乳腺熏洗方促進(jìn)非哺乳期乳腺炎術(shù)后創(chuàng)面愈合網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析及臨床驗(yàn)證

周悅，王錚，葉媚娜，吳晶晶，何斌俊，陳紅風(fēng)

1. 上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院，上海 200032；2. 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院，上海 200025

非哺乳期乳腺炎（NPM）是一類發(fā)生在非哺乳期、非妊娠期的乳房慢性化膿性疾病[1]，臨床上較為少見。在歷代中醫(yī)文獻(xiàn)中，尚未查閱到與本病相似的病證記載。1985 年，上海中醫(yī)藥大學(xué)顧伯華、陸德銘教授根據(jù)本病的發(fā)病特點(diǎn)及臨床特點(diǎn)，將其命名為粉刺性乳癰[2]，包含現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的肉芽腫性小葉性乳腺炎、導(dǎo)管周圍乳腺炎、乳腺導(dǎo)管擴(kuò)張癥等[3]。NPM是乳腺疑難病癥，若治療不當(dāng)，易反復(fù)化膿、破潰，嚴(yán)重影響乳房外形，給患者帶來極大的痛苦。上海市名中醫(yī)陳紅風(fēng)教授傳承發(fā)展顧氏外科特色，以中藥內(nèi)服結(jié)合“切擴(kuò)-拖線-熏洗-墊棉”四聯(lián)外治法治療NPM，具有創(chuàng)傷小、痛苦輕、外形改變少、不易復(fù)發(fā)等顯著優(yōu)勢(shì)[4]。本研究課題組長期致力于中醫(yī)藥內(nèi)外結(jié)合治療NPM 各分期、各階段的臨床和基礎(chǔ)研究，取得了豐碩成果。在NPM 術(shù)后生肌收口期，四聯(lián)外治法中的“熏洗”療法發(fā)揮重要作用，能夠加快創(chuàng)面愈合速度、改善創(chuàng)面愈合質(zhì)量，減少恢復(fù)后乳房外形的改變。

陳紅風(fēng)教授自擬的乳腺熏洗方包含生黃芪、當(dāng)歸、丹參、蒲公英、兒茶、澤蘭、郁金、桂枝8 味中藥，具有益氣活血、生肌斂瘡的功效。中藥熏洗療法結(jié)合了中醫(yī)外治法及現(xiàn)代機(jī)械技術(shù)的優(yōu)勢(shì)，臨床應(yīng)用廣泛。由于中藥復(fù)方成分復(fù)雜，治療作用具有多靶點(diǎn)、多途徑的特點(diǎn)，對(duì)創(chuàng)面局部微環(huán)境的調(diào)節(jié)機(jī)制不明確，因此在一定程度上限制了其發(fā)展和推廣。本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析方法，探討乳腺熏洗方促進(jìn)NPM 術(shù)后創(chuàng)面愈合的作用機(jī)制，了解乳腺熏洗方在乳房創(chuàng)面治療中的核心活性成分、調(diào)節(jié)的信號(hào)通路、可能干預(yù)的靶點(diǎn)等，并通過臨床研究進(jìn)行驗(yàn)證，以期為乳房創(chuàng)面治療提供科學(xué)的理論指導(dǎo)和評(píng)價(jià)指標(biāo)。

1 研究資料與方法

1.1 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析方法

1.1.1 乳腺熏洗方成分篩選與成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建通過中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫與分析平臺(tái)（TCMSP）檢索黃芪、當(dāng)歸、丹參、郁金、澤蘭、兒茶、桂枝7 種中藥的化學(xué)成分，再根據(jù)化合物類藥性（DL）≥0.18 進(jìn)行篩選，獲得活性化合物和對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)基因。從文獻(xiàn)[5]中查閱“蒲公英”的有效成分，在有機(jī)小分子生物活性數(shù)據(jù)（PubChem）數(shù)據(jù)庫中查找到對(duì)應(yīng)的簡(jiǎn)化分子線性輸入規(guī)范（SMILES）結(jié)構(gòu)，使用SwissADME數(shù)據(jù)庫分析這些化合物的活性，再根據(jù)化合物的結(jié)構(gòu)和活性， 用小分子藥物靶點(diǎn)預(yù)測(cè)在線平臺(tái)（SwissTargetPrediction）預(yù)測(cè)其靶點(diǎn)。完成篩選后，通過Cytoscape 3.10.10 軟件構(gòu)建化合物-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)。

