肺腺癌患者癌組織人內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒-H長末端重復關(guān)聯(lián)蛋白2、淋巴細胞活化基因3、整合連接激酶表達情況及與臨床病理特點的關(guān)系

董亮亮 童春堂 鄭明旭 李書閱

肺腺癌(LUAD)是非小細胞肺癌(NSCLC)最常見的亞型,具有高度浸潤和破壞性,其5年生存率僅為30%～60%[1-2]。近來免疫治療成為了腫瘤治療的熱點[3],人內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒-H長末端重復關(guān)聯(lián)蛋白2(HHLA2)為T淋巴細胞共抑分子,參與相關(guān)細胞因子的分泌調(diào)節(jié)、維持免疫環(huán)境穩(wěn)定及腫瘤進展過程[4]。淋巴細胞活化基因3(LAG-3)具有負性調(diào)節(jié)T淋巴細胞的功能,參與多種腫瘤細胞的免疫逃逸過程[5]。整合連接激酶(ILK)可與整合素細胞漿域結(jié)合,參與多種惡性腫瘤細胞的粘連、生長和血管生成等過程[6]。基于此,本研究檢測LUAD患者癌組織HHLA2、LAG-3、ILK表達水平,分析其與臨床病理的關(guān)系,為臨床治療提供參考。

對象與方法

1.對象:選擇2017年9月～2019年9月來我院就診的LUAD患者106例,其中男61例、女45例,年齡35～79歲,平均年齡(61.05±7.12)歲。納入標準:(1)均經(jīng)組織病理檢查確診為LUAD;(2)預計生存時間>6個月;(3)臨床相關(guān)資料完整。排除標準:(1)合并其他器官腫瘤;(2)術(shù)前行放、化療;(3)伴心臟、腎臟等嚴重功能障礙;(4)存在先天性肺功能異?；蚍尾扛腥拘约膊?(5)存在治療不耐受。本研究已通過我院倫理委員會審核,所有患者及家屬均簽訂知情同意書。

2.方法

(1)癌組織及癌旁組織病理觀察:HE染色:經(jīng)手術(shù)取LUAD患者肺腺癌組織及癌旁組織,行常規(guī)標本固定、包埋等處理,HE染色后于顯微鏡下觀察。免疫組織化學染色:采用SP法,組織芯片常規(guī)切片、烤片、脫蠟,水化后PBS沖洗;行抗原封閉,PBS沖洗,經(jīng)3%H2O2充分消除過氧化酶,加入稀釋后的一抗,4 ℃冰箱下過夜;去除一抗,PBS沖洗,加入鼠兔通用二抗,孵育后去除二抗,PBS沖洗;再行顯色、復染等步驟,最后用中性樹膠及蓋玻片封片備用,于顯微鏡下觀察。參考Imielinski等[7]標準,采用陽性區(qū)域(AP,0～4分)及染色強度(IS,0～4分)來評價HHLA2、LAG-3、ILK的表達水平,出現(xiàn)棕黃色顆粒為HHLA2(細胞膜和細胞質(zhì))、LAG-3、ILK(癌細胞細胞質(zhì)內(nèi))表達陽性細胞。強度分布(ID,分)=AP×IS,ID<4分為低表達,ID≥4分為高表達。

(2)觀察指標:收集所有患者的一般資料及臨床病理資料,包括性別、年齡、組織分化程度(低分化、中分化、高分化)、TNM分期(Ⅰ～Ⅳ期)、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠處轉(zhuǎn)移情況。采用門診及電話對所有患者進行隨訪,每3個月1次,記錄患者生存情況,隨訪時間截至2022年9月。

3.統(tǒng)計學處理:應(yīng)用SPSS 20.0軟件進行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料以例數(shù)和百分比表示,組間比較采用χ2檢驗。生存分析采用Kaplan-Meier法和Log-Rank檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結(jié) 果

1.LUAD患者肺腺癌組織及癌旁組織中HHLA2、LAG-3及ILK表達情況比較:LUAD患者癌組織中HHLA2、LAG-3、ILK高表達分別為85例(80.19%,HHLA2高表達組)、65例(61.32%,LAG-3高表達組)及78例(73.58%,ILK高表達組),低表達分別為21例(19.81%,HHEA2低表達組)、41例(38.68%,LAG-3低表達組)及28例(26.42%,ILK低表達組);上述3項指標在LUAD患者癌旁組織中高表達分別為14例(13.21%)、8例(7.55%)及26例(24.53%),低表達分別為92例(86.79%)、98例(92.45%)及80例(75.47%)。LUAD患者癌組織中HHLA2、LAG-3、ILK高表達患者比例均高于同指標低表達患者比例,癌旁組織中上述3項指標低表達患者比例均高于同指標高表達患者比例。

2.HHLA2高表達組與HHLA2低表達組患者一般資料及臨床病理資料比較:兩組患者性別、組織分化程度、TNM分期、腫瘤直徑、遠處轉(zhuǎn)移情況比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。HHLA2高表達組年齡≥60歲、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者比例均高于HHLA2低表達組(P<0.05)。見表1。

