彌漫性大B 細(xì)胞淋巴瘤組織中miR-193a-3p、miR-146b-5p 的表達(dá)量及臨床意義探究

賈光明

（鐘祥市中醫(yī)院，湖北 鐘祥 431900）

近年來，彌漫性大B 細(xì)胞淋巴瘤（DLBCL）的臨床治療效果得到了顯著提升，但仍有40%左右的患者會出現(xiàn)耐藥，預(yù)后較差。研究發(fā)現(xiàn)，miR-193a-3p、miR-146b-5p 在胃癌、肝癌等實(shí)體腫瘤組織中表達(dá)下調(diào)，并與病理分期、臨床預(yù)后存在明顯的相關(guān)性[1]。有研究證實(shí)，miR-193a-3p 與DLBCL 細(xì)胞惡性生物學(xué)行為密切相關(guān)，其可靶向負(fù)調(diào)控髓樣細(xì)胞白血病-1，從而抑制DLBCL細(xì)胞增殖和遷移，使細(xì)胞周期停滯在G2/M 期[2]。本研究旨在探討DLBCL 組織中miR-193a-3p、miR-146b-5p 的表達(dá)量及其與淋巴瘤臨床分期的關(guān)系。

1 資料與方法

1·1 一般資料

選取2022 年3 月至2023 年2 月我院收治的DLBCL患者76 例，納入DLBCL 組。納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)影像學(xué)檢查、病理活檢確診為DLBCL；未接受放化療、免疫治療等臨床治療；臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他惡性腫瘤；合并嚴(yán)重的心腦血管疾病、免疫系統(tǒng)疾病。入選病例中男40例，女36例，年齡27～78歲，平均（58·27±7·65）歲；淋巴瘤Ann-Arbor 分期：Ⅰ～Ⅱ期42 例，Ⅲ～Ⅳ期34例。選取我院同期收治的淋巴結(jié)反應(yīng)性增生（RHL）患者70 例，納入RHL 組，其中男38 例，女32 例，年齡26 ～79 歲，平均（58·35±7·42）歲。兩組的年齡、性別等一般資料相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0·05），有可比性。

1·2 方法

淋巴組織中miR-193a-3p、miR-146b-5p 表達(dá)水平的檢測方法如下。

1·2·1 總RNA 提取 兩組的淋巴組織標(biāo)本均通過手術(shù)方式獲取。標(biāo)本獲取后，采用總RNA 提取試劑（Trizol 法）提取總RNA，干燥后溶解于焦碳酸二乙酯水中，采用紫外分光光度計(jì)測定RNA 的濃度和純度。

1·2·2 PCR 反應(yīng) 以總RNA 為模板，使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將其反轉(zhuǎn)錄為cDNA，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）儀檢 測miR-193a-3p、miR-146b-5p 的 表 達(dá) 水 平。miR-193a-3p、miR-146b-5p、內(nèi)參基因（U6）序列設(shè)計(jì)引物（見表1）由上海生工生物技術(shù)有限公司合成。qPCR 反應(yīng)體系包括引物1·6 μL、模板DNA 2 μL、SYBR Premix Ex TaqTM Ⅱ 10 μL、無菌水6·4 μL，合計(jì)20 μL。

表1 引物序列設(shè)計(jì)

1·2·3 擴(kuò)增條件 95 ℃擴(kuò)增5 min，95 ℃變性30 s，60 ℃退火20 s，72 ℃延伸20 s，共40 個(gè)循環(huán)。

1·2·4 定量計(jì)算 各樣本U6、miR-193a-3p、miR-146b-5p 的qPCR反應(yīng)均設(shè)置3個(gè)復(fù)管，每管測試3 次，最后采用2-△△Ct法計(jì)算miR-193a-3p、miR-146b-5p 相對于U6 的表達(dá)量。

1·3 觀察指標(biāo)

觀察并比較兩組的miR-193a-3p、miR-146b-5p 表達(dá)水平。分析DLBCL 組織中miR-193a-3p、miR-146b-5p的表達(dá)水平與臨床病理特征及臨床分期的關(guān)系。