1.1.2 創(chuàng)面愈合靶點(diǎn)篩選與成分-疾病-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建以“wound healing” 或“wound repair” 與“breast”或“mammary gland”為條件，在人類基因綜合分析數(shù)據(jù)庫（Genecards）中檢索疾病靶點(diǎn)，以同樣條件在藥物治療靶點(diǎn)（TTD）數(shù)據(jù)庫檢索疾病靶點(diǎn)，將獲取的基本靶點(diǎn)數(shù)據(jù)合并后刪除重復(fù)值，獲得最終靶點(diǎn)。再將乳腺熏洗方的成分靶點(diǎn)與乳房創(chuàng)面愈合靶點(diǎn)取交集，獲取共同靶點(diǎn)，整合分析后構(gòu)建“藥物-成分-疾病”網(wǎng)絡(luò)圖。

1.1.3 乳腺熏洗方與創(chuàng)面愈合交集靶點(diǎn)PPI 網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建將共同靶點(diǎn)輸入STRING 數(shù)據(jù)庫，獲得蛋白質(zhì)相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)，再使用Cytoscape 3.10.10 軟件的CytoHubba 插件計(jì)算網(wǎng)絡(luò)自由度（degree）值，依據(jù)度值篩選出排名前20 位的靶點(diǎn)，繪制PPI 網(wǎng)絡(luò)圖。

1.1.4 基因本體（GO）功能富集分析及京都基因與基因組百科全書（KEGG）通路富集分析利用DAVID數(shù)據(jù)庫和Metascap 數(shù)據(jù)庫對(duì)疾病-藥物潛在靶點(diǎn)進(jìn)行GO 功能富集分析及KEGG 通路富集分析。將KEGG通路富集分析得出的主要信號(hào)通路與排名前20 位的靶點(diǎn)進(jìn)行熱圖分析。

1.2 臨床研究驗(yàn)證選取2023 年6 月23—30 日于上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院中醫(yī)乳腺科住院，行切開擴(kuò)創(chuàng)手術(shù)治療的4 例NPM 患者。待術(shù)后創(chuàng)面膿腐脫凈，處于生肌收口期時(shí)給予乳腺熏洗方治療。本研究通過上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批（2021LCSY047），并于中國臨床試驗(yàn)中心注冊(cè)（ChiCTR2000035929）。

1.2.1 診斷標(biāo)準(zhǔn)NPM 的診斷標(biāo)準(zhǔn)參考《非哺乳期乳腺炎診治專家共識(shí)》[6]。術(shù)后創(chuàng)面生肌收口期的判斷標(biāo)準(zhǔn)參考《T/CACM 1186—2019 中醫(yī)外科臨床診療指南粉刺性乳癰》[7]。

1.2.2 治療方法所有受試者行擴(kuò)創(chuàng)手術(shù)，術(shù)后常規(guī)換藥至膿腐脫凈。研究性治療從創(chuàng)面生肌收口期開始，給予乳腺熏洗方（處方：生黃芪、丹參、蒲公英各30 g，當(dāng)歸18 g，郁金、澤蘭各15 g，兒茶12 g，桂枝9 g）熏洗創(chuàng)面，每天1 次，每次熏洗15 min，治療12 d。操作方法：每天1 劑，將上述中藥水煎取汁約400 mL，取200 mL 放入藥桶，加水至約1 000 mL，加熱至95 ℃，將藥桶與熏洗機(jī)管道相連接?；颊呷∑脚P位或斜臥位，暴露創(chuàng)口，熏洗機(jī)噴口距傷口25～30 cm，熏洗時(shí)以局部皮膚微微潮紅，無燒灼疼痛感為宜。熏洗后常規(guī)換藥，同時(shí)給予有益氣健脾、養(yǎng)血和營功效的中藥方水煎劑內(nèi)服治療，每天1 劑，辨證加減用藥。

