基于ERK介導(dǎo)C-Myc/PD-L1協(xié)同作用探討參芪抑瘤方聯(lián)合順鉑對(duì)H22肝癌荷瘤小鼠的抑瘤機(jī)制

楊玉萍 段永強(qiáng) 白敏 馮鑫 周楠 曹力仁 李亞榮 馬蘭

（甘肅中醫(yī)藥大學(xué)，甘肅省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物行業(yè)技術(shù)中心，蘭州 730000）

原發(fā)性肝癌（primary liver cancer，PLC）是我國(guó)常見的惡性腫瘤之一，其病死率高居國(guó)內(nèi)惡性腫瘤第二位［1］。肝癌治療方法雖日趨成熟，但臨床大多選用放化療治療手段，在抑制腫瘤生長(zhǎng)的同時(shí)不可避免地?fù)p傷了免疫系統(tǒng)，而腫瘤免疫治療能夠提高機(jī)體免疫功能，破壞腫瘤細(xì)胞［2-4］。程序性死亡受體1（programmed death-1，PD-1）及其配體（programmed cell death 1 ligand 1，PD-L1）是免疫治療當(dāng)中較為關(guān)鍵的蛋白，是一種膜蛋白，其分泌至腫瘤細(xì)胞膜表面后與T細(xì)胞表面的PD-1相結(jié)合后抑制機(jī)體的免疫應(yīng)答，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移［5-6］。此外，原癌基因C-Myc可以直接與PD-L1基因的啟動(dòng)子結(jié)合，從轉(zhuǎn)錄水平促進(jìn)PD-L1表達(dá)，從而破壞機(jī)體免疫穩(wěn)態(tài)，抑制自身免疫的發(fā)展，誘導(dǎo)腫瘤的發(fā)生，促進(jìn)細(xì)胞增殖、分化，是正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化為腫瘤細(xì)胞的中心環(huán)節(jié)［7-8］。C-Myc是MAPK/ERK通路的下游關(guān)鍵分子，PD-L1與C-Myc具有相協(xié)性［9］。目前從MAPK/ERK通路介導(dǎo)的C-Myc/PD-L1協(xié)同作用對(duì)腫瘤的抑制作用尚無(wú)文獻(xiàn)研究。因此，本研究通過觀察不同劑量的參芪抑瘤方聯(lián)合順鉑靶向干預(yù)MAPK/ERK通路對(duì)H22肝癌荷瘤小鼠組織中C-Myc與PD-L1基因表達(dá)影響，探討參芪抑瘤方聯(lián)合順鉑對(duì)H22肝癌荷瘤小鼠的抑瘤作用及分子機(jī)制，為參芪抑瘤方的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及細(xì)胞 SPF級(jí)雄性昆明小鼠，由甘肅中醫(yī)藥大學(xué)SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，許可證號(hào)：SCXK（甘）2020-0009。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)甘肅中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理委員會(huì)審批（倫理審查批準(zhǔn)號(hào)：2021-205），70日齡，體質(zhì)量18～22 g。H22肝癌細(xì)胞株，購(gòu)自武漢普諾賽生命科技有限公司（BRF1A0KT 3Q）。

1.1.2 藥物 參芪抑瘤方：黃芪30 g、當(dāng)歸20 g、山慈菇10 g、土貝母10 g、苦參15 g、八月札30 g、莪術(shù)10 g、半枝蓮20 g、白術(shù)18 g、枳殼12 g、人參15 g，購(gòu)自甘肅中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥房。注射用順鉑（OKO554B03）購(gòu)自甘肅中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院。