1·4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2·1 兩組miR-193a-3p、miR-146b-5p 表達(dá)水平的對比

miR-193a-3p 及miR-146b-5p 在DLBCL 組中的表達(dá)水平均低于RHL 組（P＜0·05）。詳見表2。

表2 兩組miR-193a-3p、miR-146b-5p 表達(dá)水平的對比（±s）

表2 兩組miR-193a-3p、miR-146b-5p 表達(dá)水平的對比（±s）

組別 miR-193a-3p miR-146b-5p RHL 組（n=70） 1.51±0.61 2.07±0.62 DLBCL 組（n=76） 0.86±0.27 1.15±0.34 t 值 8.436 10.986 P 值 ＜0.001 ＜0.001

2·2 DLBCL 組織中miR-193a-3p、miR-146b-5p 的表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系

DLBCL 患者淋巴組織中miR-193a-3p、miR-146b-5p的表達(dá)水平與年齡、性別、腫瘤大小、結(jié)外侵犯、淋巴瘤B 癥狀及血清β2-微球蛋白（β2-MG）、乳酸脫氫酶（LDH）水平無關(guān)（P＞0·05）；而與Ann-Arbor 分期、國際預(yù)后指數(shù)（IPI）評分有關(guān)，且Ann-Arbor 分期Ⅰ～Ⅱ期、IPI 評分0 ～2 分的DLBCL 患者淋巴組織中miR-193a-3p、miR-146b-5p 的表達(dá)水平分別高于Ann-Arbor分期Ⅲ～Ⅳ期、IPI 評分3 ～5 分的患者（P＜0·05）。詳見表3。

表3 DLBCL 組織中miR-193a-3p、miR-146b-5p 的表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系（±s）

表3 DLBCL 組織中miR-193a-3p、miR-146b-5p 的表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系（±s）

注：*組間比較，P ＜0·05。

臨床資料及病理參數(shù) 例數(shù) miR-193a-3p miR-146b-5p年齡（歲） ≤60 24 0.88±0.24 1.20±0.41＞60 52 0.84±0.28 1.11±0.32性別 男 40 0.84±0.40 1.10±0.40女36 0.89±0.29 1.21±0.39腫瘤大?。╟m） ≤3 35 0.90±0.35 1.30±0.41＞3 41 0.82±0.26 1.04±0.34結(jié)外侵犯 否 25 0.88±0.25 1.26±0.41是51 0.84±0.29 1.05±0.36淋巴瘤B 癥狀 有 34 0.87±0.30 1.18±0.40無42 0.85±0.36 1.12±0.25血清β2-MG 升高 21 0.82±0.28 1.06±0.47正常 55 0.90±0.34 1.24±0.42血清LDH 升高 26 0.85±0.26 1.13±0.50正常 50 0.87±0.28 1.17±0.46 Ann-Arbor 分期（期） I ～Ⅱ 42 1.01±0.41* 1.67±0.25*Ⅲ～Ⅳ 34 0.71±0.34 0.63±0.43 IPI 評分（分） 0 ～2 25 1.02±0.45* 1.59±0.51*3 ～5 51 0.70±0.29 0.71±0.16

2·3 DLBCL 組織中miR-193a-3p、miR-146b-5p 的表達(dá)水平與臨床分期的關(guān)系

經(jīng)Kendall'stau-b 等級相關(guān)系數(shù)分析發(fā)現(xiàn)，miR-193a-3p、miR-146b-5p 的表達(dá)水平與DLBCL 臨床分期呈負(fù)相關(guān)，隨著miR-193a-3p、miR-146b-5p 表達(dá)水平的降低，DLBCL 臨床分期越高（r=0·726，r=0·519，P＜0·05）。詳見表4。以Ann-Arbo分期為因變量（Ⅰ期=1，Ⅱ期=2，Ⅲ期=3，Ⅳ期=4），以miR-193a-3p、miR-146b-5p 表達(dá)水平為自變量，建立多因素Logistic 回歸模型，以Ⅰ期為參照進(jìn)行單因素分析，結(jié)果顯示DLBCL患者淋巴組織中miR-193a-3p、miR-146b-5p 表達(dá)下調(diào)是DLBCL 臨床高分期的危險(xiǎn)因子（OR ＞1，P＜0·05）。詳見表5。

