膜聯(lián)蛋白A家族在子癇前期發(fā)生發(fā)展中的作用研究進展

李圣仙，潘玉靜，曹德恣，霍琰

1 華北理工大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院，河北唐山 063000；2 北方學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)院；3 河北省人民醫(yī)院產(chǎn)科

子癇前期是指妊娠20 周后孕婦新發(fā)的血壓升高、視物模糊、水腫及蛋白尿，病情迅速惡化時可傷及腦、心血管和肝腎等全身多種臟器，其發(fā)病率占妊娠期孕婦的2%～5%，是孕產(chǎn)婦及圍產(chǎn)兒死亡的重要原因之一。國內(nèi)外專家學(xué)者推測，如果子宮螺旋動脈重鑄不良、滋養(yǎng)細(xì)胞增殖、侵襲及凋亡能力受損，胎盤血液灌注缺乏，可通過氧化應(yīng)激合成相關(guān)因子釋放至循環(huán)系統(tǒng)，引起全身炎性反應(yīng)，導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞損傷、血管舒縮失調(diào)、胎盤及子宮缺血缺氧等變化，影響胎兒宮內(nèi)發(fā)育［1］。膜聯(lián)蛋白（ANX）是一類鈣依賴性能結(jié)合帶負(fù)電荷膜磷脂的高豐蛋白超家族，分為A、B、C、D 和E 五組。膜聯(lián)蛋白A 亞類由AnxA1-A11 和AnxA13 組成，常見于脊椎動物中，以組織特異性方式表達，廣泛存在于細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞外基質(zhì)中，膜聯(lián)蛋白有相似的核心結(jié)構(gòu)域，其中包含4 個與二價鈣離子結(jié)合的α-螺旋重復(fù)序列，并對膜磷脂具有高親和力。每個膜聯(lián)蛋白都有一個獨特的氨基末端（N 端）“尾巴”結(jié)構(gòu)域，允許與其他蛋白質(zhì)相互作用，表現(xiàn)出不同的特性［2］。膜聯(lián)蛋白A家族成員與人類細(xì)胞的一系列生理功能密切關(guān)聯(lián)，如囊泡運輸、細(xì)胞增殖、細(xì)胞分裂、細(xì)胞凋亡、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、抗炎、新血管生成、抗凝血等［3-4］。越來越多的證據(jù)表明，膜聯(lián)蛋白A家族蛋白與多種疾病有關(guān)，包括腫瘤、糖尿病、子癇前期、自身免疫性疾病和抗磷脂綜合征等［5-6］。膜聯(lián)蛋白A 家族的作用已從基礎(chǔ)科學(xué)擴展到生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，并正在轉(zhuǎn)化為臨床［7］，且采用跨學(xué)科協(xié)同作用揭示膜聯(lián)蛋白A家族成員介導(dǎo)質(zhì)膜成形和修復(fù)機制?，F(xiàn)就膜聯(lián)蛋白A家族主要成員（ANXA1、ANXA2、ANXA4、ANXA5、ANXA7）在子癇前期發(fā)生發(fā)展中的作用研究進展綜述如下。

1 ANXA1在子癇前期中的作用

ANXA1廣泛表達于肺、腎、腦、血管和心臟組織中的白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和上皮細(xì)胞，是一種具有抗磷脂酶活性的糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)蛋白，可抑制中性粒細(xì)胞通過內(nèi)皮的黏附/遷移和刺激巨噬細(xì)胞吞噬凋亡的中性粒細(xì)胞減輕炎癥反應(yīng)。ANXA1 受脂多糖（LPS）和白細(xì)胞介素（IL-6）等促炎蛋白的調(diào)節(jié)，因此可作為控制炎癥反應(yīng)的制動器［8］。

研究發(fā)現(xiàn)，子癇前期患者血漿中ANXA1水平高于血壓正常孕婦，且ANXA1 與1 型可溶性腫瘤壞死因子α 受體（sTNF-R1）呈正相關(guān)［9］；子癇前期患者胎盤組織中ANXA1 和Gal-3 表達增加［10］；在PE 模型（L-NAME）中大鼠的滋養(yǎng)層細(xì)胞增殖和炎性細(xì)胞浸潤明顯增加，血漿中的TNF-α、IL-1β、IL-6 和IL-8 水平均高于對照，胎盤中ANXA1 表達上調(diào)，在子癇前期模型中獲得的胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)，siRNAANXA1 顯著下調(diào)，JAK2 和STAT3 磷酸化，但不影響JAK2 和STAT3 水平，JAK2/STAT3 通路與妊娠并發(fā)癥的發(fā)生相關(guān)。ANXA1 的缺失通過上調(diào)pro-Caspase-3、Bcl-2 及下調(diào)cleaved-Caspase-3、Bax 來抑制滋養(yǎng)細(xì)胞的凋亡。單細(xì)胞實驗證明ANXA1 低表達降低了子癇前期滋養(yǎng)細(xì)胞的凋亡和炎癥反應(yīng)［11］。