1.1.3 試劑與儀器 RIPA裂解液（Cat#R0010）、BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒（Cat#PC0020）、4×蛋白質(zhì)上樣緩沖液（P1016）、蛋白磷酸酶抑制劑（CatP126 D）購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司；p-ERKV2（GTX24819）、C-Myc（GTX31308）、PD-L1（GTX1034-36）、β-actin（YM3028）；ECL化學(xué)發(fā)光超敏顯色試劑盒（57105010）；EGF ELISA試劑盒（2202M03），IFN-γ ELISA試劑盒（2202M16）；總RNA提取試劑盒（W9414）；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（G7106010）；實(shí)時(shí)qPCR Mix（H9114010）。電泳儀（041BR69450）、VE-180型垂直板電泳裝置（153BR111209）、酶標(biāo)儀（iMark）、梯度PCR儀（T100）購(gòu)自伯樂生命醫(yī)學(xué)產(chǎn)品（上海）有限公司；GeLView 6000plus凝膠成像系統(tǒng)購(gòu)自廣州博鷺騰生物科技有限公司；實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（CG-05）購(gòu)自杭州晶格科學(xué)儀器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 復(fù)制H22肝癌荷瘤小鼠模型 取H22肝癌細(xì)胞株解凍，復(fù)蘇H22肝癌細(xì)胞，細(xì)胞復(fù)蘇后，將細(xì)胞濃度調(diào)至1×107個(gè)/ml，每只昆明小鼠腹腔接種0.2 ml。腹腔傳至第3代，抽取淡黃色腹水，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，選取最佳細(xì)胞濃度3×106個(gè)/ml，每只0.1 ml接種于小鼠右前肢腋窩皮下。接種第5～7天小鼠右前肢腋窩下可觸及黃豆大小腫塊提示模型復(fù)制成功［10］，可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 小鼠分組及干預(yù) 60只SPF級(jí)雄性昆明小鼠，采用隨機(jī)數(shù)字表法取10只小鼠作為空白組，其50只小鼠復(fù)制H22肝癌荷瘤小鼠模型，模型復(fù)制成功后將模型小鼠隨機(jī)分為模型組、順鉑組、參芪抑瘤方低、中、高劑量聯(lián)合順鉑組（低、中、高劑量聯(lián)合組）。順鉑和參芪抑瘤方給藥均按照人與動(dòng)物體質(zhì)量進(jìn)行折算［11］，順鉑給藥量為2.5×10-3g/（kg·3 d）。低、中、高劑量聯(lián)合組分別在順鉑正常給藥的基礎(chǔ)上聯(lián)用不同劑量［13.515 g/（kg·d）、27.030 g/（kg·d）、54.060 g/（kg·d）］參芪抑瘤方湯劑灌胃?？瞻捉M與模型組均給予相同體積生理鹽水灌胃及腹腔注射，連續(xù)干預(yù)13 d，末次給藥24 h后，用戊巴比妥鈉（0.2 ml/只）麻醉處死小鼠，取材待檢。

1.2.3 腫瘤抑制率及臟器指數(shù)測(cè)定 在無(wú)菌環(huán)境下摘取腫瘤組織、胸腺及脾臟，濾紙吸干組織表面多余水分，稱重記錄。抑瘤率（IR）（%）=［模型組瘤質(zhì)量（g）-用藥組瘤質(zhì)量（g）］/模型組瘤質(zhì)量（g）×100%］；器官指數(shù)=器官質(zhì)量（mg）/小鼠體質(zhì)量（g）［12］。

1.2.4 HE染色觀察各組小鼠腫瘤組織病理變化將部分腫瘤組織用4%多聚甲醛固定，石蠟包埋，切片脫蠟，再用蘇木精和伊紅染色，脫水封片。采用顯微鏡在400倍光鏡下觀察各組小鼠腫瘤組織病理變化。

1.2.5 ELISA試劑盒檢測(cè)腫瘤組織中EGF、IFN-γ含量 稱取0.1 g腫瘤組織，加入0.9 ml PBS（pH=7.2～7.4）緩沖液，充分研磨，制成組織勻漿液，3 000 r/min 離心20 min，收集上清。嚴(yán)格按照小鼠EGF、IFN-γ ELISA試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.6 免疫組化法檢測(cè)腫瘤組織中p-ERK1/2、C-Myc、PD-L1蛋白表達(dá) 石蠟切片脫蠟至水，抗原修復(fù)，阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，孵育一抗、二抗，DBA顯色等過程后，脫水封片。顯微鏡調(diào)至200倍鏡下觀察，細(xì)胞核和（或）細(xì)胞質(zhì)為棕黃色者為陽(yáng)性。采用Image J 8.0軟件分析量化。