1.2.3 觀察指標(biāo)創(chuàng)面組織血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3（STAT3）蛋白表達(dá)：在熏洗前、熏洗12 d 后，分別取創(chuàng)面肉芽組織（約0.5 cm×0.5 cm），凍存管封存、標(biāo)記、移至-80 ℃冰箱備用。使用蛋白質(zhì)印跡（Western blot）法檢測(cè)上述蛋白表達(dá)。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法臨床驗(yàn)證部分的統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)用SPSS 27.0 軟件進(jìn)行，用ImageJ 軟件分析出目的蛋白（VEGF、STAT3）和內(nèi)參（β-actin）條帶灰度值，目的蛋白/β-actin 矯正誤差，所得結(jié)果代表目的蛋白相對(duì)含量，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以中位數(shù)（四分位間距）[M（IQR）]表示，2 組數(shù)據(jù)比較采用秩和檢驗(yàn)。統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)取雙側(cè)顯著性水平α=0.05，P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 研究結(jié)果

2.1 乳腺熏洗方成分-靶點(diǎn)關(guān)系網(wǎng)絡(luò)經(jīng)篩選，乳腺熏洗方組方成分中有205 個(gè)化合物、531 個(gè)靶點(diǎn)符合條件。通過Cytoscape 3.10.10 軟件，將乳腺熏洗方中的8 種中藥、205 個(gè)化合物與531 個(gè)靶點(diǎn)構(gòu)建藥物成分-靶點(diǎn)關(guān)系網(wǎng)絡(luò)圖，見圖1。乳腺熏洗方組方藥物的主要化合物成分見表1。

2.2 乳腺熏洗方藥物成分-靶點(diǎn)與乳房創(chuàng)面愈合靶點(diǎn)交集分析以“wound healing”或“wound repair”與“breast” 或“mammary gland” 為條件在Genecards 數(shù)據(jù)庫中檢索，獲得590 個(gè)疾病靶點(diǎn)，以同樣條件檢索TTD 數(shù)據(jù)庫獲得7 個(gè)疾病靶點(diǎn)，將以上靶點(diǎn)數(shù)據(jù)合并后刪除重復(fù)值，最終得到594 個(gè)乳房創(chuàng)面愈合靶點(diǎn)。將531 個(gè)乳腺熏洗方藥物成分靶點(diǎn)與乳房創(chuàng)面愈合相關(guān)靶點(diǎn)取交集，得到101 個(gè)共同靶點(diǎn)，繪制韋恩（Venn）圖，見圖2。

圖2 乳腺熏洗方與乳房創(chuàng)面愈合共同靶點(diǎn)韋恩圖

2.3 乳腺熏洗方與乳房創(chuàng)面愈合共同靶點(diǎn)的PPI 網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建對(duì)101 個(gè)靶點(diǎn)間的關(guān)系進(jìn)行處理，將度值排名前20 位的靶點(diǎn)（見表2）輸入STRING 數(shù)據(jù)庫，繪制關(guān)鍵靶點(diǎn)相互作用關(guān)系圖，可視化呈現(xiàn)如圖3。將乳腺熏洗方與乳房創(chuàng)面愈合的共同靶點(diǎn)導(dǎo)入Cytoscape 3.10.10 軟件中，構(gòu)建“藥物-成分-疾病”PPI 網(wǎng)絡(luò)圖，可視化呈現(xiàn)如圖4。

圖3 關(guān)鍵靶點(diǎn)相互作用關(guān)系圖

圖4 “藥物-成分-疾病”PPI 網(wǎng)絡(luò)圖

表2 乳腺熏洗方與乳房創(chuàng)面愈合共同靶點(diǎn)（前20）

2.4 GO 功能富集分析及KEGG 通路富集分析利用DAVID 數(shù)據(jù)庫和Metascap 數(shù)據(jù)庫對(duì)疾病-藥物潛在靶點(diǎn)進(jìn)行GO 功能富集分析及KEGG 通路富集分析。從參與的生物學(xué)過程（BP）、具有的分子功能（MF）和所處的細(xì)胞組分（CC）3 個(gè)方面對(duì)乳腺熏洗方的靶蛋白基因進(jìn)行分類。GO 條目富集程度較高的BP 包括環(huán)化酶活性的正向調(diào)節(jié)、參與傷口愈合的炎癥反應(yīng)等；MF 包括受體結(jié)合（趨化因子、表皮生長因子）、一氧化氮合酶活性等；CC 主要涉及質(zhì)膜區(qū)、質(zhì)膜外側(cè)、整合素復(fù)合物等。最顯著富集的前6 個(gè)BP、MF 和CC 的GO 條目見表3，可視化呈現(xiàn)如圖5。

