蓮藕解酒功能軟糖的制備及功效評價

楊紫瀚,吳偉杰,高 原,劉瑞玲,申屠旭萍,郜海燕,陳杭君,*

(1.中國計量大學 生命科學學院,浙江 杭州 310018; 2.浙江省農業(yè)科學院 食品科學研究所,農業(yè)農村部果品采后處理重點實驗室,農業(yè)農村部蔬菜采后保鮮與加工重點實驗室(省部共建),浙江省果蔬保鮮與加工技術研究重點實驗室,中國輕工業(yè)果蔬保鮮與加工重點實驗室,浙江 杭州 310021)

中國是酒文化大國,但是過量飲酒會導致酒精性疾病的發(fā)病風險。進入人體的酒精主要由肝臟中的乙醇脫氫酶(alcohol dehydrogenase, ADH)和乙醛脫氫酶(acetaldehyde dehydrogenase, ALDH)進行代謝。過量飲酒會導致急性酒精中毒,目前治療急性酒精中毒的策略是激活解酒酶活性,加速乙醇代謝,降低乙醇及其代謝產物的生物利用度。有研究表明,外源化合物可以通過激活ADH的活性以達到快速解酒的作用[1-2]。此外,酒精在體內代謝過程中會產生大量活性氧(ROS),具有良好抗氧化活性的物質可以清除酒精代謝產生的自由基,對肝臟起到一定的保護作用[3]。

蓮藕(NelumbonuciferaGaertn)是一種常見的藥食兩用蔬菜?！侗静菥V目拾遺》概述了藕粉調中開胃,補髓益血,通氣分,解表熱,常食安神生智,解暑生津,消食止瀉等作用[4]。蓮藕中富含多酚、黃酮和多糖等化合物,具有良好的抗炎、降血脂、降血壓、降血糖、抗氧化、抑菌功效[5-7]。中國古代醫(yī)學文獻《本草拾遺》記載了蓮藕具有解酒功效,但是具體解酒組分還不明確。因此,本研究的目的是篩選出蓮藕解酒效果最優(yōu)組分,并將優(yōu)化后的蓮藕提取物組分添加到軟糖制作過程中。與傳統(tǒng)的膠囊、藥片相比,功能性軟糖可以通過簡單的口服方式攝入,功能成分更容易被吸收和利用。其次,功能性軟糖口感更好,更容易被消費者接受。此外,功能性軟糖中營養(yǎng)成分的含量可以被準確地控制,使消費者攝入的營養(yǎng)成分量更加精準。本文通過測定蓮藕解酒軟糖的體外抗氧化活性以及對醉酒小鼠解酒效果的研究探討蓮藕解酒軟糖的功效,以期為蓮藕資源開發(fā)和解酒產品開發(fā)提供新思路。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

新鮮的鄂蓮五號蓮藕購于浙江省杭州市灣里塘蓮藕合作社,挑選大小均一、無機械損傷和病蟲害的蓮藕;乙醇脫氫酶,氧化型輔酶1(NAD+),1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH),2,2-二氮-雙(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)銨鹽(ABTS)購于北京索萊寶科技有限公司;過硫酸鉀,水楊酸,無水乙醇,甲醇均為分析純,購于上海凌峰化學試劑有限公司;BALB/C小鼠及SPF小鼠飼料墊料購于北京維通利華實驗動物技術有限公司;血乙醇測定試劑盒和乙醇脫氫酶活性測定試劑盒購于南京建成生物技術有限公司。

1.2 主要儀器與設備

XMTD-8222水浴鍋,上海精宏實驗設備有限公司;FreeZone?真空冷凍干燥機,美國 LABCONCO公司;Spark10M酶標儀,瑞典Tecan公司;TD2102萬分之一電子天平,江蘇金諾儀表有限公司;RE-52AA旋轉蒸發(fā)器,上海亞榮生化儀器廠;Tissuelyser-192全自動樣品快速研磨儀,上海凈信實業(yè)發(fā)展有限公司;Nexera X2超高效液相色譜,日本島津公司;4500 QTRAP質譜,美國應用生物系統(tǒng)公司;TA.XT Pus型質構儀,英國SMS公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 蓮藕提取物工藝單因素實驗