1.2.7 Western blot檢測(cè)腫瘤組織中p-ERK1/2、C-Myc和PD-L1蛋白表達(dá) 稱取0.1 g腫瘤組織剪碎，加入蛋白裂解液，離心取上清。BCA蛋白定量后變性，通過SDS-PAGE凝膠電泳，轉(zhuǎn)膜，封閉2 h后，加入一抗4 ℃孵育過夜，1×TBST洗膜，二抗（1∶20 000）室溫孵育1 h。采用1×TBST洗滌后，加入ECL發(fā)光溶液并用凝膠成像儀曝光。采用Image J 8.0分析蛋白條帶灰度值。

1.2.8 RT-PCR檢測(cè)腫瘤組織中ERK、C-Myc和PD-L1基因表達(dá) 稱取0.1 g腫瘤組織，使用RNA提取試劑盒進(jìn)行提取，超微光學(xué)分光光度計(jì)測(cè)量總RNA濃度。根據(jù)逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書，將提取的總RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA。GAPDH為內(nèi)參基因，每組相同基因設(shè)4個(gè)重復(fù)，根據(jù)RT-PCR擴(kuò)充試劑盒說(shuō)明擴(kuò)增靶基因，并計(jì)算每個(gè)mRNA的相對(duì)表達(dá)。引物由上海百賽生物技術(shù)股份有限公司合成，序列見表1。

表1 引物序列Tab.1 Primer sequences

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均用±s表示，采用SPSS24.0軟件進(jìn)行計(jì)量數(shù)據(jù)處理，根據(jù)方差齊性檢驗(yàn)結(jié)果，各組間的比較采用單因素方差分析，P＜0.05代表差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 參芪抑瘤方聯(lián)合順鉑對(duì)H22肝癌荷瘤小鼠腫瘤組織病理學(xué)變化的影響 HE染色結(jié)果顯示，模型組腫瘤組織細(xì)胞排列緊密有規(guī)則，細(xì)胞核完整且核深染，核大漿少，細(xì)胞核之間分界清楚，未見明顯細(xì)胞壞死；順鉑組及低、中、高劑量聯(lián)合組腫瘤組織細(xì)胞排列疏松且不規(guī)則，細(xì)胞核固縮、破裂，界限模糊，細(xì)胞數(shù)目減少，出現(xiàn)不同程度的片狀壞死面積，上述腫瘤壞死灶高劑量聯(lián)合組最顯著。見圖1。

圖1 各組小鼠腫瘤組織病理學(xué)變化（HE，×400）Fig.1 Histopathological changes of tumor in each group（HE，×400）

2.2 參芪抑瘤方聯(lián)合順鉑對(duì)H22肝癌荷瘤小鼠體質(zhì)量變化及腫瘤抑制率的影響 與空白組相比，模型組小鼠平均體質(zhì)量降低（P＜0.05）；與模型組相比，各治療組小鼠平均體質(zhì)量均升高（P＜0.05）、瘤體積均減?。≒＜0.05）、瘤質(zhì)量均降低（P＜0.05）；與順鉑組相比，高劑量聯(lián)合組小鼠瘤體積減?。≒＜0.05）；中、高劑量聯(lián)合組小鼠平均體質(zhì)量升高（P＜0.05）、平均瘤質(zhì)量降低（P＜0.05）。低、中、高劑量聯(lián)合組及順鉑組抑瘤率分別為46.62%、53.97%、61.25%、43.15%。見圖2。

圖2 各組小鼠體質(zhì)量、瘤質(zhì)量及抑瘤率變化Fig.2 Changes of body weight， tumor weight and tumor inhibition rate in each group

2.3 參芪抑瘤方聯(lián)合順鉑對(duì)H22肝癌荷瘤小鼠脾臟、胸腺指數(shù)的影響 與空白組小鼠相比，模型組小鼠脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)均下降（P＜0.05）；與模型組相比，順鉑組小鼠脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)均下降，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而中、高劑量聯(lián)合組小鼠脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)均升高（P＜0.05），見表2。

表2 各組小鼠脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)的變化（±s）Tab.2 Changes of spleen index and thymus index in each group （±s）

表2 各組小鼠脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)的變化（±s）Tab.2 Changes of spleen index and thymus index in each group （±s）

Note：Compared with blank group， 1）P＜0.05； compared with model group， 2）P＜0.05； compared with cisplatin group， 3）P＜0.05.