圖5 GO 功能富集分析柱狀圖

表3 GO 功能富集分析結(jié)果（前18）

KEGG 通路富集分析得到176 條通路，根據(jù)對(duì)數(shù)P值（LogP）值、富集分?jǐn)?shù)及基因數(shù)目，篩選出20 條信號(hào)通路。氣泡大小代表相應(yīng)通路的目標(biāo)基因數(shù)量，氣泡顏色代表富集顯著性，可視化呈現(xiàn)如圖6。

圖6 KEGG 通路富集分析氣泡圖

將20 條信號(hào)通路與關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行熱圖分析，可見關(guān)鍵靶點(diǎn)與VEGF、缺氧誘導(dǎo)因子-1（HIF-1）、白細(xì)胞介素（IL）-17、腫瘤壞死因子（TNF）以及糖尿病并發(fā)癥相關(guān)高級(jí)糖基化終末產(chǎn)物-受體（AGERAGE）信號(hào)通路密切相關(guān)，見圖7。

圖7 關(guān)鍵靶點(diǎn)與主要通路關(guān)系圖

2.5 創(chuàng)面組織蛋白表達(dá)驗(yàn)證依據(jù)上述分析結(jié)果，對(duì)VEGF 通路的關(guān)鍵蛋白進(jìn)行臨床驗(yàn)證。通過蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)NPM 術(shù)后患者治療前后創(chuàng)面肉芽組織中VEGF、STAT3 蛋白的表達(dá)水平。治療后，VEGF、STAT3 蛋白表達(dá)水平均較治療前升高（P＜0.05）。具體數(shù)據(jù)見表4。蛋白質(zhì)印跡法電泳結(jié)果見圖8。

圖8 VEGF、STAT3 蛋白表達(dá)

表4 NPM 術(shù)后患者治療前后創(chuàng)面VEGF通路相關(guān)蛋白表達(dá)比較[M（IQR）]

3 討論

中藥熏洗療法歷史悠久，相關(guān)記載最早見于《五十二病方》[8]?！夺t(yī)宗金鑒·外科心法要訣》記載“滌洗之法，乃瘍科之要藥也”，指出中藥熏洗療法在治療外科瘡瘍疾病方面起重要作用[9]。

隨著中醫(yī)外治法研究技術(shù)手段的發(fā)展，中藥熏洗療法已成為具有理論指導(dǎo)和技術(shù)支持的特色外治法，臨床應(yīng)用范圍也逐漸擴(kuò)大?，F(xiàn)代中藥熏洗療法是一種結(jié)合藥力、機(jī)械熱力共同作用的綜合性治療方法，在促進(jìn)創(chuàng)面愈合方面，中藥熏洗能通過加快局部和周身的血液循環(huán)和新陳代謝速度，改善局部組織營養(yǎng)和全身機(jī)能狀態(tài)，達(dá)到治療目的。應(yīng)用不同的藥物、復(fù)方煎湯熏洗，治療作用各不相同，如清熱解毒中藥可殺菌、抗炎，清潔創(chuàng)面；益氣化瘀中藥可改善創(chuàng)面血液供應(yīng)和組織營養(yǎng)狀況，促進(jìn)創(chuàng)面肉芽組織生長及上皮組織爬生[10]。