采用單因素實驗分別考察蓮藕解酒成分提取過程中溶劑體積分數(shù)、提取時間、提取溫度、料液比等因素對提取物ADH激活率的影響。根據預實驗結果,蓮藕甲醇提取物比乙醇提取物具有更高的ADH激活率,因此,選用不同體積分數(shù)的甲醇作為溶劑進行單因素實驗。

將新鮮蓮藕切塊后用液氮速凍,利用真空冷凍干燥機充分干燥并研磨成粉末備用。保持其他條件不變,設置提取溫度分別為40、50、60、70、80 ℃,提取時間分別設定為1、2、3、4、5、6 h,提取溶劑甲醇體積分數(shù)分別設為20%、40%、60%、80%、100%,蓮藕與溶劑的料液比分別為1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50進行單因素實驗,評價標準為ADH體外激活率。

1.3.2 蓮藕提取物對ADH體外激活率測定

本實驗采用改進過的瓦勒-霍赫法[8]測定蓮藕提取物的 ADH 體外激活率。在試管中依次加入0.375 mL焦磷酸鈉緩沖液 (pH值8.8)、0.25 mL 0.027 mol·L-1NAD+、0.125 mL 12%乙醇及0.025 mL蓮藕提取物樣品溶液,混勻后,于25 ℃下密封溫育5 min,然后立即將0.025 mL 3 U·mL-1ADH 添加到試管中,搖勻后立即用酶標儀測定其340 nm 處的吸光度D340,每隔1min讀取1次吸光度值,連續(xù)測定10 min,并記錄數(shù)據,對照組以對應溶劑代替樣品溶液,其余步驟不變,最后根據以下公式計算ADH的激活率。

E=(A×0.8)/(Ew×6.2);

(1)

(2)

式(1)和(2)中:E為ADH活性,VADH為ADH激活率,E1為樣品組酶活性,E0為對照組酶活性,A為反應最初線性部分340 nm波長處吸光度每1 min的增值,Ew為酶液中的酶含量,0.8為反應液總體積,6.2為NADH在340 nm處的摩爾消光系數(shù)。

1.3.3 正交試驗確定最佳提取工藝

根據單因素實驗結果,以提取溫度、提取時間、提取溶劑甲醇體積分數(shù)和料液比4個因素為變量,各取三個水平進行四因素三水平的正交試驗L9(34)。采用UPLC-QTOF-MS/MS對最佳工藝制備的蓮藕提取物進行組分解析,實驗方法參考羅夢蘭等[9]的方法略作修改。

1.3.4 蓮藕解酒軟糖的制備

根據正交試驗的結果,用最佳提取工藝提取蓮藕活性成分,將提取液減壓濃縮成浸膏,用蒸餾水復溶濃縮3次,直至甲醇完全去除。用真空冷凍干燥機干燥成凍干粉末,取100 mg蓮藕提取物加入不同體積蒸餾水配制成梯度濃度蓮藕提取液備用。凝膠軟糖制作工藝參考楊娟等[10]的工藝流程并加以改進。

(1)溶膠:稱取一定量明膠和卡拉膠,明膠與卡拉膠質量比為10∶1。加10倍膠體積蒸餾水浸泡30 min,充分吸水溶脹。將溶脹后的凝膠在沸水浴中充分溶解,在90 ℃的水浴鍋中保溫備用。

