不同因素對(duì)西藏阿旺綿羊胚胎冷凍與移植效果的影響

虞蓮 王幸栓 卓瑪拉姆 鄧增卓瑪 楊志勇 王嬋 李劍南 雷安民

摘 要 為探究西藏阿旺綿羊推行胚胎移植及胚胎冷凍技術(shù)的可行性，以阿旺綿羊?yàn)楣w，澳湖羊?yàn)槭荏w，探討發(fā)情期內(nèi)不同月份對(duì)阿旺綿羊超排效果的影響、不同發(fā)育階段鮮胚和移植數(shù)量對(duì)母羊受胎率及產(chǎn)羔率的影響，以及冷凍方法對(duì)胚胎移植的影響。結(jié)果顯示：發(fā)情期7月超排組平均可用胚數(shù)（3.95±4.23）顯著低于10月超排組（5.45±4.03）；阿旺綿羊胚胎移植2枚桑椹胚的受體妊娠率最高，達(dá)到81.81%，產(chǎn)羔率達(dá) ?57.58%，具有顯著性差異；阿旺綿羊胚胎程序化冷凍組受體妊娠率為35.48%，顯著優(yōu)于玻璃化冷凍組受體妊娠率13.63%。以上結(jié)果表明，西藏推行阿旺綿羊胚胎移植技術(shù)的可行性較高。

關(guān)鍵詞 阿旺綿羊；發(fā)育階段；玻璃化冷凍；程序化冷凍

阿旺綿羊是西藏地區(qū)的主要養(yǎng)殖畜種，以其體格大、產(chǎn)肉多、板皮面積大、適應(yīng)性強(qiáng)等特點(diǎn)，聞名于藏區(qū)內(nèi)外。1970年初至1980年中期，中國(guó)先后有多個(gè)單位開(kāi)展了綿羊胚胎移植的試驗(yàn)研究工作，并先后獲得成功。目前，對(duì)于胚胎移植技術(shù)快速擴(kuò)繁優(yōu)良個(gè)體在綿羊上已有較多報(bào)道，如小尾寒羊［1］、蒙古羊［2］、杜泊克羊［3］、薩?？耍?］、波爾山羊［5］等。2007年，西藏地區(qū)開(kāi)展綿羊胚胎移植試驗(yàn)，引進(jìn)純種綿羊并進(jìn)行胚胎移植給當(dāng)?shù)匮?，移植后受胎率?8.24%［6］。但西藏地區(qū)尚無(wú)對(duì)阿旺綿羊胚胎移植及冷凍的報(bào)道，結(jié)合國(guó)內(nèi)外對(duì)綿羊胚胎移植和冷凍的實(shí)踐與應(yīng)用，本研究進(jìn)行西藏阿旺綿羊胚胎移植與胚胎冷凍的嘗試，通過(guò)阿旺綿羊的超數(shù)排卵、胚胎冷凍、冷凍胚胎復(fù)蘇與移植等技術(shù)鏈的集成示范，構(gòu)建阿旺綿羊冷凍胚胎保種庫(kù)，實(shí)現(xiàn)阿旺綿羊種質(zhì)資源的有效保存，以利于對(duì)其進(jìn)行保種、擴(kuò)繁及優(yōu)種推廣工作。

1 材料與方法

1.1 材? 料

供體母羊：年齡2～4周歲的西藏阿旺綿羊母羊168只，均為體格健壯、生殖器官無(wú)異常、繁殖正常。受體母羊：育成或經(jīng)產(chǎn)的澳湖羊150只，均體格健康，生殖機(jī)能正常。

