)性可能導(dǎo)致蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)或功能的變化，從而對(duì)心血管疾病的發(fā)生發(fā)展產(chǎn)生影響。研究表明，RS402007 基因變異可能與頸動(dòng)脈斑塊形成和動(dòng)脈硬化進(jìn)程相關(guān)；RS402007基因型影響頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的穩(wěn)定性，增加了血栓形成風(fēng)險(xiǎn)，從而促進(jìn)了頸動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展［11-12］。本研究顯示，頸動(dòng)脈粥樣硬化穩(wěn)定斑塊患者與易損斑塊患者RS402007基因型頻率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示RS402007基因多態(tài)性對(duì)頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的穩(wěn)定性有一定影響。另有研究提示，RS402007基因多態(tài)性與腦梗死患者降脂治療效果有關(guān)；不同RS402007基因型腦梗死患者ADAMTS-1 功能差異對(duì)動(dòng)脈斑塊形成、斑塊易損性及血栓形成的作用不同，從而對(duì)降脂治療效果產(chǎn)生影響。

阿托伐他汀通過(guò)降低血清LDL-C|、TG水平，抑制動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成，從而降低心腦血管事件的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，目前被廣泛用于預(yù)防和治療動(dòng)脈粥樣硬化、心肌梗死、腦梗死等心腦血管疾?。?3-14］。本研究中，阿托伐他汀治療4周后各基因型患者治療前后血脂水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，CC基因型患者血脂水平改善優(yōu)于GG基因型、CC基因型患者，同時(shí)CC基因型患者降脂有效率高于GG基因型、CC基因型患者。劉艷輝等［15］研究表明，APOE 基因多態(tài)性能影響阿托伐他汀療效；鄒佳等［16］研究發(fā)現(xiàn)，PCSK9基因RS562556位點(diǎn)顯性模型能提高漢族人急性缺血性腦卒中的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)；CAI等［17］使用他汀類(lèi)藥物治療高脂血癥患者研究發(fā)現(xiàn)，ApoE4 基因攜帶者的ApoE 蛋白表達(dá)與E2 或E3 基因攜帶者的表達(dá)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，并且ApoE4攜帶者的他汀類(lèi)藥物療效較非ApoE4基因攜帶者更好。本研究結(jié)果與上述研究一致，證實(shí)RS402007（G/C）位點(diǎn)多態(tài)性影響阿托伐他汀的降脂療效。

綜上所述，RS402007 基因多態(tài)性與頸動(dòng)脈粥樣硬化性斑塊易損性相關(guān)，且對(duì)藥物的降脂療效有一定影響。但本研究樣本量小、觀察時(shí)間較短，研究結(jié)果的客觀性有待多中心、大樣本及更長(zhǎng)時(shí)間的觀察研究加以證實(shí)。