(2)熬糖:將溶解后的麥芽糖醇加熱溶化,過濾去除雜質。熬糖溫度為100 ℃,攪拌熬煮。用糖度計測定糖度,當糖度達到80%時,停止加熱,冷卻到70 ℃保溫。

(3)調和:糖液中加入0.5 g·L-1檸檬酸溶液、100 g·L-1溶膠、10 mL蓮藕提取液,攪拌均勻,70 ℃水浴鍋保溫。靜置直到除去所有氣泡。

(4)干燥:將排盡氣泡的糖漿混合物倒入準備好的模具中,放入4 ℃冰箱冷卻,待冷卻成型后脫模,將得到的蓮藕軟糖在30 ℃下干燥24 h, 每隔3 h翻一次面。

1.3.5 蓮藕解酒軟糖產品性質測定

采用質構儀進行產品物性分析,測定方法參考楊娟等[10]的方法。軟糖中的致病菌測定參考GB29921—2013《食品安全國家標準食品中致病菌限量》(已廢止)。菌落總數(shù)測定參考GB4789.2—2016《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗菌落總數(shù)》。軟糖理化指標的測定參照SB/T 10021—2017《糖果 凝膠糖果》。

1.3.6 蓮藕解酒功能軟糖體外抗氧化活性測定

對不同蓮藕提取物添加量的解酒軟糖進行自由基清除率測定。蓮藕解酒功能軟糖的DPPH自由基清除率測定采用Wang等[11]的方法稍作修改。取0.5 mL的各濃度未凝固軟糖調和液和0.5 mL的0.2 mmol·L-1DPPH乙醇溶液混合并劇烈振搖?？瞻讓φ战M為等體積去離子水代替樣品,在室溫下避光孵育30 min,測量反應混合物在517 nm處的吸光度。使用以下公式計算DPPH自由基清除活性:

(3)

式(3)中:A0是對照(去離子水代替樣品溶液)的吸光度,A1是樣品的吸光度,A2是在與A1相同的條件下用乙醇代替DPPH溶液的樣品的吸光度。

蓮藕解酒功能軟糖的·OH自由基清除活性通過Lim等[12]的方法測量,稍作修改。在試管中加入1.0 mL各濃度未凝固軟糖調和液,1.0 mL 2.5 mmol·L-1的FeSO4,1.0 mL 2.5 mmol·L-1的H2O2和1.0 mL 9 mmol·L-1水楊酸-乙醇溶液?；靹蚝?7℃下孵育30 min,空白對照組用去離子水代替樣品,測量510 nm處的吸光度。使用以下公式計算·OH自由基清除率:

(4)

式(4)中:A0是對照(去離子水代替樣品溶液)的吸光度,A1是樣品的吸光度,A2是在與A1相同的條件下用水楊酸-乙醇溶液代替FeSO4的樣品的吸光度和H2O2溶液。

蓮藕解酒功能軟糖的ABTS+自由基清除率的測定參考Xiao等[13]的方法,稍作修改。將7 mmol·L-1的ABTS+鹽溶液和2.5 mmol·L-1的過硫酸鉀溶液取等體積混合均勻后在黑暗條件下穩(wěn)定16 h。然后用蒸餾水稀釋至溶液在734 nm處的吸光度在0.70±0.02之間即為反應液。在0.1 mL各濃度未凝固軟糖調和液中加入1 mL ABTS+反應液,混勻,室溫反應30 min,測量734 nm處的吸光度。

(5)

式(5)中:As為含有樣品和ABTS+的吸光度,Ac為不含樣品但含ABTS+的吸光度,Ab為不含樣品和ABTS+的吸光度。

蓮藕提取物對自由基清除效果用半抑制量(IC50)表示。IC50計算方法為將測定得到的DPPH、ABTS+和·OH自由基清除率與濃度曲線所得的回歸方程,計算蓮藕提取物將自由基清除至50%時的濃度。