促卵泡素（FSH）和人絨毛膜促性腺激素（hCG）購(gòu)自寧波三生生物科技有限公司；前列腺素（PG）、孕馬血清促性腺激素（PMSG）和維生素ADE注射液購(gòu)自寧波市舒生第二激素廠；孕酮陰道栓CIDR栓購(gòu)自Pfizer Australia Pty公司；速眠新、陸眠寧和酒精等購(gòu)自重慶市渝生制藥廠；DPBS購(gòu)自Gibco公司，胎牛血清FBS（fetal bovine serum）購(gòu)自Sigma公司等。玻璃化冷凍試劑：Cryotech玻璃化快速冷凍試劑組及冷凍載桿購(gòu)于廣州尊博醫(yī)療器械有限公司。程序化慢速冷凍試劑購(gòu)于天津云牧生物科技有限公司。

二氧化碳培養(yǎng)箱、高壓滅菌鍋、干熱滅菌器、恒溫水浴器、體視鏡、腹腔鏡、程序化冷凍儀CL-8800i（程序化冷凍儀CL-8800i由澳大利亞CRYOLOGIC公司設(shè)計(jì)制造）。

1.2 方? 法

1.2.1 超排處理 超排處理示意圖如圖1，以放置陰道栓塞記為第1天。進(jìn)行發(fā)情鑒定時(shí)，用同種阿旺綿羊公羊進(jìn)行一對(duì)一配種，以母羊站立接受爬跨并完成本交過(guò)程為止，連續(xù)配種3次～4次，配種間隔8 h～12 h。同時(shí)，對(duì)供體羊在第15天配種結(jié)束后注射促黃體素釋放激素A3 25 μg，做好標(biāo)記與記錄。

1.2.2 手術(shù)法采胚 供體阿旺綿羊采用手術(shù)法沖胚，術(shù)前2 d禁食禁水。手術(shù)當(dāng)日將供體阿旺綿羊保定，麻醉，局部消毒后打開(kāi)腹腔，首先觀察并記錄左右側(cè)卵巢上的黃體數(shù)及卵泡數(shù)，胚胎回收完畢放置于體視顯微鏡下檢胚。皮膚縫合后，傷口周?chē)磕ǖ怍?，肌注氯前列烯醇（PG）。

1.2.3 胚胎檢查與鑒定 體式顯微鏡下檢查每只供體的回收胚胎，統(tǒng)計(jì)數(shù)量后，分別記錄和剔除未受精胚、崩解胚，保留授精存活胚胎，通過(guò)胚胎形態(tài)觀察，對(duì)其進(jìn)行等級(jí)鑒定。

胚胎鑒定：將每只供體回收胚胎置于20倍～40倍體式顯微鏡下，首先判斷受精及死活情況，再觀察其形態(tài)、均勻度、色調(diào)、分裂球大小、細(xì)胞密度、透明帶間隙以及變性情況等，并記錄。根據(jù)胚胎形態(tài)，將胚胎分級(jí)（表1），A、B、C級(jí)胚胎均為可用胚胎，A、B級(jí)胚胎可進(jìn)行冷凍和移植，C級(jí)胚胎可用于鮮胚移植。1.2.4 玻璃化冷凍及解凍 冷凍步驟：將卵或胚胎放入平衡液ES中10 min，然后轉(zhuǎn)移至冷凍液VS混合幾次，將卵或胚胎放置載桿末端，投入液氮，此步驟要求在60～90 s內(nèi)完成。整個(gè)過(guò)程可在室溫下進(jìn)行，每次最多操作10枚胚胎，以上液體均提前至少1 h放置于室溫環(huán)境中。

復(fù)蘇步驟：將卵或胚胎取出，置入復(fù)蘇液TS停留1? min，轉(zhuǎn)移至復(fù)蘇液TS∶稀釋液DS= ?1∶1的混合液，停留3 min；之后將胚胎依次放入稀釋液DS、清洗液WS1、清洗液WS2，各自停留2 min；將WS2中恢復(fù)形態(tài)的胚胎轉(zhuǎn)移至提前孵育的培養(yǎng)液中。

1.2.5 程序化冷凍及解凍 冷凍步驟：選擇內(nèi)置程序4，運(yùn)行程序至-7 ℃時(shí)，放入胚胎管，停留時(shí)間在1 min后誘導(dǎo)植冰；三孔板添加Holding培養(yǎng)液，另外兩孔均為10%甘油冷凍保存液。整個(gè)冷凍操作過(guò)程中的室溫要求維持在23 ℃以上。