ANXA1 在子癇前期中的高表達可能與免疫反應(yīng)引起的全身炎癥反應(yīng)有關(guān)。在正常妊娠中，已確定炎癥和調(diào)節(jié)反應(yīng)之間存在穩(wěn)態(tài)平衡。子癇前期的發(fā)生發(fā)展與免疫系統(tǒng)的慢性激活有關(guān)，此會導(dǎo)致T細(xì)胞產(chǎn)生炎性因子增加，調(diào)節(jié)性和抗炎性因子減少，從而進一步加劇子癇前期的炎癥狀態(tài)。促炎和抗炎因子之間的不平衡與胎盤缺血相關(guān)，隨著妊娠的進展這種不平衡會加?。?2］。但目前關(guān)于ANXA1 在妊娠早中期的檢測較少，其是否具有子癇前期的預(yù)測價值還需大樣本的前瞻性研究。

2 ANXA2在子癇前期中的作用

ANXA2 是一種連接膜相關(guān)蛋白復(fù)合物的連接蛋白，通過調(diào)節(jié)白細(xì)胞的募集和炎癥介質(zhì)的釋放，參與炎癥小體的激活，以及細(xì)胞自噬和細(xì)胞凋亡的啟動；ANXA2 可通過C 端結(jié)構(gòu)域與F-肌動蛋白、G-肌動蛋白、肝素和纖溶酶原結(jié)合而相互作用［13-14］，ANXA2 的N 端結(jié)構(gòu)域可與S100A10 和纖溶酶原激活劑（t-Pa）結(jié)合而相互作用［15］。

子癇前期患者外周血中ANXA2 抗體表達增強［16］，胎盤中ANXA2 和VEGF 表達降低，且ANXA2和VEGF 表達呈正相關(guān)［17］；子癇前期患者血清中ANXA2 水平顯著降低，ANXA2 水平的ROC 曲線分析預(yù)測PE 的發(fā)展，曲線下面積為0.64，最佳截斷值為0.89 ng/mL，靈敏度為70.0%，特異度為70.0%，蛋白尿、血小板計數(shù)降低和血壓升高與發(fā)生子癇前期的風(fēng)險相關(guān)［18］。在動物實驗中發(fā)現(xiàn)，雌性ANXA2［e/e］小鼠具有生育能力，但ANXA2［e/e］小鼠蛻膜組織中的催乳素IGFBP1 標(biāo)志物顯著減少，ANXA2參與妊娠期子宮內(nèi)膜的蛻膜化；ANXA2［e/e］小鼠的窩產(chǎn)仔數(shù)正常，但同窩仔鼠的體質(zhì)量評估顯示重量減輕10%~13%，ANXA2 的缺失與仔鼠宮內(nèi)生長受限和胎盤功能受損有關(guān)。ANXA2 可能在重度子癇前期患者蛻膜化子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞中具有病因?qū)W作用，子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞的蛻膜化至少部分由ANXA2 導(dǎo)致［19］。但SANO 等［20］發(fā)現(xiàn)，重度子癇前期患者胎盤中ANXA2 表達顯著升高，胎盤ANXA2 的免疫組織化學(xué)染色率較高。這項研究首次證明重度子癇前期患者胎盤中ANXA2表達增加，這與目前多數(shù)研究認(rèn)為子癇前期患者胎盤中的ANXA2 表達低于正常孕婦的結(jié)論有所不同，不排除與樣本例數(shù)及收集標(biāo)準(zhǔn)的差異有關(guān)，同時也可能與重度子癇前期患者的血管收縮及應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)，因此，仍需進一步研究子癇前期患者胎盤中ANXA2表達和作用機制。

ANXA2 是纖溶酶原和組織纖溶酶原激活劑的內(nèi)皮細(xì)胞上的輔助受體，在纖溶酶的形成過程中發(fā)揮重要作用。子癇前期患者中高表達的ANXA2 抗體阻止胎盤中促纖維蛋白生成，同時可抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞表面ANXA2 的促纖溶作用［21］。子癇前期患者胎盤中ANXA2 和VEGF 表達下降則可能與凝血酶增加致使胎盤組織中血管生成障礙有關(guān)。ROCK是一種在細(xì)胞骨架重排過程中與ANXA2 相互作用的蛋白質(zhì)，是一種關(guān)鍵的細(xì)胞內(nèi)信號分子，可協(xié)調(diào)細(xì)胞擴散、運動和形狀變化；子癇前期患者蛻膜中低表達的ANXA2 可能會影響ROCK 調(diào)節(jié)蛻膜化和隨后的基質(zhì)細(xì)胞運動、遷移和細(xì)胞骨架重組，從而不利于胚泡侵襲，造成胎兒宮內(nèi)生長受限，促使子癇前期的發(fā)生發(fā)展。重度子癇前期患者胎盤中高表達的ANXA2 可能與孕婦應(yīng)激反應(yīng)所致的血管收縮和炎癥風(fēng)暴有關(guān)，但還需進一步研究來闡明重度子癇前期的機制。