1.3.7 動物實驗分組及醒酒效果評價

通過灌胃白酒建立小鼠急性酒精中毒模型,測定各組小鼠的醉酒率、死亡率、醉酒潛伏期和醉酒睡眠時間等指標來檢驗蓮藕解酒軟糖的解酒功效[14]。取雄性BALB/C小鼠20只,按體重將小鼠隨機分為模型組和蓮藕解酒軟糖干預組,每組10只,用苦味酸染色標記,適應性喂養(yǎng)7 d。實驗前,各組小鼠禁食不禁水12 h后,模型組按0.01 mL·g-1體重的灌胃體積灌胃蒸餾水,蓮藕解酒軟糖干預組按1 g·kg-1的劑量,0.01 mL·g-1體重的灌胃體積灌胃蓮藕解酒軟糖調和前溶液。30 min后模型組和給藥組小鼠分別以0.02 mL·g-1體重的灌胃體積灌胃45度的白酒。觀察兩組小鼠灌酒后的精神狀態(tài),記錄各組醉酒率、醉酒潛伏期的時間(從灌酒結束到翻正反射消失的時間)、翻正反射恢復時間(從灌酒結束到翻正反射恢復的時間)。

1.3.8 蓮藕解酒軟糖對小鼠乙醇代謝的影響

取雄性BALB/C小鼠30只,按體重將小鼠隨機分為模型對照組、蓮藕解酒軟糖干預組、空白對照組,每組10只,用苦味酸染色標記,適應性喂養(yǎng)7 d。小鼠醉酒模型的建立方法及灌胃劑量同1.3.7節(jié),空白對照組小鼠灌胃等體積的蒸餾水。

灌酒60 min后,對小鼠摘眼球取血,血液置于促凝管中,3 000 r·min-1離心5 min,取上清液血清于凍存管中。采血后,將小鼠斷頸處死,解剖取出新鮮肝臟,取小鼠肝臟同一位置的組織適量,以1∶9(g/mL)的比例加入0.9%的冰生理鹽水,在低溫組織勻漿儀中破碎,以3 500 r·min-1轉速,將組織液離心10 min,分離上清可得到10%的肝臟勻漿液,于-80 ℃下保存,采用南京建成生物技術有限公司的血乙醇測定試劑盒測定各組小鼠血清中乙醇的含量和ADH活性,具體操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.4 數(shù)據統(tǒng)計與分析

所有實驗均重復3次,測定結果以平均值±標準差(Mean±SD)表示,采用Excel 2010軟件統(tǒng)計試驗數(shù)據,采用SPSS 25.0軟件進行方差分析和單因素ANOVA分析,不同字母表示存在顯著差異(P<0.05)。采用Origin2021軟件繪圖。

2 結果與分析

2.1 單因素實驗結果

2.1.1 提取溶劑的體積分數(shù)對蓮藕提取物ADH激活率的影響

根據前期實驗得出,用甲醇作為溶劑的蓮藕提取物在體外對ADH具有一定的激活作用[15]。確定反應溫度為50 ℃,反應時間為3 h,反應料液比為1∶30的條件下,探究不同體積分數(shù)的甲醇對蓮藕提取物的ADH激活率的影響。實驗結果如圖1所示,隨著甲醇體積分數(shù)不斷增大,提取物的ADH體外激活率逐漸上升,100%甲醇作為溶劑的蓮藕提取物對ADH具有最高的激活作用(18.89%±2.46%)。不同體積分數(shù)的甲醇具有不同的極性,提取得到成分極性也會不同,因此甲醇體積分數(shù)這一因素是決定性的。在正交試驗設計中選擇的甲醇體積分數(shù)分別為80%、90%、100%。

不同處理間沒有相同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。下同。The data without the same lowecase letters show the significant difference (P<0.05). The same as below.

2.1.2 提取溫度對蓮藕提取物ADH激活率的影響

取蓮藕粉末2 g,以提取過程中料液比為1∶30、提取時間2 h、提取物溶劑為100%甲醇為條件,考察不同提取溫度對提取物ADH激活率的影響。實驗結果如圖2所示,隨著提取溫度不斷上升,蓮藕提取物對ADH激活率呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢,這可能是因為提取溫度越高,分子擴散速率也越快,提取率升高,但是溫度持續(xù)升高會破壞提取物生物活性[16]。60 ℃時提取物的ADH激活率最高,此時蓮藕提取物的ADH激活率為17.40%±1.06%。在正交試驗設計中選取提取溫度為50、60、70 ℃。