復(fù)蘇步驟：凍胚細(xì)管取出后，空氣停留10～15 s，將細(xì)管浸入37 ℃水浴鍋中，停留15～20 s左右。剪掉細(xì)管塞子，將胚胎依次放入6%甘 ?油+0.3 mol/L蔗糖、3%甘油+0.3 mol/L蔗糖和0.3 mol/L蔗糖沖洗，每次停留5 min，再移入Holding培養(yǎng)液內(nèi)停留30 min。觀察胚胎的胞質(zhì)結(jié)構(gòu)是否完整、能否繼續(xù)發(fā)育的情況，選擇狀態(tài)較好的胚胎進(jìn)行培養(yǎng)。解凍操作過(guò)程中的室溫要求在23 ℃以上。

1.2.6 鮮胚及凍胚移植 凍胚解凍后，觀察凍胚恢復(fù)形態(tài)，選擇結(jié)構(gòu)完整的胚胎進(jìn)行培養(yǎng)。鮮胚及凍胚均采用手術(shù)法植入，受體術(shù)前1 d禁食，肌注陸眠寧0.1? mL/kg，術(shù)部消毒。打開(kāi)腹腔后，首先確認(rèn)卵巢黃體發(fā)育情況，將胚胎植入后，皮膚切口用碘酒消毒，根據(jù)切口大小縫合。凍胚解凍后的質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)， 參照表1進(jìn)行胚胎分級(jí)鑒定。

1.2.7 受體同期發(fā)情與飼養(yǎng)管理 受體澳湖母羊進(jìn)行同期發(fā)情處理，如圖2。術(shù)前1 d禁食，第21天手術(shù)移植胚胎。受體在胚胎移植術(shù)后加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，注意營(yíng)養(yǎng)狀況，防止因營(yíng)養(yǎng)不良而引起胚胎早期死亡。[FL）]

1.2.8 統(tǒng)計(jì)分析 采用試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 20進(jìn)行方差分析。結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”的形式表示，以P＜0.05作為判斷差異顯著性的標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 發(fā)情期不同月份對(duì)阿旺綿羊超排的影響

由表2可知，阿旺綿羊自然發(fā)情時(shí)間普遍集中于7月-10月。阿旺綿羊7月已有40%母羊發(fā)情，10月90%以上母羊發(fā)情。為探究阿旺綿羊發(fā)情期不同月份對(duì)超排效果的影響，在阿旺綿羊發(fā)情期7月、10月分別超排48只和120只。7月組均黃體數(shù)（8.89±4.64 vs 8.40± ?4.07）與10月組結(jié)果相對(duì)穩(wěn)定；7月組均回收胚數(shù)（5.47± ?4.06 vs? ?6.51±4.16）、胚胎回收率 ?（61.61% vs 77.57%）及可用胚率（72.22% vs 83.69%）等均低于10月組，但無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。而7月超排組平均可用胚胎數(shù)（3.95±4.23 vs 5.45±4.03）顯著低于10月超排組（P＜0.05）。

2.2 不同胚胎發(fā)育階段及移植胚胎枚數(shù)對(duì)胚胎移植效果的影響

2.2.1 阿旺綿羊移植胚胎數(shù)量對(duì)受胎率的影響 由表3可知，根據(jù)移植胚胎數(shù)量分為單胚、雙胚兩組，結(jié)果顯示受體妊娠率（50.00% vs? 77.27%）、產(chǎn)羔受體占移植受體比例（50.00% vs? ?71.74%）及胚胎成羔率（50.00% vs 54.55%），雙胚組均略高于單胚組，兩組無(wú)顯著性差異（P＞ ?0.05）。