Thymus index/（mg·g-1）Groups Spleen index/（mg·g-1）2.51±0.93 0.79±0.291）1.29±0.85 1.53±0.532）3）1.75±0.902）3）0.70±0.40 Blank Model Combination with low-dose Combination with medium-dose Combination with high-dose Cisplatin 8.59±2.02 4.00±2.691）5.31±2.45 6.94±3.082）3）7.20±3.312）3）3.45±1.71

2.4 參芪抑瘤方聯(lián)合順鉑對(duì)H22肝癌荷瘤小鼠腫瘤組織中EGF、IFN-γ含量的影響 與模型組相比，各治療組小鼠腫瘤組織勻漿液中EGF和IFN-γ含量均降低（P＜0.05）；與順鉑組相比，中、高劑量聯(lián)合組小鼠瘤組織中EGF和IFN-γ含量均降低（P＜0.05），見表3。

表3 各組小鼠腫瘤組織中EGF和IFN-γ水平的變化（±s，n=6）Tab.3 Changes of EGF and IFN-γ levels in tumor tissues of mice in each group （±s，n=6）

表3 各組小鼠腫瘤組織中EGF和IFN-γ水平的變化（±s，n=6）Tab.3 Changes of EGF and IFN-γ levels in tumor tissues of mice in each group （±s，n=6）

Note：Compared with model group， 1）P＜0.05； compared with cisplatin group， 2）P＜0.05.

IFN-γ/（pg·ml-1）110.66±15.97 89.85±6.501）75.35±8.081）2）71.79±22.881）2）93.73±8.721）Groups Model Combination with low-dose Combination with medium-dose Combination with high-dose Cisplatin EGF/（pg·ml-1）83.51±8.88 63.139±0.991）54.95±10.601）2）52.89±9.761）2）68.96±4.871）

2.5 免疫組化法檢測(cè)腫瘤組織中p-ERK1/2、C-Myc、PD-L1蛋白表達(dá)結(jié)果 p-ERK1/2、C-Myc蛋白陽(yáng)性表達(dá)于細(xì)胞漿和（或）細(xì)胞核，PD-L1蛋白陽(yáng)性表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜，染色為棕黃色。免疫組化結(jié)果顯示，模型組p-ERK1/2、C-Myc、PD-L1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率最高，切片黃染占比面積較大，各用藥組蛋白陽(yáng)性表達(dá)率逐漸降低（P＜0.05）；與順鉑組相比，聯(lián)合用藥組蛋白陽(yáng)性表達(dá)率降低（P＜0.05），且中、高劑量聯(lián)合組蛋白陽(yáng)性表達(dá)率顯著降低（P＜0.01），見圖3。

圖3 腫瘤組織中免疫組化p-ERK1/2、PD-L1、C-Myc表達(dá)Fig.3 Immunohistochemical p-ERK1/2，PD-L1，C-Myc expressions in tumor tissue

2.6 參芪抑瘤方聯(lián)合順鉑對(duì)H22肝癌荷瘤小鼠腫瘤組織中ERK、C-Myc、PD-L1 mRNA表達(dá)的影響RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，與模型組相比，各治療組小鼠腫瘤組織中ERK、C-Myc、PD-L1 mRNA表達(dá)均降低（P＜0.05）；與順鉑組相比，中、高劑量聯(lián)合組小鼠瘤組織中ERK、C-Myc、PD-L1 mRNA表達(dá)均明顯降低，且呈劑量依賴性變化（P＜0.05），見表4。

表4 各組小鼠腫瘤組織中ERK、C-Myc、PD-L1 mRNA的表達(dá)（±s，n=4）Tab.4 mRNA expressions of ERK， C-Myc and PD-L1 in tumor tissues of mice in each group （±s，n=4）

表4 各組小鼠腫瘤組織中ERK、C-Myc、PD-L1 mRNA的表達(dá)（±s，n=4）Tab.4 mRNA expressions of ERK， C-Myc and PD-L1 in tumor tissues of mice in each group （±s，n=4）

Note：Compared with model group， 1）P＜0.05； compared with cisplatin group， 2）P＜0.05.