圖2 不同提取溫度對蓮藕提取物對ADH激活率的影響Fig.2 Effect of different extraction temperatures on the activation rate of ethanol dehydrogenase from lotus root extracts

2.1.3 提取時間對蓮藕提取物ADH激活率的影響

取蓮藕粉末2 g,確定提取過程中料液比為1∶30,提取物溫度為50 ℃,提取物溶劑為100%甲醇,考察不同提取時間對提取物ADH激活率的影響。實驗結果如圖3所示,隨著提取時間不斷延長,蓮藕提取物對ADH的激活率也在不斷上升。提取物5 h后達到峰值(15.70%±0.13%),隨后蓮藕提取物的ADH激活率不再隨著提取時間的延長而提高。在正交試驗設計中選擇的提取物時間為3、4、5 h。

圖3 不同提取時間對蓮藕提取物的ADH激活率的影響Fig.3 Effect of different extraction times on the activation rate of ethanol dehydrogenase from lotus root extracts

2.1.4 提取料液比對蓮藕提取物ADH激活率的影響

取蓮藕粉末2 g,確定提取時間為3 h,提取物溫度為50 ℃,提取物溶劑為100%甲醇,考察不同料液比對提取物ADH激活率的影響。實驗結果如圖4所示,隨著溶劑體積的不斷增大,蓮藕提取物的ADH激活率呈現(xiàn)上升趨勢,這是因為料液比較低,溶液黏度大,活性分子不易發(fā)生擴散,因此提取率較低。當液料比逐漸升高時,由于有濃度差,分子擴散速率加快,提取率升高[17],對ADH的激活率也會提高。當料液比為1∶40時,蓮藕提取物的ADH激活率最高,為(17.13±0.93)%。隨著料液比繼續(xù)增大,提取物對ADH的激活率的增加不顯著,因此在正交試驗中選擇的料液比為1∶40、1∶45、1∶50。

圖4 不同料液比對蓮藕提取物的ADH激活率的影響Fig.4 Effect of different material-liquid ratios on the activation rate of ethanol dehydrogenase from lotus root extract

2.2 正交試驗結果

根據單因素實驗結果,選定A(甲醇體積分數(shù)),B(提取時間),C(提取溫度),D(料液比)4個因素,采用表1中 L9(34)正交試驗設計確定 4 種因素的最優(yōu)組合為A3B3C2D1,結果見表2。

表1 正交試驗因素與水平設計

表2 正交試驗結果

由表2實驗結果可以得出,影響蓮藕提取物對ADH激活率的因素順序為A>C>D>B。即甲醇體積分數(shù)影響最大,其次是提取溫度,之后是料液比,最后是提取時間。由表3可知,甲醇的體積分數(shù)和提取溫度對提取物的ADH激活率有顯著影響。這是因為不同體積分數(shù)的甲醇具有不同的極性,所得的提取物種類和含量也有所不同。而其他3個因素只是在此基礎上對提取率進行一定程度提高。結合正交試驗結果,確定的最優(yōu)提取工藝為A3B3C2D1,即溶劑選用100%甲醇,提取時間5 h,提取溫度60℃,料液比1∶40,在此條件下蓮藕提取物ADH體外激活率平均值為(19.60±2.10)%。