2.2.2 阿旺綿羊移植不同發(fā)育階段胚胎對(duì)受胎率的影響 由表4可知，共移植受體澳湖羊54只，移植胚胎98枚，移植兩枚桑椹胚的受體妊娠率較高，達(dá)到81.8%，同時(shí)其產(chǎn)羔率也相對(duì)較高，達(dá)到57.58%，與其他組數(shù)據(jù)有顯著性差異（P＜0.05）。當(dāng)受體澳湖母羊分別移植1枚囊胚或1枚桑椹胚時(shí)，受體妊娠率、產(chǎn)羔受體占移植受體比率及胚胎成羔率等均為50%。當(dāng)移植2枚囊胚的受體妊娠率（50.00% vs 81.8%）、產(chǎn)羔受體占移植受體比率（50.00% vs 81.8%）及胚胎成羔率（50.00% vs 57.58%）顯著低于移植2枚桑椹胚，結(jié)果差異顯著（P＜0.05）。

2.3 不同冷凍方法對(duì)阿旺綿羊胚胎移植的影響

對(duì)阿旺綿羊的胚胎做不同冷凍處理，將部分冷凍胚胎解凍并復(fù)蘇后移植入受體澳湖母羊體內(nèi)，結(jié)果顯示（表5），程序化冷凍胚移植組受體的妊娠率為35.48%，顯著高于玻璃化冷凍胚移植組受體的妊娠率為13.63%（P＜0.05）。程序化冷凍組的胚胎成羔率（26.96%）也顯著高于玻璃化冷凍組（12.00%）（P＜0.05）。阿旺綿羊兩種方法凍胚移植104枚胚胎，共移植84只受體，B超結(jié)果顯示25只受體母羊妊娠，妊娠率為 ?29.76%，產(chǎn)羔27只，胚胎成羔率為25.96%，新生羔羊狀態(tài)較好（圖3）。[FL）]

3 討論與結(jié)論

3.1 發(fā)情期內(nèi)不同月份對(duì)阿旺綿羊超排的影響

根據(jù)對(duì)阿旺綿羊繁殖性能，以及氣候和溫度等環(huán)境條件，阿旺綿羊自然發(fā)情時(shí)間普遍集中于7月-10月。為探究阿旺綿羊繁殖季不同月份對(duì)超排效果的影響，在7月與10月對(duì)阿旺綿羊超排處理后，7月組平均可用胚數(shù)（3.95±4.23）顯著低于10月組（5.45±4.03），結(jié)果差異顯著（P＜0.05）。其他結(jié)果雖無(wú)顯著性差異，但整體超排效果10月份更優(yōu)。

本試驗(yàn)結(jié)果與多位研究者結(jié)果一致，如呂禮良等［7］在繁殖季對(duì)薩福克綿羊超排處理后，9月末-10月中旬均回收胚數(shù)、均可用胚數(shù)和回收率較7月末-8月中旬、8月中旬-9月初的超排效果更好。李?？〉龋?］在對(duì)綿羊超排處理后，9-10月綿羊超排效果最好。奧旭東等［9］對(duì)杜泊克綿羊全年不同月份進(jìn)行超排后移植，發(fā)現(xiàn)10-12月超排后均回收胚數(shù)及均可用胚數(shù)顯著高于4-6月份超排效果（P＜0.05），且受體1月、3月、6月、12月的妊娠率顯著高于其他月份（P＜0.05）。大量研究結(jié)果均表明不同月份對(duì)綿羊超排效果具有一定的影響，發(fā)情早晚對(duì)其超排處理后卵巢卵泡均可發(fā)育，但在普遍發(fā)情期間成年母羊的卵巢更活動(dòng)頻繁，對(duì)FSH激素反應(yīng)敏感，卵巢卵泡發(fā)育較好、數(shù)量多，超排后可用胚數(shù)量多。

