高危型HPV 感染者外周血T 淋巴細(xì)胞與陰道微生態(tài)的相關(guān)性

林美群 張燕霞 吳英標(biāo)

HPV 是一種具有較強(qiáng)致癌性的球狀DNA 病毒, 其中高危型 HPV 的致癌性更為強(qiáng)烈［1］。已有文獻(xiàn)報(bào)道,高危型HPV 的持續(xù)性感染是導(dǎo)致子宮頸癌發(fā)生的重要原因［2］。并不是所有的 HPV 感染者都會(huì)發(fā)展成宮頸癌, 部分 HPV 感染者可以通過自身的免疫系統(tǒng)將其清除。因此HPV 感染過程及其發(fā)生、發(fā)展與機(jī)體免疫狀態(tài)密切相關(guān)。由于女性特有的生理構(gòu)造, 陰道是一種微生態(tài)系統(tǒng)。正常婦女的陰道微生態(tài)系統(tǒng)維持著一種穩(wěn)態(tài), 而這種穩(wěn)態(tài)會(huì)對子宮頸造成一定的影響, 導(dǎo)致HPV 感染的發(fā)生［3］。HPV 感染與女性陰道微生態(tài)及免疫狀況密切相關(guān), 但后者對 HPV 感染的作用機(jī)制目前尚不清楚。在此基礎(chǔ)上, 本研究擬采用臨床病例對照,對高危型HPV、非高危型HPV 感染人群的陰道微生態(tài)及外周淋巴細(xì)胞亞群進(jìn)行檢測, 旨在為高危型HPV感染者的防治提供新的思路?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2022 年11 月～2023 年4 月收治的90 例生殖道HPV 感染患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①有不同程度的白帶增加、異味、性狀顏色改變、外陰瘙癢等臨床表現(xiàn)；②經(jīng)實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)合臨床檢查確診為HPV感染；③入組前1 個(gè)月內(nèi)未接受相關(guān)干預(yù)治療；④簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并生殖系統(tǒng)器質(zhì)性疾?。虎跓o性生活史；③合并精神類疾病或其他原因無法配合完成研究；④妊娠或哺乳期女性。經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審批后, 根據(jù)《婦產(chǎn)科學(xué)》［4］中相關(guān)標(biāo)準(zhǔn), 將HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68 共13 種基因型列為高危型, 感染上述13 種HPV 亞型的50 例患者納入試驗(yàn)組, 感染非高危型HPV亞型的40 例患者納入對照組。試驗(yàn)組中年齡35～50 歲,平均年齡(41.5±6.1)歲；體質(zhì)量指數(shù)21～27 kg/m2, 平均體質(zhì)量指數(shù)(23.4±2.0)kg/m2。對照組中年齡34～48歲,平均年齡(40.5±5.4)歲；體質(zhì)量指數(shù)20～27 kg/m2, 平均體質(zhì)量指數(shù)(24.0±1.8)kg/m2。兩組患者基線數(shù)據(jù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05), 具有可比性。

1.2 方法 采集陰道微生態(tài)分泌物的具體方法：常規(guī)消毒外陰, 窺陰器暴露陰道, 采用一次性無菌采樣棉拭子采集陰道后穹窿及宮頸分泌物2份, 置于保存管中迅速送檢。使用山東仕達(dá)思陰道微生態(tài)分析系統(tǒng)進(jìn)行形態(tài)學(xué)和功能學(xué)檢測。制作濕片, 用高倍數(shù)相差顯微鏡動(dòng)態(tài)觀察支原體小體、衣原體小體及滴蟲等病原體；制作干片, 用革蘭染色在油鏡下觀察乳桿菌和其他陰道菌群分布情況, 結(jié)合功能學(xué)對患者的陰道微生態(tài)進(jìn)行總體評(píng)價(jià)。這個(gè)步驟可以幫助醫(yī)生更全面地了解患者陰道內(nèi)的微生物組成和數(shù)量, 從而更準(zhǔn)確地診斷和治療疾病。