3 ANXA4在子癇前期中的作用

ANXA4 是一種鈣和磷脂結(jié)合蛋白，可促進膜融合并參與胞吐作用。在生理上，ANXA4可抑制腺苷酸環(huán)化酶5 和干擾硫苷脂誘導(dǎo)的血漿凝固，腺苷酸環(huán)化酶5 具有催化ATP 轉(zhuǎn)化為腺苷3'，5'-環(huán)單磷酸（cAMP）的作用［22］。

在子癇前期患者的胎盤和子癇前期胎盤衍生的絨毛外細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞（EVCT）中ANXA4、PI3K、p-Akt 和p-eNOS 表達下調(diào)；ANXA4 過表達促進滋養(yǎng)細(xì)胞增殖和侵襲，抑制細(xì)胞凋亡，并上調(diào)人滋養(yǎng)層細(xì)胞HTR-8/SVneo 和JEG-3 中PI3K、p-Akt 和p-eNOS蛋白表達；子癇前期大鼠模型（L-NAME）胎盤中ANXA4、PI3K、p-Akt和p-eNOS表達下調(diào)［23］。

PI3K/Akt 通路在子癇前期患者胎盤中被激活以調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖，其信號傳導(dǎo)參與調(diào)節(jié)滋養(yǎng)層遷移和侵襲［24］；子癇前期患者的胎盤表現(xiàn)出內(nèi)皮一氧化氮合酶（eNOS）表達降低；ANXA4 在子癇前期中低表達，可能通過PI3K/Akt/eNOS 通路促進子癇前期的滋養(yǎng)層侵襲。

4 ANXA5在子癇前期中的作用

ANXA5 是具有有效抗凝活性的陰離子磷脂結(jié)合蛋白，可抑制凝血酶原的活化，在正常的靜脈和動脈血流情況下防止血栓形成，可保護合胞體表面免受血塊形成的影響，可與磷脂酰絲氨酸（PS）結(jié)合檢測細(xì)胞的凋亡［25］。

子癇前期患者胎盤中的ANXA5表達降低，新生兒標(biāo)準(zhǔn)體質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)差降低，胎盤中的蛻膜血管病變、梗塞，絨毛周圍纖維蛋白沉積和遠端絨毛發(fā)育不全［26］。ANXA5 在子癇前期患者中低表達的作用機制可能是隨著ANXA5表達降低，纖維蛋白降解產(chǎn)物和凝血酶-抗凝血酶III 復(fù)合物的血漿水平升高，導(dǎo)致絨毛間隙呈高凝狀態(tài)，發(fā)生胎兒宮內(nèi)生長受限。

5 ANXA7在子癇前期中的作用

膜聯(lián)蛋白A7（ANXA7）是一種具有鈣依賴性GTP 酶活性的磷脂結(jié)合蛋白，具有磷脂囊泡融合和胞吐等作用，在腫瘤發(fā)生中表現(xiàn)出許多生物學(xué)和遺傳學(xué)特性。最近，對ANXA7 蛋白的研究表明，ANXA7 作為一種GTP 酶，它與T 細(xì)胞內(nèi)抗原-1 相互作用調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞自噬，影響內(nèi)皮細(xì)胞的遷移和管形成能力［27］。

子癇前期患者胎盤中ANXA7 mRNA 表達下調(diào)，ANXA7 蛋白表達降低，沉默ANXA7 通過下調(diào)Bcl-2蛋白水平誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡并抑制HTR-8 細(xì)胞增殖，ANXA7 低表達抑制HTR-8 細(xì)胞中JAK1/STAT3 通路的激活［28］。ANXA7 在子癇前期患者中低表達及單細(xì)胞實驗中發(fā)現(xiàn)，ANXA7/JAK1/STAT3 在子癇前期滋養(yǎng)層細(xì)胞中的新調(diào)控通路可能是導(dǎo)致細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵因素，這可加速子癇前期的進展。關(guān)于ANXA7 在子癇前期中的研究還需進一步增加臨床樣本量及孕早中期的前瞻性研究，為目前危及生命的妊娠疾病提供新的治療思路。

綜上所述，膜聯(lián)蛋白A 家族中ANXA1的抗炎作用、ANXA2 和ANXA5 的抗凝作用、ANXA4 和ANXA7 所在信號通路引起滋養(yǎng)細(xì)胞功能失調(diào)等影響子癇前期的發(fā)生發(fā)展。膜聯(lián)蛋白A家族在炎癥調(diào)節(jié)、纖溶系統(tǒng)及滋養(yǎng)細(xì)胞功能失調(diào)等主要事件中發(fā)揮關(guān)鍵作用，可能在子癇前期臨床預(yù)防和治療中有廣闊前景。