表3 蓮藕解酒成分提取工藝方差分析

2.3 蓮藕提取物成分鑒定

對正交試驗獲得的蓮藕提取物成分進行解析,如圖5所示,多反應檢測模式下MRM代表蓮藕提取物中的不同成分,圖中不同顏色代表不同化合物,共檢測到433種化合物,圖6為蓮藕甲醇提取物中的物質組成,其中包括98種酚酸類物質、138種黃酮類化合物及其衍生物、43種木脂素和香豆素、4種鞣質、72種生物堿、44種萜類、34種其他類物質。其中酚酸類成分主要有水楊酸、2,5-二羥基苯甲醛、原兒茶醛、肉桂酸、咖啡酸、阿魏酸、兒茶素等;黃酮類成分主要有沒食子兒茶素、兒茶素、兒茶素、二氫槲皮素、柚皮素、香葉木素、3,4′-二羥基黃酮、異牡荊素等;生物堿類成分主要包括荷葉堿、6-脫氧蕎麥堿、山礬堿、O-降荷葉堿、蓮堿、葫蘆巴堿、亞美罌粟堿等;萜類物質主要包括熊果酸、常春藤皂苷元、2,3-二羥基-12-熊果烯-28-酸、坡模酸、山楂酸、24,30-二羥基-12(13)烯羽扇豆醇、布盧門醇 C、2-羥基齊墩果酸等;木脂素和香豆素類成分主要包括表松脂醇、東莨菪內酯、去氫二異丁香酚、落葉松脂醇、二氫香豆素、(7R,8S)-二氫去氫二松柏醇等。

A,正離子模式;B,負離子模式。A, Positive ion mode; B, Negative ion mode.

圖6 蓮藕提取物代謝物分布圖Fig.6 lotus root extract metabolites distribution

2.4 蓮藕解酒軟糖產品品質特性

蓮藕解酒功能軟糖的品質特性如下:外觀均勻透明,無氣泡,顏色棕黃色,有光澤,整體氣味柔和,口感佳,無雜質,平均硬度9.72 N,平均顆質量7.25 g,水分13%,回彈性0.39,平均彈性0.97 mm,咀嚼度245.76 mJ,膠著性295.74 mm,菌落總數(shù)≤200 CFU·g-1,未檢出致病菌,產品相關的感官、理化指標和微生物指標均符合國家標準要求。

2.5 蓮藕解酒軟糖體外抗氧化活性測定

隨著添加到凝膠中的蓮藕提取液濃度的增加,蓮藕解酒軟糖對ABTS+自由基、·OH自由基和DPPH自由基的清除率也不斷提高。蓮藕提取液對3種自由基清除效果也有所差異,如圖7所示,蓮藕提取物對ABTS+自由基、·OH自由基和DPPH自由基清除率的IC50分別為14.59 mg·mL-1、101.96 mg·mL-1和5.54 mg·mL-1,相同濃度下,蓮藕提取液對DPPH自由基清除率最高,其次為ABTS+自由基,對·OH自由基清除率最弱。

圖7 不同濃度蓮藕提取液對ABTS+自由基(A)、·OH自由基(B)和DPPH自由基(C)清除率的影響Fig.7 Effects of different concentrations of lotus root extract on ABTS+ free radicals(A), ·OH radical (B) and DPPH free radicals (C) clearance rate

2.6 蓮藕解酒軟糖醒酒效果評價

蓮藕解酒軟糖醒酒功效實驗結果如表4所示,與模型組相比,蓮藕解酒軟糖干預后顯著(P<0.05)延長了小鼠平均醉酒潛伏時間,同時極顯著(P<0.01)地縮短了醉酒后翻正反射恢復時間。此外,蓮藕解酒軟糖干預后將小鼠醉酒率降低了20%。結合以上實驗結果,表明蓮藕功能解酒軟糖具有一定的解酒功效,可以有效緩解醉酒癥狀。

表4 蓮藕解酒功能軟糖解酒效果評價

2.7 蓮藕解酒軟糖對小鼠乙醇代謝速率的影響

測定各組小鼠灌胃白酒1 h后的血清乙醇含量,實驗結果如圖8所示。灌胃白酒后會導致小鼠血液中乙醇含量激增并造成小鼠肝臟ADH活性降低。與模型組相比,在喂食蓮藕解酒軟糖后的小鼠血乙醇含量下降了21.35%,ADH活性提高了52.32%。說明蓮藕提取物可以通過激活小鼠體內解酒酶活性,加速乙醇在體內的代謝速率,從而達到醒酒效果。

圖8 蓮藕解酒功能軟糖對小鼠血清乙醇含量和肝臟ADH活性的影響Fig.8 Lotus root relieving alcoholism functional gel fudge on ethanol content in mouse serum and ADH activity in mouse liver