3.2 不同胚胎發(fā)育階段及移植胚胎數(shù)對(duì)移植效果的影響

受體接受移植胚胎的數(shù)量影響妊娠的成功率及胚胎存活率。本試驗(yàn)關(guān)于鮮胚移植階段及數(shù)量的研究結(jié)果（表3和表4），移植2枚桑椹胚的受體妊娠率與產(chǎn)羔受體占移植受體比率較高，均達(dá)到了81.81%，同時(shí)其產(chǎn)羔率也相對(duì)較高，達(dá)到 ?57.58%，與其他組數(shù)據(jù)有顯著性差異（P＜0.05）。

本試驗(yàn)結(jié)果與大多數(shù)研究報(bào)道一致，移植雙胚妊娠率及胚胎存活率高于移植單胚，且移植桑椹胚效果優(yōu)于囊胚。同時(shí)移植2枚或3枚胚胎時(shí)，受體妊娠率和產(chǎn)羔率較移植1枚胚胎顯著提高［10-11］。也有學(xué)者證實(shí)，當(dāng)受體移植胚數(shù)增加至3枚以上，其受體妊娠率有所增加但差異不顯著，且降低了胚胎利用率［12-14］。羅生金等［15］對(duì)薩?？司d羊6 d鮮胚進(jìn)行移植后，移植囊胚的妊娠率低于移植桑椹胚的受體妊娠率，差異不顯著。肖婷［16］對(duì)薩?？司d羊6.5 d鮮胚進(jìn)行移植數(shù)量及胚胎階段進(jìn)行探究，結(jié)果顯示移植2枚胚胎的產(chǎn)羔率高于移植1枚胚胎。黃承俊等［17］研究顯示移植2或3枚胚胎的妊娠率（57.89%、59.43%）高于移植1枚胚胎的妊娠率（53.33%）。研究表明，移植雙胚的妊娠成功率和胚胎存活率可以比移單枚胚胎提高10%～15%［18］。本試驗(yàn)對(duì)受體母羊移植雙胚，不僅提高胚胎成羔率，同時(shí)也減少同批次移植受體的數(shù)量，提高受體母羊利用率。

3.3 不同胚胎冷凍方法對(duì)阿旺綿羊胚胎移植的影響

本研究結(jié)果顯示，程序化冷凍胚組受體妊娠率35.48%，顯著高于玻璃化冷凍胚組受體妊娠率13.63%（P＜0.05）。程序化冷凍組受體妊娠率顯著高于玻璃化冷凍胚組（P＜0.05）。程序化冷凍組胚胎成羔率也顯著高于玻璃化冷凍組。本次冷凍胚胎移植效率略低于國(guó)內(nèi)正常凍胚移植效率，解凍步驟中可能由于熱應(yīng)激引起透明帶破裂，降低凍胚移植效率［19］。王麗娟［20］對(duì)綿羊胚胎玻璃化冷凍移植，受體妊娠率為47.36%。付靜濤等［21］對(duì)綿羊冷凍胚胎移植，其妊娠率在40%～45%。吐?tīng)柡椤ぐ⒛咎岬龋?2］使用玻璃化胚胎冷凍法凍存黑頭薩福克綿羊胚胎，凍胚移植受胎率54.2%顯著高于常規(guī)胚胎冷凍法的凍胚移植受胎率44.0%。影響冷凍胚胎移植效果的因素較多，如供體品種原因、胚胎質(zhì)量和數(shù)量、受體年齡、受體生理狀態(tài)或卵巢黃體發(fā)育情況、受體同期化效果、季節(jié)、操作者的熟練度、冷凍保護(hù)劑或復(fù)蘇液、移植冷凍胚數(shù)量和質(zhì)量等［23］。