表1 HHLA2高表達組與HHLA2低表達組患者一般資料及臨床病理資料比較[例,(%)]

3.LAG-3高表達組與LAG-3低表達組患者一般資料及臨床病理資料比較:兩組患者性別、年齡、組織分化程度、腫瘤直徑比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。LAG-3高表達組TNM Ⅲ、Ⅳ期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移患者比例均高于LAG-3低表達組(P<0.05)。見表2。

表2 LAG-3高表達組與LAG-3低表達組患者一般資料及臨床病理資料比較[例,(%)]

4.ILK高表達組與ILK低表達組患者一般資料及臨床病理資料比較:兩組患者性別、年齡、腫瘤直徑比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。ILK高表達組組織低分化、TNM Ⅲ、Ⅳ期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移患者比例均高于ILK低表達組(P<0.05)。見表3。

表3 ILK高表達組與ILK低表達組患者一般資料及臨床病理資料比較[例,(%)]

5.HHLA2、LAG-3、ILK表達與LUAD預后的關(guān)系:隨訪3年,106例患者中存活42例,總生存率為39.62%。HHLA2低表達組3年生存率(61.90%)高于HHLA2高表達組(34.11%);LAG-3低表達組3年生存率(53.66%)高于LAG-3高表達組(30.77%);ILK低表達組3年生存率(57.14%)高于ILK高表達組(33.33%),差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

討 論

LUAD在確診時大多已是晚期,采用化療、放療等傳統(tǒng)治療方式療效均不理想。隨著醫(yī)學研究進展,免疫檢查點療法被認為是阻止腫瘤免疫逃逸的重要方法,但最后多數(shù)患者因耐藥而復發(fā),因此尋求LUAD新的免疫檢查點很有必要[8]。

HHLA2主要表達于人抗原呈遞細胞和T細胞,具有免疫監(jiān)視、輔助T細胞激活等作用[9]。相關(guān)研究結(jié)果表明,HHLA2可能與胃癌疾病進展及預后相關(guān)[10]。本研究中,HHLA2主要表達于腫瘤細胞的細胞膜及細胞質(zhì),在LUAD患者癌組織中呈高表達,且其表達水平與年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有一定關(guān)系,提示HHLA2參與了LUAD的發(fā)生及發(fā)展,可能機制為:(1)HHLA2可與未知受體結(jié)合,減弱機體的抗腫瘤免疫應(yīng)答;(2)HHLA2可與其受體TMIGD2結(jié)合,通過AKT依賴性信號級聯(lián)共刺激T細胞增殖,促進相應(yīng)細胞因子產(chǎn)生,同時還能影響腫瘤血管內(nèi)皮生成[11-12]。隨訪3年,所有患者中共存活42例,總生存率為39.62%,HHLA2低表達組3年生存率高于HHLA2高表達組,提示HHLA2水平與LUAD預后相關(guān)。

LAG-3屬于免疫球蛋白家族,在多種腫瘤微環(huán)境中均異常表達,與腫瘤生長與發(fā)展相關(guān)[13]。本研究中,LAG-3表達于腫瘤浸潤淋巴細胞的細胞質(zhì)及細胞膜上,且呈高表達,其表達水平與患者的TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移相關(guān);同時發(fā)現(xiàn),LAG-3低表達組患者3年生存率高于LAG-3高表達組,說明LAG-3可能參與了LUAD的進展,并與患者的生存率相關(guān),分析相關(guān)機制如下:(1)LAG-3可和主要組織相容復合體Ⅱ(MHC-Ⅱ)結(jié)合,起到負性調(diào)控T細胞的作用,維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定;(2)LAG-3促進Treg分化,使其發(fā)揮免疫抑制作用[14]。

ILK是最受關(guān)注的新興免疫靶點之一,可與多種蛋白結(jié)合,在胃癌、乳腺癌、結(jié)腸癌等研究中均認為ILK具有癌基因性質(zhì)[15]。本研究中,ILK表達于癌細胞細胞質(zhì)內(nèi),且呈高表達;進一步發(fā)現(xiàn),ILK表達水平與組織分化、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移相關(guān),同時ILK低表達組3年生存率高于ILK高表達組,提示ILK可能參與疾病進展,并與預后相關(guān)。分析ILK參與腫瘤進展可能是:(1)通過下游靶蛋白如核轉(zhuǎn)錄因子(NF)-κB通路、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)等,參與調(diào)節(jié)細胞粘連、遷移及血管生成等過程;(2)通過與整合素結(jié)合,激活AMPK、PI3K/Akt等信號通路,影響細胞周期、促進細胞增殖,進而影響腫瘤進程[16-17]。當然本研究還存在一定不足:樣本量選擇較少,研究時間有限,且對于HHLA2、LAG-3、ILK與LUAD具體作用機制探討尚不夠全面,后期將聯(lián)合多中心、擴大樣本量,進行深入研究。

綜上,HHLA2、LAG-3、ILK在LUAD患者癌組織中大部分呈高表達,且與臨床病理特點、預后存在一定關(guān)系,可作為腫瘤治療的藥物靶點。