3 討論

過量飲酒會對機體造成諸多損害。健康人群肝臟對酒精的平均代謝速率為15～20 mg·dL-1· h-1,當酒精攝入量大于肝臟的處理能力時,會導致酒精及其代謝物的積累,進而誘發(fā)中毒癥狀[18],主要表現(xiàn)為心跳加速、頭暈惡心、說話障礙、協(xié)調障礙、步態(tài)不穩(wěn)定、腸胃不適等許多不良反應。嚴重時可導致昏迷,呼吸抑制甚至死亡[19]。近年來發(fā)現(xiàn)了越來越多的食源性天然產物具有解酒護肝作用,解酒護肝成分主要集中在黃酮[20-21]、多酚[22-23]、多糖[24-25]、天然色素[26]等天然代謝產物。蓮藕中含有大量的多酚、黃酮和生物堿類化合物,具有良好的抗氧化活性,相關的實驗研究表明,物質的抗氧化活性與其解酒活性有一定的關系[7,27-29]。本文以ADH體外激活率為指標,通過單因素實驗和正交試驗篩選出蓮藕最佳解酒成分的提取條件。利用UPLC-QTOF-MS/MS對此工藝條件的蓮藕提取物進行成分解析,結果表明提取物組分中超過一半的成分為多酚和黃酮類物質,其次為生物堿類和萜類,實驗結果與本實驗室前期研究結果一致。根據本實驗室之前的研究結果得出蓮藕中的香葉木素、6-甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮、(7R,8S)-二氫去氫二松柏醇、亞美罌粟堿、N-Methylcorydaldine、波爾定堿、甲基烏藥堿可能是緩解急性酒精中毒的關鍵成分[15]。

因此,具有良好抗氧化活性的天然物質可能具有一定的解酒護肝潛力。蓮藕是一種具有很強抗氧化活性的蔬菜。郭長江等[31]比較了36種蔬菜的抗氧化活性,結果顯示蓮藕的抗氧化活性最強。蓮藕解酒軟糖抗氧化能力隨著軟糖中蓮藕提取液濃度的提高而增強,表明蓮藕提取物可能是蓮藕軟糖中主要抗氧化成分。動物實驗結果表明,蓮藕解酒軟糖具有良好的防醉和醒酒效果,這可能是通過激活小鼠體內ADH活性,加速乙醇代謝速率,減少乙醇的生物利用度,從而達到解酒功效。

近年來,越來越多的功能性成分被制成具有一定功效的凝膠軟糖,與藥物相比,功能性凝膠軟糖具有易攜帶、口感好、利于吸收等優(yōu)勢,因此功能凝膠軟糖逐漸成為人們更樂于接受的健康食品。本文將蓮藕中具有潛在解酒功效的成分添加到凝膠軟糖的制作當中,對蓮藕資源進一步開發(fā)以及解酒功能組分的提取工藝提供了一定參考價值和理論依據。

4 結論

本實驗通過單因素實驗和正交試驗,篩選出對ADH具有最高激活率的蓮藕提取物的提取工藝,即溶劑選用100%甲醇,料液比1∶40, 60 ℃提取5 h。將最佳提取工藝得到的提取物添加到軟糖中,并測定軟糖的體外抗氧化活性,結果表明蓮藕解酒軟糖對ABTS+自由基、DPPH自由基和·OH自由基均有清除效果。最后評價了蓮藕解酒軟糖對醉酒小鼠的醒酒功效評價,與模型組小鼠相比,服用了蓮藕解酒軟糖的小鼠的醉酒潛伏時間延長,翻正反射恢復時間縮短;灌酒1 h后小鼠血清中乙醇含量顯著低于模型組,小鼠肝臟ADH活性顯著提高。說明蓮藕解酒軟糖可以降低血清乙醇含量,恢復解酒酶活性,加速乙醇代謝,緩解醉酒癥狀。