表4 不同Ann-Arbor 分期淋巴組織中miR-193a-3p、miR-146b-5p 的表達(dá)情況

表5 miR-193a-3p、miR-146b-5p 表達(dá)水平與Ann-Arbor 分期關(guān)系的Logistic 回歸分析

3 討論

不同DLBCL 患者的病理組織學(xué)形態(tài)、遺傳學(xué)、免疫表型特征及臨床特征存在明顯差異，臨床預(yù)后差別也較大，其中遺傳學(xué)因素是影響DLBCL 個(gè)體差異的關(guān)鍵因素。相關(guān)研究指出，B 細(xì)胞淋巴瘤的特異性途徑是DLBCL 受遺傳事件影響的重要途徑，主要包括B 細(xì)胞分化、B 細(xì)胞受體信號及調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、凋亡等[3]。因此，明確DLBCL 的遺傳機(jī)制，對本病患者的臨床個(gè)體化治療具有重要意義。病理學(xué)研究表明，miRNA 在腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲、遷移及凋亡等生命周期中具有重要的調(diào)節(jié)作用，腫瘤細(xì)胞的惡性行為對miRNA 存在高度依賴性[4]。國內(nèi)研究指出，急性髓系白血病患者miR-193a-3p表達(dá)下調(diào)，對腫瘤細(xì)胞增殖、遷移及侵襲具有抑制作用，并能刺激腫瘤細(xì)胞凋亡[5]。姜富祥等[6]也發(fā)現(xiàn)，骨肉瘤中miR-146b-5p 呈低表達(dá)，靶向負(fù)調(diào)控相關(guān)酶的活性，進(jìn)而抑制腫瘤細(xì)胞增殖和克隆形成。但miR-193a-3p、miR-146b-5p 在DLBCL 中的表達(dá)情況及與腫瘤生物學(xué)行為的關(guān)系鮮見報(bào)道。本研究結(jié)果顯示，miR-193a-3p 及miR-146b-5p 在DLBCL 中的相對表達(dá)量均顯著低于RHL，且Ann-Arbor 分期Ⅰ～Ⅱ期、IPI 評分0 ～2 分的DLBCL 患者miR-193a-3p、miR-146b-5p 的表達(dá)水平顯著升高，提示二者可能是DLBCL 發(fā)病及進(jìn)展過程中的抑癌基因。

本研究進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，隨著miR-193a-3p、miR-146b-5p 表達(dá)水平的降低，DLBCL 的臨床分期越高，且淋巴組織中二者表達(dá)下調(diào)是DLBCL 臨床高分期的危險(xiǎn)因子。提示miR-193a-3p、miR-146b-5p 與DLBCL 的臨床分期密切相關(guān)，可作為DLBCL 早期診斷的重要參考指標(biāo)。其機(jī)制可能與miR-193a-3p、miR-146b-5p 對DLBCL 細(xì)胞的增殖及遷移可產(chǎn)生抑制作用有關(guān)。筆者認(rèn)為，作為重要的抑癌基因，miR-193a-3p 可通過下調(diào)細(xì)胞周期素D1 水平而阻滯腫瘤細(xì)胞增殖，同時(shí)能通過抑制P21 活化激酶4 的活性而阻斷P53/Slug/L1 細(xì)胞黏附分子信號通路，最終抑制DLBCL 細(xì)胞的侵襲、遷移行為。此外，miR-146b-5p 是膜型基質(zhì)金屬蛋白酶的關(guān)鍵負(fù)調(diào)控因子，其高表達(dá)會誘導(dǎo)MMP-16 的降解，繼而減弱腫瘤細(xì)胞的侵襲及遷移能力，故而DLBCL 中miR-146b-5p 低表達(dá)能抑制基質(zhì)金屬蛋白酶的降解，使腫瘤細(xì)胞獲得更強(qiáng)的侵襲和遷移能力。

綜上所述，DLBCL組織中miR-193a-3p、miR-146b-5p表達(dá)水平下調(diào)，可能參與了DLBCL 的發(fā)生、發(fā)展，二者的表達(dá)水平與DLBCL 的臨床分期有關(guān)，可作為DLBCL臨床診治的重要參考依據(jù)。