Groups Model Combination with low-dose Combination with medium-dose Combination with high-dose Cisplatin ERK/GAPDH 1.00±0.00 C-Myc/GAPDH 1.00±0.00 PD-L1/GAPDH 1.00±0.00 0.60±0.221）0.63±0.091）0.67±0.171）0.43±0.101）2）0.46±0.091）2）0.42±0.071）2）0.23±0.061）2）0.78±0.121）0.31±0.101）2）0.68±0.211）0.30±0.071）2）0.65±0.141）

2.7 參芪抑瘤方聯(lián)合順鉑對(duì)H22肝癌荷瘤小鼠腫瘤組織中p-ERK1/2、C-Myc、PD-L1蛋白表達(dá)的影響 Western blot結(jié)果顯示，與模型組相比，各治療組小鼠腫瘤組織中p-ERK1/2、C-Myc、PD-L1蛋白表達(dá)均降低（P＜0.05）；與順鉑組相比，中、高劑量聯(lián)合組小鼠瘤組織中p-ERK1/2、C-Myc、PD-L1蛋白表達(dá)均明顯降低，且呈劑量依賴性變化（P＜0.05）。見圖4、表5。

圖4 各組小鼠腫瘤組織中p-ERK1/2、C-Myc、PD-L1蛋白表達(dá)Fig.4 Protein expressions of p-ERK1/2， C-Myc and PDL1 in tumor tissues of mice in each group

表5 各組小鼠腫瘤組織中p-ERK1/2、C-Myc、PD-L1蛋白表達(dá)（±s，n=3）Tab.5 Protein expressions of p-ERK1/2，C-Myc and PDL1 in tumor tissues of mice in each group （±s，n=3）

表5 各組小鼠腫瘤組織中p-ERK1/2、C-Myc、PD-L1蛋白表達(dá)（±s，n=3）Tab.5 Protein expressions of p-ERK1/2，C-Myc and PDL1 in tumor tissues of mice in each group （±s，n=3）

Note：Compared with model group， 1）P＜0.05； compared with cisplatin group， 2）P＜0.05.

Groups Model Combination with low-dose Combination with medium-dose Combination with high-dose Cisplatin p-ERK1/2/β-actin 2.14±0.05 1.72±0.211）C-Myc/β-actin 1.31±0.10 0.79±0.111）PD-L1/β-actin 1.44±0.14 0.94±0.091）1.34±0.261）2）0.50±0.051）2）0.74±0.201）2）0.49±0.031）2）1.00±0.131）0.86±0.181）2）1.80±0.181）0.32±0.021）2）0.82±0.071）

3 討論

中醫(yī)認(rèn)為肝癌的發(fā)生病機(jī)多為本虛標(biāo)實(shí)，虛、瘀、痰、毒為病理基礎(chǔ)。正氣虧虛，邪毒外擾，形成氣滯、血瘀、濕熱、痰毒等虛實(shí)夾雜之證。目前運(yùn)用中醫(yī)藥輔助治療肝癌被廣泛關(guān)注，中藥不僅能改善患者的臨床癥狀，而且能減輕患者化療后的不良反應(yīng)，增強(qiáng)機(jī)體免疫，提高生活質(zhì)量，延長(zhǎng)生存時(shí)間。

《金匱要略·婦人妊娠病脈證并治》第二十篇中載：“妊娠，小便難，飲食如故，當(dāng)歸貝母苦參丸主之”。吳紅彥教授結(jié)合臨床探究此段文意，認(rèn)識(shí)到腫瘤的核心病機(jī)與當(dāng)歸貝母苦參丸主治之證有諸多相似之處，只不過腫瘤患者的虛象和瘀象更加明顯。故此，吳教授在當(dāng)歸貝母苦參丸的基礎(chǔ)上加減化裁，創(chuàng)立了治療腫瘤疾病的常用方——參芪抑瘤方。此方由黃芪、當(dāng)歸、貝母、苦參、山慈菇等藥組成，方中重用黃芪補(bǔ)肺健脾，扶正益氣；貝母入肝經(jīng)，化痰散結(jié)；苦參清熱燥濕解毒；當(dāng)歸補(bǔ)血活血；山慈菇清熱化痰、軟解散結(jié)，諸藥相配，攻補(bǔ)兼施，共奏補(bǔ)氣活血，扶正祛邪，解毒散結(jié)之功。