陳紅風(fēng)教授自擬的乳腺熏洗方，以生黃芪為君藥，味甘，性微溫，為補(bǔ)中益氣之要藥，善補(bǔ)肺、脾之氣，具有固表止汗、托毒生肌、利水消腫、生津養(yǎng)血、行滯通痹、斂瘡生肌等功效，《神農(nóng)本草經(jīng)》將其列為上品?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，黃芪的主要活性成分為多糖類、三萜皂苷類、黃酮類化合物[11]，黃酮類化合物可用于創(chuàng)面治療[12]。當(dāng)歸、丹參、蒲公英為臣藥，當(dāng)歸配伍黃芪，既能活血消腫，又能補(bǔ)血生肌?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，黃芪-當(dāng)歸藥對(duì)的益氣作用主要表現(xiàn)為調(diào)節(jié)物質(zhì)能量代謝及免疫功能，活血作用的主要表現(xiàn)為降低血黏度，亦可通過抗氧化應(yīng)激、抗炎、保護(hù)血管壁、干預(yù)血管生成等發(fā)揮作用[13]。丹參味苦，性微寒，既涼血又活血，能清泄瘀熱而消癰腫，《日華子本草》言其能“排膿止痛，生肌長肉”?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，丹參含丹參酮類、丹參酚酸、揮發(fā)油類、多糖類和含氮化合物等化學(xué)成分，具有抗凝血、抗炎、抗氧化、抗纖維化等作用[14]。蒲公英清解、降泄并用，可清熱解毒、消癰散結(jié)兼疏肝解郁、通乳，為治療乳癰之首選，《本草備要》言其“專治癰腫疔毒”；蒲公英是具有抗炎作用的代表中藥之一，蒲公英多糖能顯著抑制巨噬細(xì)胞的炎癥因子，如一氧化氮、IL-6、IL-1β、TNF-α 等[15]。兒茶為佐藥，具有活血療傷、止血生肌、收濕斂瘡的功效，外用可治療多種外科瘡瘍，《本草綱目》言其可用于“涂金瘡，一切諸瘡”，有“生肌定痛，止血，收濕”之功。郁金既能行氣活血，又能清熱涼血。郁金中的化學(xué)成分種類較多，主要有倍半萜類、單萜類、二萜類、多糖類、甾醇類、姜黃素類、生物堿類、油樹脂、多肽類等，具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗氧化等作用[16]。桂枝能溫通經(jīng)脈，又具有散寒止痛之效。通過數(shù)據(jù)挖掘技術(shù)分析黃芪常用對(duì)藥發(fā)現(xiàn)，當(dāng)歸、防己、桂枝、丹參、葛根、甘草、白術(shù)7 味中藥與黃芪配伍的頻率較高，黃芪配伍桂枝的抗炎作用顯著[17]。澤蘭為使藥，善活血祛瘀、消腫止痛，在本方中，澤蘭與桂枝、丹參、郁金、當(dāng)歸等具有活血化瘀功效的藥物合用，可溫寒散血，宣導(dǎo)其活血之力，防止凝聚之虞，增強(qiáng)其他藥物的活血化瘀作用。

本研究通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析得到乳腺熏洗方的主要化合物成分有：芒柄花素（黃芪）、毛地黃黃酮（黃芪、丹參、蒲公英）、槲皮素（黃芪、兒茶、蒲公英）、山柰酚（黃芪、兒茶）、脫氫丹參酮（丹參）、丹酚酸（丹參）、芹黃素（丹參、蒲公英）、齊墩果酸與熊果酸（丹參、澤蘭）、芫花素（蒲公英）、β-谷甾醇（當(dāng)歸、郁金、澤蘭、桂枝）、兒茶素（兒茶、桂枝）等。組方中有多種中藥含有黃酮類化合物，如芒柄花素、槲皮素、毛地黃黃酮、山柰酚、芹黃素、芫花素等，黃酮類化合物可以抑制炎性生物酶的滲出，緩解炎癥造成的局部腫脹，并且具有調(diào)節(jié)免疫、抗氧化的作用[18]。丹參中含有丹參酮類化合物、丹酚酸，可以抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和分化，具有調(diào)節(jié)血管微循環(huán)的效果[19]；丹酚酸具有促進(jìn)創(chuàng)面肉芽組織生長的作用，主要依靠增強(qiáng)血管活性來發(fā)揮藥效[20]。齊墩果酸存在于丹參、澤蘭中，具有膜穩(wěn)定作用，可使肥大細(xì)胞難以脫顆粒和釋放炎性反應(yīng)遞質(zhì)，臨床上也用于骨關(guān)節(jié)炎等疾病的治療[21]。