外周血T 淋巴細(xì)胞及亞群送檢至廣州金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心分析, 具體為：患者入院后, 采集乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝靜脈血 2 ml, 在美國熱電公司(American Technology Corporation)的Pico17 高速離心機(jī)(Spico17)下, 以3000 r/min 的轉(zhuǎn)速進(jìn)行5 min 的離心,獲得血漿樣品, 并將其放入冰箱保存以待使用。應(yīng)用美國陶姆遜公司3839 AutoMACSTMPro 多功能流式細(xì)胞儀(Flow Flow Cell, 3839)對兩組患者的外周血中CD3+、CD4+和CD8+亞 群 進(jìn) 行 測 定, 并 計(jì) 算CD4+/CD8+。本實(shí)驗(yàn)試劑盒采用德國默克公司的產(chǎn)品, 根據(jù)儀器的使用說明及試劑盒的使用方法進(jìn)行操作。

1.3 觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn) ①分析HPV 的感染情況以及HPV 亞型分布情況；②陰道菌群陽性情況, 主要為乳酸桿菌、衣原體、解脲支原體和滴蟲；③外周血T 淋巴細(xì)胞亞群分布情況, 主要包括CD3+、CD4+和CD8+, 并計(jì)算CD4+/CD8+；④Nugent 評(píng)分, 陰道微生態(tài)總體評(píng)價(jià)使用Nugent 評(píng)分進(jìn)行, 按陰道內(nèi)雜菌的數(shù)目評(píng)分, 0 分表示沒有雜菌, 提示沒有感染性陰道炎風(fēng)險(xiǎn),評(píng)分越高提示雜菌越多, 患感染性陰道炎風(fēng)險(xiǎn)越大, 評(píng)分范圍0～8 分, 正常參考范圍0～3 分, ≥7 分則提示感染性陰道炎。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SPSS18.0 計(jì)學(xué)軟件對研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示, 采用t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)。相關(guān)性分析使用Pearson 檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HPV 感染情況分布 試驗(yàn)組患者中HPV16 型有19 例, 占38.00%；HPV18 型14 例, 占28.00%；HPV52 型 有8 例, 占16.00%；HPV31 型 有8 例, 占16.00%；HPV56 型1 例, 占2.00%。對照組患者中HPV42 型有16 例, 占40.00%；HPV43 型有6 例, 占32.50%；HPV11 型有4 例, 占10.00%；HPV6 型有4 例,占10.00%；HPV81 型有3 例, 占7.50%。

2.2 外周血T 淋巴細(xì)胞亞群分布情況 試驗(yàn)組患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+低于對照組患者, CD8+高于對照組患者, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 兩組患者外周血T 淋巴細(xì)胞亞群分布情況比較( ±s)

表1 兩組患者外周血T 淋巴細(xì)胞亞群分布情況比較( ±s)

注：與對照組比較, aP＜0.05

組別 例數(shù) CD3+(%) CD4+(%) CD8+(%) CD4+/CD8+試驗(yàn)組 50 47.52±4.52a 45.20±3.47a 32.98±2.57a 1.37±0.33a對照組 40 55.68±4.05 51.62±4.31 25.71±3.25 2.01±0.40 t-8.908 -7.831 11.854 -8.318 P 0.000 0.000 0.000 0.000

2.3 陰道菌群陽性率及Nugent 評(píng)分 試驗(yàn)組患者陰道內(nèi)乳酸桿菌陽性率低于對照組患者, 衣原體、解脲支原體、滴蟲陽性率及Nugent 評(píng)分高于對照組患者,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表2。

表2 兩組患者陰道菌群陽性率及Nugent 評(píng)分比較［n(%), ±s］

表2 兩組患者陰道菌群陽性率及Nugent 評(píng)分比較［n(%), ±s］

注：與對照組比較, aP＜0.05

組別 例數(shù) 乳酸桿菌 衣原體 解脲支原體 滴蟲 Nugent 評(píng)分(分)試驗(yàn)組 50 17(34.00)a 44(88.00)a 42(84.00)a 45(90.00)a 7.85±1.20a對照組 40 22(55.00) 24(60.00) 22(55.00) 20(50.00) 6.84±0.64 χ2/t 3.991 9.433 9.097 17.723 4.801 P 0.046 0.002 0.003 0.000 0.000

2.4 Nugent 評(píng)分與外周血T 淋巴細(xì)胞亞群的相關(guān)性 分 析 兩 組 患 者Nugent 評(píng) 分 均 與CD3+、CD4+、CD4+/CD8+呈負(fù)相關(guān), 與CD8+呈正相關(guān)(P＜0.05)。見表3。