免疫系統(tǒng)在機(jī)體中占據(jù)著不可或缺的地位，其功能的紊亂導(dǎo)致多種疾病的發(fā)生，尤其與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移等方面密切相關(guān)，雖機(jī)體的免疫系統(tǒng)能產(chǎn)生抗腫瘤免疫應(yīng)答效應(yīng)，但免疫功能的紊亂能使腫瘤逃避免疫細(xì)胞的監(jiān)視及攻擊而發(fā)生免疫逃逸［13］。PD-1/PD-L1通路的激活是腫瘤發(fā)生免疫逃逸的重要機(jī)制之一，腫瘤細(xì)胞膜上的PD-L1與T細(xì)胞上的PD-1結(jié)合，破壞T細(xì)胞的功能而阻止有效的腫瘤免疫反應(yīng)［14］。而表皮生長(zhǎng)因子（epidermal growth factor，EGF）和IFN-γ的表達(dá)可激活MAPK/ERK通路，同時(shí)誘導(dǎo)細(xì)胞膜上PD-L1表達(dá)上調(diào)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖，抑制其凋亡［15］。ERK1/2是MAPK信號(hào)通路中研究最為透徹的通路之一，活化ERK入核，啟動(dòng)相應(yīng)的轉(zhuǎn)錄因子C-Myc表達(dá)［16］。研究表明，C-Myc在腫瘤組織中的過度表達(dá)，能促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展［17］。此外，C-Myc可以直接與細(xì)胞膜上的PD-L1結(jié)合，并在腫瘤組織中高表達(dá)，誘導(dǎo)腫瘤發(fā)生免疫逃逸。PD-1/PD-L1的抑制劑在腫瘤治療中應(yīng)用廣泛，且在臨床上取得了一定的療效，其抑制劑會(huì)影響自身免疫與免疫之間的平衡，增強(qiáng)免疫系統(tǒng)活性，攻擊腫瘤細(xì)胞［18］，但由于個(gè)體差異性，機(jī)體產(chǎn)生了耐藥性反應(yīng)以及一些免疫相關(guān)不良反應(yīng)，腹瀉、結(jié)腸炎、皮疹、肝功能異常、關(guān)節(jié)痛等較為常見［19］。中藥復(fù)方在抗腫瘤免疫治療中應(yīng)用廣泛，尤其是在調(diào)節(jié)免疫平衡，抑制腫瘤的免疫逃逸，降低西藥毒性，減弱機(jī)體耐藥性等方面優(yōu)勢(shì)顯著，但是其具體機(jī)制尚不明晰。

因此，本實(shí)驗(yàn)復(fù)制H22肝癌荷瘤小鼠模型，應(yīng)用參芪抑瘤方聯(lián)合順鉑靶向干預(yù)ERK通路來(lái)調(diào)控肝癌小鼠瘤組織中C-Myc、PD-L1表達(dá)。結(jié)果表明，與模型組、順鉑組相比，參芪抑瘤方聯(lián)合順鉑可以有效抑制腫瘤的生長(zhǎng)，增加腫瘤壞死面積，提高小鼠脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)，降低腫瘤組織中EGF和IFN-γ表達(dá)，同時(shí)也降低腫瘤組織中p-ERK1/2、C-Myc、PD-L1蛋白表達(dá)和ERK、C-Myc、PD-L1 mRNA表達(dá)水平，高劑量聯(lián)合組治療效果顯著（P＜0.01），并呈劑量依賴性表達(dá)。以上研究表明，參芪抑瘤方聯(lián)合順鉑能有效抑制H22肝癌荷瘤小鼠的腫瘤生長(zhǎng)，抑制ERK信號(hào)通路激活，下調(diào)p-ERK1/2、C-Myc、PD-L1蛋白表達(dá)和ERK、C-Myc、PD-L1 mRNA表達(dá)水平，提高抗腫瘤免疫應(yīng)答。

綜上所述，參芪抑瘤方聯(lián)合順鉑能有效抑制H22肝癌荷瘤小鼠的腫瘤生長(zhǎng)，其機(jī)制可能是通過抑制ERK信號(hào)通路激活，下調(diào)C-Myc與PD-L1蛋白表達(dá)，同時(shí)也抑制了EGF和IFN-γ誘導(dǎo)的PD-L1 mRNA和蛋白表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)為參芪抑瘤方聯(lián)合順鉑治療肝癌提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。