本試驗(yàn)對(duì)阿旺綿羊采集胚胎進(jìn)行全部?jī)龃妫瑸楸苊馀咛サ睦速M(fèi)，未嚴(yán)格進(jìn)行胚胎質(zhì)量的篩選及鑒定，可能導(dǎo)致胚胎冷凍后復(fù)蘇效率低，受體妊娠及產(chǎn)羔率也較低。本試驗(yàn)在西藏高海拔地區(qū)進(jìn)行，對(duì)受體的狀態(tài)及后期營(yíng)養(yǎng)狀況要求應(yīng)較低海拔地區(qū)更嚴(yán)格。海拔高、冬季氣溫低，受體移植胚胎后應(yīng)注意氣溫變化，避免環(huán)境低溫使胚胎著床失敗導(dǎo)致受體妊娠率低［23］。分析本試驗(yàn)結(jié)果差異性較大，聯(lián)系實(shí)際生產(chǎn)及胚胎冷凍相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，需再進(jìn)行阿旺綿羊胚胎冷凍效果的探究。

3.4 結(jié)論

西藏阿旺綿羊普遍發(fā)情時(shí)（10月）超排效果更好，其胚胎可利用率更高；受體母羊同時(shí)移植2枚阿旺綿羊胚胎，其妊娠率及產(chǎn)羔率更高；程序化冷凍胚組受體妊娠率及產(chǎn)羔率優(yōu)于玻璃化冷凍組。因此，對(duì)西藏地區(qū)阿旺綿羊進(jìn)行胚胎移植技術(shù)推廣工作可行性極高，本試驗(yàn)阿旺綿羊鮮胚移植98枚胚胎，共移植54只受體，B超監(jiān)測(cè)39只受體母羊妊娠，其妊娠率達(dá)72.22%，產(chǎn)羔53只，胚胎成羔率達(dá)54.08%。

參考文獻(xiàn) Reference：[WT6BZ][HT6SS]

［1］ 王 珂，于 軒，任茂源，等.不同受體羊同期發(fā)情及胚胎移植效果的研究［J］.畜牧獸醫(yī)雜志，2018，37（6）：1-3，7.

WANG K，YU X，REN M Y，et al.Study on the effect of simultaneous estrus and embryo transfer in different recipient sheep［J］.Journal of Animal Science and Veterinary Medicine，2018，37（6）：1-3，7.

［2］ 張博宇，任俊光，武 迪，等.綿羊輸卵管移植和子宮角腹腔鏡微創(chuàng)移植2種胚胎移植方法受胎率的比較分析［J］.畜牧與飼料科學(xué)，2017，38（7）：42-44.

ZHANG B Y，REN J G，WU D，et al.Comparative analysis of conception rate between two methods of embryo transfer by laparoscopic minimally invasive transfer of fallopian tubes and uterine horns in sheep［J］.Animal Husbandry and Feed Science，2017，38（7）：42-44.

［3］ 張 帆，李曉麗，王 俊，等.杜泊綿羊超數(shù)排卵及胚胎移植影響因素分析［J］.黑龍江動(dòng)物繁殖，2014，22（3）：40-44.

ZHANG F，LI X L，WANG J，et al.Analysis of influencing factors of superovulation and embryo transfer in Dorper sheep［J］.Animal Reproduction in Heilongjiang，2014， ?22（3）：40-44.

［4］ 闞向東.薩?？巳庥镁d羊胚胎移植技術(shù)的推廣應(yīng)用［J］.當(dāng)代畜牧，2015（29）：22-23.

KAN X D .Popularization and application of embryo transfer technology in suffolk meat sheep ［J］.Contemporary Animal Husbandry，2015（29）：22-23.

［5］ 沈文正，馬建濤，嚴(yán) 飛.波爾山羊批量胚胎移植莎能奶山羊［J］.西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2005，14（2）：1-4.

SHEN W ZH，MA J T，YAN F.Bulk embryo transfer of Boer goat to Shanen dairy goat ［J］.Acta Agriculturae Boreali-occidentalis Sinica，2005，14（2）：1-4.

［6］ 倉(cāng)木拉，央 金.MOET技術(shù)發(fā)展及其在西藏綿羊業(yè)中的應(yīng)用前景［J］.西藏科技，2008（8）：46-48.

CANGMULA，YANGJIN.Development of MOET technology and its application prospect in Tibetan sheep industry［J］.Tibetan Science and Technology，2008（8）：46-48.