在基因蛋白層面，乳腺熏洗方發(fā)揮作用的靶點(diǎn)中，有101 個(gè)與乳房創(chuàng)面愈合相關(guān)，對(duì)排序前20 位的靶點(diǎn)行PPI 網(wǎng)絡(luò)分析，這些關(guān)鍵靶點(diǎn)主要為基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP2、MMP9）、細(xì)胞因子[IL-1β、IL-6、表皮生長因子受體（EGFR）、轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）、TNF、成纖維細(xì)胞生長因子2（FGF-2）等]、黏附分子（ICAM-1）和一些信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白（STAT3、MAPK）等。STAT3 蛋白信號(hào)傳導(dǎo)與細(xì)胞增殖、分化及凋亡等密切相關(guān)，在調(diào)控創(chuàng)面愈合方面，通過Jaks 磷酸化或直接二聚化STAT3 蛋白，可以激活HIF-1 DNA轉(zhuǎn)錄，上調(diào)HIF-1 蛋白水平，進(jìn)而激活VEGF DNA轉(zhuǎn)錄，上調(diào)VEGF 表達(dá)，介導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞的新生[22]。STAT3 蛋白也是介導(dǎo)IL-1β、IL-6、TGF-β 等炎性細(xì)胞因子功能的主要調(diào)節(jié)蛋白[23-24]。此外，TNF-α和IL-1β 會(huì)抑制TGF-β 誘導(dǎo)的p38 絲裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）通路激活，導(dǎo)致神經(jīng)生長因子表達(dá)降低，造成創(chuàng)面愈合延緩[25]。由此，從分子層面推測(cè)，乳腺熏洗方可能通過抗炎、促進(jìn)血管生成和肉芽組織修復(fù)等機(jī)制，起到促進(jìn)乳房創(chuàng)面愈合的作用。

在功能作用層面，GO 功能富集分析篩選出的前18 個(gè)條目（BP、CC、MF 排序前6 位）和KEGG 通路富集分析篩選得到的前20 條信號(hào)通路，主要涉及炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激反應(yīng)、免疫反應(yīng)、細(xì)胞增殖和凋亡等，VEGF、HIF-1 等信號(hào)通路均為創(chuàng)面愈合研究的經(jīng)典通路[26]。提示乳腺熏洗方可能通過調(diào)控VEGF、HIF-1、IL-17、AGE-RAGE、TNF 等信號(hào)通路發(fā)揮促進(jìn)乳房創(chuàng)面愈合的作用。通過調(diào)控炎性介質(zhì)與細(xì)胞因子的合成和分泌、改善創(chuàng)面血供和微循環(huán)、改善創(chuàng)面營養(yǎng)等措施，從整體上改善創(chuàng)面愈合微環(huán)境，進(jìn)而促進(jìn)創(chuàng)面愈合。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析得出乳腺熏洗方促進(jìn)NPM 術(shù)后創(chuàng)面愈合的關(guān)鍵靶點(diǎn)和調(diào)控的信號(hào)通路，對(duì)這些候選靶點(diǎn)做進(jìn)一步臨床驗(yàn)證才是關(guān)鍵。因此，本研究的第二部分基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析結(jié)果，選擇VEGF信號(hào)通路的STAT3、VEGF 蛋白進(jìn)行精確驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)使用乳腺熏洗方熏洗12 d 后，NPM 術(shù)后患者創(chuàng)面肉芽組織的VEGF、STAT3 蛋白表達(dá)均較治療前上升。但乳腺熏洗方促進(jìn)NPM 術(shù)后創(chuàng)面愈合的機(jī)制復(fù)雜，是多因素、多途徑共同作用的結(jié)果，未來可設(shè)計(jì)前瞻性隊(duì)列研究，更深入地探討乳腺熏洗方對(duì)創(chuàng)面微環(huán)境的調(diào)節(jié)機(jī)制。

雖然中藥熏洗療法促進(jìn)創(chuàng)面愈合的療效顯著，但仍缺乏深入的機(jī)制研究。由于使用的外用中藥有些為經(jīng)典方劑或院內(nèi)制劑，有些為經(jīng)驗(yàn)方，用藥劑量不統(tǒng)一，用藥的有效性尚待驗(yàn)證?；诙喾N生物信息學(xué)方法的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析，被認(rèn)為是研究中藥復(fù)方作用機(jī)制的有效方法。如何將新設(shè)備、新技術(shù)與外用中藥相結(jié)合，對(duì)中醫(yī)外治法加以完善和改進(jìn)，更有效地發(fā)揮其多靶點(diǎn)、多環(huán)節(jié)、多層次的綜合調(diào)控作用，可能是未來中醫(yī)外治法促進(jìn)創(chuàng)面愈合研究的方向。