表3 Nugent 評(píng)分與外周血T 淋巴細(xì)胞亞群的相關(guān)性分析

3 討論

HPV 是一種具有高度傳染性的 DNA 病毒, 其具有較強(qiáng)的致癌性, 超過90%的宮頸癌患者都會(huì)合并高危型 HPV 感染［5］。目前已知的 HPV 亞型有200 余種,其中40 余種具有高度致癌性。根據(jù) HPV 所致宮頸損傷的嚴(yán)重性, 可將 HPV 亞型分為高、中、低3 種, 其中高危型主要有HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV56 、HPV58、HPV59 及HPV68 等［6］；中、低風(fēng)險(xiǎn)的HPV亞型則可納入非高危型。在本次調(diào)查中, 宮頸癌高危型 HPV 感染的主要亞型是HPV16 型, 占38.00%, 其次為HPV18 型 和HPV52 型, 分 別 占28.00%和16.00%,這與以往的研究結(jié)果［7］相吻合。

本研究發(fā)現(xiàn), 試驗(yàn)組患者的乳酸桿菌陽性率較對照組明顯降低, 而衣原體、解脲支原體及滴蟲陽性率較對照組高(P＜0.05), 提示陰道菌群失衡與HPV 感染相關(guān), 但具體機(jī)制目前尚不清楚。在陰道和腸道中, 乳酸桿菌是一種正常的菌群, 其能抑制體內(nèi)有害微生物的生長和繁殖。有研究發(fā)現(xiàn), 乳酸桿菌能夠激活腔道內(nèi)的黏膜免疫系統(tǒng), 從而提高人體的免疫功能, 同時(shí),乳酸桿菌還具有抗腫瘤細(xì)胞的功效, 在陰道中生長的正常乳酸桿菌還可以預(yù)防陰道癌、宮頸癌等疾?。?］。有國外學(xué)者研究證實(shí), 在HPV 感染的人群中, 乳酸桿菌的表達(dá)水平明顯降低, 提示在HPV 感染的高危人群中, 因乳酸桿菌的缺失, HPV 的感染率明顯升高［9］。而厭氧細(xì)菌和衣原體、解脲支原體及滴蟲的檢出率較高, 其對陰道及子宮頸黏膜的損害程度較大, 也會(huì)導(dǎo)致HPV 感染風(fēng)險(xiǎn)升高［10］。

本研究結(jié)果證實(shí), 試驗(yàn)組外周血T 細(xì)胞亞群中CD3+、CD4+及CD4+/CD8+較對照組明顯降低, 而CD8+則明顯升高(P＜0.05), 提示高危型HPV 感染患者的免疫功能有所下降。正常的免疫機(jī)能可起到免疫監(jiān)控作用, 對生殖系統(tǒng)的致病微生物進(jìn)行清除, 而在免疫功能下降的情況下, 對多種有害物質(zhì)的監(jiān)控清除能力 下降, 導(dǎo) 致HPV 感染［11］。CD3+、CD4+和CD8+是反應(yīng)人體免疫狀況的關(guān)鍵［12-15］。Nugent 評(píng)分是按陰道內(nèi)雜菌的數(shù)目來評(píng)分的標(biāo)準(zhǔn), 反映陰道微生態(tài)總體情況［16,17］。Nugent 評(píng)分與高危型HPV 的外周血T細(xì)胞亞群中CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+都有顯著負(fù)相關(guān)性, 而與CD8+有顯著的正相關(guān)性。本研究結(jié)果顯示, 無論對于高危型HPV 感染者還是非高危型HPV 感染者, Nugent 評(píng)分均與CD3+、CD4+、CD4+/CD8+呈負(fù)相關(guān), 與CD8+呈正相關(guān)(P＜0.05), 提示陰道微生態(tài)與外周血液中T 細(xì)胞亞群數(shù)量可能存在著密切關(guān)系, 二者可能通過相互作用, 共同參與宮頸高危型HPV 感染的發(fā)生和進(jìn)展過程［18-20］。

綜上所述, 高危型HPV 感染者的全身免疫功能相對低下, 導(dǎo)致發(fā)生陰道菌群紊亂的風(fēng)險(xiǎn)增加, 糾正患者的免疫功能低下及陰道微生態(tài)狀態(tài)均有利于提升宮頸高危型HPV 感染的治療效果, 改善患者預(yù)后。