［7］ 呂禮良，王曉陽(yáng)，王大廣，等.繁殖季節(jié)不同月份對(duì)薩?？司d羊超排效果的影響［J］.現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2008（16）：243-246.

L? L L，WANG X Y，WANG D G，et al.Effects of different months of breeding season on superovulation effect of Suffolk sheep［J］.Modern Agricultural Science and Technology，2008（16）：243-246.

［8］ 李?？?，方南洙，金 虎，等.不同季節(jié)、不同超排次數(shù)對(duì)綿羊超數(shù)排卵效果的影響［J］.黑龍江畜牧獸醫(yī)，2010（5）：52-53.

LI F J，F(xiàn)ANG N ZH，JIN H，et al.Effects of different seasons and different times of superovulation on the effect of superovulation in sheep［J］.Heilongjiang Animal Science and Veterinary Medicine，2010（5）：52-53.

［9］ 奧旭東，陳大勇，石新宇，等.季節(jié)對(duì)杜泊羊體內(nèi)胚胎生產(chǎn)與移植效果的影響［J］.畜牧與飼料科學(xué)，2019，40（1）：24-27.

AO X D，CHEN D Y，SHI X Y，et al.Effects of seasons on embryo production and transfer in Dorper sheep［J］.Animal Husbandry and Feed Science，2019，40（1）：24-27.

［10］ 代相鵬，王 鋒.波爾山羊胚胎移植影響因素的分析［J］.家畜生態(tài)，2004（4）：230-232.

DAI X P，WANG?? F.Analysis of influencing factors of boer goat embryo transfer［J］.Livestock Ecology，2004（4）：230-232.

［11］ 楊秀娟，丁建平，章美林，等.不同品種受體對(duì)波爾山羊胚胎移植效率的影響［J］.現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2008（19）：279-280.

YANG X J，DING J P，ZHANG M L，et al.Effects of different varieties of receptors on embryo transfer efficiency of Boer goat ［J］.Modern Agricultural Science and Technology，2008（19）：279-280.

［12］ 王 鋒，代相鵬.激素對(duì)波爾山羊超排效果影響的研究［J］.畜牧與獸醫(yī)，2006（5）：8-10.

WANG F，DAI X P.Study on the effect of hormones on the superovulation effect of Boer goat［J］.Livestock and Veterinary，2006（5）：8-10.

［13］ 趙振華，周敏敏，錢(qián)紅娟，等.山羊超數(shù)排卵效果的影響因素分析［J］.上海畜牧獸醫(yī)通訊，2008（1）：48-49.

ZHAO ZH H，ZHOU M M，QIAN H J，et al.Analysis on the influencing factors of superovulation effect in goats［J］.Shanghai Journal of Animal Husbandry and Veterinary Medicine，2008（1）：48-49.

［14］ 王敬軍，胡大偉，劉國(guó)輝，等.FSH劑量、受體品種及移植胚胎數(shù)對(duì)崇明白山羊胚胎移植效率的影響［J］.上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)（農(nóng)業(yè)科學(xué)版），2011，29（1）：38-42.

WANG J J，HU D W，LIU G H，et al.Effect of the dose of FSH，the species of? recipient and the number of embryos transplanted on the efficiency of embryo transfer of Chongming white goat［J］.Journal of Shanghai Jiaotong? University（Agricultural Science Edition），2011，29（1）：38-42.

［15］ 羅生金，張 磊，馬春江，等.薩?？搜虺盘幚砼c胚胎移植技術(shù)應(yīng)用研究［J］.中國(guó)草食動(dòng)物科學(xué)，2016，36（2）：26-28.

LUO SH J，ZHANG L，MA CH J，et al.Application of superovulation treatment and embryo transfer technology in Suffolk sheep［J］.China Herbivores Science，2016，36（2）：26-28.

［16］ 肖 婷.肉羊程序化與玻璃化冷凍胚胎移植效果的比較［D］.烏魯木齊：新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)，2017.

XIAO T.Comparison of the effect of programmed and vitrified embryo transfer in mutton sheep［D］.Urumqi：Xinjiang Agricultural University，2017.

［17］ 黃承俊，張文軍，李 寧.牛羊胚胎移植研究進(jìn)展［J］.現(xiàn)代畜牧獸醫(yī)，2019（5）：51-58.

HUANG CH J，ZHANG W J，LI N.Advances in embryo transfer of cattle and sheep［J］.Modern Journal of Animal Husbandry and Veterinary Medicine，2019（5）：51-58.

［18］ BIITON R J，MOORE N W.In vitro culture，storage and transfer of goat embryos［J］.Australian Journal of Biological Sciences，1976，1（29）：1-2.

［19］ 王光亞，馬保華，趙曉娥，等.安哥拉山羊胚胎冷凍試驗(yàn)［J］.西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，1996，5（4）：41-45.

WANG G Y，MA B H，ZHAO X E，et al.Embryos freezing experiment of Angola goat［J］.Acta? Agriculturae? Boreali-occidentalis? Sinica，1996，5（4）：41-45.

［20］ 王麗娟.綿羊玻璃化冷凍胚胎直接移植試驗(yàn)研究［D］.哈爾濱：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)，2003.

WANG L J.Research on direct transfer of sheep vitrified embryos［D］.Harbin：Northeast Agricultural University，2003.

［21］ 付靜濤，朱士恩，余文莉，等.綿羊同期發(fā)情與冷凍胚胎移植技術(shù)的研究［J］.中國(guó)畜牧雜志，2005（8）：32-33，57.

FU J T，ZHU SH? E，YU W L，et al.Research on simultaneous estrus and frozen embryo transfer technology in sheep［J］.Chinese Journal of Animal Husbandry，2005（8）：32-33，57.

［22］ 吐?tīng)柡椤ぐ⒛咎?，阿布力孜·吾斯曼，宋玉坤，?黑頭薩?？司d羊胚胎玻璃化快速凍胚移植效果分析［J］.中國(guó)畜牧獸醫(yī)文摘，2016，32（7）：73-74.

TUERHONG AMUTI，ABULIZI WUSIMAN，SONG Y K，et al.Analysis on the effect of quick frozen embryo transfer by vitrification of black-headed Suffolk sheep embryos［J］.Chinese Animal Husbandry and Veterinary Abstracts，2016，32（7）：73-74.

［23］ 尹?？疲装裁?，王忠林，等.液氮內(nèi)凍存8年的布爾山羊胚胎移植試驗(yàn)［J］.西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2011，20（9）：11-13，60.

YIN H K，LEI A M，WANG ZH? L，et al.Embryo transfer experiment of Boer goat frozen in liquid nitrogen for 8 years ［J］.Acta Agriculturae Boreali-occidentalis Sinica，2011，20（9）：11-13，60.

Effects of Different Factors on Freezing and Transplantation of Awang Sheep Embryos

Abstract To explore the feasibility of embryo transfer and embryo freezing in Xizang Awang sheep.Awang sheep is used as donor and Aohu sheep as acceptor to study? effect of different months of estrus on the superovulation in Awang sheep， the effect of fresh embryos at different developmental stages and the number of transferred embryos on the conception rate together with lambing rate of Awang sheep， as well as the effect of freezing methods on embryo transfer.The results showed that the number of embryos available in the superovulation group in July in estrus （3.95±4.23） is evidently lower than that in the superovulation group in October （5.45±4.03）.The pregnancy rate of two morulae transferred from Awang sheep is the highest at 81.81%， and the lambing rate is 57.58%.The pregnancy rate of Awang sheep embryos in programmed freezing group is 35.48%， while the vitrification group is 13.63%.Therefore， Awang sheep embryo transfer technology is feasible in Xizang.

Key words Awang sheep; Developmental stage; Vitrification; Programmed freezing